麝香酮对氧化应激损伤人血管内皮细胞凋亡的影响

目的:观察麝香酮对过氧化氢(H<,2>O<,2>)诱导人血管内皮细胞(HUVEC)凋亡的保护效应,并探讨其作用机制.方法:运用H<,2>O<,2>建立血管内皮细胞凋亡模型,继而用低、中、高不同剂量的麝香酮进行干预,并用MTT法检测细胞增殖,Hoechst 33258荧光染色及流式细胞技术检测细胞凋亡,激光共聚焦显微镜测定Ca<'2+>浓度和线粒体膜电位(△Ψm)的变化.结果:H<,2>O<,2>诱导HUVEC细胞凋亡,中、高剂量的麝香酮对HUVEC细胞增殖均有明显促进作用；H<,2>O<,2>组与正常组相比ΔΨm显著下降,Ca<'2+>浓度明显升高(P<0.01)；中、高剂量组与H<,2>O<,2>组相比△Ψm则显著升高,Ca<'2+>浓度明显降低(P<0.01).结论:麝香酮可通过稳定线粒体△Ψm,减轻细胞通透性,减少Ca<'2+>内流,从而抑制H<,2>O<,2>所致的HUVEC细胞凋亡.

中药含药血清对尿酸盐诱导的人血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:观察中药尿酸利仙(含药血清)对尿酸盐诱导的人血管内皮细胞(endothelial cell of vessels, ECV)细胞间黏附分子-1(intercelluar adhesion molecule,ICAM-1)基因和蛋白表达的影响.方法:1070μmol/L尿酸盐溶液刺激血管内皮细胞,同时用含不同浓度(2.5%、5.0%、10.0%)中药含药血清的培养液进行干预,分别用流式细胞术(FCM)、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术测定细胞ICAM-1的表达.结果:①血管内皮细胞在尿酸盐刺激下,ICAM-1基因和蛋白表达均较空白对照组显著上调.② 5.0%浓度中药尿酸利仙含药血清可显著抑制尿酸盐诱导的血管内皮细胞ICAM-1基因表达(P＜0.01);2.5%、10.0%浓度的尿酸利仙含药血清均可显著抑制ICAM-1蛋白表达(P＜0.01).结论:中药尿酸利仙含药血清抑制ICAM-1表达的作用是减轻尿酸盐诱导的人血管内皮细胞炎症损伤的机制之一.

KDR反义寡核苷酸对人血管内皮细胞的作用

VEGF及其受体KDR在肿瘤血管生成中起重要作用.我们用KDR特异性反义寡核苷酸作用于人血管内皮细胞,以阻断VEGF的自分泌作用通路,观察对细胞增殖的影响、细胞超微结构的变化及检测细胞DNA含量,测定细胞分泌VEGF的能力,并检测作用后KDR mRNA和KDR蛋白的水平.结果发现未经处理的人血管内皮细胞能分泌一定量的VEGF,KDR ASODN能抑制人血管内皮细胞内KDR基因的表达,并显著抑制细胞的增殖,在一定剂量下还可诱导凋亡.结果说明KDR ASODN能显著抑制血管内皮细胞的增殖,VEGF受体KDR在人血管内皮细胞的增殖和凋亡的调控中起重要作用.

丹参酮ⅡA抑制马兜铃酸诱导HUVECs凋亡及其可能机制

目的 观察丹参酮ⅡA(TSN)对马兜铃酸(AA)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡的保护作用及其可能机制.方法 体外培养HUVECs,设对照组、AA刺激组(AA终浓度为10 mg/L)、TSN干预组(先加入0.2、0.4和0.8 mg/L TSN,lh后再加入AA)和LY294002预处理组(20 μmol/L的PI3K抑制剂LY294002预处理30 min后,再加入TSN).24 h后,MTF法检测细胞增殖;Hoechst33258荧光染色观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI双荧光染色流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞Bcl-2、Bax和磷酸化Akt (p-Akt)蛋白表达及比色法测定细胞caspase-3活性.结果 与对照组相比,AA引起细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),细胞Bcl-2和p-Akt表达降低(P＜0.05),细胞Bax表达升高(P＜0.05);TSN能减轻AA对细胞凋亡率及对细胞Bcl-2、Bax和p-Akt表达的作用(P＜0.05);PI3K抑制剂LY294002可抑制TSN的抗凋亡作用(P＜0.05).结论 TSN可抑制AA诱导的HUVECs凋亡.

脂质过氧化对人血管内皮细胞NO合成的影响及维生素E的作用

一、材料与方法1. 细胞培养：人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养采用本实验室改进的Jaffe培养法。经免疫荧光检测第Ⅷ因子相关抗原阳性，鉴定为血管内皮细胞。

组织工程化羟基磷灰石涂层人工机械瓣膜的研究进展

目前,应用于临床治疗的人工心脏瓣膜主要有生物瓣和机械瓣2种.生物瓣具有很好的生物相容性,置人后不需或只需短期抗凝.但是由于生物瓣容易钙化、衰败及破损撕裂等原因使得它的使用寿命受限,从而严重限制了其临床应用范围,目前仍然没有有效提高生物瓣使用寿命的方法.

组织工程化类金刚石膜复合材料与人血管内皮细胞相容性的研究

目的:利用脉冲激光沉积(PLD)方法在人工心脏机械瓣膜上沉积纳米相类金刚石(DLC)薄膜,探讨纳米相类金刚石薄膜复合材料与人血管内皮细胞相容性,为应用组织工程方法构建组织工程化机械瓣膜材料提供依据.方法:将人血管内皮细胞与纳米相类金刚石薄膜复合材料体外复合培养,进行形态学和功能测定,同时分别测定在DLC材料组和空白对照组中血管内皮细胞分泌一氧化氮(NO)、前列环素(PGI2)水平.结果:人血管内皮细胞能在纳米相类金刚石薄膜复合材料上良好地黏附、增殖、生长.人脐静脉血管内皮细胞分泌一氧化氮(NO)和前列环素(PGI2)在DLC材料和空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05).结论:纳米相类金刚石薄膜复合材料具有良好的细胞相容性,可作为组织工程化机械瓣膜材料.

血清反应因子参与RhoA诱导的人血管内皮细胞肌动蛋白骨架重构

Ox-LDL对血管内皮细胞ABCA1及炎症因子表达的研究

目的:研究在致动脉粥样硬化(AS)因子氧化低密度脂蛋白胆固醇(Ox-LDL)刺激下,人血管内皮细胞ECV304中ATP-结合盒转运子A1(ABCA1)对炎性细胞因子ICAM-1及IL-1β水平调节作用,阐明ABCA1基因在AS发生中的可能机制.方法:培养人血管内皮细胞株ECV304,加入Ox-LDL(30 ng/ml)刺激3、6、12、24 h,以荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测ABCA1、ICAM1 mRNA表达量,Western blot和酶联免疫吸附(ELISA)法检测ABCA1、ICAM1及IL-1β蛋白表达量;ABCA1的反义寡核苷酸(100 nmol/L)转染人血管内皮细胞,按相同方法给予Ox-LDL刺激细胞,同样的方法测定上述指标的改变.阴性对照为未加Ox-LDL刺激并同时培养的细胞.结果:与阴性对照组比较,人血管内皮细胞株ECV304在给予Ox-LDL刺激不同时间后,ABCA1、ICAM-1的mRNA和蛋白及IL-1β蛋白水平均增高;给予ABCA1反义寡核苷酸转染后各时间点 ABCA1、ICAM-1mRNA表达均降低,ABCA1、ICAM-1及IL-1β蛋白表达水平也降低.结论:人管内皮细胞在Ox-LDL作用下,其ABCA1可能通过增加IL-1β的表达,促进炎症细胞因子ICAM-1释放,在AS的早期发生中发挥作用.

Alphastatin体外抑制血管内皮细胞血管生成的实验研究

血管新生(angiogenesis)是肿瘤生长和转移过程中一个非常重要的阶段.研究表明,当肿瘤大小超过1～2 mm3时,其继续生长和转移则依赖于新血管的形成[1].抗肿瘤血管生成制剂可以阻断瘤体血供,有效地抑制肿瘤生长、转移和复发.目前,多种血管生成抑制剂相继被发现,研究证实具有良好的效果.2004年Staton等[1]首次研究发现人纤维蛋白原α链末端的24个氨基酸片段具有抑制体外血管生成和鼠源性肿瘤血管生成的作用,他们将其命名为alphastatin [2].本研究中,我们在体外模拟血管生成,探讨了alphastatin对人血管内皮细胞的作用,为进一步抗人源性肿瘤实验提供了依据.

脓毒症患者血清诱导血管内皮细胞通透性相关因素研究

目的：观察脓毒症患者血清对人血管内皮细胞单层通透性的影响。方法选择45例脓毒症患者纳入试验组，根据处理方法的不同分为试验Ⅰ组（n＝32，不处理）和试验Ⅱ组[（n＝23，ROCK抑制药（Y27632）]，同时将40例健康志愿者分为正常Ⅰ组（ n＝20，不处理）和正常Ⅱ组（ n＝20， Y27632）。分别以20％脓毒症患者血清刺激内皮细胞6 h；测定内皮细胞单层通透性，观察内皮细胞的形态分布并检测RhoA （ Ras homolog A ）蛋白的表达。结果与正常组相比，试验Ⅰ组的内皮细胞通透性显著升高（P ＜0.05），但是试验Ⅱ组预处理Y27632后，可以显著抑制内皮细胞通透性的增高（ P＜0.05）；抑制药本身（正常Ⅱ组）对内皮细胞通透性无影响。试验Ⅰ与Ⅱ组的血清可增加内皮细胞间间隙的数量，改变细胞通透性，并能有效诱导RhoA蛋白的表达。结论脓毒症患者血清能够明显诱导血管内皮细胞通透性增高；其机制与激活Rho相关蛋白激酶／Rho相关的卷曲蛋白激酶（ Rho／ROCK ）信号通路、破坏内皮细胞屏障功能有关。

层流低切应力刺激对人脐静脉血管内皮细胞Toll样受体mRNA表达的影响

目的 用RT-PCR和Northern杂交技术,评价层流低切应力刺激对人脐静脉血管内皮细胞Toll样受体(TLR-4)信号受体表达的影响.方法 用未刺激和经42 μN/cm2处理1 h的脐静脉血管内皮细胞提取总RNA,采用RT-PCR和Northern杂交技术观察切应力刺激1 h人脐静脉血管内皮细胞TLR-2和TLR-4 mRNA的表达情况.结果 RT-PCR和Northern杂交均显示,层流低切应力刺激1 h后血管内皮细胞TLR-4表达增强,TLR-2几乎无变化.结论 层流低切应力可引起人脐静脉内皮细胞TLR-4 mRNA表达增加,提示炎症信号受体TLR-4可能介导层流切应力诱导的血管内皮细胞某些效应基因的表达.

转染内皮抑素基因对血管内皮细胞增殖的影响

目的 通过接种转染携带小鼠内皮抑素基因的腺病毒到人血管内皮细胞(ECV304),观察内皮抑素基因表达对人血管内皮细胞增殖的影响.方法 分对照Ⅰ组(磷酸盐缓冲液)、对照Ⅱ组(携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒)和实验组(携带小鼠内皮抑素基因的腺病毒),用二苯基四氮唑澳盐法(MTT法)测定各孔的光吸收值,计算细胞增殖抑制率.结果 各组的细胞增殖抑制率分别为7%(对照Ⅰ组)、6%(对照Ⅱ组)和78%(实验组).结论 证实腺病毒携带的内皮抑素基因可以抑制人血管内皮细胞系的增殖,为进一步研究内皮抑素基因治疗提供实验基础.

羟基磷灰石膜复合材料上人血管内皮细胞分泌功能的研究

目的 探讨羟基磷灰石膜复合材料上人血管内皮细胞分泌功能的变化.方法 将人血管内皮细胞与纳米相羟基磷灰石(HA)薄膜复合材料体外复合培养,进行形态学和功能测定,同时分别测定HA材料组和空白对照组中血管内皮细胞分泌一氧化氮(NO)、前列环素(PGI2)水平.结果 人血管内皮细胞能在纳米相羟基磷灰石薄膜复合材料上良好地黏附、增殖、生长.人脐静脉血管内皮细胞分泌NO和PGI2在HA材料组和空白对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 相羟基磷灰石膜复合材料上人血管内皮细胞分泌功能正常,说明纳米相羟基磷灰石薄膜复合材料具有良好的细胞相容性,可作为组织工程化机械瓣膜材料.

纳米羟基磷灰石人工心脏机械瓣膜细胞相容性的研究

目的 探讨利用脉冲激光沉积(PLD)方法在人工心脏机械瓣膜上沉积的纳米相羟基磷灰石(HA)薄膜的组织相容性,为人工心脏瓣膜的构建提供理想的支架薄膜材料.方法 将传代的人血管内皮细胞制成细胞悬液接种在HA材料上,置含5%(V/V)CO2、37℃的恒温培养箱内静态培养3周.分别在培养3、7、14和21 d后取出部分材料,用2.5%戊二醛固定,乙醇梯度脱水,临界点干燥、喷金,于扫描电子显微镜(SEM)下观察细胞在材料上的附着情况.用四氮唑盐比色(MTF)法测定血管内皮细胞与材料复合培养的增殖能力.结果 扫描电镜观察复合培养,见HA材料的表面有细胞附着且数目逐渐增多,到第21天时可见细胞融合成片,并将材料表面覆盖,部分区域有细胞外基质形成.MTT法评价材料对血管内皮细胞的细胞毒性,见细胞增殖未受到明显影响,生长良好.结论 HA对血管内皮细胞的增殖和分化功能无明显影响,对细胞无明显毒性,具有良好的生物相容性,可以作为心脏瓣膜材料安全应用.

人血管内皮细胞中腺苷代谢的定量研究

目的:通过对人脐静脉内皮细胞腺苷分泌进行定性及定量研究,了解人类血管内皮细胞的腺苷代谢及机制.方法:收集并测定不同干预下细胞柱流出液中分离的人脐静脉内皮细胞分泌的腺苷量.结果:在无干预、抑制腺苷激酶及去氨酶、抑制细胞膜腺苷转运情况下,人脐静脉内皮细胞腺苷分泌率分别为13.5±7.1 pmol·min-1·mg-1、32.5±14.2 pmol·min-1·mg-1和20.8±15.7 pmol·min-1·mg-1.结论:人类血管内皮细胞内腺苷合成高于胞外,而细胞膜腺苷转运被抑制后的腺苷分泌率反而高于生理状态下分泌率,则表明腺苷在胞内分解代谢非常迅速,使部分腺苷反由胞外扩散入胞内.

异丙酚对人血管内皮细胞诱生型一氧化氮合成酶生成的影响

作为临床常用的静脉麻醉药,异丙酚(PF)引起血压下降的循环抑制作用已经受到重视,但机理尚不清楚.迄今为止,尚未见到关于PF对人血管内皮细胞(EC)一氧化氮合成酶(NOS)作用的报道.本文研究PF对EC的诱生型NOS(iNOS)生成的影响,探讨其引起血压下降的可能机制.

同型半胱氨酸对高糖培养的人血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的 探讨同型半胱氨酸(HCY)对高糖培养的血管内皮细胞产生活性氧和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA表达的影响.方法体外培养人血管内皮细胞(ECV-304),实验性模拟糖尿病的高HCY状态,随机分为4组:正常对照组、高糖(HG)组、同型半胱氨酸(HCY)组和高糖加同型半胱氨酸(HG+HCY)组.分别在培养12 h、24 h、48 h进行相关的实验和检测.应用比色法检测培养细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)水平.用RT-PCR法测定(ICAM-1)mRNA表达的影响.结果与正常对照组相比,HG组和HCY组SOD活力明显降低(P<0.01),而MDA含量明显升高(P<0.01),并随时间延长有明显增加的趋势.结论 HCY可能通过氧化应激机制上调ICAM-1的表达,从而损伤内皮细胞,加重糖尿病血管病变的发生、发展.

CD146的研究进展

CD146是近年来发现的一种具有跨膜结构的黏附分子,属于免疫球蛋白(Ig)超家族成员.CD146初是从黑色素瘤细胞上发现的肿瘤相关抗原,介导肿瘤细胞间、肿瘤-内皮细胞间的同型或异型黏附,促进肿瘤牛长、血行转移,是肿瘤进展和转移的标志.国外学者发现,CD146在所有人血管内皮细胞上组成性表达,在平滑肌细胞、活化的T细胞及小脑皮层等组织中均检测到表达.