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阿司匹林对胶质瘤细胞C6抑制及一氧化氮生成的影响
为观察阿司匹林对胶质瘤细胞C6生长抑制、NOS表达及NO生成、CEA含量的影响,采用MTT法测定不同浓度阿司匹林对胶质瘤细胞C6的生长抑制率,免疫细胞化学染色检测NOS表达,Griess法测定NO浓度,微粒子捕捉免疫法分析CEA含量变化.结果发现阿司匹林抑制胶质瘤细胞C6的生长增殖,并能诱导iNOS的表达,增加培养基中NO浓度,减少CEA的生成.阿司匹林对胶质瘤细胞C6的抑制作用可能是阿司匹林的直接毒性或通过诱导iNOS的表达,增加NO含量产生大量超氧阴离子的结果,监测CEA含量的变化可能是判断胶质瘤发生、发展及预后的有效指标.
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胶质瘤干细胞研究进展
随着对肿瘤干细胞(tumor stem cells)理论的深入认识和分离、培养肿瘤干细胞实验技术的不断进步,胶质瘤内肿瘤干细胞的存在已经有较多的证据和研究.这方面的研究不仅有助于深化人们对胶质瘤发生、复发和侵袭机制的认识,更重要的是可能改变以往胶质瘤的治疗策略,影响十分深远.新近,有学者将来自胶质瘤的肿瘤干细胞或具有干细胞特性的胶质瘤细胞称为"胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSC)"[1],较好地反映了这类细胞的特性.
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胶质瘤细胞增殖及凋亡调控紊乱研究的进展
胶质瘤占原发性脑肿瘤的60%~70%,且多数呈浸润性生长,手术不易全切.化疗和放疗既不能高度特异地杀伤胶质瘤细胞,又可能产生中枢神经系统,乃至全身不能耐受的毒副作用,治疗效果差.在全身肿瘤中,恶性胶质瘤5年病死率仅次于胰腺癌和肺癌居第3位,5年生存率不足5%.近20年中,胶质瘤的疗效和患者预后没有明显改善.故寻求有效的治疗措施势在必行,但阐明胶质瘤的发病机制是实现该目标必须解决的关键问题.已知无限增殖和凋亡抑制是胶质瘤发生、发展的根本原因[1],而对其细胞增殖及凋亡调控紊乱认识的不断深入是近10年来胶质瘤研究的重要进展之一,为进一步深入探讨胶质瘤发病的分子机制提供了重要启示.
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胶质瘤细胞端粒结合因子表达水平与肿瘤细胞增殖和凋亡关系的研究
一、材料与方法1.标本来源:收集天津医科大学总医院神经外科1994~2000年手术切除的人脑胶质瘤石蜡包埋标本71份.患者中男48例,女23例,年龄12~74岁.按WHO标准进行分类和分级,其中Ⅰ~Ⅱ级组22例(毛细胞型星形细胞瘤1例、室管膜下巨细胞型星形细胞瘤2例、中枢神经细胞瘤1例、纤维型星形细胞瘤10例、原浆型星形细胞瘤2例、肥胖型星形细胞瘤1例、少突胶质细胞瘤2例、混合性星形少突胶质细胞瘤1例、室管膜瘤2例),Ⅲ级组24例(间变性星形细胞瘤23例、间变性混合性星形少突胶质细胞瘤1例),Ⅳ级组25例(胶质母细胞瘤25例).另收集10份手术切除的非肿瘤石蜡包埋组织作为增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡检测的对照组,其中,男5例,女5例,年龄24~53岁.
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肿瘤坏死因子α诱导胶质瘤细胞凋亡和p38丝裂素活化蛋白激酶表达
一、材料和方法1.材料:胶质瘤细胞C6购自本校全军神经外科研究所.重组人肿瘤坏死因子α(RhTNF-α)购自Sigma公司,按照所需浓度以PBS稀释.噻唑蓝(MTT)购自Amresco公司.二甲基亚砜(DMSO)购自Fluka公司.
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临床相关浓度硫喷妥钠对大鼠脑胶质瘤细胞核因子-кB活性的影响
目的 探讨临床相关浓度的硫喷妥钠及其不同作用时间对大鼠脑胶质瘤细胞核因子(NF)-кB活性的影响.方法 取大鼠脑胶质瘤C6细胞株,分别与10-3mol/L、10-4mol/L、10-5mol/L硫喷妥钠作用1 h,在收集细胞前30 min用10 ng/ml脂多糖进行处理;取大鼠脑胶质瘤C6细胞株,分别与10-5mol/L硫喷妥钠作用0.5 h、1 h、2 h、4 h,在收集细胞前30 min用脂多糖进行处理.提取细胞总RNA.逆转录得到c-DNA,之后行PCR反应;NF-кB表达结果进行凝胶电泳分析(EMSA)并用Bio-Rad密度仪进行半定量分析.结果 经 10-3mol/L、10-4mol/L、10-5mol/L硫喷妥钠处理的电泳带窄于对照,密度测量值低于对照(P《0.05),但各处理浓度之间密度测量值的无显著性差异.经10-5mol/L硫喷妥钠作用0.5 h、1 h、2 h、4 h的各电泳带宽度依次递减,亮度依次递减;密度测量数值也依次递减(P《0.05),且低于对照(P《0.05).结论 硫喷妥钠对脑胶质瘤细胞NF-кB活性具有明显影响.这种影响与硫喷妥钠浓度无关,随硫喷妥钠作用时间的延长而增强.
关键词: 核因子-кB(NF-кB) 胶质瘤细胞 硫喷妥钠 浓度 作用时间 -
增强PIAS3表达对CHG-5细胞生物学效应的影响
目的 探讨增强人胶质瘤CHG-5细胞内的活化STAT3抑制蛋白(protein inhibitor of activated STAT3,PIAS3)表达对CHG-5细胞增殖及凋亡等生物学效应的影响.方法 构建PIAS3真核表达载体pEGFP-N1-PIAS3,使用脂质体法瞬时转染人CHG-5胶质瘤细胞,同时设置空白对照组和阴性对照组,转染48 h后用RT-PCR、蛋白质印迹法和免疫组化法分别在核酸和蛋白水平检测目的蛋白表达,采用流式细胞技术检测转染后的胶质瘤细胞凋亡和细胞增殖变化.结果 转染后的CHG-5细胞可见PIAS3绿色荧光蛋白表达,显微镜观察发现细胞形态改变,坏死细胞增多.转染组PIAS3 mRNA的积分密度值为523 414.50±34 502.89,与空白对照组的135 668.00±6 693.66和阴性对照组的154 511.67±8 266.89相比,转染组PIAS3 mRNA表达增强,x2=13.053,P=0.01.转染组PIAS3蛋白的积分密度值为30.13±3.76,与空白对照组的13.83±0.77和阴性对照组的15.02±0.87比较,CHG-5细胞转染PIAS3基因后,PIAS3蛋白表达增强,x2=14.193,P=0.001.提示转染后PIAS3 mRNA和蛋白表达增加.转染组的早期细胞凋亡率为(12.5±1.9)%,较空白对照组的(6.4土1.1)%和阴性对照组的(5.4±1.8)%升高,x2 =7.407,P=0.005;转染组的活细胞率为(86.9±2.2)%,较空白对照组的(92.1±1.2)%和阴性对照组的(93.1±2.0)%降低,x2=4.775,P=0.019.转染组S期细胞百分率为(35.2±4.2)%,高于空白对照组的(24.5士5.1)%和阴性对照组的(23.0±3.7)%,x2=8.179,P=0.003;转染组G2期细胞百分率为(10.7±5.4)%,高于空白对照组的(21.3±4.0)%和阴性对照组的(27.8±5.2)%,x2=17.121,P<0.01.结论 外源性增强PIAS3表达,引起CHG-5胶质瘤细胞生长缓慢,出现S期阻滞,并促进细胞凋亡发生.
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脑胶质母细胞瘤骨转移胸壁转移一例
患者男,41岁.2001年2月2日因突发头痛、头晕伴喷射性呕吐、言语不清到山东省立医院就诊.脑CT检查发现左额叶肿瘤,急症手术治疗.术后病理为多形性胶质母细胞瘤.术后进行全脑常规放疗,照射36 Gy18分次后局部缩野加量至55 Gy,同时给予卡莫司汀化疗2个周期.术后3个月患者又出现头部不适,复查CT为肿瘤术后复发,行第2次手术.术后病理仍为多形性胶质母细胞瘤.术后给予卡莫司汀+替尼泊甙化疗2个周期.2002年5月患者出现右胸壁、左肩背部、左臀部疼痛.骨扫描检查示肋骨、髂骨多发骨转移,MRI结果示椎体多发转移.给予破骨细胞抑制剂治疗同时又给予卡莫司汀+替尼泊甙+顺铂化疗2个周期,但症状逐渐加重,双下肢肌力丧失、大小便失禁,并出现右胸壁肿块.胸壁肿块穿刺细胞学结果为胶质瘤细胞.仅给予椎体姑息放疗,3 Gy/次,5次/周,共30 Gy.放疗后疼痛减轻、大小便失禁改善,未再行其他治疗,患者自动出院,2个月后死亡.
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IL-24基因对大鼠胶质瘤细胞生长状况的影响
目的探讨IL-24基因对C6大鼠胶质瘤细胞生长状况的影响.方法应用逆转录病毒载体,将IL-24基因导入C6细胞,经G418筛选后获得表达IL-24分子的阳性细胞克隆C6/IL-24;用RT-PCR方法检测目的基因表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞体外增殖状况,流式细胞技术检测细胞的增殖活性,并制作荷瘤动物模型,观察C6/IL-24和C6细胞的体内致瘤性.结果RT-PCR检测表明,外源IL-24基因于mRNA水平在C6/IL-24细胞已获得稳定表达.C6/IL-24细胞系的体外增殖性较亲代C6细胞明显下降,流式细胞术检测其细胞增殖指数(PI)为(29.71±O.89)%.9只接种C6/IL-24细胞的实验组大鼠中,6只颅内成瘤,肿瘤体积为(14.08±9.81)mm3,明显小于接种C6细胞大鼠的肿瘤体积(P<0.05).结论外源性IL-24基因可部分抑制胶质瘤细胞异常增殖的肿瘤特性.
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胶质瘤干细胞的放射抵抗性及机制
胶质瘤是常见的颅内恶性肿瘤,占全部颅内肿瘤的40%~50%,具有显著的侵袭性、化疗抗性和放射抵抗性,目前的治疗方法包括手术切除、化疗、放疗单独或者联合治疗,但患者生存率仍然很低.近发现一类干细胞特性的胶质瘤细胞[CD133+胶质瘤细胞或者多形性胶质母细胞瘤起始干细胞(GBM initiating stem cells,GISC)]具有很强的自我更新、增殖、分化能力,并且是放疗后残存的主要细胞亚群,因此深入研究其放射抵抗性,对于揭示胶质瘤放射抵抗性的机制,提高患者生存率有重要意义,本文就近年来干细胞及其放射抵抗性相关的研究做一综述.
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脑胶质瘤Apaf-1基因表达及启动子区甲基化的研究
胶质瘤是一种常见的颅内肿瘤,其发生率占全部颅内肿瘤的40%,即便采取手术切除、放化疗等综合治疗,仍预后不良[1].近年来已经有相当多的研究发现胶质瘤细胞存在多种凋亡基因异常,提示胶质瘤细胞存在凋亡通路功能异常,研究有关凋亡的变化可能为探讨胶质瘤的发生提供线索[2-4].
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三氧化二砷对正常星形胶质细胞的影响
本实验研究了三氧化二砷(As2O3)对大鼠正常神经胶质细胞的生长抑制作用,并与其对9L胶质瘤细胞的抑制作用进行对比,以明确As3O3在诱导9L胶质瘤细胞凋亡的同时,是否会对正常神经细胞产生影响,从而为临床应用As2O3治疗脑胶质瘤提供实验依据.
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真菌源性CD::UPRT联合基因治疗脑胶质瘤的实验研究
目的研究5-FC/CD::UPRT联合基因治疗策略对胶质瘤细胞C6的杀伤效应.方法扩增yCD::UPRT融合基因并构建含yCD::UPRT基因的重组表达载体;载体转染包装细胞PT67,所获重组病毒转染胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆;用MTT法检测不同浓度5-FC对CD::UPRT转基因细胞的杀伤效应.结果 PCR法扩增出全长CD::UPRT基因,经测序证实序列正确,重组逆转录病毒表达载体pLXSN-yCD::UPRT经双酶切获目的条带,载体转染包装细胞获重组逆转录病毒(滴度达3.5×106 CFU/ml)并转染C6,经筛选获得转基因阳性克隆C6-yCD::UPRT细胞株,检测显示该细胞株有效表达目的基因.当5-FC终浓度≥10μmol/L时,实验组与对照组的细胞增殖力出现显著差异(P<0.01),5-FC作用96h后电镜观察到凋亡小体.结论 5-FC/yCD::UPRT联合基因治疗策略对胶质瘤细胞C6有明显的杀伤作用.
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人隔蛋白7的真核表达载体的构建及表达
目的 构建人隔蛋白7(SEPT7,hCDC10/SEPT7)的表达载体并对U251人脑恶性胶质瘤细胞系进行转染且检测其表达.方法 RT-PCR方法扩增SEPT7 cDNA片段,并将扩增的片段插入pCDNA3真核表达载体,构建成含SEPT7cDNA的重组载体pCDNA3/SEPT7,以脂质体介导该质粒转染人脑恶性胶质瘤细胞系U251,应用RT-PCR和免疫荧光染色鉴定转染细胞中hCDC10/SEPT7的表达.用流式细胞术对转染前后的U251细胞进行细胞周期分析.结果 成功构建含SEPT7cDNA的重组载体pCDNA3/SEPT7,并使其稳定转染U251细胞,在转染的细胞中,证实有SEPT7mRNA表达上调.细胞周期检测结果G0/G1期细胞增多,SPF降低.结论 成功构建SEPT7表达载体,并在人脑恶性胶质瘤细胞系获得表达,延迟细胞周期进展.
关键词: 人隔蛋白7(SEPT7)质粒构建 胶质瘤细胞 隔蛋白7表达 细胞周期 -
2-甲氧雌二醇对胶质瘤放射敏感性影响实验研究
一、资料与方法1.主要试剂:2-甲氧雌二醇(2ME),雌二醇(E2)购自美国Sigma公司.2.细胞培养:人胶质瘤细胞T98G细胞来自于哈尔滨医科大学神经外科研究所,于含10%胎牛血清、10%非必需氨基酸(NEAA)的MEM培养基中培养.
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胶质瘤树突状细胞融合疫苗诱导抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞
在本研究中,我们检测树突状细胞(DC)与胶质瘤细胞U87融合是否会产生融合细胞,并确定此融合细胞是否会于体外诱导产生胶质瘤细胞U87特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL).
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MDR1启动子控制双自杀基因系统的建立及其在耐药胶质瘤细胞中特异性表达的初步研究
耐药性成为胶质瘤化疗失败的主要原因,主要是由于部分胶质瘤细胞具有多药耐药性(Multidrugresistance,MDR),可以逃避或减轻化疗药物的杀伤作用[1].
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胶质瘤生成细胞及其在胶质瘤起源中的作用
关于胶质瘤生成细胞,早在上个世纪20年代,Bailey就推测是同名的始祖细胞.到了上个世纪下半叶,随着电子显微镜技术和免疫组化技术的应用,这种推测得到了部分证实.我们在先前的胶质瘤细胞诱导分化实验中,也见到了瘤细胞由双极(梭形)向多极(星形)方向分化,星形细胞特有的标记蛋白GFAP表达增强等现象[1].有鉴于此,大多数学者认为,胶质瘤细胞是由正常的胶质细胞在特定条件下恶变而成,而且这种转化在一定条什下还是可逆的.这种观点至今仍被大多数人接受.自从在成人脑中发现了神经干细胞,且其在移植实验中有潜在致瘤性,还在胶质瘤组织中分离到了与神经干细胞类似的具多向分化潜能的干细胞之后,对胶质瘤生成细胞的研究使众多学者发生了兴趣.
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脑胶质瘤特异性6HRE-GFAP-Baxα基因治疗系统的构建
脑胶质细胞瘤基因治疗的关键是治疗的安全性和有效性,因此需要构建对胶质瘤特异而高效表达的基因表达系统.目前研究中多采用端粒酶逆转录酶催化亚单位(human telomerase reverse transcriptase,bTERT)启动子介导凋亡基因表达,然而该启动子表达效率低下,限制了进一步的应用.本实验依据恶性胶质瘤体内部低氧的微环境,构建对低氧敏感的6HRE-GFAP杂合启动子(hypoxia responsive element,低氧反应元件)和(glial fibrillary acidic protein,胶质纤维酸性蛋白),使之介导治疗基因在胶质瘤细胞内表达,产生治疗作用,而正常脑组织细胞虽有基因转染,但不表达毒性产物,从而构建出针对胶质瘤细胞特异而高效的表达载体.
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雷公藤甲素增敏替莫唑胺杀伤胶质瘤细胞的机制研究
目的 探讨雷公藤甲素(TPL)对替莫唑胺(TMZ)杀伤胶质瘤细胞效应的影响及其可能机制.方法 采用CCK-8法检测TPL与TMZ对胶质瘤细胞增殖的抑制效应,使用Chou-Talalay法评估TPL和TMZ的联合作用,流式细胞仪检测技术检测TPL和(或)TMZ作用后U87胶质瘤细胞的周期和凋亡的变化,以及应用Western blot技术检测TPL和(或)TMZ作用后U87胶质瘤细胞中IκBα、磷酸化IκBα、XIAP及Cleaved PARP表达的变化.结果 TPL与TMZ作为单药均能够剂量依赖性的抑制胶质瘤细胞增殖;在U87细胞系中,TPL联合TMZ抑制U87细胞达IC50时联合指数(CI)为0.76,表明TPL与TMZ具有协同作用;TPL与TMZ联用处理U87细胞后,细胞凋亡比例显著多于单药用药组(t=14.474,P<0.01;t=11.244,P<0.01);TPL与TMZ联用可抑制NF-κB信号转导通路中关键蛋白IκBα的磷酸化以及抗凋亡蛋白XIAP的表达.结论 TPL在体外能够协同增加TMZ杀伤胶质瘤细胞的效应,其机制可能通过抑制NF-κB信号转导通路的活化,进一步诱导胶质瘤细胞凋亡所致.