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大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离培养与多向分化鉴定
目的：：建立体外分离、培养及纯化大鼠骨髓间充质干细胞( mesenchymal stem cells, MSCs)的方法,并对细胞进行形态学观察、表面标志物鉴定及分化潜能检测,为大鼠MSCs 进行细胞移植治疗脑损伤的研究奠定基础。方法：用全骨髓贴壁培养法分离、培养、纯化大鼠MSCs,倒置相差显微镜进行形态学观察,流式细胞仪检测细胞表面标记物,定向诱导向成脂、成骨方向分化。结果：72小时首次全量换液7天后观察可见呈放射状排列的细胞集落,以梭形细胞为主,细胞规则、生长旺盛,可连续传代10代以上；取3代MSCs流式细胞仪检测,CD90呈阳性表达,CD34、CD45均呈阴性表达；细胞传代后加入成脂、成骨诱导剂定向诱导分化,油红O染色及茜素红染色均呈阳性。结论：全骨髓贴壁筛选培养法可大量分离、纯化、扩增大鼠MSCs。经诱导鉴定MSCs 具有多项分化潜能。
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复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎
复方鳖甲软肝片主要由鳖甲、黄芪、赤芍、冬虫夏草、三七、连翘等11味中药组成,具有扶正祛邪、活血化瘀、清热、解毒之功效.本文通过症状、肝功能、乙肝表面标记物的检测来观察对慢性肝炎的治疗作用.
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心脏自身干细胞的研究进展
背景:细胞移植修复心肌再生受到细胞来源、免疫排异、伦理及疗效不确切的限制,寻找新的种子细胞已成为心肌再牛领域的趋势.人量研究证明哺乳动物心脏中存在心脏自身干细胞,参与心脏的自我更新和内源性修复,已成为近年来的研究热点.目的:综述心脏干细胞的来源、特征、诱导因素及其在心肌再生方面的研究进展.方法:应用计算机榆索2000/2009期间Medline数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed)与心脏干细胞的来源、分化、特征及其在心肌再生方面相关的文章,检索词为"Cardiac stem cell",包括临床研究和基础研究,排除重复和Meta分析类文章,纳入27篇文章进行综述.结果与结论:心脏干细胞是一类存在于心脏组织内能够自我更新及克隆增殖的干细胞,它具有多能分化潜力,能够分化为心肌细胞、内皮细胞及血管平滑肌细胞等彩种细胞,对心脏的维持自我稳定及损伤修复有重要意义.已发现多种具有小同表型特征的心脏干细胞,它们均具有参与心肌和血管再生的能力.以心脏干细胞为基础的治疗方法为心脏疾病的治疗提供了一条新途径.相对于其他成熟干细胞.心脏干细胞应该是一种更合理的心肌再生治疗的细胞来源.
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肿瘤干细胞表面标记物CD44在胃癌浸润和淋巴结转移中的作用
背景：肿瘤干细胞不仅能启动肿瘤发生，还参与肿瘤细胞的侵袭和转移。对肿瘤干细胞来说，识别其特异性细胞表面标志物已成为研究热点。目的：探讨肿瘤干细胞表面标记物CD44在胃癌浸润和淋巴结转移中的临床意义。方法：采用免疫组化 SABC法检测胃癌组织标本CD44蛋白表达，应用Pearsonχ2检验和Cox回归多因素分析，确定CD44表达与胃癌生物学特性及其预后的相关性。结果与结论：100例胃癌标本中，59例(59.0%)标本CD44蛋白呈阳性表达。CD44蛋白在距胃癌原发灶边缘5 cm以上的正常胃黏膜组织中呈阴性表达。胃癌组织中CD44蛋白广泛表达，主要表达于细胞膜，少量表达于细胞浆。胃癌组织中 CD44蛋白的表达和患者性别、年龄无关(P >0.05)，但与肿瘤分期和淋巴管浸润、组织学分级、肿瘤大小等有关(P <0.05)，其中，肿瘤浸润越深、组织学分级越高、肿瘤直径越大、有淋巴结转移，则CD44蛋白表达阳性率越高，CD44阳性表达是影响患者术后生存的独立预后因素(P <0.05)。以上结果表明肿瘤干细胞表面标记物 CD44在胃癌组织中的表达与胃癌的浸润和淋巴结转移密切相关，表达越高患者预后越差。
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年龄因素对人类脂肪来源干细胞的影响
背景与目的 脂肪来源间质干细胞(ADMSCs)是一种健康的具有多向分化潜能的来源细胞.其可简单获取,并可应用于多种再生领域.本研究的目的是评估衰老对ADMSCs的影响,探讨与其相关的形态学、衰老特性、生长因子表达和成骨.方法 按不同的年龄组(婴幼儿、成年、老年)获取细胞并培养.利用显微镜检测其形态学特征,利用流式细胞术探查细胞表面标记物.利用实时(real-time)聚合酶链反应测量端粒长度.对比各组间相关成血管和成骨生长因子的表达.通过评估诱导反应及RUNX-2和骨钙蛋白mRNA表达的定量分析,来进一步探索成骨能力.结果 每个供区获取到相同分离比例的间质干细胞,不考虑年龄因素.婴幼儿的脂肪来源于细胞(ADSCs)形态学上表现出瘦长轴状,与老年组相比其端粒长度更长.血管生成因子在婴幼儿组细胞中有更高的表达,而成骨表达在各组间均相似.碱性磷酸酶染色和茜素红染色证实,婴幼儿组干细胞对成骨诱导的反应比老年组更明显,视为与骨相关的基因表达.结论 各年龄组的ADMSCs均是有活性的.与老年组相比,婴幼儿组的来源细胞形态学上表现为梭形,端粒较长,成血管及成骨能力较强.相反,所有年龄组的来源细胞均表现相似的成骨旁分泌能力,因此,我们推断其在成年至老年阶段仍可保持临床适用性.
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人类脂肪来源干细胞经长期深低温保藏后保留的增殖能力和多能性
背景 人类脂肪来源干(间质)细胞作为间叶细胞谱系(包括脂肪,骨骼肌和心肌,骨,软骨,血管)组织缺损的再生疗法的工具,是很有应用前景的.同其他领域所发生的一样(包括造血干细胞和脐带血细胞在基于细胞的治疗方法中的应用),在未来可能的临床应用中,脂肪来源干细胞深低温保藏也许是一项必不可少的基本技术.方法 作者从18位患者的抽吸获得脂肪中分离出脂肪来源干细胞,并在干细胞深低温保藏6个月前后分别检测它们的增殖能力和多功能性,深低温保藏过程遵循他们已确定的方案.通过检测培养细胞的倍增时间对细胞增殖能力进行量化分析,通过分析脂肪来源干细胞向成软骨、成骨、和成脂谱系细胞的分化确定细胞的多功能性.另外,通过流式细胞术确定细胞表面标记物的表达谱,并对新鲜的和经深低温保藏的脂肪来源干细胞表面标记物的表达谱进行对比.结果 经深低温保藏的脂肪来源干细胞完全保存分化成脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞的能力及增殖能力.流式细胞术分析结果显示深低温保藏前后细胞表面标记物表达谱保持不变.结论 在现有的方案下,脂肪来源干细胞至少可深低温保藏6个月,且不损失任何增殖能力和分化潜能.这些结果保证了自体库存的脂肪来源干细胞在未来的临床应用中的可用性.
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免疫学与儿科临床第四讲T细胞亚群的临床意义
经过胸腺上皮细胞及其分泌的胸腺素诱导成熟的T淋巴细胞,在其表面表达CD3分子.T淋巴细胞在外周血淋巴细胞中约占80%左右,因此CD+3细胞也相应为80%.由于技术原因,检测的T淋巴细胞常达不到外周血淋巴细胞的总数.采用单克隆抗体(moAb)玫瑰花结实验的阳性率低,为50%～60%;moAb荧光显微镜法可达到65%左右,流式细胞计数仪的敏感性高,可达到70%左右.T淋巴细胞因其CD3分子以外的其它表面标记物,以及生物学功能不同,而分为许多亚群,各具不同的临床意义.本文简述T淋巴细胞亚群及其在临床中的价值.
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小鼠脾脏淋巴细胞体外培养前后细胞表面标记物 CD3、CD4、CD44、CD62 L的变化
目的：探讨体外培养小鼠脾脏淋巴细胞后，细胞表面标记物CD3、CD4、CD44、CD62 L的变化。方法：用淋巴细胞分离液分离小鼠脾脏淋巴细胞，37℃细胞孵箱中体外培养3 d后，向细胞中加入流式抗体Mouse CD3e PE-CY7、Mouse CD4 FITC、Mouse CD44 PE、Mouse CD62L APC，同时设阴性对照，应用流式细胞仪检测细胞表面标记物CD3、CD4、CD44、CD62L的水平。结果：小鼠脾脏淋巴细胞分离后直接做流式检测，CD3＋CD4＋细胞占19.09％，其中98.61％的细胞为CD44＋，68.71％为CD62 L＋。体外培养后CD3＋CD4＋细胞占8.96％，其中71.82％为CD44＋，11.27％为CD62 L＋。哮喘小鼠脾脏淋巴细胞分离后直接做流式检测，CD3＋CD4＋细胞占20.33％，其中97.72％的细胞为CD44＋，75.74％为CD62 L＋。体外培养后CD3＋CD4＋细胞占7.2％，CD44阳性细胞占58.21％，CD62L阳性细胞仅占2.77％。结论：小鼠脾脏淋巴细胞体外培养后，细胞表面标记物CD44和CD62L发生巨大变化，CD62L呈现明显下调趋势，接近消失，CD44也有下调。
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拉米夫定对慢性乙型肝炎患者外周血CD30+CD4+、CCR5+CD4+及其细胞因子表达的影响
近发现,CCR5、CD30分别为Th1、Th2细胞特异表达,且与激活Th1、Th2密切相关,因此可作为其相应的表面标记物.
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实体瘤干细胞特异性表面标记物的研究进展
20世纪60、70年代,许多学者就已找到实体肿瘤干细胞存在的实验依据:实体肿瘤细胞存在异质性,只有小部分细胞有克隆形成的能力.
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支气管肺泡干细胞的研究进展
肺腺癌的发生与肺腺癌干细胞有关,肺腺癌干细胞和肺支气管肺泡干细胞(BASCs)具有相似的表型特征,肺腺癌可能源于BASCs的恶性转化.小鼠肺腺癌模型的建立,对支气管肺泡干细胞有了较为深入的了解:BASCs能耐受细支气管和肺泡损伤,并使上皮细胞得以更新、增殖;正常状态下的BASCs处于静止期,但在K-ras转基因模型中,BASCs异常增生导致肺腺癌的发生.对小鼠BASCs的研究为探讨人肺腺癌干细胞的相关生物学特性提供借鉴,本文对BASCs研究进展方面作简要总结.
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肿瘤干细胞的研究进展
早期理论认为,肿瘤的发生和发展主要来源于正常组织细胞的基因突变,使细胞增殖能力增强,分化度下降,细胞凋亡减少,细胞持续处于高增殖状态.按照该理论,这种低分化细胞持续增殖会导致更多的细胞出现更进一步的致癌突变,而使同一肿瘤中存在多种肿瘤细胞,这和大多数临床结果是不相符的.近年来越来越多的学者[1]提出,干细胞不仅在多细胞有机体形成中具有重要的作用,同时在肿瘤的发生过程中同样起到不可忽视的推动作用,即"肿瘤干细胞假说"学说.许多研究[2-5]表明,在肿瘤组织中存在一类特殊的细胞群,具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞,促进肿瘤形成和增殖,即肿瘤干细胞,也称癌干细胞(CSCs).由于这类细胞的存在,使得肿瘤组织具有自我更新、多向分化和无限增殖的能力,是肿瘤的转移和复发过程中的关键因素.因此能否彻底清除肿瘤干细胞成了肿瘤能否缓解甚至治愈的重要前提.
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鱼油组分共轭亚油酸抑制肺腺癌干细胞成瘤的体内研究
目的:建立肺腺癌干细胞荷瘤动物模型,体内验证鱼油组分共轭亚油酸(CLA)抑制肺腺癌增殖及转移的作用和分子机制. 方法:采用新霉素和克隆挑选技术分别建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的A549和SPC-A-1细胞株,体外培养富集干细胞微球,建立肺癌干细胞原位荷瘤裸鼠模型,腹腔注射给予不同组分c9t11-CLA、tl0c12-CLA和混合组,定期检测裸鼠体重和肿瘤质量,研究终点采用小动物活体荧光成像技术分别观察肿瘤的转移情况.采用Western blotting检测肿瘤组织COX-2、CXCR4的蛋白表达水平. 结果:实验终点各组原发肿瘤重量,A549混合治疗组比各单药治疗组肿瘤质量显著降低(P＜0.001),而各CLA单药治疗组比,A549 control组肿瘤质量显著降低(P＜0.01),与SPC-A-1组结果相似.各组肿瘤转移情况:在动物活体荧光成像系统下,A549CSC和SPC-A-1 CSC空白对照组出现了全身多处转移;经c9,t1 1-CLA、t10,c12-CLA治疗显著减少转移位置和比率;而混合治疗组减少尤为明显.Western blotting检测OCT4、COX-2、CXCR4蛋白表达水平.在A549肺腺癌干细胞组,c9t11-CLA、t1oc12-CLA均不同程度地抑制OCT4、COX-2、CXCR4蛋白,混合治疗组抑制作用强.在SPC-A-1肺腺癌干细胞组结果类似. 结论:c9,t1 1-CLA、t10,c12-CLA及其混合物能明显抑制肺腺癌干细胞荷瘤裸鼠原发肿瘤和转移灶的生长;CLA组分能明显抑制肿瘤组织OCT4、COX-2和CXCR4蛋白的表达.
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前列腺干细胞研究进展
干细胞具有强大的自我更新、多向分化潜能和高度增殖的特性,其在多种疾病的发生和疾病治疗中的作用已越来越受到人们重视.前列腺干细胞包括上皮干细胞和间充质干细胞,其中上皮干细胞表面标记物包括细胞角蛋白、干细胞抗原-1、整合素α2β1、CD49f、CD133、CD117、CD44等,间充质干细胞的标记物包括CD30、CD44、CD133、神经元特异性烯醇化酶和血管内皮生长因子受体-1.前列腺疾病的发生与干细胞的参与密切相关.本文就前列腺干细胞近年来的相关研究进展作一综述.
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肝癌干细胞的研究进展
我国是原发性肝癌高发的国家,其发病率、死亡率约占全球的一半以上.尽管目前肝癌的诊断和治疗有了许多新的进展,但是总体疗效仍不满意.近年来的研究表明,肝癌中存在着一群具有干细胞特征、能自我更新、自我无限增殖并具有多向分化潜能的细胞,即肝癌干细胞,这对重新认识肝癌的发生、发展、预后转归以及指导临床治疗将起到极为重要的作用.本文通过复习肝癌干细胞相关文献,就肝癌干细胞起源、分选及相关治疗的研究进展作一综述.
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肝癌干细胞的研究热点及前景
随着越来越多的肿瘤中发现肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)的存在,肝癌被认为很可能也是一种干细胞疾病.肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)若能终得到确认,将会为肝癌的预防、早期诊断、有效治疗及预后监测等开辟一条崭新的途径.
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宫颈癌干细胞的研究进展
肿瘤干细胞(CSC)是存在于肿瘤细胞系或肿瘤组织中的一小群具有多向分化潜能、侵袭力强、高耐药性及高致瘤性等生物学特性的细胞,是肿瘤生长、转移和复发的关键因素.目前,宫颈癌干细胞的研究还处于初级阶段,已有研究证据支持宫颈癌干细胞的存在,但尚无确定的分子标记物.针对有关可能的分子标记物进行分选,并对具有不同分子标记物的CSC生物学特性进行比较,可能成为筛选和确定宫颈癌干细胞标记物的有效方法.本文对CSC学说、宫颈癌干细胞的分离、鉴定及宫颈癌干细胞的表面分子标记物做一综述.旨在为探讨宫颈癌发病机制、提高宫颈癌的诊治效率及改善预后提供新的思路和方向.
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肿瘤干细胞标记物的研究进展
肿瘤干细胞(TSC)在肿瘤组织中的成功分离,使TSC学说近年来得到越来越多的学者的认同.TSC是恶性肿瘤转移复发的根源.认识各种TSC标记物并对其鉴定,分离后研究其耐药、耐放射机制,将为攻克肿瘤带来新的希望.
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浓缩血小板中白细胞表型和功能变化的研究
目的检测浓缩血小板和冰冻浓缩血小板中白细胞的表型和功能变化.方法用Nageotte法计数新鲜浓缩血小板和冰冻浓缩血小板中的白细胞数量,台酚蓝拒染法计数白细胞存活率,流式细胞仪对白细胞表面标记进行测定,用双向混合淋巴细胞培养法对同种免疫功能进行分析.结果新鲜浓缩血小板中的白细胞数约为2.4×106/U,经3个月的冻存有85%的白细胞存活,浓缩血小板中白细胞表型为CD+3CD+8、CD+3CD+4、CD+3CD-4和CD+3CD-8等,并存在较强的同种免疫活性.结论新鲜浓缩血小板和冰冻浓缩血小板中的白细胞均有免疫原性和免疫反应性,此为输注过程中产生不良反应的主要原因;为预防输注浓缩血小板引起非溶血性输血发热反应、血小板输注无效、输血相关的移植物抗宿主病(TA-GVHD)等,建议应用滤除白细胞输血器(PL型滤器).
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角膜缘干细胞识别的研究进展
角膜干细胞存在于角巩膜缘被人们所认识已有20年了[1].随着对角膜缘干细胞研究的深入,发现其对角膜的完整性及功能至关重要.正常情况下角膜缘干细胞具有上皮屏障的作用,能阻止结膜上皮及血管向角膜内生长.角膜缘干细胞缺乏将导致各种眼表功能异常.角膜缘干细胞的定位和分离,对临床上应用角膜缘干细胞移植治疗各种眼表异常具有重要意义.就国内外对角膜缘干细胞识别的研究做一综述.
