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  • G-SCF联合HGF-MSCs治疗肺动脉高压大鼠的疗效研究

    作者:郭娜;郭英华;苏龙翔;刘长庭

    目的 探讨重组粒细胞集落刺激因子(G-SCF)联合携带肝细胞生长因子(HGF)基因的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对野百合碱诱导的实验性肺动脉高压(PAH)大鼠的治疗效果.方法 取3周龄雄性SD大鼠骨髓,经贴壁筛选法体外培养并纯化MSCs,利用腺病毒(Ad)介导的基因转染方法,将HGF基因导入MSCs.将50只SD大鼠随机分为5组(每组10只):PAH组,采用腹腔注射野百合碱(60mg/kg)复制PAH模型后,经颈内静脉移植1ml低糖伊戈尔培养基(L-DMEM);MSCs组,复制PAH模型后,移植5x106/L的空腺病毒载体转染的MSCs细胞悬液1ml;G-CSF组,经腹腔注射G-SCF[100μg/(kg·d)],连续5d;HGF组,移植5x106/L携带HGF基因的MSCs细胞悬液1ml;HGF+G-CSF组,移植5×106/L携带HGF基因的MSCs细胞悬液1ml并且经腹腔注射G-SCF[100μg/(kg·d),连续5d.21d后,观察各组血流动力学指标、右心室(RV)与左心室(LV)重量比值(RV/LV比值)、血管密度及血浆中内皮素-1(ET-1)的表达情况.结果 PAH大鼠治疗21d后,实验各组间全身动脉血压无明显差异;HGF+G-SCF组及HGF组中平均肺动脉压较其他各组显著下降(P<0.05);HGF组及HGF+G-SCF组RV/LV比值显著低于其他3组(P<0.05);HGF+G-SCF组血管密度高于其他各组,但差异无统计学意义(P>0.05);HGF组及HGF+G-SCF组血浆中ET-1的含量显著低于PAH组(P<0.05).结论 G-SCF联合HGF-MSCs移植可有效减轻野百合碱诱导的大鼠PAH的进程,明显改善心功能及血流动力学指标,这些效应可能是通过增加肺血管数量及减少缩血管因子来实现的.

  • 骨髓间充质干细胞在消化道疾病中的应用

    作者:宫媛;杨超;车宇芳;陈倩倩;常青;吴本俨

    干细胞具有持久的自我增殖和分化能力,在特定的条件下,可以分化成不同功能的细胞,形成多种组织和器官.干细胞按照细胞起源的阶段可分为胚胎干细胞和成体干细胞,按照其分化潜能分为全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞3类.骨髓干细胞(BMDCs)包括骨髓间充质干细胞(BMSCs)、造血干细胞和内皮祖细胞.BMSCs是20世纪70年代发现的中胚层来源的成体干细胞,具有很强的自我更新和多向分化潜能[1-2].BMSCs无特异性表面抗原,它表达了间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的多种表面标志[3-4].在不同的诱导条件下可向中胚层来源的骨、软骨、心肌、脂肪和肌腱等细胞分化,还可跨胚层向内胚层和神经外胚层,如肝、胆管上皮、肺、肠、皮肤上皮和神经元及神经胶质细胞分化[5].

  • 抗骨质疏松药物作用靶位分子水平研究进展

    作者:赵春燕

    1 成骨细胞上的药物作用靶位多功能骨髓基质干细胞或多功能骨髓间充质干细胞(p luripotent mesenchymal stem cell,M SC)分化形成纤维样系统细胞,包括前成骨细胞、成骨细胞、成软骨细胞、成纤维细胞和网织细胞.来源于M SC的骨髓基质成纤维样系统细胞的前体细胞,在成年的哺乳动物体内分为2种:定向成骨前体细胞和可诱导成骨前体细胞.

  • 硫代乙酰胺促进骨髓间充质干细胞凋亡的研究

    作者:杨亚洋;张婷;沈灿;姚叶涛;李敏;骆丰;许健

    目的 研究硫代乙酰胺(TAA)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的毒性作用.方法 体外分离大鼠骨髓间充质干细胞并培养;光学显微镜下观察原代细胞生长的过程;CCK-8检测TAA对BMSCs细胞的生长抑制作用;流工式细胞术法检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blot)检测凋亡蛋白Bax,Bcl-2,Caspase-3的表达情况.结果 分离培养的BMSCs阳性表达CD90,CD29,阴性表达CD45,CD11 b/c;与对照组比较,TAA能显著的抑制BMSCs细胞增值,具有明显的时间和剂量依赖性;流式细胞术结果显示TAA能够诱导细胞凋亡;Western blot结果显示TAA能够上调Bax,Caspase-3的表达,Bcl-2的表达下降.结论 TAA对BMSCs具有促进其凋亡的作用.

  • 人骨髓间充质干细胞脑内注射给予食蟹猴的长期毒性研究

    作者:李岩;高虹;李秦;朱华;韩钦;安沂华;赵春华;王任直;秦川

    目的 研究人骨髓间充质干细胞(BMSC)脑内注射给予食蟹猴的长期毒性,为临床试验提供依据.方法 24只食蟹猴随机分为对照组(生理盐水)、低剂量组(3×105 个细胞/kg)和高剂量组(2.5 ×106 个细胞/kg),每只动物脑内基底节外囊区域定向注射人BMSC 2次,间隔3周.注射后观察动物的一般毒性反应,并进行体重、体温、神经功能、心电图、血液学和血液生化学、体液免疫(IgG、IgM)、细胞免疫(CD3、CD4、CD8)、尿液、脑脊液(一般性状、细胞计数、葡萄糖、蛋白质和氯化物含量)及组织病理学等指标测定.结果 病理结果显示食蟹猴脑内基底节外囊区域注射人BMSC后,注射部位大脑局部出现组织坏死及炎症反应,对照组、低剂量组和高剂量组的损伤程度和范围呈递增趋势,随着时间推移,各组脑组织病变基本修复,残存少量瘢痕组织.其他各项检测指标均未见有生物学意义的显著改变.结论 在本试验条件下,2.5×106/kg的剂量范围内,人BMSC食蟹猴脑内基底节外囊区域注射仅对注射局部大脑组织产生一定的病理损伤,损伤可随着时间推移逐渐修复.

  • BMSCs的骨向诱导分化及在口腔医学的应用

    作者:穆月;李倩;赵继志

    骨组织细胞是骨组织改建过程中的主要响应细胞,其中骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stemcells,BMSCs)是这些细胞中的主要效应细胞,也是这一过程的核心细胞,所以其增殖活性和功能状态会影响环境刺激下骨组织重建的状态.近年来,因其良好的生物学特性,BMSCs已成为骨组织工程领域理想的种子细胞,研究主要集中于探寻该类细胞的分化特性及其机制,且已在临床医学中得到有效的应用.

  • 骨髓间充质干细胞在口腔医学应用中的研究进展

    作者:任文;杨岚;郭吕华

    作为一类来源于骨髓,具有极强自我增殖能力和多向分化潜能的成体干细胞,骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)在适当的条件下可以向多种细胞方向分化.同时,因为其免疫原性低、伦理争议少及易于体外培养和扩增等特点,被认为是一种非常理想的组织工程种子细胞.近来,BMSCs被广泛应用颌骨骨量不足、牙周组织不足和颞下颌关节病等口腔医学研究之中.本文就BMSCs在口腔医学中的应用研究作一综述.

  • 多氯联苯对大鼠骨髓间充质干细胞c-fos和c-jun表达影响的研究

    作者:赵红斌;王剑锋;王旭;董菊子;周焕发;杨银书

    目的 探讨多氯联苯( PCB126)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs) c-fos和c-jun表达的影响.方法 采用percoll分离液(密度1.073g/cm3)分离Wistar大鼠MSCs、培养并传代,实验分为3组:对照组、低剂量组(10-7mol/L PCB126)和高剂量组( 10 -6mol/L PCB126).PCB126分别作用于MSCs 12h和24h后,利用MTT方法检测细胞的增殖率,免疫荧光化学方法检测细胞c-fos的表达;PCB126分别作用于MSCs 30min、1h、2h、4h、8h、12h和24h后,利用RT-PCR分析c-fos和c-jun mRNA的表达;Western blot方法分析细胞c-fos和c-jun蛋白的表达.结果 10-6mol/L和10 -7mol/L组12h时细胞的增殖率分别为13.8%和19.1%,24h时分别为31.5%和36.1%,48h时分别为42.5%和43.6%(t=8.42,P<0.01).10-6mol/L和10-7 mol/L组12h时c-fos的阳性率分别为54.6% (231/446)和51.3% (214/416) (x2=15.59,P<0.01;x2=15.45,P<0.01),24h时c-fos的阳性率分别为83.2%( 376/425)和73.0%( 309/423)(x2=60.56,P<0.01;x2=25.79,P<0.01).RT-PCR结果显示,10 -6mol/L组和10-7 mol/L组在30 min和1h时c-fos mRNA的表达显著上调;两组在不同时间c-jun mRNA均上调且10-6mol/L组的表达水平明显高于10-7 mol/L组(t=7.88,P<0.01).10-6mol/L和10-7 mol/L组12h时c-fos和c-jun蛋白表达上调(t=9.91和t=8.84,P<0.01),24h时c-fos和c-jun表达显著上调(t=9.52,P<0.01).结论 PCB126能促进MSCs增殖,上调癌相关基因c-fos和c-jun的表达,PCB126影响MSCs的功能与c-fos和c-jun的表达异常有关.

  • 短发夹RNA对人骨髓间充质干细胞生长增殖的影响

    作者:程杰;陶泽璋;肖伯奎;段洪刚;陈始明

    目的 观察靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的短发夹RNA(shRNA)对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)生长增殖的影响.方法 根据RNA干扰原理,利用构建的表达shRNA的靶向hTERT mRNA的真核表达质粒(shRNA1),非特异性的shRNA真核表达质粒(shRNA2),转染试剂和正常培养液处理细胞.24h后在共聚焦显微镜下检测荧光表达情况;24h、48h、72h用MTT法检测细胞增殖活性;48h后行HE染色、RT-PCR及端粒酶活性检测.结果 (1)共聚焦显微镜下见shRNA1及shRNA2组有大量的细胞表达荧光.(2)相应时间点各组细胞生长增殖无明显差异.HE染色发现,同等培养条件下,各组细胞生长密度及形态无明显变化.(3)RT-PCR显示各组细胞均无hTERT mRNA的表达;端粒酶活性均为阴性表达.结论 靶向hTERT mRNA的shRNA对正常hMSCs的生长增殖无明显影响,该方法对不表达hTERT的正常体细胞是安全的.

  • 辛硫磷对大鼠骨髓间充质干细胞DNA损伤、细胞凋亡及P53蛋白表达的影响

    作者:闫建国;周亚莉;邢雪琨;方方;朱振东;王松涛

    目的 研究辛硫磷对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) DNA的损伤作用及其对氧化损伤、细胞凋亡和P53蛋白表达的影响.方法 Percoll离心法分离培养大鼠BMSCs,正常传代.取第3代BMSCs,调整细胞密度为1.0×106/瓶,当细胞至亚融合状态,分别以0(对照)、0.2、2和20μ g/L的辛硫磷浓度染毒24h.采用MTT法检测BMSCs的存活率,分光光度比色法检测BMSCs超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(C AT)活性和丙二醛(MDA)含量,单细胞凝胶电泳检测BMSCs的DNA损伤,流式细胞术检测大鼠骨髓间充质干细胞凋亡率,Western blotting检测BMSCs的P53蛋白表达水平.结果 与对照组相比,0.2~20μg/L辛硫磷染毒24h,可诱发大鼠BMSCs的DNA损伤,且具有剂量-效应关系;各染毒组大鼠BMSCs的存活率、SOD和CAT活性均显著下降(P<0.05),细胞凋亡率和MDA含量均显著升高(P<0.05);辛硫磷染毒可以诱导大鼠BMSCs P53蛋白表达水平的增加(P<0.05).结论 辛硫磷可诱导大鼠BMSCs氧化损伤、DNA损伤、细胞凋亡和P53蛋白表达,且具有剂量-效应关系.

  • 大剂量糖皮质激素对骨髓间充质干细胞成骨分化的MiroRNA的调控作用

    作者:赵光辉;李辉;王志远

    目的 探究不同浓度糖皮质激素对骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨分化的MicroRNA的调控作用.方法 利用10-8 mmol/L及10-10 mmol/L两组浓度地塞米松对BMSC进行诱导,对比研究诱导7、14 d时骨钙蛋白、骨桥蛋白及碱性磷酸酶的浓度变化.结果 诱导7 d时,两组的骨桥蛋白浓度均呈现升高趋势,且10-10组骨桥蛋白浓度明显高于10-8组(P<0.05).诱导14 d时,10-8组骨钙蛋白及骨桥蛋白的浓度降低,而10-10组骨钙蛋白及骨桥蛋白的浓度升高,且10-10组骨钙蛋白的浓度及骨桥蛋白明显高于10-8组(P<0.05).诱导14 d时,10-8组碱性磷酸酶浓度升高,10-10组碱性磷酸酶浓度降低,10-10组明显低于10-8组(P<0.05).结论 高浓度的糖皮质激素诱导MicroRNA调控BMSC向脂肪细胞分化,抑制其向骨细胞分化.

  • 骨髓间充质干细胞重构下鼻甲治疗萎缩性鼻炎的疗效探讨

    作者:赵永光

    目的 探讨骨髓间充质干细胞重构下鼻甲治疗萎缩性鼻炎的疗效.方法 择取2013年1月~2015年10月我院收治的萎缩性鼻炎患者22例作为研究对象,按照患者的就诊时间先后顺序随机将其分为研究组和参照组,各11例.研究组患者在局部麻醉处理条件下运用组织工程学方法骨髓间充质干细胞重构鼻甲手术治疗、参照组患者实施药物保守治疗以及生理盐水鼻腔冲洗.结果 研究组患者的治疗总有效率显著高于参照组,组间数据比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 针对萎缩性鼻炎患者行局部麻醉条件下的骨髓间充质干细胞重构鼻甲手术治疗,能够显著提升患者的临床治疗总有效率,值得在临床中予以推广运用.

  • 中药二仙汤对骨髓干细胞增值和迁移能力的影响

    作者:李楠;艾浩

    目的:观察二仙汤对骨髓间充质干细胞增殖能力和迁移能力的影响,为二仙汤协同骨髓间充质干细胞治疗卵巢早衰提供基础实验依据.方法:分别将20只SD雌性大鼠制备含二仙汤的药物血清(含药组)和无药物血清(对照组),取10只大鼠体外分离骨髓间充质干细胞进行培养,通过对照法对细胞形态学观察、MTT法测定、细胞周期及细胞迁移能力进行检测并分析.结果:与对照组相比,含药组细胞增殖能力和迁移能力均明显增强.结论:二仙汤协同骨髓干细胞自体移植治疗卵巢早衰疾病具有可行性.

  • 骨髓间充质干细胞移植治疗生精细胞损伤模型大鼠的实验研究

    作者:王聪;何志旭;周从容

    目的:探讨骨髓间充质干细胞(MMSCs)在睾丸内定向分化为生精细胞用于治疗实验性雄性不育模型大鼠的可行性.方法:复苏冻存的MMSCs-GFP并培养传代后经睾丸网移植到经白消安处理的生精细胞损伤模型大鼠睾丸曲细精管内,移植后8周采样,观察睾丸质量指数、组织学表现和供体细胞分布,运用免疫荧光检测生殖细胞表面特异标志c-kit的表达.结果:MMSCs-GFP移植组右侧受体睾丸质量指数与模型组大鼠及自体未细胞移植的左侧睾丸相比有差异(P<0.01),与正常组大鼠睾丸质量指数相比无差异(P>0.05);光镜下显示曲精管内生精上皮明显恢复,荧光显微镜下观察MMSCs-GFP大部分迁移至曲精管基底部,免疫荧光结果显示移植组与自身未移植组相比,睾丸曲细精管内精原细胞表面特异标志基因c-kit表达有差异.结论:细胞冻存不影响MMSCs的增殖能力,MMSCs在体内生精微环境中能够定植并定向分化为生殖细胞.

  • 骨髓间充质干细胞及脂肪干细胞在勃起功能障碍中的研究进展

    作者:杜建均;马可为;云志中

    干细胞被定义为具有自我更新和定向分化的能力的细胞,因此,他们在医学界中代表了的巨大潜力。从历史上看,干细胞已被分为胚胎干细胞(ESC)和成体干细胞(ASC)。以前只认为ESC具有保持分化成任何细胞类型的能力,而ASC只是具有一定胚胎细胞的能力。然而,大量的研究表明,成体干细胞分化成的细胞类型的能力超出其组织起源。在本文中,我们列举了利用骨髓间充质干细胞及脂肪干细胞治疗勃起功能障碍的临床试验,对其进行一一综述。

  • 氢醌对骨髓间充质干细胞PARP-1表达的影响

    作者:高羽亭

    目的探讨氢醌(HQ)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)PARP-1基因表达的影响。方法2015年1月一2015年3月在东莞市环境医学重点实验室以BMSCs为对照组,以PARP-1沉默BMSCs为处理组,磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,分别以0、2.5、5.0、10.0、20.0和40.0μmol/L HQ染毒两组细胞,应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测两组细胞PARP-1基因表达的改变。结果与PBS组对比,2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L HQ染毒24 h后,BMSCs细胞PARP-1表达量分别为1.39倍、1.65倍(P<0.05)、1.69倍(P<0.05)、1.76倍(P<0.05)和1.5倍(P<0.05);沉默细胞PARP-1表达量分别为1.37倍(P<0.05)、1.58倍(P<0.05)、1.84倍(P<0.05)、2.15倍(P<0.05)和1.93倍(P<0.05);与BMSCs细胞相比,沉默细胞中PARP-1表达水平下降了78%(P<0.05)差异均无统计学意义。结论两组细胞PARP-1表达水平随HQ剂量增加先升后降,PARP-1沉默能增加BMSCs对HQ的敏感性。

  • 大鼠血管组织提取物体外控制间质干细胞转向内皮细胞的分化研究

    作者:梁晓鹏;田力

    目的 研究大鼠血管组织提取物于体外诱导骨髓间质干细胞(MSCs)向内皮细胞的分化能力.方法 2015年6-9月间使用淋巴细胞专用分离液对15例大鼠MSCs进行分离,以贴壁法行培养扩容,再采用流式细胞法检测MSCs的表层抗原水平,以基础培养液为实验A组,以含热处理的血管组织细胞提取物的培养液为实验B组,以含大鼠血管组织细胞提取物的培养液为实验C组,以含原代血管内皮组织细胞提取物的培养液作为实验D组,将第4代MSCs分别加入四组进行分化培养,分析对比细胞的表达变化,并检测内皮组织细胞于特异性标志物之变化表达.结果 实验C组的MSCs的细胞形态未见显著改变,但细胞内的基因表达可见明显改变,内皮细胞的特异性基因CD144、CD34、CD31以及eNOS(endothelial nitric oxide synthase)出现高表达.结论 血管组织细胞的提取物中含有能够诱导大鼠MSCs向内皮组织细胞分化的成份,提示成体细胞的内组成份对于相邻干细胞之分化结果具有至关重要的控制作用.

  • 短发夹RNA对人骨髓间充质干细胞生长增殖的影响

    作者:程杰;陶泽璋;肖伯奎;段洪刚;陈始明

    目的:观察靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的短发夹RNA(shRNA)对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)生长增殖的影响,探讨靶向hTERT的RNA干扰技术临床应用的安全性.方法:根据RNA干扰原理,利用构建的表达shRNA的靶向hTERTmRNA的真核表达质粒(shRNA1),非特异性的shRNA真核表达质粒(shRNA2),转染试剂(德国metafectene)和正常培养液处理细胞.24 h后在共聚焦显微镜下检测荧光表达情况;24h、48 h、72 h用MTT法检测细胞增殖活性;48 h后进行HE染色、RT-PCR及端粒酶活性检测.结果:①共聚焦显微镜下见shRNA1及shRNA2组有大量的细胞表达荧光.②相应时间点各组细胞生长增殖无明显差异(P>0.05);HE染色发现,同等培养条件下,各组细胞生长密度及形态无明显变化.③RT-PCR显示各组细胞均无hTERT mRNA的表达;端粒酶活性为阴性.结论:靶向hTERT mRNA的shRNA对正常hMSCs的生长增殖无明显影响,该方法对不表达hTERT的正常体细胞可能是安全的.

  • 不同传代倍数骨髓间充质干细胞诱导成脂能力的观察

    作者:黄治存

    目的:探讨不同传代倍数骨髓间充质干细胞诱导成脂的能力.方法:应用percoll法结合贴壁培养法分离培养骨髓MSCs,流式细胞仪法检测其特异性表面标志物,培养体系中加入1μmol/L地塞米松、0.5mmol/L IBMX、5mg/L人胰岛素,100μmol/L吲哚美辛,如此连续培养10代,油红O染色观察其成脂能力.结果:培养的MSCs在倒置相差显微镜下显示了间充质干细胞的形态特性,流式细胞仪检测证实为MSCs,第3代细胞在诱导21天后成脂能力强.结论:作为组织工程的种子细胞,骨髓间充质干细胞体外培养不宜超过7代.

  • BMP-2诱导MSCs修复无血运区半月板损伤的实验研究

    作者:王志波;王德春

    目的:为探寻无血运区半月板损伤的治疗方式.方法:选用健康新西兰大白兔分成A、B两组,双膝内外侧半月板均用于实验,在其半月板体部统一造成无血运区纵行全层裂.A组(36膝)对每只双膝随机采取一侧于半月板损伤区注入纤维蛋白胶(FG组),另一侧为空白对照组(NT组),B组(36膝)对其双膝随机采取一侧于半月板损伤区注入纤维蛋白胶与骨髓间充质干细胞混合物(FM组),另一侧于膝关节半月板损伤区注入纤维蛋白胶+骨髓间充质干细胞+骨形态发生蛋白混合物(FMB组),对半月板损伤区的修复情况行大体观察,结果:FMB组术后,缺损区修复组织与周围组织融合可,效果明显好于FG组及FM组,与NT组和FG组及12周时与FM组相比差异显著(P<0.05).结论:纤维蛋白胶是骨髓间充质干细胞及骨形态发生蛋白的理想载体,以纤维蛋白胶为载体的FG+MSCs+BMP-2复合物可以有效的促进和改善无血运区半月板损伤的修复,从而为临床治疗无血运区半月板损伤提供一种新的方法.

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