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Smad 4在去势大鼠下丘脑、垂体中的表达和意义
目的::研究Smad 4 mRNA在去卵巢大鼠下丘脑、垂体中的表达水平和意义。方法:SD大鼠分为3组(每组10只):对照组(月龄<24周雌性大鼠)、去势组(手术切除双侧卵巢大鼠)、治疗组(去势后雌激素治疗雌性大鼠30天),动物处死后迅速取材,提取各组大鼠下丘脑、垂体组织RNA,反转录成cDNA,下丘脑,采用实时定量PCR方法( Real-time quantitative reverse transcriPtion Polymerase chain reaction;qRT-PCR),检测各组大鼠Smad4 mRNA在下丘脑及垂体中的表达。结果:去势组大鼠下丘脑Smad4 mRNA水平是正常组0.4±0.22倍(P<0.05),雌激素治疗组大鼠下丘脑Smad4 mRNA水平是正常组2.5±0.79倍(P<0.05);去势组大鼠垂体Smad4 mRNA水平是正常组0.2±0.12倍(P<0.05),垂体中Smad4 mRNA水平是正常组8.8±0.16倍(P<0.05)。结论:去卵巢大鼠下丘脑、垂体表达Smad 4基因,并与雌激素水平变化相关。
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几种基因差异表达分析方法的比较
高等生物大约含有100 000个不同的基因,其中仅有约15%得到表达,基因表达的变化是调控细胞生命活动过程的核心机制[1],因此,分析基因表达的差异不仅在发育、分化和突变等研究领域有着极大的应用价值,而且已成为基因克隆的有效手段之一,其技术发展也非常迅速.目前主要有差减杂交(subtractive hybridization,SH)、mRNA差异显示逆转录PCR(mRNA differential display reverse transcription PCR,DDRT-PCR)、cDNA代表性差异分析(cDNA representational difference analysis,cDNARDA)和抑制消减杂交(suppression sbtractive hybridization,SSH)等.尽管这些具有代表性的方法均不完善,不能通过它们得到所有的差异表达基因,但已经有大量的重要基因通过这些方法得到了分离和鉴定.本文就这些技术的主要原理、基本过程、优越性和主要缺陷做一比较分析.
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mRNA差异显示反转录PCR技术的发展及其在神经科学中的应用
众所周知,控制生物性状的基本结构与功能单位是基因.不同细胞间或同一细胞不同时间与空间基因表达的差异决定着生命活动的多样性.
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mRNA差异显示技术及在毒理学研究中的应用
RNA差异显示技术全称为mRNA差异显示反转录聚合酶链反应PCR技术(differentialdisplay reverse transcription polymerase chain reaction DDRT-PCR).该技术在分析基因表达差异、绘制遗传图谱、分离特异性表达基因和临床诊断遗传疾病等方面具有特殊的优势,因此一经建立就被广泛应用,并取得了可喜的成果.在毒理学研究中,不同的毒物或者不同剂量的同一毒物,诱发组织细胞及损伤后修复的病理生理过程在分子水平上表现为一些基因的开放、关闭或表达量的改变,阐明这些差异表达基因的结构与功能对研究毒物对机体的损伤机制及防治实践有重要意义.然而,在缺乏相关基础研究资料的情况下,要从细胞内上万种mRNA分子中鉴别出引起毒物损伤和损伤后修复的重要基因十分困难,而近10年出现的mRNA差异显示技术为研究毒物对机体的损伤及其损伤后的修复的机制提供了强有力的工具.现对其毒理学研究中的作用作一综述.
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肾移植术后淋巴细胞相关基因表达的差异分析1
肾功能衰竭后,肾移植是必要的治疗手段,然而急性排斥反应严重影响移植器官的功能和长期存活.目前,移植排斥反应的发生机制尚不十分明确,亦未发现可早期特异诊断免疫排斥反应的指标,因而临床尚无早期检测排斥反应的有效方法.移植排斥反应的发生,其早期重要的事件是淋巴细胞与异体抗原识别后的活化增殖.本实验利用差异显示PCR(differe ntial display reverse transcription PCR, DDRT-PCR)技术,对一例肾移植术后患者外周血淋巴细胞基因表达变化进行连续监测,为建立早期、无创、特异性预测排斥反应的指标提供依据.
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The Beige and Chediak-Higashi (BEACH) domain is highly conserved in a large family of eukaryotic proteins, and is crucial for their functions in vesicle trafficking, membrane dynamics and receptor signaling. From a fetal brain cDNA library, we isolated a cDNA of 3858 bp encoding a novel human BEACH protein, which was named as human neurobeachin-like 1 (NBEAL1) gene. The cDNA had an open reading frame (ORF) of 3006 bp encoding a putative 1001 amino acid protein. The NBEAL1 gene was located on human chromosome 2q33-2q34 and consisted of 25 exons spanning about 73 kb of the human genome. PSORT analysis indicated that the NBEAL1 protein contained a vacuolar-targeting motif ILPK, which suggested the protein might be located in the cell lysosome. The expression pattern was examined by reverse transcription/polymerase chain reaction (RT-PCR), which showed that the transcripts were highly expressed in the human brain, kidney, prostate, and testis while lowly in the ovary, small intestine, colon and peripheral blood leukocyte. In addition, the RT-PCR result of and Northern blot showed that the novel gene was highly expressed in the biopsies of different grade glioma, especially in that of lower grade ones, which suggested it might be correlative with the glioma.
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儿童头皮与包皮组织诱导前后犬小孢子菌FSH1的表达
目的 探讨丝氨酸水解酶(FSH1)在犬小孢子菌致病中的意义.方法 半定量RT-PCR检测30株犬小孢子菌头癣株和30株犬小孢子菌体癣株经沙氏液体培养基传代及儿童头皮、包皮诱导前后FSH1的表达.结果 头癣株犬小孢子菌FSH1mRNA表达水平明显高于体癣株(P<0.01),经沙氏液体培养基传至第5代的菌株FSH1mRNA表达水平较第一代差异无统计学意义(P>0.05).经儿童头皮或包皮诱导后,FSH1mRNA表达水平较诱导前明显升高(F=2025.713、1833.139,P值均<0.01),且不同皮肤组织(儿童头皮、儿童包皮)诱导后的菌株其表达水平差异有统计学意义(P<0.01).结论 不同感染部位的犬小孢子菌FSH1mRNA表达水平不同;局部组织对该菌的FSH1mRNA表达存在诱导作用,且儿童头皮的诱导作用明显.
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不同预后尖锐湿疣组织中Toll样受体3、9的表达
目的探讨不同预后尖锐湿疣(CA)患者皮损局部Toll样受体3(TLR3)和Toll样受体9(TLR9)表达定位及TLR3 mRNA、TLR9 mRNA的表达情况.方法免疫组化SP法及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测10例CA复发者、14例CA无复发者及10例包皮组织中TLR3及TLR9表达情况.结果 TLR3、TLR9在无复发CA皮损中表达以棘层、颗粒层为主;在复发组CA皮损中表达以基底层、棘层为主.无复发组CA组织中TLR3mRNA表达较对照组及复发组均明显升高(P<0.01、P<0.05),TLR9mRNA较对照组明显升高(P<0.05),较复发组差异无统计学意义.结论表皮TLR3及TLR9的表达部位和表达量的改变可能与CA预后有关,TLR3的影响可能更大.
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尖锐湿疣组织内血管内皮生长因子和转化生长因子-α表达
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子-α(TGF-α)在尖锐湿疣(CA)血管形成中的作用.方法 用RT-PCR和免疫组化法检测30例CA和15例正常包皮中VEGF、TGF-α和CD34表达.结果 CA中VEGF和TCF-α mRNA表达明显高于正常包皮(P<0.001);CA中VEGF、TGF-α蛋白阳性表达率分别为90%、86.7%,正常包皮中则为40%、26.7%,二者的差异具有统计学意义(P<0.01).CA中微血管密度比正常包皮明显增多(P<0.01),且CA中VEGF、TGF-α蛋白表达与MVD呈显著正相关(P<0.01).结论 CA中VEGF和TGF-α表达上调,可能促进血管生成,参与CA的发生、发展.
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人乳头瘤病毒6bL1双顺反子载体的构建及其在哺乳动物细胞内的表达
目的构建尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒6b型晚期基因(HPV6b L1)的双顺反子表达载体,并使其在哺乳动物细胞内表达,以期建立含有HPV6b L1的细胞模型.方法表达质粒pEGFP-HPV6bL1经双酶切纯化后与经过相同双酶切的真核表达质粒pIRES2-EGFP连接,酶切鉴定,挑选阳性克隆进行测序.重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP转染进小鼠成纤维细胞(NIH3T3),荧光显微镜下观察EGFP蛋白的表达.RT-PCR检测HPV6b L1 mRNA的生成.结果成功构建含HPV6b L1的重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP.重组体成功转染进NIH3T3细胞,并用G418筛选.同时荧光倒置显微镜下可观察到细胞内有绿色荧光蛋白的表达.进一步进行RT-PCR,检测到HPV6b L1 mRNA的生成.结论成功构建携带HPV6b L1的重组体pIRES2-HPV6bL1-EGFP并转染入NIH3T3细胞.经荧光倒置显微镜观察及RT-PCR方法检测证明HPV6b L1在NIH3T3细胞内成功表达.
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AIM: To study the expression of c-fos mRNA in brain following moderate lateral fluid percussion brain injury in rats, and to observe the temporal patterns of its expression following percussion. METHODS: Male Sprague-Dawley rats were divided into normal control, sham operation control and injury group. The rats of injury group subjected to moderate lateral fluid percussion injury (0.2 mPa). The injury groups were then subdivided into 5 min, 15 min, 30 min, 1h, 2h groups according to the time elapsed after injury. The expression of c-fos mRNA was studied with reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) semi-quantitatively.RESULTS: At 5 min after percussion, the induction of c-fos mRNA was increased, and remained elevated up to 2 h after brain injury.CONCLUSION: The induction and expression of the c-fos mRNA in cortex and brain stem after fluid percussion brain injury were increased rapidly.