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细胞因子诱导的杀伤细胞治疗对恶性肿瘤患者免疫功能的影响
近年来恶性肿瘤的发病率越来越高,严重影响到患者的生活质量,特别是其病程凶猛,很多失去了手术机会.目前细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是继手术化疗放射之后第4种抗肿瘤及细胞免疫治疗的有效方法[1].我们选择2011年7月至2012年3月恶性肿瘤患者进行CIK细胞治疗共31例,采用流式细胞仪检测患者经CIK治疗前后,淋巴细胞亚群的百分含量,为临床治疗提供依据,现将结果报告如下.
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维生素E琥珀酸酯诱导人白血病细胞凋亡的发生
本研究选择两株人白血病细胞Raji(人单核细胞白血病细胞株)、Jurkat(人T淋巴细胞白血病细胞株),体外比较观察了VE和VES对细胞的生长抑制作用及其与诱发细胞凋亡的关系.检测指标及结果如下:(1)维生素E和VES诱导细胞凋亡的形态学观察.倒置显微镜下观察维生素E和VES作用72 h后的Raji细胞;制备单细胞层涂片,4℃固定、Hoechst 33258避光染色后,荧光显微镜观察.倒置显微镜下,VES组细胞透亮性下降,并见颗粒、碎片,台盼蓝染色大多为阳性.荧光显微镜下,对照培养细胞的胞核大多数大小一致、染色均匀,VES处理组细胞可见随作用剂量增加而逐渐增多的凋亡细胞核.维生素E处理组的上述改变较相同剂量VES组轻.(2)维生素E和VES对细胞的生长抑制作用.Raji.jurkat细胞分装于24孔培养板,设维生素E组(5、10、20μg/mL)、VES组(5、10、20μg/mL),空白对照组、乙醇对照组、丁二酸组,台盼蓝排除法5 d计数.维生素E和VES对Raji、Jurkat细胞的生长均具有程度不一的抑制作用,维生素E对Jurkat细胞的抑制作用较弱,而Raji细胞对维生素E和VES的反应更为敏感,20μg/mL的VES在24h的抑制率达到30%,72 h抑制率为100%,并表现出时间效应和剂量效应的关系.(3)流式细胞仪检测维生素E和VES诱导细胞凋亡.
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磷脂酰肌醇聚糖A类基因突变检测方法的研究进展及其应用
遗传毒性检测是化学品安全评价和健康风险评估的重要内容。经典遗传毒性检测方法,如:鼠伤寒沙门菌回复突变试验( Ames试验)、染色体畸变分析和微核试验已经广泛地应用于毒物、药物的筛选和遗传毒性评价。近年来,一些新的遗传毒性试验相继发展并逐渐应用于化学品安全评价。磷脂酰肌醇聚糖 A 类( phosphatidylinositol glycan class-A, Pig-a)基因突变分析是基于体细胞基因突变的新的体内遗传毒性检测方法[1]。 Pig-a基因突变不仅可用于化学物急性暴露引起的遗传毒性识别,也可用于化学物慢性、亚慢性暴露所引起的遗传毒性筛查,且符合当前国际上对于实验动物使用所倡导的3R 原则,即:减少( reduction )、替代(replacement)和优化(refinement)。因Pig-a基因突变可采用流式细胞仪检测,灵敏、高效、成本低、操作简单、适用于高通量分析的需求,相继被经济合作与发展组织( Organization for Economic Co-operation and Development, OECD)等国际组织推荐为遗传毒性评价的标准组合试验[2]。因此,笔者综述了Pig-a基因突变检测方法研究进展和应用。
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雷公藤多甙对湿疹患者T淋巴细胞亚群的影响
笔者用流式细胞仪检测湿疹患者用雷公藤多甙治疗前后T淋巴细胞亚群的变化,现将结果报告如下.临床资料1 病例选择 诊断参照《临床皮肤科病学》(赵辨主编.第3版南京:江苏科学技术出版社,2001:604-606).(1)符合湿疹的诊断,皮肤反复瘙痒达3个月以上,直接影响患者的生活质量者.
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流式细胞仪检测巨细胞病毒感染
巨细胞病毒(CMV)是巨细胞包涵体病的病原体, 是疱疹病毒家族的DNA病毒, 具有典型的疱疹病毒结构.人群中CMV感染非常广泛, 60%-90%的成人已有CMV抗体.
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用流式细胞仪测定母血中胎儿红细胞含量的新方法
本文介绍一种快速而准确地测量母血中胎儿红细胞含量的方法.它通过流式细胞仪检测母血中胎儿红细胞胞内的血红蛋白(HbF)和红细胞表面i抗原,可以特异地识别母血中胎儿红细胞.这对预防新生儿溶血症和优生优育具有重要意义.
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石蜡切片厚度对流式细胞仪检测细胞DNA的影响
在肿瘤研究中,应用流式细胞仪技术分析肿瘤细胞的DNA含量及周期细胞群体数目,已成为肿瘤临床诊断、疗效评价及预后推测的重要参考依据[1,2].DNA双螺旋结构碱基对与某些核酸荧光染料有良好的亲和力,在激发光的激发下,产生特定的荧光,运用流式细胞仪检测并分析这些荧光强度,从而了解细胞群体中各周期的分布状况,即G0/G1期、S期、G2/M细胞所占的百分比例.
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流式细胞仪每秒进样细胞数对细胞G0/G1期峰的荧光强度值及变异系数值的影响
在生物学研究中,利用细胞内DNA双螺旋结构碱基对与某些核酸荧光染料有良好的亲和力,荧光染料在光的激发下,产生特定的荧光,运用流式细胞仪检测、分析其荧光强度(Mean值),及其变异系数(CV值),了解细胞内DNA含量,已成为科学分析细胞DNA含量及其所处周期状态的一种手段[1,2].然而,流式细胞仪对操作者技术要求高,同一样本不同实验室检测的结果不尽相同;即使是同一实验室,不同操作人员检测结果亦不一样.其原因既有各实验室评价指标的差异[2-4],也有操作人员个人习惯以及机器本身性能的差异,选定技术参数不同等等.本研究旨在探讨流式细胞仪每秒进样细胞数对检定细胞G0/G1期峰Mean值及CV值的影响,以寻求合适的每秒进样细胞数.
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胃癌患者外周血TH1/TH2细胞因子水平的观察
胃癌是当今世界范围内在发病和死亡中常见的恶性肿瘤之一,严重威胁着人类的健康.我们应用流式细胞仪检测胃癌患者外周血CD4+T细胞中TH1/TH2细胞因子的水平,探讨胃癌患者体内TH1/TH2细胞的反应状态,为胃癌的免疫治疗提供实验依据.
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抗排斥反应中睾丸Sertoli细胞与免疫抑制剂的协同作用
将表达FasL的睾丸Sertoli细胞与肾细胞共同移植,联合应用环孢素(CsA)观察抗排斥效果,以探讨一条同种异体肾移植中移植体保护的新途径。 供受体为不同种系Wistar雄性大白鼠。用酶消化法制备供体睾丸Sertoli细胞及肾细胞。采用流式细胞仪检测FasL及Fas。按以下法建立同种异体移植模型:A组10只,仅移植肾细胞;B组16只,移植2种细胞(B左),任取其中6只大鼠(B右),右侧肾包膜下同时植入肾细胞,对比观察;C组10只,植入2种细胞,但Sertoli细胞注射前已用抗FasL抗体封闭。D组10只,植入2种细胞,并且使用CsA。术后20d免疫组化及计算机图象分析观察移植物中g-PG,TUNEL法观察移植物中凋亡细胞。
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流式细胞仪检测TH1及TH2细胞时PMA对CD4分子表达的影响
应用流式细胞仪结合胞浆内染色技术检测辅助性T淋巴细胞(TH)胞浆内细胞因子分泌以区分TH1/TH2细胞是近年来新建立的一种方法,我们发现目前广泛使用的丝裂原PMA(Phorbol 12-myristate 13-Acetate)对TH细胞表面CD4分子表达有明显下调作用,现报道如下.
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流式细胞术用于细菌抗生素敏感性试验的初步探索
大肠埃希菌ATCC25922、临床分离头孢噻肟(CTX)敏感大肠埃希菌7771、7880、CTX耐药大肠埃希菌7992与浓度范围为(0.015~128)μl/ml的CTX于35℃孵育2?h后,用碘化丙啶(PI)标记上流式细胞仪检测.在一系列药物浓度作用下,各菌株的碘化丙啶荧光强度(MFI)随着药物浓度的升高呈现递增的变化趋势,但是,当抗生素浓度过高,如大于其小抑菌浓度(MIC) 8倍时,菌细胞门所占比例将明显减少,MFI值也会显著下降,表明在高浓度抗生素持续作用下,较多细菌死亡后,菌细胞被裂解.
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慢性HBV感染患者机体免疫状况的淋巴细胞亚群分析
本研究应用流式细胞仪检测患者淋巴细胞亚群,对28例慢性乙肝患者和12例乙肝后肝硬化患者的免疫状况进行分析,探讨HBV感染后,随着病情进展,患者免疫情况的变化.
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活动性肺结核患者外周血单个核细胞表达TH1/TH2类细胞因子的特点
结核病患者免疫细胞产生TH1类细胞因子的能力低下,而TH2类细胞因子表达各家报道不一[1-3].CD4+ T和CD8+ T细胞是结核病免疫中主要的效应细胞,也是细胞因子的主要来源.我们采用流式细胞仪检测CD4+ T和CD8+ T分泌IFN-γ和IL-4的能力,从单细胞水平探讨结核菌感染患者TH1/TH2型免疫反应的特点.
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60例复发性生殖器疱疹患者T淋巴细胞及NK细胞的动态研究
复发性生殖器疱疹(RGH)主要是单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染人体后易在骶神经根区潜伏,受到激活造成生殖器、肛周部位的红斑、水疱、糜烂、溃疡等改变,并反复发作[1].HSV-2在人体潜伏和复发的机制尚不清楚,除了病毒本身的因素外,机体的免疫状况可能对其有关键性作用[2].本研究通过流式细胞仪检测RGH患者发作期和静止期的免疫细胞,观察其动态变化,分析比较RGH患者与健康成人的免疫细胞,探讨患者的免疫功能状态与生殖器疱疹发病及复发的关系.
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大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离培养与多向分化鉴定
目的::建立体外分离、培养及纯化大鼠骨髓间充质干细胞( mesenchymal stem cells, MSCs)的方法,并对细胞进行形态学观察、表面标志物鉴定及分化潜能检测,为大鼠MSCs 进行细胞移植治疗脑损伤的研究奠定基础。方法:用全骨髓贴壁培养法分离、培养、纯化大鼠MSCs,倒置相差显微镜进行形态学观察,流式细胞仪检测细胞表面标记物,定向诱导向成脂、成骨方向分化。结果:72小时首次全量换液7天后观察可见呈放射状排列的细胞集落,以梭形细胞为主,细胞规则、生长旺盛,可连续传代10代以上;取3代MSCs流式细胞仪检测,CD90呈阳性表达,CD34、CD45均呈阴性表达;细胞传代后加入成脂、成骨诱导剂定向诱导分化,油红O染色及茜素红染色均呈阳性。结论:全骨髓贴壁筛选培养法可大量分离、纯化、扩增大鼠MSCs。经诱导鉴定MSCs 具有多项分化潜能。
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流式细胞术测定人外周血淋巴细胞亚型
利用流式细胞仪检测淋巴细胞亚型,具有简便、快速、计数的细胞量大等优点.但目前各家报道的正常参考值相差较大,为此我们测定了110名正常成人外周血淋巴细胞亚型的百分含量,报告如下.
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流式细胞术检测单个淋巴细胞内的细胞因子表达
各种辅助性T淋巴细胞(Th)之间的失衡与自身免疫病、过敏性疾病、肿瘤、移植排斥反应以及感染性疾病的发生发展有密切的关系,而掌握一种准确、灵敏、快速的检测Th的方法,是研究Th细胞间平衡与疾病关系的前提。我们采用免疫荧光抗体双标记法,用流式细胞仪检测单个淋巴细胞内的细胞因子的表达,能准确地了解淋巴细胞的极化状态,对研究疾病的发病机制以及相应的治疗策略具有实用意义。
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流式细胞仪检测人类白细胞抗原-B27与微量细胞毒法的比较
人类白细胞抗原-B27(human leucocyte antigen,HIA-B27)是HLA-I类分子基因中B位点上的1个等位基因,是经典的HLA位点编码的Ⅰ类主要组织相容性复合物基因产物之一.
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叶酸对胃癌前细胞凋亡的影响
目的:研究叶酸对胃癌前细胞凋亡的影响.方法:胃镜下活检,病理证实癌前病变患者38例(结肠型肠上皮化生18例和轻、中度非典型增生20例),癌前病变组织经胃蛋白酶消化液消化成单个细胞后,采用PI单染法和Annexin V FITC/PI双参数染色法用流式细胞仪检测细胞凋亡率.将癌前病变患者随机分为治疗组19例,对照组19例(每组包括结肠型肠上皮化生9例和轻、中度非典型增生10例),治疗组给予叶酸10 mg,3次/d,治疗3 mo,对照组给予硫糖铝1.0 g,3次/d,治疗3 mo,治疗结束后复查组织细胞凋亡率.结果:治疗组治疗后细胞凋亡率增高(P<0.05),对照组治疗后细胞凋亡率无明显变化(P>0.05).结论:叶酸具有诱导胃癌前病变细胞凋亡的作用.