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淫羊藿苷对动脉粥样硬化病灶血管平滑肌细胞葡萄糖调节蛋白78基因表达的影响
目的:差异筛选淫羊藿苷(icariin,ICA)诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)凋亡相关基因葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78),观察其在动脉粥样硬化(athemsclerosis,AS)病灶中的表达情况,探讨ICA抗AS的可能机制.方法:建立同型半胱氨酸(homocysteinemia,HCY)诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度ICA共同培养48h后,原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)筛选差异基因片段,克隆、鉴定、测序,组织原位杂交观察该基因在正常及AS病灶中的表达水平.结果:TUNEL法显示ICA组凋亡细胞数目明显增多;筛选出全长648bp的基因片断与兔GRP78基因高度同源,组织原位杂交显示该基因在AS病灶VSMC胞质中高表达.结论:GRP78基因参与AS病变形成,其表达上调可能是ICA诱导VSMC凋亡作用靶点之一.
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小干扰RNA抑制胃癌细胞株葡萄糖调节蛋白Grp78的表达
目的:观察Grp78靶向RNA干扰质粒载体对人类胃癌细胞株7901 Grp78基因表达的抑制作用.方法:设计1对Grp78基因发卡寡核苷酸,并与psiSTRIKETM质粒载体连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体,将重组质粒导入人类胃癌细胞株7901内,分别在转染前、转染后24,48和72 h通过RT-PCR、免疫荧光技术检测Grp78 mRNA及蛋白水平的表达情况.结果:成功构建RNA干扰质粒载体,靶向Grp78干扰质粒载体命名为p siSTRIKETM/Grp78.将上述质粒转染到人类胃癌细胞株后,观察到Grp78 mRNA及蛋白水平的表达明显下调,随着时间的延长Grp78在实验组中的表达逐渐降低,并随着时间推移稳定存在.阴性对照组,转染前组,转染12,48,72 h组Grp78的mRNA相对表达量分别为1.069,0.972,0.662,0.408,0.420.转染后组较转染前组及阴性对照组分别具有显著性差异(P＜0.01),转染前与阴性对照组无显著性差异(P＞0.05).转染前后组免疫荧光表达结果统计学差异明显(P＜0.001),其中转染后48 h同转染后24 h相比较Grp78蛋白表达明显减少(P＜0.00714).结论:构建的RNA干扰真核表达载体psiSTRIKETM/Grp78能明显抑制Grp78 mRNA及蛋白的表达.
关键词： 胃癌 RNA干扰 葡萄糖调节蛋白 逆转录-聚合酶链反应 免疫荧光技术 -
氧调节蛋白150在急性坏死性胰腺炎胰腺损伤中的作用
重症急性胰腺炎(severe acute pancreastitis,SAP)是临床常见的急腹症,病情凶险,病死率高,易伴发全身炎症反应综合征(SIRS),甚至多器官功能不全综合征(MODS).氧调节蛋白150(ORP150)是葡萄糖调节蛋白(GRPs)家族的成员.它作为一种应激蛋白,正常情况下表达很低.当细胞和组织暴露于缺氧、缺血-再灌注损伤等应激环境时则能诱发内质网应激,从而使ORP150的表达增高.
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醌型二氢生物喋呤还原酶基因表达变化对高糖环境下NRK-52E细胞葡萄糖调节蛋白75表达的影响
目的 探讨醌型二氢生物喋呤还原酶(QDPR)基因对高糖环境下肾小管上皮细胞系NRK-52E葡萄糖调节蛋白75(GRP75)的影响及其在DN中的可能作用机制.方法 构建过表达及敲低QDPR基因的NRK-52E模型,分别予5.4 mmol/L和30 mmol/L葡萄糖培养基培养,Western blot检测GRP75在OLETF大鼠肾皮质及细胞模型各组的表达水平,流式细胞术检测细胞周期.结果 与LETO鼠比较,OLETF大鼠肾皮质GRP75含量降低[(1.53±0.27) vs (0.79±0.26),P＜0.01];与NRK-52E组比较,NRK-52E高糖组的GRP75含量降低[(0.62±0.03 ) vs (0.46±0.06)]、G0/G1期细胞增多[(39.80±1.31)% vs (50.35±0.33)%]、S期细胞减少[(48.55±1.85)% vs (37.17±0.10)%] (P＜0.05);过表达QDPR使高糖环境下GRP75含量降低[(0.85±0.10) vs (0.45±0.16),P＜0.05]、G0/G1期细胞增多[(43.73±0.48)% vs (61.87±0.17)%,P＜0.01],S期细胞减少[(42.42±0.66)% vs (25.29±0.12)%,P＜0.01];敲低QDPR不影响GRP75表达量与细胞周期. 结论 GRP75在DN模型中含量减少,QDPR基因可能通过GRP75及细胞周期影响DN发生发展.
关键词： 糖尿病肾病 醌型二氢生物喋呤还原酶 葡萄糖调节蛋白 肾小管上皮细胞 -
下肢缺血预处理对未成熟心肌内质网应激细胞凋亡的影响
目的：探讨下肢缺血预处理对未成熟心肌内质网应激细胞凋亡的影响。
方法：采用兔离体心脏Langendorff灌注模型，24只幼兔随机分为3组，对照组（C，n=8）：仅灌注KH液180分钟；缺血/再灌组（I/R，n=8）：心脏灌注20分钟后，停灌60分钟，复灌100分钟；下肢缺血预处理组（LIP， n=8），反复3次阻断双下肢血流5分钟/放开5分钟，建立Langendorff模型，然后重复I/R组缺血/再灌方法。TUNEL法检测心肌细胞凋亡率、Western blot检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、bcl-2、bax和fas蛋白表达。 -
酸性复灌液对缺血再灌注心肌内质网应激葡萄糖调节蛋白78的影响
目的：观察酸性复灌液对大鼠缺血再灌注（I/R）心肌内质网应激（ERS）葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的影响。
方法：采用Langendorff离体心脏灌注模型，SD大鼠24只随机分为3组（n=8）：正常对照组（C），灌注pH7.4 HEPES-KH液180 min；缺血/再灌组（I/R，n=8），pH7.4 HEPES-KH液灌流20 min后缺血60 min，pH 7.4 HEPES-KH液恢复灌注100 min；酸性复灌液组（E，n=8），pH 7.4 HEPES-KH液灌流20 min后缺血60 min，复灌初先用pH6.8和pH 7.1 HEPES-KH液依次灌注5 min，后恢pH 7.4 ；HEPES-KH液灌注90 min。以肌钙蛋白I（cTnI）浓度、心肌细胞凋亡、GRP78mRNA和GRP78蛋白表达为检测指标。 -
血红素加氧酶-1对烟草烟雾提取物诱导健康人支气管上皮细胞凋亡的作用
COPD是严重危害人类健康的常见疾病,其主要的病理特征为气流受限不完全可逆并呈进行性发展.烟草中含有4000多种化学物质,是导致COPD的主要元凶之一.我们在前期的研究中发现,过度的内质网应激可启动细胞凋亡[1].分子伴侣葡萄糖调节蛋白78 (glucose regulated protein,GRP78)与生长停滞DNA损伤可诱导基因153( C/EBP homologous protein/growth arrest-and DNA damage-inducible gene 153,CHOP/GADD153)表达显著增多是发生内质网应激的2个经典标志物[2-3].内质网应激时,CHOP是由抵抗细胞凋亡向促进细胞凋亡转换的重要信号分子[3-4].血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)是广泛存在的抗氧化酶,具有抗炎、抗氧化、抗凋亡和抗增生的细胞保护效应.
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微流控浓度梯度芯片在肺癌耐药性研究中的应用
微流控芯片系统是20世纪末开发的一种高效的微分析系统,可将样品制备、液体分离、生物与化学反应检测、细胞培养及蛋白分析等研究手段集成,具有高通量检测的特点,近年来已逐渐应用于化学、药物筛选及环境检测等多个领域,但在医学及分子生物学研究中的应用较少.本研究中利用该微流控芯片系统对人肺鳞状细胞癌细胞内葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在肺癌对化疗耐药中的作用进行分析.
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胆总管腺癌组织中葡萄糖调节蛋白78和94的表达及其临床病理意义
胆总管腺癌为消化系统较少见的恶性肿瘤.由于其发病隐蔽,发现时多属晚期,故预后较差,病因病理及其发病机制研究亦较少.葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein-78,GRP78)和葡萄糖调节蛋白94(glucose-regulated protein-94,GRP94)是内质网分子伴侣蛋白,是细胞为了适应内质网应激状态所产生的应激蛋白.近年研究证实,一些恶性肿瘤GRP78和GRP94呈高表达,且与其进展、转移发生及预后密切相关[1-9].GRP78和GRP94的产生对肿瘤细胞有保护作用很可能是某些晚期肿瘤患者对放疗和化疗不敏感的原因之一[1-9].作者应用EnVision免疫组化法研究了胆总管腺癌和癌旁组织中两者的表达水平及其临床病理意义.
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葡萄糖调节蛋白在肿瘤细胞中的表达及意义
葡萄糖调节蛋白(glucose regulated proteins,GRP)是细胞为了适应内质网应激状态所产生的一类应激蛋白,与热休克蛋白(heat shock protein, HSP)有较高的同源性.GRP首先发现于1977年,Shiu等发现在无葡萄糖介质中培养鸡胚胎成纤维细胞的过程中可以诱导产生两种相对分子质量分别为78000和94000的蛋白,即命名为GRP78和GRP94.
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内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白94与肿瘤研究进展
葡萄糖调节蛋白(glucose regulated proteins,GRPs)是一种内质网(endoplastic reticulum,ER)分子伴侣,是细胞为适应内质网应激状态所产生的一类应激蛋白, 与热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)有高度的同源性.
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四氯化碳诱导小鼠内质网应激所致急性肝损伤的作用研究
目的 研究四氯化碳(CCl4)诱导小鼠内质网应激(ERS)所致急性肝损伤的作用及机制.方法 将50只昆明种小白鼠随机分为对照组10只和实验组40只.实验组按0.01 L·kg-1腹腔注射10％ CCl4(豆油稀释),对照组注射同体积生理盐水,分别在注射后16,24,48,72 h处死动物并取材.检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)的变化;计算肝、脾指数;以苏木精-伊红(HE)染色法观察肝病理学变化,以原位末端标记法(TUNEL)检测肝组织细胞凋亡情况,以免疫组化法检测ERS标志性蛋白DNA损伤诱导因子3(DDIT3/CHOP)和葡萄糖调节蛋白(GRP78)的表达情况.结果 实验组16,24,48,72 h时ALT水平分别为(278.38 ±6.44),(261.52±10.52),(124.46±13.82)和(42.67±12.74)U·L-1,AST水平分别为(35.01±7.84),(31.93±11.33),(24.05±1.11)和(19.66±3.21)U·L-1,与对照组的(25.48±7.16)和(17.60±2.14)U·L-1相比,实验组小鼠血清中ALT、AST水平均有所上升,在16 h达到顶峰(P＜0.01),16 h后有所下降,并逐渐恢复至接近正常水平;实验组肝指数显著增高(P＜0.01),24 h后逐渐恢复,脾指数与之相反.HE染色结果显示,实验组小鼠中肝肿大,胞质疏松,出现明显的片状坏死和气球样变.TUNEL结果显示,实验组16,24,48,72 h时的平均凋亡率分别为(64.00±5.69)％,(81.00±3.61)％,(45.00±3.21)％和(31.00±1.53)％,与对照组的(8.00±1.01)％相比,差异均有统计学意义(均P＜0.01).免疫组化结果显示,与对照组相比,CHOP和GRP78表达量显著升高(P＜0.01),并在24h达到峰值.结论 以0.01 L·kg-1的10％ CCl4能够诱导小鼠ERS,其所致急性肝损伤的佳时间为24h.
关键词： 四氯化碳 急性肝损伤 内质网应激 DNA损伤诱导因子3 葡萄糖调节蛋白 -
GRP78对SMMC-7721细胞耐药性的影响及机制
目的 探讨GRP78对人肝癌细胞株SMMC7721细胞耐药性和Topo-11表达的影响.方法 用低浓度顺铂(cDDP)短期诱导SMMC-7721细胞产生耐药,并用脂质体转染不同浓度GRP78反义寡核苷酸(QRP78ASODN)以降低SMMC-7721细胞GRP78的表达,应用RT-PCR检测并筛选一个有效的降低ORP78mRNA表达的GRP78ASODN浓度,然后用MTT法检测亲本SMMC-7721细胞、耐药细胞及筛选出的转染组细胞对cDDP的药物敏感性,得出各组的半数抑制浓度(IC50)及耐药指数,并用RT-PCR检测三组细胞Topo-II mRNA的表达.结果 RT-PCR显示转染GRPT8ASODN浓度为100nmol/ml时,GRP78mRNA降低为显著(P＜0.01);耐药组Topo-II mRNA的表达较亲本细胞相显著降低(P＜0.01),转染组与耐药组相比显著升高(P＜0.01).经诱导得到的耐药细胞,IC50是亲本细胞IC50的1.91倍.转染后,其IC50与转染前相比其耐药性显著降低(P＜0.01).结论 用低浓度cDDP短期诱导SMMC-7721细胞产生耐药;GRP78能提高SMMC-7721细胞的耐药性,并与Topo-II有关;抑制GRP78可以降低SMM0-7721细胞的耐药性.
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葡萄糖调节蛋白与细胞凋亡胞内信号转导的关系
葡萄糖调节蛋白(GRP)是在应激状态下细胞内质网明显表达的一类应激蛋白,是热激蛋白家族的重要组成部分.细胞凋亡是生物学领域研究的新课题之一,在保证细胞生存过程中起重要作用,是生物界重要的现象之一.该文通过总结研究GRP与细胞凋亡胞内信号转导的文献,分析GRP参与的信号通路和细胞凋亡相关因子的关系,为进一步探讨GRP与细胞凋亡的关系提供参考.
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大鼠严重烧伤后心肌细胞GRP94表达变化及其意义
目的 观察严重烧伤大鼠心肌细胞内质网应激蛋白表达的改变及其意义,以探讨严重烧伤后心肌损伤与内质网应激的关系.方法 建立大鼠30% Ⅲ度烫伤模型,酶联免疫法检测血浆中心肌肌钙蛋白T(cTnT)含量,放射免疫法检测血浆中TNFα的含量,RT-PCR和免疫组化分析GRP94的表达.结果 烧伤组大鼠伤后3 h血浆中cTnT含量即呈显著升高(P＜0.01),心肌中GRP94 mRNA和蛋白表达于烧伤后3 h显著性升高,12 h达峰值,24 h还呈显著升高;大鼠烧伤后3 h心肌中Caspase-3活性开始升高,12 h达高峰,48 h后仍显著高于对照组.牛磺酸治疗组GRP94的表达和Caspase-3活性较烧伤组均有显著性降低(P＜0.05).结论 严重烧伤可引起心肌细胞内质网应激,牛磺酸对烧伤后早期心肌损害有保护作用.
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胰岛素样生长因子-1对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠大脑皮质中内质网应激相关因子表达的影响
[目的]观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠大脑皮质中内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白(GRP)和C/EBP同源蛋白(CHOP)表达的影响.[方法]取足月新生Wistar大鼠(7d龄),随机分为正常对照组、模型对照组和重组胰岛素样生长因子-1(rh-IGF-1)组,后两组参照Rice方法制作HIBD新生大鼠模型.之后rh-IGF-1组立即腹腔注射给予rh-IGF-1,正常对照组和模型对照组腹腔注射给予等量生理盐水.各组大鼠分别于缺氧后24,48 h取大脑组织,采用HE染色法和原位末端标记法观察大脑皮质神经元的病理改变及细胞凋亡情况,利用免疫组织化学染色法检测各组大鼠大脑皮质GRP78,CHOP的表达水平.[结果]模型对照组脑组织中GRP78,CHOP表达及凋亡细胞数较正常对照组明显增加(P＜0.05),rh-IGF-1组GRP78,CHOP表达及凋亡细胞数较模型对照组明显减少(P＜0.05).[结论] IGF-1通过下调GRP78,CHOP表达抑制神经细胞凋亡,从而减轻缺氧缺血所致的脑组织损伤.
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白藜芦醇预处理对人鼠脑缺血再灌损伤的保护作用
目的:探讨白藜芦醇预处理对大鼠脑缺血再灌损伤的保护作用及其分子机制.方法:大鼠随机分成假手术组、缺血溶剂组、白藜芦醇预处理组,四动脉阻塞(4-VO)法建立前脑缺血模型,缺血10min/再灌22h,试剂盒检测大鼠海马组织SOD活力及NO、MDA含量变化,RT-PCR法观察GRP78 mRNA的表达.结果:缺血溶剂组海马组织SOD活性明显低于假手术组,NO、MDA含量高于假手术组;缺血前白藜芦醇预处理能显著反转缺血诱导的SOD活力和NO、MDA水平变化,脑缺血能明显上调GRP78 mRNA水平;白藜芦醇预处理能有效抑制缺血诱导的GRP78表达,与缺血组比有显著性差异.结论:白藜芦醇能通过上调SOD活力,减少NO、MDA的生成来抑制缺血后自由基的生成和积累,继而缓解内质网应激、下调GRP78的表达,减轻缺血性脑组织损伤.
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葡萄糖调节蛋白94和78在结肠癌中的表达及临床意义
葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP 78)和葡萄糖调节蛋白94(glucose regulated protein 94,GRP 94)分别是热休克蛋白(HSP)70和HSP90家族成员,是细胞为了适应内质网应激状态所产生的一组应激蛋白,在低氧、酸中毒、葡萄糖缺乏及感染等应激条件下表达增加,可在维持细胞稳态方面发挥多种功能.作为内质网分子伴侣,参与内质网蛋白的转运、蛋白质量控制、内质网相关蛋白降解、内质网应激调节及内质网钙绑定等活动[1].
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内质网应激激活剂上调GRP78表达与肺癌A549细胞对顺铂的敏感性
目的 探讨内质网应激激活剂衣霉素(tunicamycin,TM)与肺癌A549细胞对顺铂(cisplatin,DDP)的敏感性的关系及其机制.方法 体外培养肺癌A549细胞,并应用不同浓度的DDP(0、10、20、50 μmoVL)和/或TM(0、1、2、4 μg/ml)处理肺癌A549细胞.MTY法检测肺癌A549细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测内质网应激相关蛋白-葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)和凋亡相关蛋白-激活型半胱天冬酶-7(Cleaved caspase7)的表达水平.结果 (1)不同浓度DDP作用于肺癌A549细胞24h后,细胞存活率随DDP浓度的增加而下降,A549细胞凋亡率、凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-7的表达水平随DDP浓度增加而增加(P均＜0.01);(2)不同浓度TM作用A549细胞24h后,随着TM浓度的增加,GRP78的表达水平递增(P＜0.05);(3)TM联合20 μmol/L的DDP处理A549细胞24h后,与单纯TM组和单纯20 μ.mol/L的DDP组比较,A549细胞存活率降低,面细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01);(4)TM联合20 μmol/L的DDP处理A549细胞24 h后,与单纯20 μmol/L的DDP组比较,TM联合DDP组Cleaved caspase-7表达明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TM可促进DDP诱导的肺癌A549细胞存活率的降低、凋亡率的增加和凋亡相关蛋白Cleaved caspase-7的表达,提示TM可能通过上调GRP78增加肺癌A549细胞对DDP的敏感性,联合应用TM和DDP有望成为治疗肺癌的新策略.
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宫内窘迫胎鼠脑组织葡萄糖调节蛋白78及胱冬酶9,12表达的改变
目的:探讨内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白(GRP)78及凋亡因子胱冬酶(caspase)-9,12在宫内窘迫致胎鼠脑缺血损伤中的作用.方法:制备胎鼠宫内窘迫模型,随机分为正常组(10只胎鼠)、假手术组(50只胎鼠)、缺血再灌注组(50只胎鼠).胎鼠脑组织行TUNEL染色,分析神经元凋亡情况;免疫组化法检测海马回CA1区GRP78及caspase-9,12蛋白的表达.结果:①宫内窘迫缺血再灌注可导致胎鼠脑神经元凋亡,且凋亡数量随再灌注时间延长而增加.②正常组及假手术组仅有GRP78,caspase-9,12蛋白微弱表达;缺血再灌注组GRP78于再灌注3h达峰值,之后逐渐下降;caspase-12于再灌注3h内表达量急剧上升,至12h达高峰;caspase-9则于血流恢复3h之后表达迅速增强,至12h达峰值.结论:宫内窘迫致胎鼠缺血缺氧性脑损伤可能与GRP78表达升高启动内质网自稳调节系统有关;内质网caspase-12凋亡通路的启动可能是脑缺血损伤的又一机制.
