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SARI基因的结构与功能
SARI(suppressor of AP-1 and regulated by interferon)是在2008年通过差减杂交(subtraction hybridization)技术发现的一种新的抑癌基因[1],是一种新型的含碱性亮氨酸拉链的Ⅰ型干扰素诱导的早期反应基因,从结构特性而言,与激活转录因子(activating transcription factor,ATF)具有相似之处,故又称BATF2(basic leucine zipper transcription factor,ATF-like 2),其在多种组织广泛表达,具有与BATF和BATF3类似的碱性亮氨酸拉链结构,可抑制AP-1转录因子家族活性,目前有限的资料均证明,SARI是一种抑癌基因,但其作用机制尚不十分清楚.
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乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对转录因子ATF-1的调节
0引言乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)的感染,不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化、肝细胞癌(HCC)的发生密切相关.虽然HBV和HCV感染与HCC之间的关系已经得到确定,但是具体的分子生物学机制还不十分清楚.由于肝炎病毒可以影响肝细胞信号转导,引起细胞的病变及恶性转化[1],而激活转录因子-1(activating transcription factor-1,ATF-1)是重要的细胞信号转导途经中的转录因子,因此深入研究二者的相互关系对肝炎病毒的发病机制研究有进一步的帮助.
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乙型和丙型肝炎病毒与转录因子ATF-2的调节
0引言乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)的感染,不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化、肝细胞癌(HCC)的发生密切相关.虽然HBV和HCV感染与HCC之间的关系已经得到确定,但是要阐明其具体的分子生物学机制还有许多工作要做.由于肝炎病毒可以影响细胞信号转导,引起细胞的病变及恶性转化[1],而激活转录因子-2(activatingtranscription factor-2,ATF-2)是重要的细胞信号转导途径中的转录因子,因此深入研究二者的相互关系对肝炎病毒的发病机制会有进一步的了解.
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过氧化物酶体增殖物激活受体γ与急、慢性胰腺炎
过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)是核因子受体家族的配体激活转录因子.在过去的10年里科学家们对PPARs在调节脂蛋白和脂质的代谢、炎症反应、葡萄糖的平衡和细胞分化等一些生理过程中的作用做了大量的研究.迄今为止,已发现了3种PPAR异构体:PPARα、PPARβ和PPARγ,每一种由不同的基因编码,有不同的表达方式[1].
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激活转录因子4协同核因子相关因子-2调控γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基的表达对支气管哮喘豚鼠的影响
支气管哮喘(简称哮喘)是一种气道慢性炎症性疾病.氧化应激在诱导气道炎症及其发展中起关键作用.核因子相关因子-2( NF-E2-related factor 2,Nrf2)是一种对氧化还原敏感的转录因子,调节肺部几乎所有相关抗氧化基因,如γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基(γ-glutamylcysteine synthetase catalytic subunit,γ-GCSc),发挥重要的抗氧化作用[1].激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)属于具有碱性亮氨酸拉链结构(basic leucine zipper,bZIP)的cAMP反应元件结合蛋白(CAMP-responsive element binding protein,CREB)家族中的转录因子.氧化应激时,ATF4能与Nrf2结合形成异二聚体,调控Nrf2及其靶基因γ-GCSc表达[2].本研究中通过观察哮喘急性发作期豚鼠肺组织中ATF4、Nrf2、γ-GCSc的表达变化,探讨其在哮喘发病及防治中的作用.
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X射线全身照射对小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4表达的影响
CD14是LPS/LBP复合物的受体,以LPS-LBP-CD14三联体形式介导LPS诱导细胞活化.TLR4是Toll样受体中发现较早的一个受体,是LPS信号跨入细胞所必需的跨膜受体[1].CD14和TLR4作为巨噬细胞膜上的跨膜受体将细胞外信号传到细胞内,通过一系列蛋白质级联反应激活转录因子NF-κB和Jun/Fos,释放IL-1和IL-6等细胞因子而发生炎性反应.本研究探讨X射线全身照射对小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4表达的影响,为临床应用X射线进行抗炎、抗肿瘤治疗提供理论和实验依据.
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SiRNA-STAT3在肿瘤研究中的应用
信号转导子与转录激活子(signal transducersand activators of transcription:STAT)是一类生长因子受体和一些非受体类酪氨酸激酶能激活转录因子[1],是Darnell[2]于1990年在研究干扰素(IFN)信号转导通路时首次被发现.STAT蛋白是一类脱氧核糖核酸(DNA)结合蛋白,作为JAK(Janus Kinase)-STAT途径中重要的JAKs底物,STATs在细胞因子(cytokine;CK)的信号转导中起着关键的作用.
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PPAR-γ在缺血脑保护中的作用研究进展
过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator s activated receptors,PPARs),是一类细胞核激素受体超家族配体激活转录因子,控制多种细胞和代谢过程.PPARs的3种亚型(α、β、γ)参与机体多种生理和病理过程,包括葡萄糖的吸收、脂肪代谢、细胞增殖与分化、炎性及免疫反应、氧化应激、肿瘤发生等.近年来,对PPAR-γ的作用机制、效应和应用的研究较多,对糖脂代谢方面的疾病有很好的疗效,已成为代谢性疾病的重要治疗靶标.
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真核基因转录因子研究进展
转录因子(TFs)是一类能特异性地结合到基因启动子区,并且对靶基因的转录起到调控作用的蛋白质,又称为反式作用因子.作为基因调控网络的一个重要角色,准确地认识转录因子的结构与功能,是研究基因转录调控机制的关键.本文对转录因子的结构、普遍转录因子与激活转录因子的功能以及目前转录因子相关的研究方法进行了综述.
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乙型肝炎病毒X蛋白转录激活细胞DNA甲基转移酶基因启动子进而上调其表达
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma ,HCC )是常见的恶性肿瘤之一。大量资料显示,慢性HBV感染是其发生、发展的一个重要病原学因素,80%的 HCC与 HBV感染有关,而85%~90%的 HBV 相关性 HCC 存在 HBV 基因组整合[1]。HBV 基因组整合位点并不随机发生,多集中在 HBV DNA反式激活蛋白的基因编码区,即X蛋白编码基因,其编码蛋白能够反式激活同源/异源的病毒/细胞转录调节序列,与乙型肝炎的慢性化和正常肝细胞中癌基因激活和(或)抑癌基因失活密切相关。之前的研究均证实,HBx是一种非常强大的反式激活因子,胞核内的 HBx尽管不能直接与DNA结合,但可与多种转移因子蛋白相互作用,导致特定基因的转录活性升高[2‐3]。有研究报道,DNA甲基转移酶(DNM T )启动子序列中含有 A P1、S P1、S P3等转录因子结合位点,而有关 HBx广泛激活转录因子AP1、SP1、SP3的研究多有报道[4],且HBx参与表观遗传路径、诱导抑癌基因甲基化进而下调其表达、参与 HCC发生与发展的研究也日益增多,而抑癌基因甲基化过程由 DNM T 催化并维持。有研究表明, HCC患者血清及肝组织中 DNM T 表达升高[5‐6],但有关HBx与DNM T转录表达之间是否存在关联及其可能的机制依然不甚明确,需更深入的研究。本研究通过分析启动子活性,从另一方面来研究影响基因调控的因素,设计特异性引物扩增包含DNM T 1、DNM T 3A、DNM T 3B启动子区域的DNA片段,构建相应的启动子报告载体,试图从启动子水平阐述HBx对DNM T的影响。
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高效表达幽门螺杆菌cag A蛋白工程菌的构建
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是引起人类慢性活动性胃炎、消化性溃疡的主要病原菌,并与胃癌的发生密切相关.对Hp毒力因子进行的研究表明:尿素酶、空泡毒素(VacA)及细胞毒素相关蛋白A(CagA),是引起人类严重胃部疾患的主要致病因素[1].其中cagA基因已被克隆并进行了序列分析[2].研究还证实cagA基因的存在是产生有活性的空泡毒素所必须的,并能促进细胞因子IL-8的释放及激活转录因子NF-k B,加重胃黏膜的组织损伤,故而目前认为含cagA基因的Hp菌株是高毒株[3].我国人群中,Hp的携带率高达80%左右,胃癌的发病人数每年约20万,约占全世界胃癌发病人数的35%,在Hp分离株中约有97%~98%存在cagA基因,表明我国是Hp高毒株的高感染国[4].为了获得高效表达的幽门螺杆菌CagA蛋白,从而为高毒力Hp的人群普查提供一种具有良好前景的基因工程诊断抗原,我们克隆了该基因的保守区域,对不同诱导条件下CagA蛋白的表达量进行了优化研究,并对CagA蛋白的可溶性表达进行了探索.
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膀胱癌侵袭转移机制研究有新发现
上海交通大学医学院附属新华医院检验科沈立松教授领衔的科研团队,在膀胱癌侵袭转移的机制研究中发现,人激活转录因子3(ATF3)是一种新的膀胱癌转移抑制基因。研究者阐明了ATF3通过调控凝溶胶蛋白(gelsolin)介导的细胞骨架蛋白重构,抑制膀胱癌细胞转移的新机制。该项成果有望为临床判断膀胱癌预后和治疗找到新的靶点。研究论文发表于《肿瘤研究》[Cancer Res 2013,73(12):3625]杂志。
研究者通过分析膀胱癌组织的表型,发现适应反应基因ATF3在膀胱癌组织中低表达,且与膀胱癌的侵袭转移相关。临床患者生存期资料也显示,ATF3低表达的膀胱癌患者生存期相对较短。 -
GRP78在肿瘤治疗和预后中的应用
内质网(ER)是膜蛋白及分泌蛋白合成及组装的核周细胞器,可合成大约1/3的细胞蛋白质.当蛋白负载超出ER的组装能力时,会激发细胞的未折叠蛋白反应(UPR),激活PERK、IRE1/X-box结合蛋白-1(XBP-1),并且激活转录因子-6信号途径,这些保护措施可以导致广泛的翻译停滞,上调分子伴侣和折叠酶表达,增强内质相关的错误折叠蛋门降解[1,2].
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破骨细胞的RANK信号转导系统研究进展
信号转导系统(signal transduction system)是由接收信号的特定受体、受体后信号转导通路、转录因子和作用终端组成,信号通过受体激活细胞内的信号转导通路,引发离子通道开放、蛋白质可逆磷酸化反应及基因表达改变等变化,导致一系列生物学效应,调节细胞的增殖、分化、代谢、适应、防御和凋亡等.信号转导系统的过程可概括为:细胞外信号与受体结合→受体将胞外信号转换为胞内信号→启动细胞内信号转导通路→激活转录因子→启动基因的表达→细胞生物学效应.
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Intermedin通过减轻内质网应激和炎症反应而抑制同型半胱氨酸诱导的心肌纤维化
目的:探讨intermedin( IMD)1-53在apoE-/-小鼠心肌纤维化中的作用和机制。方法:同型半胱氨酸( Hcy)处理apoE-/-小鼠和心脏成纤维细胞。结果:IMD1-53显著抑制Hcy处理apoE-/-小鼠心肌间质胶原沉积、I型和III型胶原mRNA和蛋白表达,直接抑制Hcy诱导的心脏成纤维细胞I型和III型胶原的蛋白表达,抑制心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞分化。此外, IMD1-53抑制Hcy处理的apoE-/-小鼠心脏组织及心脏成纤维细胞内质网应激标志分子如葡萄糖调节蛋白78( GRP78)、GRP94、激活转录因子6(ATF6)、ATF4、蛋白激酶受体样内质网激酶、真核翻译起始因子2α、肌醇需求酶1α和剪切的X盒结合蛋白1的激活。 IMD1-53抑制Hcy处理的apoE-/-小鼠心脏组织及成纤维细胞炎症相关分子如肿瘤坏死因子α、单核细胞趋化蛋白1、白细胞介素6、白细胞介素1、核因子κB、转化生长因子α1和c-Jun氨基末端激酶的激活。结论:IMD1-53显著抑制心肌纤维化,其机制可能与IMD减轻内质网应激和炎症反应有关。
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糖皮质激素对PMA诱导的CD18表达的抑制作用及机制
国内外大量研究表明糖皮质激素(glucocorticoid,GC)能明显抑制包括由于CD18在内的多种粘附分子的表达.以往研究多限于CD18蛋白质水平,无法阐明GC-GR使细胞表面CD18数量减少,是由于合成减少,分解增多,还是细胞内转位过程受到抑制(CD18从胞内储存池脱落并转位至质膜有关).对GC在CD18基因转录水平上的抑制作用极其机制目前研究得很少.目的:探讨GC抑制CD18 mRNA表达的作用及机制.方法:本研究以细胞激活剂PMA诱导下的人组织淋巴瘤细胞系U937细胞和人早幼粒白血病细胞系HL-60为实验模型,用定量RT-PCR法、Northern杂交法、流式细胞术研究GC抑制CD18表达的作用及机制.结果:地塞米松Dex能够明显地抑制PMA诱导U937细胞CD18 mRNA的表达,这种作用具有剂量依赖性,当Dex为10-8mol/L时,其抑制率达50%,10-6mol/L时可达89%.把GR的拮抗剂RU38486与Dex同时处理U937细胞,随着RU38486浓度的升高,Dex对CD18 mRNA表达上调的抑制作用逐渐减弱,当RU38486的浓度达10-6mol/L时,几乎可完全阻断Dex的作用.而单纯用RU38486处理U937细胞,CD18 mRNA表达无明显变化,说明Dex的抑制作用是通过GR来介导的.在U937细胞和HL-60细胞,Dex对CD18膜蛋白表达也有相似的抑制作用.在HL-60细胞,Dex能阻止PMA引起的细胞粘附表型的改变,RU486可逆转Dex的作用.实验还表明PMA能通过PKC激活转录因子NF-κB促进IL-8表达,GR介导的Dex具有明显的抑制作用.结论:Dex对CD18表达的抑制作用是通过GR来介导的.由于CD18的基因启动子上无NF-κB的结合位点和糖皮质激素反应元件(GRE),Dex对CD18表达的抑制作用可能是间接的.
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PMA促进CD18表达的信号转导通路及机制
细胞激活剂肉豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)是蛋白激酶C(PKC)的特异性激动剂,PMA具有促进U937细胞和HL-60细胞分化的作用,能使U937细胞和HL-60细胞膜上的整合素β2亚族CD18蛋白增多.但PMA诱导作用的机制尚未明了.目的:进一步阐明PMA促进CD18表达的信号传导通路及机制.方法:定量RT-PCR法、Northern杂交法、流式细胞术研究了细胞激活剂PMA对人组织淋巴瘤细胞系U937细胞和人早幼粒白血病细胞系HL-60 CD18表达的作用及有关的信号传导通路.结果:U937细胞经不同浓度的PMA(5 ng/mL~200 ng/mL)处理8 h后,CD18 mRNA表达水平均有明显提高,且具有明显的剂效关系.50 ng/mL PMA可使CD18 mRNA表达水平达高,约为对照的3倍.50 ng/mL PMA对CD18 mRNA表达水平的诱导作用具有明显的时相性,随着作用时间延长,PMA诱导作用逐渐加强,作用24 h后,mRNA表达水平可达对照组的12.14倍.PMA还能引起U937细胞、HL-60细胞CD18膜蛋白的数量的增多.在HL-60细胞,伴随CD18膜蛋白数量的增多,细胞的粘附表型也由悬浮、分散变成贴壁、聚集状.PMA的诱导作用能被PKC或转录因子NF-κB的抑制剂十四烷基化多肽抑制剂Myr (Myr. Arg-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-Gln-Lys-Asn-Val)和pyrrolidinedithiocarbamate(APDC)所抑制,但不能被AP-1的抑制剂curcumin所阻断.本实验还发现PMA能诱导U937细胞的IL-8的mRNA表达,这种作用能被NF-κB的抑制剂所抑制.结论:PMA促进CD18表达的作用是通过激活该细胞的PKC,进而激活转录因子NF-κB实现的.由于CD18基因中缺乏NF-κB的结合元件,提示NF-κB的作用可能是间接的.尽管PMA可激活AP-1,CD18基因启动子上也有AP-1的结合位点,但AP-1不是促进CD18表达所必需的转录因子.IL-8有可能参与了PMA对CD18表达的诱导作用.
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PPAR-γ及其配体在人体细胞的分子研究
PPAR-γ,即Peroxisome Proliferator-activated receptor-gam-ma(过氧化物酶体增殖物激活受体),因初在脂细胞的分化中发现,故又称脂激活转录因子.对细胞生长、分化以及炎症、凋亡具有重要影响,与心血管疾病、糖尿病及肿瘤细胞的生长密切相关.近年来,对PPAR-γ及其配体的研究较多,但多为实验动物研究,其在人体细胞的作用机制及效应、应用等研究尚有限,本文就其研究近况作一综述.……
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AngⅡ通过ATF-1通路诱导NOX1高表达
目的:探讨激活转录因子(ATF1)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)中NOX1基因表达增加的作用.方法:体外培养大鼠主动脉VSMCs,用荧光实时定量逆转录PCR(Real-time RT-PCR)检测NOX1基因表达的量,Western Blot检测ATF-1蛋白在AngⅡ的刺激是否引起NOX1基因的高表达并用RNA干扰(RNAi)技术转染VSMCs使ATF-1基因沉默来观察NOX1的表达.结果:AngⅡ能够诱导NOX1基因的表达增加以及增强ATF-1的磷酸化及活性,ATF1基因沉默反过来可抑制AngⅡ诱导的NOX1基因表达的增加.结论:在大鼠的VSMCs中,ATF-1是介导NOX1基因表达的一个必须的转录因子.