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大鼠压力负荷型心肌肥厚相关基因片段分离和鉴定
本实验基于心肌肥厚过程中基因表达所发生的变化,采用cDNA差减杂交法分离其中存在表达差异的基因片段.在三个不同时期的六组材料中共分离出三十六个差异性基因片段,其中以心肌组织作为材料分离出二十四个片段,以灌流分离的心肌细胞作为材料得到十二个片段.杂交结果显示它们在心肌肥厚组和对照组中确实存在表达差异.
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SARI基因的结构与功能
SARI(suppressor of AP-1 and regulated by interferon)是在2008年通过差减杂交(subtraction hybridization)技术发现的一种新的抑癌基因[1],是一种新型的含碱性亮氨酸拉链的Ⅰ型干扰素诱导的早期反应基因,从结构特性而言,与激活转录因子(activating transcription factor,ATF)具有相似之处,故又称BATF2(basic leucine zipper transcription factor,ATF-like 2),其在多种组织广泛表达,具有与BATF和BATF3类似的碱性亮氨酸拉链结构,可抑制AP-1转录因子家族活性,目前有限的资料均证明,SARI是一种抑癌基因,但其作用机制尚不十分清楚.
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几种基因差异表达分析方法的比较
高等生物大约含有100 000个不同的基因,其中仅有约15%得到表达,基因表达的变化是调控细胞生命活动过程的核心机制[1],因此,分析基因表达的差异不仅在发育、分化和突变等研究领域有着极大的应用价值,而且已成为基因克隆的有效手段之一,其技术发展也非常迅速.目前主要有差减杂交(subtractive hybridization,SH)、mRNA差异显示逆转录PCR(mRNA differential display reverse transcription PCR,DDRT-PCR)、cDNA代表性差异分析(cDNA representational difference analysis,cDNARDA)和抑制消减杂交(suppression sbtractive hybridization,SSH)等.尽管这些具有代表性的方法均不完善,不能通过它们得到所有的差异表达基因,但已经有大量的重要基因通过这些方法得到了分离和鉴定.本文就这些技术的主要原理、基本过程、优越性和主要缺陷做一比较分析.
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IL-10家族中的新白细胞介素
分子生物学技术的发展使从基因文库中筛选新分子的方法日臻完善,许多新的白细胞介素(Interleukin,IL)被相继发现.目前,IL系列细胞因子已至少有28个成员,其中IL-19~IL-26是用差减杂交等方法从不同细胞或组织的cDNA文库或基因文库中筛选出,再经组织分布、结构分析和功能实验等后确定的.尽管对这些白细胞介素的细胞介素的功能了解不多,且它们已知的功能与IL-10或IFN-γ的活性不同,但由于这些新白细胞介素的细胞介素在氨基酸序列和蛋白质空间构型方面与IL-10和IFN-γ有同源性,它们的受体也十分相似,人们仍将它们归类于Ⅱ型细胞因子家族或IL-10家族.
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黑线仓鼠白化突变系抑制差减文库的构建及初步分析
目的 构建黑线仓鼠白化突变系的抑制差减文库,分离获得黑线仓鼠发生被毛突变的相关基因片段,并进行初步分析.方法 以黑线仓鼠作为实验组(tester),以其白化突变系作为驱动组(driver),采用抑制差减杂交技术构建差减文库(SSH).对阳性克隆进行测序并分析.结果 共获得126个有生物学意义的表达序列标签(ESTs),包括21个骨架蛋白,42个转录因子,24个代谢酶基因,25个转运分子及其调节蛋白和4个未知基因.差异基因中没有发现常见的白化疾病相关基因,发现多种与溶酶体的形成及内吞作用相关的基因,推测黑线仓鼠白化突变性状的产生可能与黑色素的运输障碍有关.结论 成功构建了黑线仓鼠白化突变的抑制差减文库,获得126个白化突变的相关基因,为进一步寻找白化突变相关基因,揭示其分子机制奠定了基础.
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差减杂交技术在细菌学研究中的应用
差减杂交技术是一种用于寻找基因组之间差异的有效的方法.其通过去除被比较的两组基因组之间的共有序列,富集差异序列的方法来达到寻找差异基因的目的.其操作简便,价格低廉,且避免了已知细菌基因组信息匮乏对其应用的限制,从而在细菌学方面得到了广泛的应用,包括鉴定可能与毒力有关的致病基因岛/遗传岛、查找细菌的致弱机理、鉴定可移动的遗传成分、寻找毒力基因、寻找与导致宿主差异有关的基因、检测基因表达上的变化等多个方面.从而为病原的鉴定,疾病的诊断,预防,细菌的致病机理等方面的研究奠定了坚实的基础.