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榄香烯对人源性脑胶质细胞瘤SHG-44细胞系放射增敏实验研究
脑胶质细胞瘤是中枢神经系统常见的恶性肿瘤,在所有原发性脑肿瘤中约43%～50%为胶质细胞瘤[1],放疗是有效的辅助治疗手段之一,但疗效不理想.研究旨在探讨榄香烯对脑胶质细胞瘤SHG-44细胞系是否有放射增敏作用及初步探讨放射增敏作用机制.
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维甲酸影响人恶性胶质细胞生长和分化的研究
目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对胶质瘤生长及分化的作用及可能机理.方法:将ATRA加入培养液中培养,观察它对人恶性胶质瘤细胞SHG-44细胞形态变异、生长抑制及集落形成的影响,同时检测细胞中cAMP的水平.结果:经ATRA作用后,与对照组相比,细胞异型性变小,细胞生长速度受到抑制,细胞软琼脂集落形成率也减少.同时细胞中cAMP水平明显提高.结论:ATRA对恶性胶质瘤细胞SHG-44具有明显的抑制生长和诱导分化作用,其作用与提高细胞中cAMP水平相关.
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檞皮素抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞增殖的实验研究
目的 探讨中草药檞皮素抑制人胶质瘤SHG-44细胞的增殖作用.方法 运用MTT法检测檞皮素对SHG-44细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪技术分析檞皮素对SHG-44细胞增殖周期的影响.结果 50～200 μmol/L浓度的檞皮素均能抑制SHG-44细胞的生长,且呈明显的时间,剂量依赖性关系,细胞周期分析显示檞皮素组G1期细胞比例明显增多,呈量效关系.结论 檞皮素抑制SHG-44细胞增殖,可能通过使SHG-44细胞停滞在G1期而诱导其凋亡.
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榄香烯诱导SHG-44细胞凋亡和对细胞周期各时相的影响
目的:观察人脑胶质瘤细胞SHG-44细胞在榄香烯诱导下形态的变化.方法:采用用流式细胞仪检测人脑胶质瘤细胞SHG-44细胞在榄香烯诱导下细胞凋亡和细胞周期的改变.结果:榄香烯可以抑制体外培养的SHG-44细胞的生长,并且不同浓度的榄香烯对SHG-44细胞的抑制作用程度是不相同的,随着榄香烯浓度的增加,SHG-44细胞的凋亡率升高,呈现剂量依赖性.结论:榄香烯对SHG-44细胞有非常明显的增殖抑制作用,可以加速SHG-44细胞的凋亡,具有抗肿瘤活性.
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九节龙皂苷诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡的实验观察
目的:探讨九节龙皂苷对胶质瘤SHG-44细胞潜在的治疗作用及其机制.方法:用四基偶唑蓝(MTT)法检测5、7.5、10、12.5、15、20、40、80mg/L九节龙皂苷作用6、12、24、72h对人胶质瘤SHG-44细胞活性的影响和细胞流式术检测SGH-44细胞调亡情况;Hoechst3258荧光染色法观察细胞形态的变化;琼脂糖凝胶电泳检测SHG-44细胞DNA的完整性.结果:九节龙皂苷明显抑制SHG-44细胞生长活性呈浓度-时间依赖性,并诱导细胞发生明显的凋亡,细胞核发生浓聚边集,DNA呈凋亡特异性"梯状"分布.结论:九节龙皂苷明显抑制SHG-44细胞的生长活性,能引起胶质瘤细胞大量凋亡,具有显著的抗肿瘤作用.
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miRNA-34a对胶质瘤SHG-44细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)在人脑胶质瘤组织中的表达以及其对胶质瘤SHG-44细胞增殖和凋亡的影响.方法:20例胶质瘤组织标本均取自于青岛医学院附属医院神经外科(2007年01月至2010年12月),作为对照的正常脑组织取自5位重症脑外伤需行减压手术的患者.Real-time PCR检测胶质瘤组织中miR-34a的表达.体外转染miR-34a mimics至SHG-44细胞中,MTT实验、流式细胞术检测SHG-44细胞的增殖、细胞周期及凋亡.结果:miR-34a在人脑胶质瘤组织中的表达量明显低于正常脑组织,其在Ⅲ、Ⅳ期胶质瘤组织中表达量明显低于Ⅰ、Ⅱ期胶质瘤组织.miR-34a mimics体外转染组与空白组相比,其细胞增殖抑制率明显提高[(37.24±5.72)％ vs(4.19±0.63)％,P＜0.01]；miR-34a mimics转染组SHG-44细胞G1期比例明显高于空白对照组[(61.78±2.01)％ vs(50.91±1.19)％,P＜0.05]；且miR-34a转染组细胞凋亡率与空白组细胞相比显著升高[(15.28±3.65)％,vs (2.07 ±0.84)％,P＜0.01].结论:miR-34a在人脑胶质瘤组织中低表达,miR-34a可抑制SHG-44细胞的增殖、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡.
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人脑胶质瘤细胞SHG-44照射后COX-2表达与放射敏感性的关系
目的:探讨人脑胶质瘤细胞SHG-44照射存活后代细胞对放射敏感性的变化,以及环氧合酶-2(COX-2)的表达情况,为临床使用COX-2抑制剂提供理论依据.方法:采用克隆形成率研究SHG-44及SHG-44照射存活后代细胞的放射敏感性;并分别用RT-PCR方法及免疫组化的方法检测COX-2基因mRNA和蛋白的表达情况.结果:与SHG-44细胞相比,SHG-44照射后代细胞对放射的敏感性下降, COX-2 mRNA及蛋白表达均升高.COX-2表达水平与SHG-44照射后代细胞放射敏感性呈负相关.结论:辐射诱导了SHG-44细胞COX-2表达的升高,使SHG-44照射后代细胞对放射敏感性下降,COX-2表达的升高可能是导致其辐射耐受的原因之一.
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九节龙皂苷诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡及其机制研究
目的 研究九节龙皂苷对胶质瘤SHG-44细胞潜在的治疗作用及其机制.方法 用四甲基偶氨唑蓝(MTT)法检测不同剂量九节龙皂苷于不同时间(6、12、24、72 h)对人胶质瘤SHG-44细胞活性的影响和细胞流式术检测SGH-44细胞调亡情况;Western-blot检测caspase-3和Bcl-2在SHG-44 细胞中的表达情况.结果 流式细胞仪检测显示,随着九节龙皂苷浓度的增大和时间延长,SHG-44细胞的凋亡率明显上升,Western-blot结果提示九节龙皂苷下调了凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达并激活了凋亡蛋白caspase-3,九节龙皂苷明显抑制SHG-44细胞的生长与增殖.结论 九节龙皂苷引起胶质瘤细胞大量凋亡,具有显著的抗肿瘤作用,通过调控caspase-3和Bcl-2诱导胶质瘤SHG-44 细胞凋亡.
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正、反义β-1,4-半乳糖基转移酶V表达质粒在星形胶质细胞瘤细胞中的转染与鉴定
目的:构建β-1,4-半乳糖基转移酶-V(β-1,4-GalTV)正、反义表达质粒,并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中,为探讨神经胶质瘤细胞表达β-1,4-GalTV的生物学意义提供研究基础.方法:构建β-1,4-GalTV表达质粒,并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中;用Western印迹和Northern印迹鉴定转染情况.结果:通过酶切鉴定和测序分析,实验成功构建β-1,4-GalTV表达质粒.将构建的表达质粒转染到胶质细胞瘤细胞SHG-44中,经鉴定表明,转染的正义表达质粒能增加胶质细胞瘤细胞SHG-44中的β-1,4-GalTV表达量,而转染反义质粒则能降低细胞中β-1,4-GalTV表达量.结论:正、反义β-1,4-GalTV表达质粒在人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中的稳定转染和表达,对分析胶质瘤细胞表达β-1,4-GalTV的意义如对肿瘤细胞的增殖、迁移和黏附等的影响提供了研究基础.
关键词： β-1 4-半乳糖基转移酶-V 星形胶质细胞瘤 SHG-44细胞 表达质粒 -
对乙酰氨基酚联合外照射对脑胶质瘤细胞照射后代增殖的影响
目的 观察对乙酰氨基酚联合外照射对脑胶质瘤SHG-44细胞株照射存活后代增殖的影响,探讨对乙酰氨基酚作为复发性恶性脑胶质瘤放射治疗增敏剂的可能性.方法 培养人脑胶质瘤SHG-44细胞株经6 MV X线DT10 Gy照射后的存活后代细胞(SHG-44-10细胞),测定其群体倍增时间;在培养SHG-44-10细胞中加入对乙酰氨基酚,进行集落形成实验和流式细胞仪检测,分析其放射敏感性和细胞周期的变化.结果 与SHG-44细胞相比较,SHG-44照射后代细胞克隆形成率降低,倍增时间延长,对放射的敏感性明显降低.而加入对乙酰氨基酚培养后,SHG-44照射后代细胞对放射的敏感性可增加.SHG-44照射后代细胞再次照射后12 h,G2/M相细胞比例增高,24 h比例下降,而加入对乙酰氨基酚培养后G2/M相细胞12 h、24 h均维持较高的比例.结论 (1)SHG-44细胞照射后存活后代细胞增殖延缓,放射敏感性下降.(2)小剂量对乙酰氨基酚可提高SHG-44细胞照射后存活后代细胞的放射敏感性,其可能的机制为诱导细胞阻滞在对放射敏感的G2/M期并能诱导它的凋亡.(3)对乙酰氨基酚有可能成为治疗复发性脑胶质瘤的放射增敏剂.
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人脑胶质瘤细胞株SHG-44放射敏感性的测定方法探讨
目的探讨MTT法、细胞计数Kit-8(CCK-8)法在进行人脑胶质瘤细胞株SHG-44细胞放射敏感性测定时能否替代集落形成试验法.方法运用3种方法分别在0、1、2、3、4、6、8、10 Gy8个不同剂量点照射后检测其存活分数,采用统计学检查分析3种方法所得存活分数的相关性.结果在一定照射剂量内(照射剂量≤3 Gy时),MTT法、CCK-8法与克隆形成法相关性较好,而超出该剂量范围时的相关性差.经直线回归分析,3种方法均不存在高度线性相关.CCK-8和MTT法相比无更好的相关性.结论集落形成法仍然是测定放射敏感性的"金标准",MTT法等其他方法可以提供参考,但无法替代集落形成法.
关键词： MTT法 细胞计数Kit-8法 集落形成试验 SHG-44细胞 放射治疗 -
正义和反义β1,4-半乳糖基转移酶V表达质粒在星形胶质细胞瘤细胞中的表达与鉴定
目的 构建β1,4-半乳糖基转移酶V(β1,4-galactosyltransferase V, β-1,4-GalT-V)正、反义表达质粒,为探讨神经胶质瘤细胞表达β-1,4-GalT-V的生物学意义提供研究基础.方法 构建β-1,4-GalT-V表达质粒,并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中;用Western blot和Northern blot鉴定转染后基因表达情况.结果 通过酶切鉴定和测序分析证实,成功构建了β-1,4-GalT-V表达质粒.将构建的表达质粒转染到胶质细胞瘤细胞SHG-44中,正义表达质粒能增加胶质细胞瘤细胞SHG-44中的β-1,4-GalT-V表达量,而转染反义质粒则能降低细胞中β-1,4-GalT-V表达量.结论 正、反义β-1,4-GalT-V表达质粒在人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中的稳定转染和表达,对分析胶质瘤细胞表达β-1,4-GalT-V的意义以及对肿瘤细胞的增殖、迁移和黏附等的影响,提供了研究基础.
关键词： β1 4-半乳糖基转移酶V 星形胶质细胞瘤 SHG-44细胞 表达质粒 -
脑肿瘤干细胞放射敏感性的实验研究
目的 评价脑肿瘤干细胞(brain tumor stem cell,BTSC)与胶质瘤细胞系SHG-44细胞放射敏感性的差异.方法 SHG-44细胞分别接种于含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基和无血清的DMEM/F12培养基(添加bFGF和EGF)中.CD133免疫细胞化学染色鉴定BTSC.0、0.5、1、2、3、4、6、8、10、20 Gy X线照射SHG-44细胞和BTSC后以流式细胞仪检测两种细胞的细胞周期及细胞凋亡率,绘制SHG-44细胞和BTSC的存活曲线.结果 SHG-44细胞中存在BTSC,后者能在无血清的DMEM/F12培养基中存活并悬浮生长,增殖形成克隆球,具有自我更新和增殖能力,表达特异性标志物CD133.两种细胞在X线照射后细胞周期无明显差异,BTSC的细胞凋亡率低于SHG-44细胞(P<0.05),细胞存活率高于SHG-44细胞(P<0.01).结论 BTSC的放射敏感性较SHG-44细胞明显降低,是胶质瘤放疗抵抗的主要原因.
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黄芩素对星形细胞瘤SHG-44细胞增殖、侵袭迁移的影响
目的:观察黄芩素干预人星形细胞瘤SHG-44细胞株后,肿瘤细胞形态、增殖、凋亡、细胞周期以及运动侵袭能力的变化.方法:以体外培养的人星形细胞瘤SHG-44细胞为研究对象,用黄芩素干预后,显微镜观察细胞形态变化,MTT法观察细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,侵袭小室实验观察细胞侵袭力改变.结果:黄芩素对SHG-44细胞增殖的抑制作用随时间的延长和药物浓度的增加,抑制作用逐渐增强,有明显的时间和剂量依赖性;随黄芩素浓度增加,凋亡率增高,差异有统计学意义(P＜0.05);黄芩素将肿瘤细胞阻滞于G0/G1期,与对照组比较S期细胞减少近18％,差异有统计学意义(P＜0.05);侵袭小室实验表明随着黄芩素干预浓度增加,SHG-44细胞48 h后穿过人工基底膜的细胞数量明显更少,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:黄芩素能显著抑制SHG-44细胞的增殖、侵袭及迁移,提示黄芩素对星形细胞瘤治疗具有潜在应用价值.
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鬼臼乙叉甙对星形胶质细胞瘤表达β1,4-半乳糖基转移酶的影响
目的研究鬼臼乙叉甙(Etoposide,又称VP16)影响人星形胶质细胞瘤SHG-44细胞周期过程中,与N-糖链合成有关的β1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ(β-1,4-galactosyltransferase Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ,β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ)表达变化.方法首先应用流式细胞仪技术分析VP16处理SHG-44细胞过程中细胞增殖情况的变化,再采用Northern Blot方法分析处理过程中的SHG-44细胞中β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ的表达变化.结果流式细胞仪检测表明,细胞培养基加入120 μmol/L VP16 1～6 h后能引起SHG-44细胞的S期阻滞.Northern Blot显示,VP16作用1～6 h过程中,β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅴ表达无显著变化.而β-1,4-GalT-Ⅱ表达在此过程中则有升高趋势.结论 VP16能够引起星形胶质细胞瘤细胞SHG-44细胞周期改变过程中,β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅴ的表达无变化,而β-1,4-GalT-Ⅱ的表达明显升高.提示VP16引起肿瘤细胞周期改变,可能通过影响β-1,4-GalT-Ⅱ的表达,引起有关蛋白质的糖基修饰而实现的.
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参麦注射液诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡的影响?
目的：观察参麦注射液体内外对人脑胶质瘤SHG-44细胞生长的抑制及诱导凋亡的作用。方法常规培养细胞,分别加入10,20,40,80,160,320μg·mL-1参麦注射液,分别于培养48,72,96 h后采用噻唑蓝( MTT)法检测参麦注射液对SHG-44细胞增殖的抑制作用；Annexin V-FITC/PI法检测对细胞凋亡的影响；建立SHG-44细胞裸鼠异种移植瘤模型,随机分为模型对照组、顺铂组及参麦注射液(20,40,80 mg·kg-1)3个剂量组,每日腹腔注射给药,观察荷瘤裸鼠的一般活动状况以及进食量；12 d后处死裸鼠,剥瘤称定质量并计算抑瘤率；取组织瘤块,免疫组织化学法检测基因蛋白Caspase-9、Caspase-12、Fas、Survivin含量。结果参麦注射液6个剂量组对SHG-44细胞的增殖均具有明显抑制作用,该抑制率具有时间和剂量依赖性；3个剂量的参麦注射液均能明显诱导SHG-44细胞凋亡；参麦注射液腹腔注射给药可明显抑制荷瘤裸鼠移植瘤的生长；促进Caspase-9、Caspase-12、Fas表达,抑制Survivin的表达。结论参麦注射液体内外均可抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞的生长,并诱导其凋亡,其诱导凋亡的机制可能与上调Caspase-9、Caspase-12、Fas水平,下调Survivin有关。
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全反式维甲酸对胶质瘤SHG-44细胞基因表达谱的影响
背景与目的:胶质瘤有恶性进展的趋势,而诱导分化治疗可诱导高级别肿瘤的分化,使肿瘤恶性程度降低甚或转为正常.本研究旨在检测全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)处理后胶质瘤SHG-44细胞的基因表达谱改变,为进一步研究胶质瘤的基因治疗奠定基础.方法:以10靘ol/L ATRA处理SHG-44细胞后,提取总RNA进行反转录聚合酶链反应,并以荧光染料Cy3和Cy5标记cDNA产物,然后进行芯片杂交,检测ATRA诱导前后SHG-44细胞的基因表达谱,获得差异表达基因;随机选择数个差异基因进行Northern杂交实验,以验证cDNA微阵列的结果.结果:应用cDNA微阵列检测发现ATRA处理前后的SHG-44细胞之间存在42个差异表达基因,其中表达上调28个、表达下调14个.这42个差异表达基因按功能分为:凋亡类3个、细胞迁移和转移类3个、细胞周期与生长调节类2个、细胞骨架类2个、分化类1个、细胞代谢类5个、癌基因1个、氧化磷酸化类1个、受体与信号传导类2个、核蛋白体类3个、泛素-蛋白酶系统类2个、生长因子与细胞因子类1个及其他类相关基因16个.结论:ATRA可引起胶质瘤SHG-44细胞基因表达谱的改变,上述差异表达基因可能不仅介导药物诱导胶质瘤分化的机制,而且调节胶质瘤的演进.
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针对MAGE-1基因RNAi在恶性胶质瘤SHG-44细胞中的作用研究
目的构建抑制黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)的siRNA表达载体,鉴定其在人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞中对MAGE-1基因表达的干涉作用.方法化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE-1基因寡核苷酸链,克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上,重组构建RNA干涉 (RNAi)质粒载体.利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术和荧光显微镜,检测经稳定转染后SHG-44细胞中MAGE-1的表达,以了解siRNA的干扰效果. 结果重组构建的pSUPER-MAGE-1载体经双酶切电泳及插入基因片段序列分析,表明寡核苷酸链成功插入到预计位点,并且序列与预期完全一致.稳定转染后G418筛选出的SHG-44多克隆细胞MAGE-1的表达经RT-PCR、流式细胞术和荧光显微镜检测,2对siRNA均有较明显的干涉作用. 结论成功构建了针对MAGE-1基因的siRNA表达载体,抑制SHG-44细胞中的MAGE-1分子的表达.
