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黄芩素的药理作用及分子机制的新研究进展
黄芩素是黄芩发挥功效的主要活性成分,具有抗氧化、清除氧自由基、抗菌抗病毒、保护心脑血管及神经元、解热镇痛、抗肿瘤、保肝、抗炎、预防和治疗糖尿病及其并发症等作用.本文对黄芩素的药理作用及分子机制的新研究进展进行了综述.
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穿心莲内脂联合黄芩素治疗种植体周围炎的临床疗效观察
目的 研究中药穿心莲内脂联合黄芩素对种植体周围炎患者牙周指数的影响,探讨穿心莲内脂联合黄芩素治疗种植体周围炎的疗效.方法 选取我院牙周病科和种植科诊断为种植体周围炎的患者48例(种植体48枚),将48例种植体周围炎患者随机分为对照组、中药组和盐酸米诺环素组.3组患者经龈上洁治、龈下刮治后,对3组患者给予相应的药物辅助治疗.观察3组患者种植体周围炎治疗前和治疗2周、治疗4周后的改良菌斑指数(mPLI)、探诊深度(PD)和改良龈沟出血指数(mSBI)的变化,并对比分析.结果 与治疗前相比,治疗后3组患者的牙周指数均降低.与对照组比较,中药组和盐酸米诺环素组mSBI、mPLI、PD差异有统计学意义(P<0.05);但中药组与盐酸米诺环素组比较差异无统计学意义(P﹥0.05).结论 局部使用中药穿心莲内脂联合黄芩素对种植体周围炎的治疗有疗效,可改善患者的牙周指数.
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黄芩提取物多指标成分鉴定及指纹图谱的研究
目的:应用超高效液相串联飞行时间质谱法鉴定黄芩提取物中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素4种活性成分及其指纹图谱同时检测的方法.方法:以ACQUITYTM UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100 mm,1.7 μm),乙腈-0.1％甲酸溶液梯度洗脱,流速0.2 mL·min-1,检测波长275 nm,柱温30c.结果:4种成分色谱显示分离度良好,经质谱得到各成分离子碎片,查阅相关文献均得以证实,并在同一色谱条件下检测指纹图谱,结果显示相似度良好.结论:该方法简便、灵敏、准确,可用于黄芩提取物的质量控制研究.
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黄芩中4种黄酮的抗肿瘤细胞株活性比较
目的:汉黄芩苷、汉黄芩素、黄芩苷及黄芩素是黄芩的主要成分.对前三种黄酮的抗癌活性文献有不同的报导.方法:本研究比较了4种黄酮在相同浓度下对4个肿瘤细胞株24 h及48 h存活率的影响.结果:实验结果显示,汉黄芩素对4种细胞株都有明显的抑制作用,48 h半抑制浓度分别为97.9 μM(肺腺癌A549)、15.3 μM(子宫颈癌HeLa)、147 μM(肝细胞癌HepG2)及104 μM(乳腺癌MCF-7).其相应的糖化物,汉黄芩苷对4种细胞均未显示抑制.黄芩素抑制HeLa细胞,而糖化的黄芩苷抑制HepG2,且对MCF-7显示刺激作用.结论:以上结果显示,汉黄芩素在4种主要黄芩黄酮中具有强的抑制肿瘤细胞生长效能,而其他3种黄酮的抗肿瘤作用并不一致,黄芩苷甚至促进个别肿瘤细胞株的生长.因此,黄酮抗癌作用的研究及可能的临床应用更应在单体水平进行.
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黄芩素药代动力学研究进展
黄芩为中国药典收载的常用中药材,具有悠久的用药历史,含有多种黄酮类化合物,其中黄芩素为常用中药黄芩中的主要活性成分之一.笔者通过对黄芩素在体内的药动学研究进行总结,发现:黄芩素胃肠道吸收较好,主要分布在肝、肾、肺等组织器官中；黄芩素在大鼠体内代谢物主要是葡萄糖醛酸结合物,后者又可经胆汁和肠黏膜转运至肠腔,形成再吸收；黄芩素口服后血浆原型药物浓度极低.目前针对黄芩素的药动学行为研究主要是通过其代谢物黄芩苷的测定来间接实现,由此使得黄芩素替代黄芩苷进行口服制剂研究也成为可能.
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黄芩素对UVB诱导HaCaT细胞光老化及相关p38信号通路的影响
目的:研究黄芩素对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(HaCaT)光老化及相关p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响.方法:选择1×10-11,1 ×10-10,1×10-9,1×10-8,1 × 10-7,1×10-6,1 ×10-5,1×10-4,1×10-3 mol·L-19种浓度黄芩素作用于HaCaT细胞,噻唑蓝(MTT)法筛选出佳有效浓度.经预实验筛选出辐射强度为0.5 mW·cm-2的UVB,辐射时间为5 min建立光老化模型,筛选出佳有效浓度作用于光老化模型,另设空白组MTT法检测各组细胞活性.超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),过氧化氢酶(CAT)及丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD,GSH-Px,CAT活性及MDA含量.实时定量荧光定量聚合酶连式反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组细胞中mRNA及蛋白表达.结果:筛选出1×10-7,1×10-6,1×10-5 mol·L-1黄芩素为佳有效浓度;与空白组比较,UVB组对HaCaT细胞无明显的增殖作用.与UVB组比较,1×10-7,1×10-6,1×10-5 mol· L-1黄芩素组对光老化模型无明显增殖作用.与空白组比较,UVB组SOD,GSH-Px及CAT活性明显的降低,MDA含量显著升高(P＜0.01);与UVB组比较,1 ×10-7,1×10-6,1×10-5 mol· L-1黄芩素组SOD,GSH,CAT活性明显升高,MDA含量明显降低(P ＜0.05,P＜0.01).与空白组比较,UVB组肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA及TNF-α,磷酸化p38(p-p38)蛋白表达显著升高(P＜0.01);与UVB组比较,1×10-7,1×10-6,1×10-5 mol· L-1黄芩素组TNF-α mRNA及TNF-α,p-p38蛋白表达明显降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论:黄芩素对UVB诱导HaCaT细胞光老化保护作用主要是通过提高氧化酶活性以及阻断p38MAPK信号通路,抑制炎症因子产生.
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黄芩素对中波紫外线诱导角质形成细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响
目的:研究黄芩素对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响.方法:体外培养人皮肤角质形成细胞(HaCaT),取对数生长期的细胞,随机分为空白组、模型组和黄芩素组,并用30 mJ·cm-2的UVB照射模型组和黄芩素组,建立光老化模型.噻唑蓝(MTT)比色法筛选黄芩素的有效安全浓度,并测定黄芩素对光老化HaCaT细胞增殖率的影响;活性氧自由基(ROS)试剂盒测定各组细胞中ROS含量;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒测定各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定各组细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)及Caspase-9蛋白表达水平.结果:筛选出1×10-,1×10-6,1×10-5mol·L-1黄芩素为佳有效安全浓度.与空白组比较,模型组ROS含量和细胞凋亡率显著升高(P＜0.01),BcL-2蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著升高(P＜0.01).与模型组比较,1×10-7,1 ×10-6,1 ×10-5mol·L-1黄芩素组ROS含量和细胞凋亡率显著降低(P ＜0.05,P＜0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P ＜0.05,P＜0.01),Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著下降(P ＜0.05,P＜0.01).结论:黄芩素可以通过降低细胞ROS含量和凋亡率,调控Bcl-2家族中抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,降低凋亡相关细胞因子Caspase-3和Caspase-9的表达水平,抑制UVB诱导的细胞凋亡.
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黄芩素对大鼠离体胸主动脉的舒张作用及其机制
目的:研究黄芩素(BAI)对去甲肾上腺素(NE,1×10-6mol· L-1)和氯化钾(KCl,6×10-2 mol·L-1)预收缩健康成年雄性大鼠胸主动脉环的舒张作用,并探讨其作用机制.方法:应用离体血管环技术观察BAI对大鼠胸主动脉环张力的作用,记录NE预收缩的离体大鼠胸主动脉环张力变化.采用一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME,1×10-4mol·L-1)、环氧合酶抑制剂吲哚美辛(INDO,1×10-5mol· L-1)和鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝(MB,1×10-5mol· L-1)和不同的钾通道阻滞剂预孵后观察BAI对血管环张力改变的影响,并观察对NE诱发的内钙释放和CaCl2引起的外钙内流的影响.结果:BAI对NE或KCl预收缩的内皮完整和去内皮大鼠离体胸主动脉环均产生明显的舒张作用,与溶剂组相比差异有统计学意义.预先用L-NAME,MB,KV通道阻断剂四氨基吡啶(4-AP,1×10-4mol· L-1),KC.通道阻断剂四乙胺(TEA,1×10-3mol· L-1),Kir通道阻断剂氯化钡(BaCl2,1×10-4mol·L-1)孵育后,BAI对预收缩的血管张力的改变与无阻断药时比较,差异均无统计学意义；预先用KATP通道阻断剂格列苯脲(Gli,1×10-5mol·L-1)和INDO孵育后,BAI的舒张血管作用减弱,与无阻断药比较差异有统计学意义(P＜0.05)；且BAI对NE外钙内流引起的收缩有明显的抑制作用.结论:黄芩素可明显降低由NE诱发的血管环张力的升高,且其作用具有浓度依赖性,此作用有内皮依赖性和非内皮依赖性的特点.内皮依赖性收缩可能与前列环素(PGI2)途径有关,非内皮依赖机制与KATP通道和钙离子通道有关.
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黄芩素对4种肝损伤物质造成肝细胞毒性的拮抗作用
目的:观察黄芩素对4种肝毒性物质诱导的人正常肝细胞株L-02细胞损伤的拮抗作用.方法:培养的L-02细胞分别给予10 mmol· L-1对乙酰氨基酚(AP),50 μmol·L -1山岗橐吾碱( clivorine,CLI),2μmol·L-1川楝素( toosendanin,TSN)和100 mmol· L-1乙醇( EtOH)诱导肝细胞毒性.黄芩素1,10,25,50,100 μmol· L-1分别与细胞预孵15 min后,加入肝毒性物质,48 h后MTT法检测细胞存活率.结果:与对照组相比,4种肝毒性物质均能显著降低肝细胞存活率(P ＜0.001).经不同浓度黄芩素处理后,各浓度黄芩素均能显著提高AP,TSN,EtOH肝细胞损伤模型组的细胞存活率(P ＜0.01,P＜0.001)；10,25,50,100μmol·L-1黄芩素能显著提高CLI肝细胞损伤模型组的细胞存活率(P ＜0.05,P＜0.001).结论:黄芩素具有拮抗对乙酰氨基酚、山岗橐吾碱、川楝素和乙醇这些肝毒性物质诱导的肝细胞毒性的作用,且具有一定的浓度依赖性.
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黄芩素对绒毛滋养细胞侵袭的影响
目的:通过研究黄芩素对人类早孕期绒毛滋养细胞株HTR-8/SVneo的增殖活力、侵袭能力的影响,探讨中药黄芩作用于滋养细胞侵袭相关疾病的可能作用机制.方法:体外培养早孕期绒毛滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞,以不同浓度(0.01,0.05,0.1,0.5,1μmol·L-)黄芩素作用于细胞,设黄芩素0 μmol· L-为空白组,采用细胞增殖、毒性活力实验法(cell counting kit-8,CCK-8)检测黄芩素对HTR-8/SVneo细胞增殖活力的影响,细胞侵袭实验(Transwell)检测黄芩素对HTR-8/SVneo细胞侵袭作用的影响.提取黄芩素处理后的细胞总RNA,蛋白,分别运用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测滋养细胞侵袭相关的重要因素-基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9的mRNA,蛋白表达水平;收集细胞上清,培养基采用明胶酶谱法检测黄芩素对MMP-2,MMP-9的分泌及酶活性的影响.结果:与空白组比较,0.01,0.05,0.1,0.5μmol·L-1黄芩素能明显诱导增强滋养细胞HTR-8/SVneo的侵袭能力(P＜0.05),且侵袭率对剂量呈依耐性增长.0.01,0.05,0.1,0.5μmol·L-1黄芩素可明显上调MMP-9蛋白和mRNA表达水平,增强其酶活性(P＜0.05).结论:黄芩素能诱导增强滋养细胞HTR-8/SVneo的侵袭能力,可能是通过增强MMP-9 mRNA和蛋白表达及酶活性来发挥作用.
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双波长HPLC同时测定防风通圣丸中7个成分的含量
目的:建立防风通圣丸中栀子苷、连翘苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸铵7个成分的高效液相色谱测定方法.方法:采用phenomenex Luna 5u-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相甲醇(A)-0.1％磷酸溶液(B),梯度洗脱,流速0.8 mL·min-,检测波长分别为234,254 nm.结果:栀子苷、连翘苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸铵7个成分在相应的范围内线性关系良好,r不低于0.999 1;平均回收率97.3％～99.8％;RSD均＜2.0.结论:经方法学验证,本方法简单、快速、灵敏、准确,可用于防风通圣丸中栀子苷、连翘苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸铵7个成分的含量测定.
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HPLC同时测定黄栀花口服液中绿原酸、栀子苷、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量
目的:建立同时测定黄栀花口服液(金银花、栀子、黄芩等)中绿原酸、栀子苷、黄芩苷、黄芩素与汉黄芩素含量的方法.方法:采用HPLC法,Agilent SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈(A)-0.1％的磷酸溶液(B),梯度洗脱,流速1.0 mL· min-;检测波长(0 ～ 13 min,327 nm;13 ～ 15 min,238 nm;15～45 min,280nm).结果:根据回归方程,5种成分线性范围分别为绿原酸4.096×10-3 ～1.228 8×10-1μg(r =0.999 3);栀子苷4.204×10-3～1.2612×10-1μg(r =0.999 9);黄芩苷0.1175～3.525μg(r=0.9999);黄芩素4.152×10-3 ～1.245 6×10-1 μg(r =0.999 9);汉黄芩素4.256×10-4～1.276 8×10-2 μg(r=0.999 4);平均回收率分别为绿原酸99.31％,RSD 0.8％,栀子苷99.62％,RSD 0.5％,黄芩苷99.94％,RSD1.3％,黄芩素99.64％,RSD 0.8％,汉黄芩素100.1％,RSD 1.2％.结论:该方法操作简便、准确、重复性好,可用于黄栀花口服液的质量控制.
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UPLC同时测定银黄颗粒中4种黄酮类成分含量
目的:建立银黄颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的UPLC含量测定方法.方法:采用ACQUITY UPLC H-Class超高效液相色谱仪,ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm× 50 mm,1.7 μm)；流动相甲醇-0.2％磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长274 nm,柱温30℃.结果:黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的线性范围分别为1.09 ～21.8,0.340～6.80,0.116 ～2.32,0.102～2.04 μg,加样回收率分别为100.8％(RSD 0.32％),97.1％ (RSD 0.95％),101.5％ (RSD 1.6％),98.7％(RSD 0.059％).结论:该方法简便、快速,分离效果好,可为全面控制银黄颗粒的质量提供参考.
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高效液相色谱法测定黄芩愈伤组织中黄芩苷、黄芩素含量
目的:研究黄芩愈伤组织中黄芩苷,黄芩素的含量测定方法.方法:采用HPLC法测定黄芩愈伤组织中黄芩苷,黄芩素的含量.结果:黄芩愈伤组织中黄芩苷,黄芩素的含量分别为0.39%和0.051%.结论:建立了黄芩愈伤组织中黄芩苷,黄芩素的含量测定方法.
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葛根芩连汤中黄芩活性成分在大鼠体内的组织分布
目的:考察大鼠灌服葛根芩连汤后黄芩活性成分在心、肝、胃、肺、脾、肾、小肠中分布特性.方法:采用LC-MS/MS测定黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷及汉黄芩素在大鼠各组织中的含量,Shiseido CAPCELL PAK C18色谱柱(2.0 mm×100 mm,5 μm),流动相0.1％甲酸乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱,采用ESI正离子检测,多反应监测模式测定.按15 g·kg-1灌胃葛根芩连汤,分别于给药后2,4,6,8,12 h断颈动脉放血处死动物,立即分取心、肝、胃、肺、肾、脾、小肠7个组织处理,测定各组织中活性成分的分布情况.结果:黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷及汉黄芩素的线性范围分别为6.150 ～3 077,3.030～1 515,6.170～3 085,3.140～1 569 μg·L-1,日内精密度RSD5.4％ ～11.7％,日间精密度RSD7.8％ ～11.9％,准确度RE-6.4％～7 5％,各组织中4种活性成分的提取回收率均＞75.5％,基质效应可忽略,大鼠肝脏组织中4种活性成分在放置4℃保存24h,-20℃冰箱内反复冻融1,3次及-70℃冰箱内保存4周条件下稳定性良好.结论:活性成分在各组织中浓度差异较大,大鼠灌服葛根芩连汤后黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷及汉黄芩素主要分布于肝脏、胃及小肠中,其次为肾、心、肺、脾.
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黄芩药材中主要黄酮类成分含量测定及指纹图谱研究
目的:建立不同产地黄芩药材指纹图谱,并测定主要黄酮类成分的含量来评价药材质量.方法:采用岛津SHIMADZU VP-ODS柱(250mm × 4.6mm,5μm),以0.1%枸橼酸-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速1.0ml/min,检测波长为276nm及200nm-400nm,应用二极管阵列检测器检测.所得不同样品的指纹图谱用相似度评价软件进行分析.结果:确定了17个共有峰,建立了黄芩药材的指纹图谱.但各主要成分的含量有较大的差异,其中沂源县的扦插黄芩中的黄芩苷含量高.高达18.32%;东北野生黄芩中的黄芩素和汉黄芩素含量高,分别为2.31%和0.73%.结论:此方法简单、准确、重复性好,峰的分离度较好,可作为黄芩质量控制的方法.
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黄芩素在人喉癌Hep-2增殖抑制中的作用及机制
目的:探讨不同浓度黄芩素对人喉癌Hep-2细胞增殖的抑制作用及其作用机制研究.方法:采用MTT法检测不同浓度黄芩素对Hep-2细胞的抑制作用,DAPI染色法观察细胞凋亡现象,流式细胞术法检测细胞凋亡率,western bloting检测NF-κB亚基p65蛋白表达水平.结果:不同浓度黄芩素与对照组(0.1％ DMSO)比较,对肿瘤细胞生长抑制率明显升高,差异有统计学意义,且该抑制作用与时间、剂量呈依赖性;黄芩素对Hep-2细胞具有诱导凋亡作用,黄芩素通过阻止p65的核移位从而抑制NF-κB活性来诱导Hep-2细胞凋亡,并通过抑制P53活性而诱导Hep-2细胞凋亡.结论:黄芩素对Hep-2细胞增殖具有明显的抑制作用,且具有诱导肿瘤细胞Hep-2凋亡的作用.
关键词： 黄芩素 人喉癌Hep-2细胞 增殖抑制作用 机制研究 -
黄芩素对阿尔茨海默病大鼠早期脑组织蛋白表达谱的影响
目的 观察黄芩素对阿尔茨海默病(AD)大鼠发病早期认知功能和皮层、海马组织蛋白表达谱的影响,探讨其作用机制.方法 实验大鼠随机分为对照组、模型组、黄芩素组,每组12只.黄芩素组大鼠予黄芩素药液灌胃,模型组和对照组大鼠予等量生理盐水灌胃.灌胃体积均为2mL,连续10d.利用Morris水迷宫评估治疗效果,并运用双向凝胶电泳技术对脑组织蛋白进行分离,考马斯蓝染显色,应用PDQuest8.0软件对双向电泳图谱进行差异分析,通过MALDI-TOF-MS/MS和数据库查询鉴定差异明显的蛋白质点,并利用String在线分析软件对差异表达蛋白进行生物信息学分析.结果 黄芩素可显著缓解p-淀粉样蛋白(Aβ) 1-40导致的认知功能减退.黄芩素作用下,位于大鼠大脑皮层和海马组织的8种蛋白表达水平变化明显.质谱鉴定结果显示,差异蛋白涉及4种生物学功能,与神经传导关系为密切,其中3种蛋白与其他蛋白存在相互作用关系.结论 黄芩素对AD大鼠早期认知功能损伤的改善作用与其能够调节神经传导相关蛋白的表达相关.
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HPLC-电化学检测法用于黄芩苷和黄芩素大鼠血浆稳定性研究
目的:考察黄芩苷(BG)和黄芩素(B)在缓冲液及大鼠血浆中的稳定性,建立测定二者在大鼠血浆中含量的样品处理方法,并初步探讨二者在血浆中稳定性的影响因素.方法:采用HPLC-电化学检测法,分别考察BG,B在不同条件下的稳定性及使二者稳定的条件.结果:BG,B在大鼠血浆中较在pH 7.4的缓冲液中更不稳定.在pH 7.4缓冲液中加入抗氧化剂可使BG和B的稳定性明显提高,剩余百分含量达到102%和100%;在大鼠血浆中加入抗氧化剂及1 mol.L-1HCl可使BG和B的稳定性明显增加,剩余百分含量可分别达到98%和103%.结论:BG和B在pH 7.4缓冲液中的稳定性主要受氧化影响,BG和B在血浆中的稳定性不仅与氧化有关,还受血浆中的内源物质影响,终确定每1 mL大鼠血浆中加入抗氧剂及100μL 1 mol·L-1HCl为血浆样品的处理条件,此条件可使样品稳定.
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黄芩苷和黄芩素大鼠在体胃、肠的吸收动力学研究
目的:研究黄芩苷和黄芩素在大鼠胃、肠的吸收动力学特征.方法:采用大鼠在体胃、肠吸收模型,以高效液相色谱法测定胃、肠灌注液中药物的含量.结果:黄芩苷在胃、小肠及结肠中的每小时吸收率分别为8.05%,-0.94%,2.32%;黄芩素在胃、小肠及结肠中的每小时吸收率分别为34.53%,30.61%,4.89%.黄芩素在十二指肠、空肠、回肠及结肠的每小时吸收速率常数分别为0.090 7,0.083 7,0.076 6,0.048 3.结论:黄芩苷只在胃中有一定程度的吸收,在小肠和结肠基本不吸收;黄芩素在胃和小肠中吸收良好,在结肠有少量吸收.黄芩素在各部位的吸收程度明显优于黄芩苷,提示黄芩素比黄芩苷更适于制成口服吸收制剂;黄芩素具有广泛的吸收窗,提示适宜制成缓控释制剂.
