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利用RIP-Chip筛选结合多聚胞嘧啶结合蛋白2的microRNAs
目的 通过核糖核蛋白免疫沉淀-芯片技术(RIP-Chip)在人正常神经胶质细胞(HA)和神经胶质瘤细胞(T98G和U87MG)中筛选与多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)相互作用的microRNA(miRNA).方法 选择兔抗人PCBP2抗体,用Western blot法检测PCBP2蛋白在HA、T98G和U87MG细胞中的表达.用兔IgG作为阴性对照,收集3种细胞的RIP蛋白和RNA样品,通过Western blot检测PCBP2蛋白富集效果,利用NanoDrop定量并经Agilent2100检测RNA完整性.选择Affymetrix miRNA 3.0芯片对RNA样品进行杂交,筛选富集4倍以上且P＜0.05的miRNA.结果 用PCBP2抗体进行RIP-Chip实验,终筛选和PCBP2相互作用的103条miRNA,1条前体miRNA和1条核仁小分子RNA;其中15条存在PCBP2的结合位点.结论 PCBP2可以通过识别靶序列或者以核糖核蛋白复合物形式在细胞内结合成熟的miRNA、前体miRNA或核仁小分子RNA.
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调节PCBP2表达水平对心肌细胞肥大的影响
目的 研究调节PCBP2表达水平对心肌细胞肥大的影响.方法 分离、培养原代乳鼠心肌细胞;在体外应用儿茶酚胺类物质(血管紧张素Ⅱ、异丙肾上腺素、苯肾上腺素)来诱导心肌细胞.诱导心肌细胞肥大,通过对心肌细胞表面积和心肌肥大标志物的检测,观察敲低和过表达PCBP2对血管紧张素Ⅱ诱导 的心肌细胞肥大的影响.结果 血管紧张素Ⅱ、异丙肾上腺素、苯肾上腺素均可诱导心肌细胞肥大,使心肌细胞表面积增加.敲低心肌细胞PCBP2后,血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的程度更大,使心肌细胞表面积显著增大;而过表达心肌细胞PCBP2后,可有效抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大,使心肌细胞表面积显著缩小.结论 PCBP2参与调节心肌细胞肥大,是抑制病理条件下心肌细胞肥大的负性调节因子.
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PCBP2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生中的作用
目的 探讨PCBP2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生过程中的作用.方法 选取8～10周龄的雄性C57BL/6小鼠20只,体重23～28 g,随机分为2组,每组各10只,分别施以主动脉缩窄术(TAC组)和假手术(Sham组).术后4周应用超声心动图评价小鼠的心脏功能,应用心脏重量与体重之比(HW/BW)定量评价心肌肥厚程度.Real-time PCR检测心肌肥厚标志物Nppa、β-MHC (Myh7)的mRNA水平,同时检测PCBP2 mRNA水平.Western blot方法检测Nppa、β-MHC及PCBP2的蛋白水平.比较分析两组之间的差异.结果 与Sham组相比,TAC组小鼠的心肌肥厚程度明显增加[TAC组(8.23±1.88)mg/g比Sham组(4.89±0.68)mg/g],左心室射血分数[TAC组(41.38±2.22)％比Sham组(59.15±3.58)％]及短轴收缩率[TAC组(33.61±0.92)％比Sham组(43.87±1.37)％]明显降低(P＜0.05).TAC组的心肌肥厚标志物Nppa、β-MHC的mRNA水平及蛋白水平均明显高于Sham组(P＜0.05).然而,TAC组PCBP2mRNA水平及蛋白水平却明显低于Sham组(P＜0.05),与心肌标志物Nppa、β-MHC的变化趋势相反.结论 PCBP2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生过程中起着负性调节作用,上调PCBP2表达可能会抑制心肌肥厚的发展.
