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饮水消毒副产物二氯乙腈对HepG2细胞周期的影响
目的 研究p53基因和chk1基因在饮水消毒副产物二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对HepG2细胞周期阻滞过程中的影响.方法 以二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人肝癌细胞(HepG2细胞)为对照组,分别以低、高浓度(50、400 μmol/L)DCAN染毒HepG2细胞24 h.采用碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞周期分布情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测p53基因和chkl基因mRNA表达的改变.结果 与对照组比较,400 μmol/L处理组G1期细胞比例明显减少,G2期细胞比例明显增加,差异均有统计学意义(P ＜0.05);400 μmol/L DCAN作用于HepG2细胞后下调了p53的表达,差异有统计学意义(P＜0.05),而对chk1的表达没有影响.结论 高浓度的DCAN能明显延长HepG2细胞的G2期,并可抑制p53的mRNA表达水平,但对chk1的mRNA表达水平无影响.
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二氯乙腈对HepG2细胞凋亡的影响
目的 探讨饮水消毒副产物二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对HepG2细胞凋亡的影响及相关调控机制.方法 二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人肝癌细胞(HepG2细胞)为对照组,分别以50 μmol/L、100 μmol/L、200μmol/L、400μmol/L DCAN染毒HepG2细胞为处理组,培养24 h后通过AnnexinV/PI流式细胞分析法检测细胞凋亡情况,用荧光测定法观察Caspase 3酶活性,蛋白质印迹法(West-ern blotting)技术检测HepG2细胞pro-caspase 3和P53蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,400 μmol/LDCAN处理组可诱导HepG2细胞凋亡(P＜0.05),各处理组细胞内Caspase 3酶活性随着染毒剂量的增加而显著升高(P＜0.05).DCAN作用于HepG2细胞后pro-Caspase 3和P53蛋白含量呈下降趋势,当染毒浓度达到200 μmol/L以上时,pro-Caspase 3和P53蛋白表达明显低于对照组(P＜0.05).结论 高浓度的DCAN可通过激活Caspase 3诱导HepG2细胞凋亡.
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多廿醇毒性作用研究
胆固醇过高是心血管疾病的主要危险因素,研究表明他汀类药物通过竞争性抑制HMG-CoAR,阻断甲羟戊酸生成,降低胆固醇合成[1-2].
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甘草对H2O2诱发人HepG2细胞DNA损伤的保护作用
目的 探讨甘草对过氧化氢(H<,2>O<,2>)诱发人HepG2细胞DNA损伤的保护作用.方法 培养的HepG2细胞经甘草(2,4,8和16 g/L)单独处理或甘草与H<,2>O<,2>(2 g/L+500μmol/L,10 g/L+500 μmol/L)同时处理2 h后,分别运用彗星试验(comet assay)结合彗星图像分析软件(CASP)分析细胞尾部DNA百分率变化.结果 甘草单独处理的HepG2细胞尾部DNA百分率没有明显变化,与不处理对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);但甘草与H<,2>O<,2>同时处理的HepG2细胞尾部DNA百分率显著降低,与H<,2>O<,2>(500μmol/L)单独处理对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).结论 甘草本身不能诱发HepG2细胞DNA损伤,但甘草对H<,2>O<,2>诱发HepG2细胞DNA损伤有保护作用.
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IL-10对HepG2细胞生长增殖的影响
目的 初步探讨不同浓度的白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)对肝癌细胞HepG2生长及增殖的影响作用.方法 体外常规培养HepG2细胞,以0～ 30 ng/ml IL-10分别作用24 h,四唑盐比色法(MTT法)观察不同浓度的IL-10对HepG2细胞生长增殖的影响,酶标仪检测各组吸光度值.倒置显微镜下观察各组细胞数量及形态变化.结果 与对照组(0剂量组)相比,5～15 ng/ml IL-10作用于HepG2细胞24 h,细胞的增殖水平无明显改变;20 ～ 30 ng/mlIL-10作用于HepG2细胞24 h,细胞的生长增殖能力明显增加(P＜0.05);且细胞的增殖能力随着IL-10浓度的升高不断增强,具有剂量依赖关系.结论 一定浓度的IL-10对HepG2细胞的生长增殖具有明显的促进作用.
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丁烯酸内酯对HepG2细胞抗氧化功能的影响
目的 研究镰刀菌毒素丁烯酸内酯对HepG2细胞内某些抗氧化指标的影响.方法 不同剂量的丁烯酸内酯处理体外培养的HepG2细胞后,观察毒素对细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活力及蛋白巯基(P-SH)含量的影响,并测定脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量变化.结果 丁烯酸内酯能够明显降低HepG2细胞内主要抗氧化酶SOD、GSH-Px和CAT的活力,明显降低P-SH的含量,并能显著增加细胞上清液中MDA的含量.结论 丁烯酸内酯能够明显降低HepG2细胞的抗氧化能力.
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胞浆内Ca2+浓度的变化在顺铂诱导的肝癌HepG2细胞凋亡中的作用
目的 探讨胞浆内的Ca2+在顺铂诱导的肝癌HepG2细胞凋亡过程中的作用及其可能机制.方法 体外培养人肝癌HepG2细胞,分组并按实验目的加药,检测胞浆内Ca2+浓度的变化和Grp78蛋白的表达;MTT法检测细胞的活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 顺铂诱导了肝癌HepG2细胞内胞浆Ca2表达增加,促进细胞凋亡,同时也上调了Grp78蛋白的表达.与顺铂组相比,顺铂联合BAPTA/AM或2-APB降低了顺铂诱导的胞浆Ca2+浓度,减弱了顺铂对细胞的增殖抑制作用和Grp78蛋白的表达.结论 顺铂诱导HepG2细胞发生内质网应激,导致Ca2+从内质网释放,使胞浆内Ca2+上调,并进一步诱导内质网应激介导的凋亡.
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羟基酪醇对苏丹红Ⅰ号所致的HepG2细胞微核率的影响
目的 探讨羟基酪醇(hydroxytyrosol,HT)对苏丹红Ⅰ号(Sudan Ⅰ)所致的HepG2遗传毒性的化学防护作用及机制.方法 采用微核(micronucleus,MN)试验检测细胞染色体损伤程度.为探讨机制,以2',7'-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;以荧光法检测细胞内的谷胱甘肽(glutathione,GSH)的水平;以Western blot法来检测γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(gamma-glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)的表达水平.结果 100 mol/L苏丹红Ⅰ号引起HepG2细胞的微核形成率、ROS水平和GSH水平明显增加(P<0.01),γ-GCS表达水平较对照组明显减少(P<0.01);不同浓度的HT(0、25、50和100 umol/L)预处理HepG2细胞30 min,再加入100umol/L苏丹红Ⅰ号后,HT预处理组微核形成率、ROS水平和GSH水平较单独接触苏丹红Ⅰ号组明显减轻(P<0.01或P<0.05),并且存在剂量依赖关系,而γ-GCS表达水平HT预处理组较对照组明显增加.结论 在本试验条件下,HT能够通过降低细胞内ROS的水平以及增加细胞内的古胱甘肽的水平而抑制苏丹红Ⅰ号所致的遗传毒性.
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胞浆内的Ca2+浓度变化在五味子乙素诱导HepG2细胞凋亡过程中的作用
目的 探讨五味子乙素在诱导HepG2细胞凋亡过程中Ca2浓度变化的作用和可能机制.方法 体外培养人肝癌HepG2细胞,分为空白对照组、2-APB(2-Aminoethyl diphenylborinate)组、五味子乙素组和联合用药组(五味子乙索与2-APB合加),加药48和72 h后,MTT检测细胞存活率,激光共聚焦显微镜、免疫印迹法检测内质网相关蛋白Grp78、Cleaved caspase-4和CHOP蛋白含量,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率.结果 与单加五味子乙素组相比,联合用药组的细胞生存率明显升高(P＜0.05),Ca2浓度、Grp78、Cleaved caspase-4、CHOP蛋白的含量明显降低(P＜0.05).结论 五味子乙素能诱导人肝癌HepG2细胞内质网应激,导致细胞内Ca2浓度显著升高,并进一步诱导细胞凋亡.
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甲醛对HepG2细胞凋亡的影响
目的 探讨甲醛对HepG2细胞凋亡的影响.方法 以0.004、0.02、0.1、0.5、2.5、12.5 mmol/L的甲醛(formaldehyde)分别处理人肝癌HepG2细胞24和48 h,采用MTT法检测细胞活性.分别以0.004、0.02、0.1 mmol/L的甲醛处理人肝癌HepG2细胞24和48 h,采用Western blot法检测p53、mdm2、Caspase-3、RIP1、RIP3和NF-B的蛋白表达水平.结果 与阴性对照组相比较,0.5 ～ 12.5 mmol/L FA染毒24和48 h可显著降低HepG2细胞活性(P＜0.05);染毒24 h后Caspase-3蛋白表达降低(P＜0.05);p53、p-p53、mdm2、RIP3表达水平在染毒24和48 h后均明显降低(P＜0.05);cleaved RIP1表达水平在0.1 mmol/L剂量染毒24和48 h后表达增加(P＜0.05)上述变化均有统计学意义;染毒24和48 h后NF-κB蛋白表达无明显变化.结论 甲醛可能是通过死亡受体途径而不是线粒体途径引起肝细胞凋亡.
关键词： 甲醛 HepG2细胞 凋亡 受体相互作用蛋白激酶1 -
基于微孔板的人HepG2细胞体外彗星试验方法的研究
目的 运用微孔板体外培养技术,建立人HepG2细胞的体外彗星试验方法,为进一步建立体外高通量筛选方法提供依据.方法 选用人HepG2细胞,运用96孔板体外细胞培养技术,建立微孔板的彗星试验方法,结合中性红检测细胞毒性的方法,选择20种化合物对所建方法进行验证.结果 阳性和阴性对照物用所建方法与体内试验所获结果一致,验证结果显示,8种遗传毒物在体外彗星试验中均获得阳性结果,灵敏度为100%,且当细胞的相对活力＞50%时,拖尾率及尾长均与剂量呈正相关.12种非遗传毒物中,11种物质呈阴性反应,1种物质呈阳性反应,特异性为91%.结论 运用微孔板体外细胞培养技术,可在1块96孔板上同时检测4～5种受试物,并在无S9的情况下能检测出直接与间接诱变剂,并可界定出引起遗传毒性的作用剂量,提高了筛选的速度,减少了受试物等的用量,具有发展成为体外高通量筛选方法的良好条件.
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硒化合物在HepG2和Hela细胞中代谢生成硒蛋白的效应比较
目的 比较亚硒酸钠(Na2SeO3)、硒代蛋氨酸(SeMet)和甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)3种硒化合物在HepG2和Hela细胞中代谢生成硒蛋白P(SEPP)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的差异.方法 将培养好的细胞分为对照组、Na2SeO3组、SeMet组和MeSeCys组.加入0.01μmol/L和0.1μmol/L的硒化合物作用48 h和72 h,收集细胞培养上清液和裂解液.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法对上清中的SEPP和裂解液中的GPx进行定量检测.结果 与对照组比较,0.1 μmol/L SeMet和MeSeCys处理的Hela细胞生成的SEPP和GPx浓度显著升高(P＜0.05).与Hela细胞比较,0.1μmol/L 3种硒化合物处理的HepG2细胞生成的SEPP和GPx浓度均显著升高(P＜0.05).结论 硒化合物在肝癌细胞HepG2中代谢生成硒蛋白的效应比在宫颈癌细胞Hela中更明显.
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EGCG对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭的影响
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭的影响及可能的分子机制.方法 不同浓度EGCG对HepG2细胞进行干预后,CCK-8法检测EGCG对肝癌HepG2细胞增殖的影响；荧光显微镜及流式细胞术(FCM) Annexin V-FITC/PI双染法检测EGCG对HepG2细胞的凋亡诱导作用；Transwell侵袭实验检测EGCG对HepG2细胞侵袭的影响；ELISA法检测HepG2细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平.结果 EGCG各浓度组干预HepG2细胞24、48h后,细胞的生长增殖均明显受到抑制,其24h IC25值和IC50值分别为58.19和133.90mg/L.以60、135mg/L EGCG干预肝癌HepG2细胞24h后,FCM结果显示药物组细胞凋亡率明显高于对照组(P＜0.05),荧光显微镜观察显示随着药物浓度的增加,细胞凋亡程度加重.Transwell侵袭实验显示,60、135mg/L EGCG对HepG2细胞侵袭力抑制率分别为69.47％和100％ (P＜0.05).ELISA检测结果显示,EGCG干预后HepG2细胞上清液中MMP-2和VEGF表达水平下降(P＜0.05).结论 EGCG对人肝癌HepG2细胞具有抑制增殖和侵袭作用,其机制可能与EGCG诱导HepG2细胞凋亡和抑制肿瘤细胞中MMP-2及VEGF表达水平有关.
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丝氨酸对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及粘附功能的影响
目的 探讨丝氨酸对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及粘附功能的影响及其调控机制.方法 体外培养HepG2细胞,采用不同浓度(0.01～100μmol/L)丝氨酸处理,CCK8法、划痕实验和体外基质粘附实验检测HepG2细胞的增殖、迁移及粘附功能;采用1 μmol/L丝氨酸处理,Western blot检测pERK和pAKT.结果 与空白对照组细胞相比,1 μmol/L丝氨酸处理组显著促进HepG2细胞的增殖,且在48 h和72 h差异具有统计学意义(P＜0.05).1μmol/L丝氨酸处理组24 h的迁移促进率为6％(P＜0.05).0.01和l μmol/L丝氨酸处理组对HepG2细胞粘附功能的促进率分别为15％ (P＜0.05)和20％ (P ＜0.01).1μmol/L丝氨酸处理组ERK和AKT活性(pERK和pAKT)明显升高.结论 丝氨酸通过促进ERK和AKT磷酸化促进HepG2细胞的增殖、迁移和粘附.
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降血脂体外评价技术的建立
目的 建立一种降血脂的体外评价的方法.方法 以HepG2细胞为模型,在培养液中加入胆固醇,测定细胞内胆固醇含量和胆固醇代谢相关蛋白及基因的表达情况来评价胆固醇模型是否成功,并用阳性降胆固醇药物洛伐他汀进行验证.培养液中加入游离脂肪酸,测定细胞内甘油三酯和培养液游离脂肪酸吸收率来评价模型是否成功,并用阳性降甘油三酯药物非诺贝持进行验证.结果 培养液中加入25-羟胆固醇后,细胞内胆固醇含量显著升高,HMG-CoA还原酶、SREBP-2及LDLR表达降低,表明胆固醇模型成功.阳性药洛伐他汀能够显著降低细胞内胆固醇含量,上调SREBP-2及LDLR的表达,发挥降胆固醇的功效.培养液中加入50μmol油酸6 h后油酸吸收率达到40%,细胞内甘油三酯有升高趋势即表明高甘油三酯模型成功.非诺贝特能够促进游离脂肪酸的吸收并且不增加细胞内甘油三酯的含量达到降低甘油三酯的作用.结论 在体外可以将HepG2细胞作为细胞模型进行降血脂功能因子的筛选.
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塞来昔布对肝细胞癌HepG2细胞增殖和转移能力的影响
目的 探讨在不同浓度塞来昔布的影响下对肝细胞癌HepG2细胞增殖能力的影响及其与肿瘤侵袭转移之间的关系.方法 选用肝癌细胞系HepG2细胞,分别加入0μmol/L;12.5μmol/L;25μmol/L;50μmol/L和100μmol/L的塞来昔布进行处理.采用CCK-8法测定HepG2细胞体外增殖活性;用划痕实验观察细胞迁移能力的改变;用酶联免疫吸(ELISA)法检测细胞上清前列腺素E2(PGE2)表达量.结果 随着塞来昔布剂量和作用时间的增加,HepG2细胞的增殖能力降低,呈剂量和时间依赖性.HepG2细胞迁移能力下降.塞来昔布影响HepG2细胞PGE2的分泌,呈浓度和时间依赖性地抑制.实验组与对照组比较;差异有统计学意义(P<0.05).结论 塞来昔布能抑制hepG2细胞增殖及迁移,通过抑制COX-2进而影响PGE2的分泌并呈剂量和时间依赖性.
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电穿孔与脂质体转染法对悬浮与贴壁细胞转染效率的影响
目的 比较电穿孔与脂质体转染法对悬浮细胞株K562与贴壁细胞株HepG2转染率的检测效果.方法 选取人髓系白血病细胞株K562及人肝癌细胞株HepG2进行研究,分别应用电穿孔与脂质体转染法进行绿色荧光质粒(pEGFP-C1)基因转染,采用荧光显微镜对PEGFP-C1转染情况进行观察,并对不同方法的转染率及细胞转染后存活率进行计算和比较.结果 电穿孔转染法转染率与细胞转染后存活率优于脂质体转染法(P<0.05).结论 相比脂质体转染法,电穿孔转染法的基因转染率更高,因此该种方式值得在科研实验中进行推广.
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内皮抑素衍化30肽对HepG2细胞增殖活性和迁移能力的影响
目的 研究人内皮抑素衍化的30肽对肝癌HepG2细胞增殖和迁移能力的影响.方法 人工合成人内皮抑素N末端30个氨基酸残基的编码序列(该多肽链为将原RGIRGAD更改为RGDRGD的30肽),连接到质粒pTYB2中,再转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,WST-1法检测30肽对HepG2细胞增殖活性的影响和tran-swell实验观察30肽对HepG2细胞迁移能力的影响.结果 成功纯化30肽,30肽能够有效抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力,且改抑制作用呈时间剂量依赖性.结论 内皮抑素30肽能有效抑制HepG2细胞的增殖和迁移,其在临床上有望成为肝癌的治疗手段.
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糖尿病患者多药耐药基因mdr1的表达
目的:体外观察糖尿病患者肝细胞诱导发生胰岛素抵抗(IR)中多药耐药基因mdr1的表达.方法:采用高浓度胰岛素诱发肝源性细胞HepG2建立IR细胞模型(HepG2 IR细胞),GOD-POD微量化法测定葡萄糖消耗量,RT-PCR检测胰HepG2 IR细胞mdr1基因和胰岛素受体(InsR)mRNA的表达,流式细胞术(FCM)检测P-糖蛋白(P-gp)和InsR蛋白水平.结果:胰岛素诱发HepG2发生IR后,HepG2 IR细胞葡萄糖消耗量降低约10%～45%,InsR基因mRNA表达显著下调、受体表达量降低50.2%～82.9%.胰岛素诱导HepG2细胞产生抗性的过程中,耐药基因mdr1基因表达同步显著增强,mRNA转录增高0.7～2.1倍,P-gp表达阳性细胞增加0.6～1.7倍、表达强度增高.结论:胰岛素诱发的肝脏胰岛素抵抗细胞mdr1基因和P-gp的表达显著增强,提示耐药基因可能与胰岛素抵抗相关联.
关键词： 胰岛素抵抗 HepG2细胞 多药耐药基因1(mdr1) -
女贞子总黄酮对HepG2细胞脂代谢调节作用的研究
目的 探讨女贞子总黄酮对HepG2细胞脂代谢调节作用的分子靶点.方法 通过MTT、LDH确定女贞子总黄酮处理细胞的适宜刺量.逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测HepG2细胞中脂蛋白脂酶(LPL)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)及羟甲戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)mRNA的表达水平.结果 10-5g/ml的女贞子总黄酮上调LPL mRNA表达,10-6～10-4g/ml的女贞子总黄酮上调PPARα mRNA表达,10-5、10-4g/ml的女贞子总黄酮则下调HMGCR mRNA的表达.结论 女贞子总黄酮可能通过调控PPARα-LPL通路、HMGCR表达实现降脂作用.
