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李斯特菌的耐药性及耐药基因
细菌耐药性的发展越来越受到关注,李斯特菌也表现出向多重耐药发展的趋势.本文综述了李斯特菌属对几种常用抗生素的耐药现状及相关耐药基因,并着重阐述了对人体致病的单核细胞增生李斯特菌的耐药状况.
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2011年北京市朝阳区儿童A组溶血性链球菌的emm基因分型及耐药性分析
目的 了解2011年北京市朝阳区儿童感染A组溶血性链球菌(GAS)的emm基因分型及对红霉素和克林霉素的耐药情况及耐药基因谱的特点.方法 从猩红热或咽峡炎及扁桃体炎儿童患者的咽拭子培养分离获得71株GAS,应用PCR扩增emm基因及红霉素耐药基因mefA、ermA、ermB和转座子基因Tn916;采用E-test法进行药敏试验并分析耐药情况.结果 北京市朝阳区儿童感染GAS的emm12.0基因型占87.4％,其次为emm1.0型(9.8％)、emm22.0型(1.4％)、emm75.0型(1.4％);GAS对红霉素和克林霉素的耐药率为100％和95.8％,两种药物的交叉耐药率为95.8％;耐药基因ermA、ermB、mefA和转座子基因Tn916的携带率分别为5.6％、90.1％、4.2％和90.1％.结论 北京市朝阳区2011年儿童感染GAS的主要流行株为emm12.0型,对红霉素普遍具有较高的耐药率且与克林霉素之间存在显著的交叉耐药;ermB基因是决定本地区2011年儿童感染GAS对红霉素耐药的重要基因;而Tn916转座子基因在GAS菌株间耐药基因扩散中起重要作用.
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多耐鲍曼不动杆菌分子流行病学分析
目的 分析云南省第三人民医院鲍曼不动杆菌分离株耐药表型及耐药基因分子流行病学特征.方法 2013年6-9月,分离该院不同重症监护室(ICU)院内感染患者鲍曼不动杆菌28株,全自动微生物分析仪分类鉴定及耐药分析.PCR扩增及测序β-内酰胺酶、氟喹诺酮类及氨基糖苷类等抗性基因及IS插入元件及整合子等.结果 78.6％菌株为多药耐药菌,14.3％菌株为广泛耐药菌,7.1％的菌株为泛耐药菌.100％菌株不仅对一代/二代头孢类抗生素耐药,且对三代/四代抗生素CRO、CAZ、FEP及单环β-内酰胺类(ATM)、氟喹诺酮类(CIP、LEV)、氨基糖苷类(AN)及磺胺类(FD)耐药.特别是92.9％菌株对碳青霉烯类抗生素耐药.质粒介导的D类β-内酰胺类抗性基因blaOXA、氟喹诺酮类[aac(6')-Ib-cr、qnrA及qnrD]及氨基糖苷类(aacA4、aadA1及aacC2)为主要基因型.100％菌株复合携带blaOXA、aac(6')-Ib-cr及aacA4等抗性基因及整合酶int1基因.85.7％菌株携带ISCR1.全部菌株为同一脉冲场凝胶电泳(PFGE)克隆群,且多位点序列分型(MLST)优势基因型为ST2.结论 云南昆明第三人民医院ICU病房可能存在ST2多耐产碳青霉烯酶A.baumanni院内感染流行,有必要进行进一步流行病学及临床深入调查.防控措施及合理使用抗生素是当地医院当务之急.
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铜绿假单胞菌耐药基因分子流行病学调查
目的 了解云南省昆明某医院临床铜绿假单胞菌分离株耐药特征及耐药基因分子流行病学特征,为临床治疗与控制院内感染提供依据.方法 2013年6-9月共收集全院不同病区感染患者28株铜绿假单胞菌.微生物自动分析仪鉴定菌株及耐药分析.PCR扩增及序列分析β-内酰胺酶bla基因、氟喹诺酮类及氨基糖苷类耐药基因及IS插入元件及整合子.脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分析菌株间遗传变异关系.结果 全部菌株呈现多重耐药且存在有广泛耐药性(extensively drug-resistant,XDR)及泛耐药性(pendrug-resistant,PDR)菌.100％(28/28)菌株对一代/二代及大部分三代/四代头孢霉素、磺胺类及叶酸代谢途径抑制剂耐药.85.7％(24/28)菌株对碳青霉烯类抗生素美罗培南(MEM)、亚胺培南(IMP)耐药,50.0％(14/28)菌株对厄他培南(ETP)耐药.92.9％(26/28)菌株同时携带β-内酰胺酶基因、氟喹诺酮类及氨基糖苷类耐药基因,且菌株间基因谱存在较大不同.blaFOX/qnrB/aacA4为主要耐药基因谱(21.4％,6/28).57.1％ (16/28)菌株携带int1整合酶基因,21.4％(6/28)菌株携带ISCR1插入元件,35.7％ (10/28)菌株携带ISEcpl插入元件.PFGE显示14株菌株分为8个克隆群.结论 本研究铜绿假单胞菌分离株存在较高耐药率,多种耐药基因存在不同克隆菌株中,提示耐药基因在菌株间及不同菌种间存在快速传播风险.
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某医院72株阴沟肠杆菌临床菌株分子型别与耐药特征分析
目的 分析72株阴沟肠杆菌临床菌株分子型别和耐药特征,为流行病学及临床研究提供参考依据.方法 通过热休克蛋白基因和肽指纹图谱进行分子分型;采用琼脂药敏纸片法分析耐药表型;利用PCR扩增法对20个耐药基因进行检测;运用SAS软件对数据进行统计学分析.结果 72株阴沟肠杆菌临床菌株分为2个分支9个基因群,以分支1(基因群Ⅲ、Ⅵ和Ⅷ)菌株为主(50株,69.4％).临床菌株对一至三代头孢、氨苄西林/舒巴坦具有较高的耐药率,对另外9种抗生素较为敏感.共检测到8个耐药基因(mir-act、dha、shv、tem、ctx-M、qnrA、qnrB和qnrS).通过组内统计学分析发现,各型别菌株的临床分布、耐药率和耐药基因携带率不完全相同,差异有统计学意义.结论 通过两种分型方法,阴沟肠杆菌临床菌株中存在优势型别,不同型别的菌株在耐药率和耐药基因携带率上存在差异.
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奇异变形杆菌耐药性研究进展
奇异变形杆菌是临床重要的条件致病菌,可以引起消化道、泌尿道等各种类型的感染.其导致的感染尤其是尿路感染病情严重、持久难治.近年来,有关奇异变形杆菌的耐药报道日益增多,其耐药性呈上升趋势.本研究主要从奇异变形杆菌对β-内酰胺类、喹诺酮类等常见抗菌药物的耐药性着手,通过描述其生物学特征、耐药机制、主要耐药基因类型及流行情况、临床感染及治疗情况、未来发展趋势5个方面来介绍奇异变形杆菌耐药性的研究进展.
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2017年北京市顺义区腹泻患者弯曲菌流行特征及耐药性分析
目的 了解北京市顺义区弯曲菌引起腹泻的现状,探索弯曲菌分离检测方法及其耐药特征.方法 收集2017年顺义区2家医院成年人腹泻患者的粪便标本进行沙门菌、志贺菌、致泻大肠埃希菌和副溶血弧菌的分离培养.用滤膜法分离培养弯曲菌并进行药敏试验.结果 372份粪便标本共检出39株弯曲菌,检出阳性率为10.48％,包括36株空肠弯曲菌(92.31％,36/39)和3株结肠弯曲菌(7.69％,3/39).沙门菌、志贺菌、致泻大肠埃希菌、副溶血弧菌的阳性率分别为6.99％(26/372)、0.27％(1/372)、9.14％(34/372)、12.63％(47/372).弯曲菌感染病例的临床症状以腹泻、腹痛、恶心、脱水为主,且多为水样便.春秋季检出率高于夏冬季,高峰出现在10月.弯曲菌感染病例以16～ 45岁青壮年居多;男、女性检出率差异无统计学意义(x2=0.150,P=0.698);职业以学生、其他职业、商业服务居多.可疑感染食品为蔬菜类、粮食类、水产及其制品.3株结肠弯曲菌分离株仅对氯霉素敏感.36株空肠弯曲菌分离株对喹诺酮类、四环素类和氯霉素类抗生素的耐药率高,包含萘啶酸(97.22％)、环丙沙星(97.22％)、四环素(86.11％)、氟苯尼考(58.33％).19株空肠弯曲菌(52.78％)存在多重耐药,多重耐药谱主要为喹诺酮类-氯霉素类-四环素类(47.37％,9/19).结论 弯曲菌感染引起腹泻的比例较高,春秋季高发,耐药性严重且存在多重耐药现象,应引起重视.
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万古霉素耐药肠球菌的药敏表型及基因特性研究
目的 研究万古霉素耐药肠球菌(VRE)的耐药表型和基因特性.方法 采用浓度梯度法(E-test)测定VRE对万古霉素(VA)、替考拉宁(TP)的耐药表型;采用聚合酶链反应检测vanA、vanB、vanC1、vanC2、vanC3基因,并对van基因产物进行测序.结果 万古霉素耐药基因检测结果:VRE经PCR扩增,均获得vanA基因阳性片段.未检测到vanB、vanCl及vanC2/3基因.结论 万古霉素耐药肠球菌的耐药表型与耐药基因型一致,菌株之间有较高的同源性.住院患者肠道中VRE携带率高,是医院感染的危险因素.
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生命不能承受抗生素之殇
8月23日，中国原料奶生产商现代牧业发布上市以来差业绩报告，截至6月底，该公司中期由盈转亏，亏损额为5.6566亿元，主因是“原料奶售价下跌”。现代牧业半年报严重亏损，是国内整个乳品产业产能过剩的缩影之一。
曾有一项世界规模的宏基因组研究显示，含耐药基因的微生物在自然界中无处不在。这意味着人类有可能回到没有抗生素的时代，医疗体系中的很大一部分可能会退回到抗生素发明之前的境地，轻微的细菌感染都可能引起致命的后果。 -
MDR1及TCRP1在人体口腔鳞癌中的表达与其耐药性的相关性
目的：研究耐药基因MDR1和TCRP1在人体口腔癌中与癌细胞耐药的相关性。方法收集40例口腔鳞癌患者作为研究对象，采用MTT法检测细胞的增殖活性计算癌细胞的耐药指数；免疫组化检测MDR1和TCRP1蛋白表达。qRT-PCR定量检测MDR1和TCRP1基因表达的情况。结果分析癌细胞耐药指数与耐药基因之间的相关性发现两者之间存在正相关，癌细胞耐药性越高MDR1和TCRP1蛋白表达量越多。结论耐药基因MDR1和TCRP1的高表达直接提高了口腔癌细胞的耐药性，增加了口腔癌的化疗难度。
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荧光定量PCR探针熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用
目的 应用荧光定量PCR探针熔解曲线法检测耐多药结核病患者的临床分离菌株对一线抗结核药物的耐药基因突变.方法 于2009年1月1日至2012年12月31日留取南京市胸科医院结核科门诊部或住院的所有肺结核患者痰液标本,每人3～5 ml,均进行痰结核分枝杆菌培养、鉴定和药物敏感性试验(简称“药敏试验”),分离出结核分枝杆菌菌株67株.应用荧光定量PCR探针熔解曲线法,根据靶序列熔点变化,实时PCR检测结核病患者的临床分离标本对利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素的耐药情况;通过与传统药敏试验进行对比,对2种结果不一致的菌株进行基因测序分析,探讨其发生突变的位点差异,并观察在治疗中的变化.结果 利福平和异烟肼的表型和基因型检测具有较高的一致性,分别为99％(66/67)和97％(65/67),不一致的菌株都是表型检测法为耐药,而基因型检测为敏感,测序未检测到突变.乙胺丁醇和链霉素的表型和基因型检测一致性较低,分别为60％(40/67)和75％(50/67).测序发现,乙胺丁醇的突变发生在embB306和embB406位点上;链霉素突变发生在rrs基因517位点和907位点,以及rpsL43耐药密码子.结论 应用荧光定量PCR探针熔解曲线法,能快速筛查结核分枝杆菌对一线抗结核药物的耐药情况.
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结核分支杆菌KatG rpoB rpsL pncA耐药基因的检测
目的:结核病在许多国家出现回升的一个主要原因是细菌耐药性问题,随着联合药物治疗的使用,又出现了耐多药结核杆菌,使许多结核病病情进展迅速,难以治疗,增加了死亡率,为探讨耐药结核菌快速检测方法的临床应用价值,本文用PCR-SSCP检测结核分支杆菌耐药基因KatG rpoB rp sL pncA突变.
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程序依赖性MFP方案联合大剂量三苯氧胺逆转耐药肺癌的疗效探讨
目的:逆转多药耐药提高肺癌化疗疗效.本文报道1例46岁女性患者,确诊为左肺下叶腺癌T4N2,1-Ⅳ期(左腋下淋巴结、脑、骨),先后给予司莫司汀(Me-CCNU)、丝裂霉素(MMC)、长春花碱酰胺(VDS)及顺铂(DDP)即SMVP-T1方案,MVP-T2方案化疗,治疗后临床症状无好转,复查胸部CT等考核疗效显示病灶进展,用免疫组化法检测患者腋下转移淋巴结病理标本中耐药相关基因的表达,结果显示多项耐药相关基因产物(P-gp、MRP、LRP)表达阳性,系原发性多药耐药肺癌.改换程序性应用Me-CCNU、MMC、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、DDP联合大剂量三苯氧胺(TAM)即TSMFP-T3方案,TMFP-T4方案化疗,二段化疗后临床症状完全消失,复查胸部CT等考核疗效显示病灶绝大部分消失.结论:本研究结果提示多项耐药基因产物的联合检测可指导临床化疗方案的选择,程序性应用EFP方案联合大剂量TAM能逆转肺癌耐药,提高化疗疗效,值得临床进一步深入研究.
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程序依赖性MFP方案联合大剂量三苯氧胺逆转耐药肺癌的疗探讨
目的:逆转多药耐药提高肺癌化疗疗效.本文报道1例46岁女性患者,确诊为左肺下叶腺癌T4N2M1-Ⅳ期(左腋下淋巴结、脑、骨),先后给予司莫司汀(Me-CCNU)、丝裂霉素(MMC)、长春花碱酰胺(VDS)及顺铂(DDP)即SMVP-T1方案,MVP-T2方案化疗,治疗后临床症状无好转,复查胸部CT等考核疗效显示病灶进展,用免疫组化法检测患者腋下转移淋巴结病理标本中耐药相关基因的表达,结果显示多项耐药相关基因产物(P-gp、MRP、LRP)表达阳性,系原发性多药耐药肺癌.改换程序性应用Me-CCNU、MMC、5氟尿嘧啶(5-Fu)、DDP联合大剂量三苯氧胺(TAM)即TSMFP-T3方案,TMFP-T4方案化疗,二段化疗后临床症状完全消失,复查胸部CT等考核疗效显示病灶绝大部分消失.结论:本研究结果提示多项耐药基因产物的联合检测可指导临床化疗方案的选择,程序性应用EFP方案联合大剂量TAM能逆转肺癌耐药,提高化疗疗效,值得临床进一步深入研究.
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宁波市河水环境中沙门菌分布特征和耐药性
目的 了解宁波市人工河水环境中沙门菌的血清型分布特征及耐药情况,为预防、控制相应食源性疾病发生提供科学根据.方法 对河水样品进行离心浓缩、蛋白胨水增菌液增菌、亚硒酸盐胱氨酸增菌液选择性增菌和沙门菌显色平板分离沙门菌,对分离菌株采用系统生化和血清凝集进行鉴定,并采用纸片法检测菌株对8种抗生素的耐药性,对多重耐药菌株和耐β-内酰胺类抗生素菌株扩增主要相关耐药基因.结果 2014年1月至2015年12月,共采集48份河水样品,分离沙门菌株105株,主要血清型为鼠伤寒(26株)、德尔卑(14株)、里森(8株)、肠炎(4株)、阿贡纳(4株)、斯坦利(4株)、阿格玛(4株),其他及未分型沙门菌41株.70株(66.7％)耐至少一种抗生素,对抗生素的耐药率分别为氨苄西林53.3％、四环素42.9％、甲氧苄啶-磺胺甲恶唑32.4％、庆大霉素11.4％、环丙沙星4.8％、头孢噻肟4.8％和产超广谱β-内酰胺酶4.8％.β-内酰胺类抗生素相关耐药基因为TEM型(n=52)、OXA型(n=6)和CTX-M型(n=3),58.1％的菌株1类整合子基因阳性.结论 人工河水环境中沙门菌检出率较高,且部分血清型为重要的食源性致病菌,检出菌也有较高的耐药性,携带多种耐药基因,提示食源性疾病防控中需关注环境细菌的危害.
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鼠伤寒沙门菌婴幼儿分离株耐药基因及毒力基因研究
目的 基于全基因组测序结果,分析鼠伤寒沙门菌耐药表型和耐药基因的关系,研究其耐药发生机制和毒力因子.方法 利用美国临床和实验室标准委员会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法对5岁以下腹泻患儿粪便中分离的321株鼠伤寒沙门菌开展药物敏感性试验,从中选择不同耐药表型的3株鼠伤寒沙门菌(S1:敏感;S2:TET耐药;S3:ESBLs阳性,10重耐药)进行全基因组测序,通过与抗生素抗性基因数据库(ARDB)和病原毒力因子数据库(VFDB)比对以及美国国立生物技术信息中心(NCBI)核酸数据库人工检索,对耐药基因和毒力基因进行注释.结果 321株鼠伤寒沙门菌对IPM和MEM均敏感,对TET和AMP的耐药率高,分别为84.4％ (271/321)和83.8％(269/321),206株菌株显示为耐3类以上抗生素(64.2％,206/321),11株CIP-CTX耐药株均为ESBLs阳性(3.4％,11/321);全基因组测序结果显示,S1、S2和S3的全基因组大小依次为4 876 427、4 970 690、5 133 380 bp,预测编码基因数分别为4 825、4 936和5 082个,GC含量依次为52.18％、52.14％、51.87％;对S1、S2和S3基因组中18、20和32个耐药基因进行注释,除共有基因外,S2主要携带tetA和sul2基因,S3主要携带sull/2/3、tetB、AAC(3)-Ⅳ、AAC(6')-Ⅰ、ANT(2")-Ⅰ、ANT(3")-Ⅰ、aphA1、bla CTX-M-14、blaOXA-1、catB3、cml_e1和cml-e3基因.与阳性鼠伤寒沙门菌株LT2的gyrA基因进行序列比对发现,S3gyrA基因第87位密码子由GAC突变为AAC(Asp87→Asn);分别注释S1、S2和S3基因组的130、129和120个毒力基因,发现主要以三型分泌系统和粘附因子为主.结论 5岁以下腹泻患儿粪便样品中鼠伤寒沙门菌耐药现象严重;全基因组测序分析发现耐药基因与耐药表型一致,且存在多种毒力因子;为后续开展耐药基因传播机制和菌株致病性研究,评估其对人群的健康风险,防控鼠伤寒沙门菌感染提供技术支持.
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食源性变形杆菌氨基糖苷类修饰酶基因及16S rRNA甲基化酶基因研究
目的 了解食源性变形杆菌的氨基糖苷类耐药基因情况.方法 收集2011-2014年石家庄市售各类食品中分离到的对阿米卡星和庆大霉素至少有一种耐药的变形杆菌124株,用PCR、测序和基因库在线比对方法分析6种氨基糖苷类修饰酶基因与3种16S rRNA甲基化酶基因.结果 124株变形杆菌中氨基糖苷类修饰酶耐药基因aacC2、aacA4、aadA1和aphA6的检出率分别为95.2％(118/124)、80.6％ (100/124)、73.4％ (91/124)和5.6％(7/124);16S rRNA甲基化酶耐药基因rmtB检出率为87.1％ (108/124).aacC1、aadB、armA和rmtC基因均未检出.结论 aacC2型氨基糖苷类修饰酶基因与rmtB型16S rRNA甲基化酶基因流行是食源性变形杆菌对氨基糖苷类抗生素耐药的重要原因.
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食源性希拉肠球菌R17基因组中前噬菌体的结构特征及其与宿主菌的相互影响
目的 了解生鲜猪肉中分离的希拉肠球菌R17基因组中前噬菌体的结构特征及其和宿主菌的相互影响.方法 利用PHAST软件预测希拉肠球菌R17基因组中前噬菌体基因的分布及其编码基因特征,分析前噬菌体中含有的毒力基因、耐药基因和环境抗性基因.结果 在希拉肠球菌R17染色体上有3个前噬菌体,其中Prophage-1和Prophage-2是不完整的前噬菌体,Prophage-3是完整的前噬菌体.染色体上的噬菌体携带了多个细菌功能编码基因,包括与核苷酸转运和代谢功能相关的基因.希拉肠球菌R17质粒上有一个不完整的、携带了红霉素和杆菌肽耐药基因的前噬菌体Prophage-p,推测前噬菌体介导的基因水平转移使希拉肠球菌R17对红霉素和杆菌肽产生了耐药性.结论 希拉肠球菌基因组中的前噬菌体具有多样性.前噬菌体在肠球菌向耐药菌进化过程中发挥了重要作用,应重视监控噬菌体介导的耐药性和致病性在食品中的扩散.
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2015年南宁市动物源性食品中金黄色葡萄球菌污染状况及耐药调查
目的 调查2015年南宁市市售的动物源性食品中金黄色葡萄球菌的污染情况以及流行菌株的耐药情况,为食源性疾病监控提供数据支撑.方法 随机采集市售的不同种类的动物源性食品383份,按照国标法进行金黄色葡萄球菌分离鉴定,并对分离到的28株金黄色葡萄球菌进行K-B纸片法耐药试验和PCR方法检测耐药基因.结果 从383份动物源性食品中分离到28株金黄色葡萄球菌,耐药试验结果发现,其中10株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,28株分离株对不同的抗菌药物有不同程度的耐药,并检测到了4类耐药基因.结论 市售动物源性食品中有金黄色葡萄球菌污染,存在引发食物中毒的风险;分离株的耐药试验结果可以为南宁市金黄色葡萄球菌引起的食物中毒提供用药参考.
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耐碳青霉烯类肠杆菌细菌的耐药基因研究
目的：分析耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的耐药情况及其耐药基因，为临床防治CRE感染提供依据。方法：收集肠杆菌科细菌6321株，采用PCR检测技术检测KPC、IMP、VIM，并测序分析基因型别。结果：经检测，6321株肠杆菌科细菌中含有耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌33株，检出率0.52%，在尿液、血液、痰液、胆汁、脓液中均有分布，其中痰液分布多，为12株。耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌是多药耐药菌，对不同药物具有不同程度耐药率，其对氨苄西林、头孢唑啉、舒巴坦耐药率较高，分别为100.00%、90.91%、78.79%。结论：KPC和IMP为产碳青霉烯酶主要基因型，临床加强对耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的监测具有重要意义。
