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北京市西城区食源性与临床感染性单核细胞增生李斯特菌PFGE和MLST分型研究
目的 研究北京市西城区食源性和临床感染性单核细胞增生李斯特菌(listeria monocytogenes,Lm)的脉冲场凝胶电泳(plused-field gel electrophoresis,PFGE)和多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)分型特征,分析两种分型方法的应用价值.方法 采用PFGE和MLST两种方法对2012-2015年50株食源性和临床感染性单核细胞增生李斯特菌进行分型研究.结果50株单核细胞增生李斯特菌PFGE分型得到23种型别,GX6A16.CN0004为优势带型.MLST分析获得12个型别,ST9为优势型别.其中5组数据是ST型别只对应一种PFGE型别,3种PFGE型别同时存在食源性和临床感染性单核细胞增生李斯特菌,并且其ST型别进化关系比较远.结论 北京市西城区不同来源单核细胞增生李斯特菌污染长期存在,出现致病型别,并且致病性单核细胞增生李斯特菌的遗传关系呈多元化.两种分子分型方法的结合,从基因水平上解释了单核细胞增生李斯特菌的变化趋势及流行特征.
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甲型H1N1流行性感冒不是新型流行性感冒
一、甲型H1N1流行性感冒(简称流感)是一个新型的疾病吗复旦大学公共卫生学院流感课题组在对甲型H1N1流感病毒株HA片段的进化速率和进化分歧时间的研究结果显示,美国分离的人源性和猪源性H1序列的进化速率相似,快于中国大陆、慢于欧洲;起源时间也相似,均短于中国大陆和欧洲.
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抗HBcAg人源性单链抗体细胞内表达及其抗病毒复制的实验研究
应用人源性抗HBcAg单链抗体细胞内表达技术,探讨抗HBV复制基因治疗的应用价值.应用噬菌体展示和基因重组技术,从HBV感染的外周血淋巴细胞克隆了人源性抗HBcAg单链抗体,并重组至逆转录病毒载体.以人肝癌细胞smmc-7721和PLC/PRF/5为靶细胞进行基因共转染,分别测定实验组细胞上清中的HBsAg和HBeAg,与对照组做比较,观察抗HBcAg单链抗体细胞内表达的抗病毒治疗作用.结果显示,在急性HBV感染的细胞株中,抑制病毒复制效率为49%~61%,在慢性病毒感染细胞,抑制率为41%~54%.实验结果表明,应用单链抗体细胞内表达技术,在抗病毒治疗研究中具有潜在的应用价值.应对HBV的4个开放阅读框架编码产物进行全面的对比研究,以发现抑制效率高、实用价值大的靶基因.
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噬菌体抗体库中筛选血小板膜糖蛋白Ⅱ b/Ⅲa特异的人源性Fab抗体
本研究利用特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患者产生抗血小板自身抗体的特点,从ITP患者脾脏细胞中提取RNA,扩增抗体轻链和重链Fd基因,插入噬粒载体pComb3H,构建人源性抗GP Ⅱ b/ⅢaFab噬菌体抗体库.以表达GP Ⅱ b/Ⅲa的CHO123细胞筛选抗体库,制备人源性GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体.
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经门静脉注射131I标记抗癌胚抗原单克隆抗体预防人结肠腺癌肝转移的实验研究
我们进行了经门静脉注射131I标记抗癌胚抗原(131I-CEA)单克隆抗体预防人结肠腺癌肝转移的实验研究,报告如下.材料与方法1.人源性结肠癌裸鼠肝转移模型:4~6周龄的BALB/C nu/nu裸鼠(第三军医大学实验动物所提供),雌雄兼用,体重17~25g,在无致病菌(SPF)条件中饲养.按左国华和葛海燕[1]方法制作结肠癌肝转移模型.
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Alphastatin体外抑制血管内皮细胞血管生成的实验研究
血管新生(angiogenesis)是肿瘤生长和转移过程中一个非常重要的阶段.研究表明,当肿瘤大小超过1~2 mm3时,其继续生长和转移则依赖于新血管的形成[1].抗肿瘤血管生成制剂可以阻断瘤体血供,有效地抑制肿瘤生长、转移和复发.目前,多种血管生成抑制剂相继被发现,研究证实具有良好的效果.2004年Staton等[1]首次研究发现人纤维蛋白原α链末端的24个氨基酸片段具有抑制体外血管生成和鼠源性肿瘤血管生成的作用,他们将其命名为alphastatin [2].本研究中,我们在体外模拟血管生成,探讨了alphastatin对人血管内皮细胞的作用,为进一步抗人源性肿瘤实验提供了依据.
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贝伐单抗治疗卵巢癌的临床研究进展
血管上皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)在多种恶性肿瘤中高表达,在肿瘤新生血管的生成过程中起着至关重要的作用[1].重组人源性抗VEGF单克隆抗体贝伐单抗(rhMAb VEGF,bevacizum-ab,BEV)[2],是一种重组的人源化单克隆抗体.包含了93%的人类IgG片段和7%的鼠源结构.
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榄香烯对人源性脑胶质细胞瘤SHG-44细胞系放射增敏实验研究
脑胶质细胞瘤是中枢神经系统常见的恶性肿瘤,在所有原发性脑肿瘤中约43%~50%为胶质细胞瘤[1],放疗是有效的辅助治疗手段之一,但疗效不理想.研究旨在探讨榄香烯对脑胶质细胞瘤SHG-44细胞系是否有放射增敏作用及初步探讨放射增敏作用机制.
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系统性红斑狼疮患者外周血细胞中新的人源性逆转录病毒NP9基因的分子克隆与鉴定
系统性红斑狼疮(SLE)是一种常见的自身免疫性疾病,常累及多系统、多器官,血清出现多种自身抗体,并伴有明显的免疫功能紊乱.由于SLE的确切病因与发病机制迄今不详,给SLE临床早期诊断和治疗造成很大困难[1,2].
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高纯度凝血因子Ⅸ制剂的制备方法
人凝血因子Ⅸ(F Ⅸ)为参与人体凝血过程中不可或缺的维生素 K 依赖型糖蛋白,相对分子质量大小约57 kDa,在体内由肝细胞合成并分泌到血液中。血浆中人凝血因子Ⅸ的浓度很低,健康成年人为5μg / mL 左右[1]。当血浆中人凝血因子Ⅸ含量或活性大幅下降时,内源性凝血途径受到阻碍,人体无法进行正常的凝血,从而引发 B 型血友病。B 型血友病患者必须补充外源的人凝血因子Ⅸ,才可以恢复正常的凝血时间,且目前没有其他的任何替代品。目前,主要靠输注人凝血酶原复合物(PCC)进行治疗,但输注 PCC 后可能产生静脉血栓和弥散性血管内凝血等不良后果[2]。这种不良反应是输注 PCC时其他凝血因子或多余的凝血酶原成分所造成的。目前,国外已开发出重组及人源性的凝血因子Ⅸ制剂,如 Baxter 公司生产的静脉注射用冻干重组凝血因子Ⅸ制剂 RIXUBIS,辉瑞公司的注射用重组人凝血因子Ⅸ制剂 BeneFIX?及 CSL Behring 公司生产的从人血浆中提取的静脉注射用冻干因子Ⅸ制剂MonoFIX?- VF,但国内尚无重组及人源性的因子Ⅸ制剂。PCC 易引起不良反应,开发高纯度的凝血因子Ⅸ制剂具有重要的现实意义。近几年很多厂家都在致力于人源性高纯度 F Ⅸ制剂的研究开发。现结合国内外研究资料,对高纯度 F Ⅸ制剂的制备方法作一综述。
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低pH病毒灭活工艺对抗人淋巴细胞免疫球蛋白质量的影响
抗人淋巴细胞免疫球蛋白(ALG)是由多份猪免疫血浆为原料制备的产品,免疫所用的抗原来源于人的淋巴细胞,同时在ALG生产过程中,使用了人血浆、人红细胞以及人胎盘组织吸收杂抗体.尽管对所用的人源性原料中血源性病毒实行了越来越严格的筛选,但由于筛选方法本身的限制和感染窗口期的存在,人源性原料的污染很难避免.
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人源性乳腺移植模型:有效提高人源性乳腺癌细胞株在小鼠原位成瘤率的途径
目的:探索解决部分人乳腺癌细胞株在小鼠模型中成瘤率过低问题,以稳定提高乳腺癌小鼠模型的成瘤效率.方法:在雌性重症联合免疫缺陷症(severe combined immunodeficiency, SCID)小鼠的一侧胁腹皮下移植人源性正常乳腺组织,向移植组织内注射绿色荧光蛋白(GFP)标记的人乳腺癌细胞株MCF-7;同时以传统的小鼠乳腺脂肪垫(MFP)注射模型作为对照,即在雌性SCID小鼠一侧腹股沟MFP内注射同等数量GFP标记的MCF-7.从活体动物荧光成像仪和病理检测两个水平评估移植模型和MFP注射模型的原位成瘤率.结果:人源性乳腺移植小鼠模型的原位成瘤率在大体荧光观察下为95%(19/20例),在病理检测中为100%(20/20例);MFP注射模型的原位成瘤率在大体荧光观察下为0(0/20例),在病理检测中为15%(3/20例).人源性乳腺移植模型在大体(P<0.05)和镜下(P<0.05)两个水平的成瘤率都远高于传统的MFP注射模型.结论:人源性乳腺移植模型可显著提高人乳腺癌细胞株在小鼠模型上的原位成瘤率.
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27株人源性沙门菌耐药性分析
目的 了解人源性沙门菌耐药情况,辅助临床合理用药.方法 对2014-2016年常州市金坛区从业人员健康体检分离出的27株菌株进行药敏试验,并检测其耐药基因.结果 27株分离菌株对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、头孢唑林、头孢替坦耐药率高,均为100.0%,其中6株为多重耐药菌株.对其余常用抗生素总耐药率依次为:氨苄西林>氨苄西林/舒巴坦>复方新诺明>环丙沙星=呋喃妥因>头孢曲松=头孢吡肟=左旋氟氧沙星,而对于哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、氨曲南、厄他培南、亚胺培南全部表现为敏感.耐药基因检测,氨基糖苷类抗生素耐药基因aac(6')-Ib-Cr和β-内酰胺酶基因AmpC检出率高,为100.0%.耐药基因检出情况与药敏试验结果有一致性.结论 常州市金坛区人源性沙门菌对临床常用抗生素耐药性较严重.
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人源性抗日本血吸虫噬菌体抗体库的构建及初步鉴定
目的 利用噬菌体抗体展示技术构建人源性抗日本血吸虫Fab段噬菌体抗体库并进行初步鉴定.方法 RTPCR从对血吸虫感染有一定抗性成年人外周血淋巴细胞中扩增出人IgG轻链和重链Fd段基因片段,将其克隆入PComb3中,构建人源性Fab段噬菌体抗体库,并用限制性内切酶酶切、序列分析、DOT-BLOT以及SDS-PAGE等方法对噬菌体抗体库进行初步鉴定.结果 噬菌体抗体库的滴度为6.2×1011/L,库容量为1.2×107,酶切鉴定结果显示噬菌体抗体库轻重链重组率达到66.6%,测序结果表明克隆入PComb3的是人免疫球蛋白轻链和重链基因,DOT-BLOT实验证明该抗体库表达了人源性的抗体,而SDS-PAGE证实了免疫球蛋白Fab段的可溶性表达.结论 成功地构建了人源性抗日本血吸虫Fab段噬菌体抗体库,为筛选人源性抗日本血吸虫的抗体、研究这些抗体的特性和功能奠定了基础.
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G抗原对Rh(D)阴性人中Del鉴定的影响
Del是指部分D阴性的人,当他们的红细胞和抗D抗体做吸附及放散试验时,可证明这些D阴性的红细胞上带有微弱的D抗原,中国人Del占D阴性人口10%[1].目前,用于鉴定Del的抗D血清主要为人源性IgG抗D血清.然而,在制备人源性IgG抗D血清过程中有可能在血清中保留微弱的抗G抗体[在Rh(D)血型测定中不影响结果],当用这种人源性IgG抗D血清做吸收放散试验来鉴定Del时,就有可能影响鉴定结果.
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利用16S rRNA(DNA)基因建立多种PCR法快速检测拟杆菌
拟杆菌是从人源性患者身上分离出来多的一类厌氧菌.可引起严重的牙周炎、败血症以及伤口感染等,须及时进行抗生素治疗.厌氧菌培养法表型鉴定等,步骤繁琐,细菌之间有些生化试验结果相似,甚至只能依赖1个表型特征鉴别.而且,检测人员判定结果带有一定的主观性.因此,迫切需要准确快速灵敏的方法来改变现状[1].
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靶向血管生成因子2的shRNAs降低U87胶质瘤侵袭力的研究
血管生成因子(Ang)-2作为多个促肿瘤迁移因子的潜在激活物质,在胶质瘤新生血管生成与稳定、周围基质降解与侵袭方面发挥重要作用[1,2].我们通过敲低Ang-2在人源性U87胶质瘤细胞中的表达,观察其对胶质瘤侵袭力的影响.
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单克隆抗体Herceptin免疫疗法治疗乳腺癌--在治疗转移性乳腺癌方面的新进展
1998年9月在美国通过了单克隆抗体Herceptin免疫疗法治疗转移性乳腺癌。Herceptin适用于已有转移,肿瘤对人类表皮生长因子受体2(HER2)过表达,而且接受过一次或多次化疗乳腺癌患者的治疗。对于还没有接受过化疗的患者,如果肿瘤中有HER2的存在,则用Herceptin与紫杉醇(Paclitaxel)联合治疗。该成果是通过国际范围内的有预期目标的、随机的、多中心的临床研究来实行的。 在瑞士1999年8月这项成果被授予杰出医学奖,且包括欧盟在内的有2000个医学中心通过了这项声明。Herceptin是一个复合的、人源性、单纯的抗体,属于IgG1-卡也尼型,它在细胞外HER2的合成方面有较高的特殊的亲合力。
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人源性及牛源性乳铁蛋白抑制丙型肝炎病毒复制作用的对比研究
目的:探讨人乳铁蛋白(HLF)及牛乳铁蛋白(BLF)在体外HepG2细胞中对丙型肝炎病毒(HCV)感染增殖的抑制作用,为乳铁蛋白用于临床治疗HCV感染提供理论和实验依据.方法:以HepG2细胞作为HCV复制体系,以RT-nPCR方法,测定培养细胞提取物中病毒正、负链,并用活性细胞定量鉴定法(MTT)对两种乳铁蛋白的细胞毒性作用及药物剂量进行研究.结果:细胞毒实验显示,实验中两种乳铁蛋白的浓度小于1.5 mg·mL-1时对HepG2细胞生存率无显著影响.HCV阳性血清接种HepG2细胞后,HCV正、负链可于第8,10,12天被检测到.当两种乳铁蛋白(浓度分别为1.5,1.0,0.5,0.1 mg*mL-1)先与HCV阳性血清作用后再接种细胞时,不同时期提取物中均未测定到HCV正、负链.而当乳铁蛋白(浓度同上)先与细胞作用后洗去再与HCV阳性血清作用时,不同时期细胞提取物中可测定到HCV正、负链.结论:乳铁蛋白能在非细胞毒性剂量时能防止HCV感染HepG2细胞;乳铁蛋白可能主要是通过与病毒颗粒本身相互作用发挥上述功能;两种来源的乳铁蛋白在体外抑制HCV复制的作用差异无显著性.
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重组人源性肝细胞生长因子的纯化及其生物学活性的初步研究
目的获取高纯度的重组人源性肝细胞生长因子(rhHDSSF),并探讨rhHDSSF在体外的生物学活性.方法收获大量培养的表达细胞,以冻融法提取蛋白质;以IMAC pH递减非变性法纯化表达的rhHDSSF;以MTT法测定其对HepG2,T24,Fibroblast和Hela细胞的增殖效应.结果从细胞裂解物中纯化得到20 kD左右的单一蛋白条带,其纯度达89%.细胞增殖实验证实这一蛋白产物对HepG2,Hela细胞有显著的增殖作用,并表现出良好的量效和时效关系,而对T24,Fibroblast细胞则增殖效果不明显.结论本研究证实,人源性肝细胞生长因子(HDSSF)转染细胞株中有20 kD左右HDSSF相应蛋白表达,与HDSSF 598 bp开放读码框理论值相一致,且纯度达89%,并发现其有良好的细胞增殖作用.rhHDSSF是一种非特异性促细胞增长物质,但它也有一定的选择性,这可能与不同细胞表达的细胞受体差异而导致蛋白信号传导不同有关.