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β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ对施万细胞增殖的影响
目的探讨周围神经施万细胞表达β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-GalT-Ⅰ)对其增殖的影响.方法将构建的正、反义β-1,4-GalT-Ⅰ表达质粒,转染到施万细胞中,分析转染细胞倍增时间、3H-TdR掺入情况以及细胞周期变化.结果转染正义β-1,4-GalT-Ⅰ后施万细胞的增殖受到抑制,这种作用随转染浓度增大而增强;在G1/G0期的细胞数目增加,S期的数目减少.而转染反义β-1,4-GalT-Ⅰ有相反的作用. 结论β-1,4-GalT-Ⅰ对施万细胞的增殖有抑制作用,可能在周围神经施万细胞的增殖调节中发挥重要作用.
关键词： β1 4-半乳糖基转移酶-Ⅰ 施万细胞 细胞增殖 大鼠 -
TNF-α与β1,4-GalT-Ⅰ在骨关节炎滑膜炎症过程中的关系研究
目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(1,4-GalT-Ⅰ)在骨关节炎滑膜炎症中的关系.方法 选取2013年1月至2014年7月在治疗的骨关节炎患者15例,同时选取15例行膝关节探查未见异常健康者作为健康组,检测两组滑膜组织中TNF-α与β1,4-GalT-Ⅰ表达水平;采用免疫荧光双标法检测TNF-α与β1,4-GalT-Ⅰ共定位情况;同时培养成纤维滑膜细胞(FLSs),检测TNF-α刺激后β1,4-GalT-Ⅰ的表达变化.结果 观察组TNF-α和β1,4-GalT-Ⅰ相对表达量分别为(1.22±0.17)和(0.91±0.14),明显高于健康组的(0.41±0.06)和(0.40±0.11),差异有统计学意义(P＜0.05);TNF-α和β1,4-GalT-Ⅰ在骨关节炎滑膜组织中表达,融合图有明显的共定位;各剂量TNF-α组FLSsβ1,4-GalT-Ⅰ表达与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),说明TNF-α能够诱导FLSsβ1,4-GalT-Ⅰ表达增加,从0.1 ng/ml TNF-α时开始增加,在5 ng/ml TNF-α时达到高(24.18±2.16)×10-4.结论 在骨关节炎滑膜炎症过程中,TNF-α可诱导β1,4-GalT-Ⅰ表达增高.
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β1,4-N-乙酰半乳糖胺转移酶的表达调节及其在检测肿瘤微转移中的应用研究
β1,4-N-乙酰半乳糖胺转移酶是糖基转移酶的家族成员之一,它是神经节苷脂GM2、GD2以及糖脂GA2合成的关键酶.目前,动物模型研究结果表明,该酶在神经组织的维持与修复、精母细胞的分化以及白细胞介素-2受体复合体的调节等方面具有重要的作用.它在许多恶性肿瘤组织和细胞株中表达增加,与肿瘤的发生发展密切相关,近年来,应用该酶检测肿瘤微转移已经引起肿瘤学界的重视.
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肿瘤坏死因子-α在骨关节炎成纤维样滑膜细胞中上调β1,4-乳糖基转酶-Ⅰ的表达
目的 探讨肿瘤坏死因子(TNF)-α与β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β1,4-GalT-Ⅰ)在骨关节炎滑膜炎症过程中的相互关系.方法 提取各8例骨关节炎患者(试验组)和膝关节游离体患者(对照组)的滑膜组织,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测滑膜组织中β1,4-GaIT-Ⅰ和TNF-α表达水平,运用免疫荧光双标法检测β1,4-GalT-Ⅰ和TNF-α在滑膜组织中的共定位情况；培养成纤维样滑膜细胞(FLSs),运用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测脂多糖刺激后TNF-α表达变化及运用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测脂多糖和TNF-α刺激后,β1,4-GalT-Ⅰ的表达变化；运用t检验和单因素方差分析进行统计学分析.结果 ①与对照组[β1,4-GaiT-Ⅰ(0.48±0.09),TNF-α(0.46±0.07)相比,骨关节炎滑膜组织中β1,4-GalT-Ⅰ(0.94±0.16)和TNF-α(1.19±0.19)表达均明显增加(t=3.47,t=4.06,均P＜0.01),且存在共定位；②脂多糖能够诱导FLSs β1,4-GalT-Ⅰ[11.2±0.9与2.9±0.5(量效),22.3±2.3与4.4±0.9(时效),F=83.03,F=157.58,均P＜0.05]表达增加；③脂多糖在FLSs中促进TNF-α[(1256±96)pg/ml与(101±7)pg/ml,F=124,F=93.6,均P＜0.01]表达增加；③TNF-α在FLSs中也诱导β1,4-GalT-Ⅰ[23.2±1.9与8.4±1.3(量效),23.9±1.8与11.5±1.3(时效),F=431.96,均P＜0.05]的表达增加.结论 在骨关节炎的滑膜炎症过程中,HLSs可能运用TNF-α调控β1,4-GalT-Ⅰ的表达.
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六味地黄汤对IgA肾病大鼠外周血C1 GALT1及Cosmc mRNA表达影响研究?
目的：观察六味地黄汤对IgA肾病大鼠外周血C1GALT1及Cosmc mRNA表达,探讨其对IgA糖基化的影响。方法：SD大鼠40只随机分为正常对照组,模型组,雷公藤多苷片组,六味地黄汤组。除正常对照组外均采用运用牛血清白蛋白+脂多糖+四氯化碳方法建立实验性IgA肾病模型。造模成功后连续灌胃4周。将各组大鼠外周血分离的PBMC悬液,采用实时荧光定量PCR检测C1GALT1及Cosmc mRNA的表达,ELISA法测定外周血中IgA含量,凝集素亲和 ELISA 法检测IgA1异常糖基化程度,并进行定量分析。结果：各组C1GALT1mRNA表达量并差异无统计学意义(P>0.05)；在各组Cosmc mRNA表达中,六味地黄汤组及雷公藤多苷片组表达均较模型组升高(P<0.05),但六味地黄汤组表达较雷公藤多苷片组低(P<0.05)；在各组大鼠IgA含量及异常糖基化程度比较中,六味地黄汤组较模型组下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：六味地黄汤可以上调Cosmc mRNA表达,增加C1GALT1活性,改善IgA1糖基化异常,从而下调体内IgA1含量,避免进一步沉积肾脏,延缓IgA肾病的进展。
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β1,4-半乳糖基转移酶-I在强直性脊柱炎患者髋关节滑膜组织中的研究
目的:探讨β1,4-半乳糖基转移酶-I(β1,4-GalTI)在强直性脊柱炎(AS)髋关节滑膜组织中的表达情况.方法:选取医院收治的AS病人30例作为AS组,选取股骨颈骨折后行髋关节置换术病人25例作为对照组,Real-time PCR和western blot检测滑膜组织中β1,4-GalTI表达情况,Lectin biot检测显示β1,4-GalTI合成的Galβ1,4 GlcNA糖链表达情况,组织免疫荧光双标分析β1,4-GalTI及其合成的Galβ1,4 GlcNA糖链与主要炎症细胞共定位情况.结果:AS组β1,4-GalTI mRNA、β1,4-GalTI/GAPDH、Galβ1,4 GlcNA糖链表达高于对照组,AS患者活动期高于稳定期,差异有统计学意义(P<0.05);β1,4-GalTI及其合成的Galβ1,4 GlcNA糖链和中性粒细胞标记物MPO、巨噬细胞标记物ED-1、成纤维细胞标记物THY 1和体细胞标记物CD3共定位.结论:AS病人滑膜组织中β1,4-GalTI呈高表达,且与滑膜组织中的主要炎性细胞存在共定位.
关键词： 强直性脊柱炎 滑膜组织 β1 4-半乳糖基转移酶-I -
带蒂大网膜包肾术对肾小球硬化大鼠肾皮质 TGF-β1基因表达的影响
目的:探讨带蒂大网膜包肾术(POT)对肾小球硬化大鼠肾皮质转化生长因子(TGF-β1)基因表达的影响.方法:采用单侧肾切除加2次注射阿霉素制备肾小球硬化大鼠模型,观察带蒂大网膜包肾术对肾小球硬化大鼠肾皮质 TGF-β1基因表达的影响.结果:带蒂大网膜包肾术使肾小球硬化大鼠肾皮质 TGF-β1基因表达明显上调,肾小球硬化减轻.结论:带蒂大网膜包肾术能上调肾小球硬化大鼠肾皮质 TGF-β1基因表达,这是其延缓肾小球硬化的机理之一.
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糖尿病性肾病患者尿液转化生长因子1测定及中药的干预作用
目的:探讨自拟中药复方制剂对糖尿病性肾病患者尿液转化生长因子1(TGF-β1)含量的影响.方法:60例2型糖尿病性肾病患者采用酶联免疫吸附法检测尿液TGF-β1水平.随机分为对照组和治疗组各30例,治疗组予自拟中药复方煎剂.对比两组治疗前后TGF-β1的变化.结果:自拟中药复方煎剂治疗后,患者尿微量白蛋白水平下降,尿液TGF-β1水平亦明显下降,较疗前及对照组有统计学差异.结论:自拟中药复方煎剂治疗后,糖尿病性肾病(DN)患者尿液TGF-β1水平下降、从而延缓糖尿病性肾病进程.
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Schwann细胞转染Ha-Ras对β1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ,Ⅱ,Ⅴ表达的影响
目的:研究原代Schwann细胞转染持续激活型原癌基因Ha-Ras后β1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ,Ⅱ,Ⅴ(β-1,4-galactosyltransferase Ⅰ,Ⅱ,Ⅴ;β-1,4-GalT-Ⅰ,Ⅱ,Ⅴ)表达变化.方法:构建Ha-Ras表达质粒和分离纯化大鼠Schwann细胞,将Ha-Ras表达质粒转染到Schwann细胞中.采用Northern Blot方法分析转染细胞中Ha-Ras转染情况和转染后β-1,4-GalT-Ⅰ,Ⅱ,Ⅴ的表达变化.结果:原代Schwann细胞转染持续激活型Ha-Ras后,β-1,4-GalT-Ⅰ随转染时间延长而表达增高,而β-1,4-GalT-Ⅱ及Ⅴ的表达无变化.结论:β-1,4-GalT-Ⅰ随Schwann细胞转染时间Ha-Ras延长而表达增高,提示原代细胞表面的β-1,4-GalT-Ⅰ可能与Ha-Ras影响原代细胞增殖的信号途径相关.
关键词： Ha-Ras β1 4-半乳糖基转移酶Ⅰ Schwann细胞 大鼠 -
高糖环境下视网膜微血管周细胞β1,4半乳糖基转移酶-1的表达
目的 了解高糖培养环境下牛视网膜微血管周细胞β1,4半乳糖基转移酶-1(galactosyltransferase-1,GalT-1)的表达情况以及细胞凋亡情况.方法 原代培养牛视网膜微血管周细胞,在含不同浓度葡萄糖的培养基(5 mmol/L,10 mmol/L,20 mmol/L,30 mmol/L)培养72 h,以5 mmol/L浓度葡萄糖培养组作为正常对照组.采用RT-PCR,蛋白凝集素染色法观察不同浓度葡萄糖培养下GalT-1表达的改变情况,同时采用流式细胞观察高糖诱导的细胞凋亡.结果 高糖培养环境下,视网膜微血管周细胞内GalT-1 mRNA表达上调,凝集素染色提示视网膜微血管周细胞蛋白由Galβ1→4GlcNAc糖基化基团的修饰表达上调;视网膜微血管周细胞凋亡加剧,各葡萄糖浓度组的凋亡细胞平均死亡率为:7.35±1.82%,16.34±2.25%,29.85±6.66%,39.48±6.48%.结论 高糖环境下,牛视网膜微血管周细胞内β1,4半乳糖基转移酶-1的表达上调,其可能参与了高糖环境下的视网膜微血管周细胞凋亡,参与机制有待进一步研究.
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β3GalT7基因转染HL-60细胞及对其生物学行为的影响
目的:初步探讨人类β1,3半乳糖基转移酶7(β3GalT7)基因对HL60细胞的细胞周期、侵袭能力等方面的影响.方法:通过脂质体介导将本实验室构建好的β3GalT7真核正义表达载体pEGFP-C1-T7-Sense和反义表达载体pEGFP-C1-T7-AntiSense转染入HL60细胞;流式细胞仪分析各细胞株的细胞周期改变;Transwell侵袭实验检测β3GalT7对HL60细胞侵袭转移能力的影响.结果:随着β3GalT7 表达的增高,G2+S期细胞增多,且细胞侵袭能力增强;而转染反义表达载体pEGFP-C1-T7-AntiSense的结果是相反的.结论:过度表达β3GalT7的HL-60细胞株体外增殖和侵袭能力增强.
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β1,4-GalT I在大鼠坐骨神经损伤后脊髓和背根神经节中的表达
目的:观察β1,4-GalT I mRNA在坐骨神经损伤后相应节段脊髓和背根神经节中的表达变化.方法:采用real-time PCR 方法, 分析β1,4-GalT I mRNA在大鼠坐骨神经损伤后相应脊髓和背根神经节中的表达变化.运用原位杂交检测β1,4-GalT I在脊髓和背根神经节中的定位情况.结果: Real-time PCR 显示,与正常脊髓和背根神经节相比, β1,4-GalT I在坐骨神经损伤后发生表达变化.原位杂交结果显示β1,4-GalT I在正常脊髓中的表达较弱,主要表达于脊髓灰质中,而损伤后在灰质和白质中均可见有大量的阳性信号.β1,4-GalT I在背根神经节中则主要定位于神经元.结论: 本实验发现β1,4-GalT I在正常脊髓和背根神经节中有表达, 并在坐骨神经损伤后发生表达变化.提示β1,4-GalT I在周围神经损伤后再生和退变过程中可能发挥一定的作用.
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β1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ影响雪旺氏细胞增殖的机制
目的:探讨β1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ影响雪旺氏细胞增殖的机制.方法:将不同浓度的β-1,4-GalT-Ⅰ表达质粒转染雪旺氏细胞,采用Westem blot方法检测增殖相关信号分子cyclin D1、p16INK4以及p27Kipl的表达水平,Northem blot方法检测p19ARF的表达变化.结果:随着β-1,4-GalT-Ⅰ在雪旺氏细胞中的表达增加,cyclin D1表达降低,而p16INK4a和p19ARF呈现相反的变化;p27Kipl变化不明显.结论:β-1,4-GalT-Ⅰ影响雪旺氏细胞增殖可能与cyclin D1、p16INK4a和p19ARF介导的信号传导途径有关.
关键词： β1 4-半乳糖基转移酶Ⅰ 雪旺氏细胞 增殖 大鼠 -
正、反义β1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ表达质粒的构建
目的:为了探讨不同β1,4半乳糖基转移酶-I(β1,4-galactosyltransferase I,β-1,4-GalT-1)表达水平的生物学意义.方法:通过分子生物学手段,构建正、反义β-1,4-GalT-I表达质粒.:设计β-1,4-GalT-I全长引物;提取小鼠脑总RNA,通过RT-PCR方法,得到全长β-1,4-GalT-I基因片段,将其克隆到pGEM-T载体.再通过多克隆酶切位点,将β-1,4-GalT-I全长序列克隆到pcDNA3.1表达载体中.设计反义引物,以pGEM-β-1,4-GalT-I质粒为模板,将PCR产物克隆到pcDNA3.1表达载体中.通过酶切和测序鉴定构建的质粒.结果:通过酶切和测序证实,实验得到了正、反义β-1,4-GalT-I表达质粒.结论:正、反义β-1,4-GalT-I表达质粒的构建,为进一步研究不同β-1,4-GalT-I表达水平的生物学意义奠定基础.
关键词： β1 4半乳糖基转移酶-I 逆转录-聚合酶链反应 小鼠 -
p3GnT8/β3GalT7催化活性的研究
目的 进一步验证β1,3半乳糖基转移酶(β3GalT7)的催化功能.方法 将重组表达载体pGEX-6p-1-β3GnT8/GalT7转化BL21大肠杆菌,经IPTG诱导表达后,得到GST-β3GnT8/GalT7融合蛋白,分别进行β3GAIT7和β3GnT8反应体系的酶促反应,利用高效液相色谱(HPLC)进行检测.结果 HPLC检测结果表明,β3GalIT7同时具有β3GalT7和β3GnT8的活性.结论 β3GalT7具有双重酶活性,拟初步重命名为β3GnT8/β3GalT7.
关键词： β1 3半乳糖基转移酶 3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 催化活性 高效液相色谱 -
p3GnT8/β3GalT7催化活性的研究
目的 进一步验证β1,3半乳糖基转移酶(β3GalT7)的催化功能.方法 将重组表达载体pGEX-6p-1-β3GnT8/GalT7转化BL21大肠杆菌,经IPTG诱导表达后,得到GST-β3GnT8/GalT7融合蛋白,分别进行β3GAIT7和β3GnT8反应体系的酶促反应,利用高效液相色谱(HPLC)进行检测.结果 HPLC检测结果表明,β3GalIT7同时具有β3GalT7和β3GnT8的活性.结论 β3GalT7具有双重酶活性,拟初步重命名为β3GnT8/β3GalT7.
关键词： β1 3半乳糖基转移酶 3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 催化活性 高效液相色谱 -
正、反义β1,4半乳糖基转移酶-Ⅴ表达质粒的构建
目的:探讨不同β1,4半乳糖基转移酶-Ⅴ(β-1,4-GalTV)表达水平的生物学意义,构建正、反义β-1,4-GalTV表达质粒.方法:设计β-1,4-GalTV全长引物;提取小鼠脑总RNA,通过RT-PCR方法,得到全长β-1,4-GalTV基因片段,将其克隆到pGEM-T载体.再通过多克隆酶切位点,将β-1,4-GalTV全长序列克隆到pcD-NA 3.1表达载体中.设计反义引物,以pGEM-β-1,4-GalTV质粒为模板,将PCR产物克隆到pcDA3.1表达载体中.通过酶切和测序鉴定构建的质粒.结果:通过酶切和测序证实,得到了正、反义β-1,4-GalTV表达质粒.结论:正、反义β-1,4-GalTV表达质粒的构建,为进一步研究不同β-1,4-GalTV表达水平的生物学意义奠定基础.
关键词： β1 4半乳糖基转移酶-Ⅴ 逆转录-聚合酶链反应 正、反义表达质粒 -
类风湿关节炎患者滑膜组织中β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ的表达及临床意义
目的 检测β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β1,4-GalT-Ⅰ)在类风湿关节炎(RA)患者膝关节滑膜组织中表达及其在RA发病过程中的作用.方法 分别运用免疫组化、RT-PCR和Western blot方法检测29例炎症活动RA患者膝关节滑膜组织和7例正常膝关节滑膜组织中β1,4-GalT-Ⅰ蛋白和mRNA表达.结果 75.8％的RA患者膝关节滑膜组织中检测到β1,4-GalT-Ⅰ.与正常膝关节组织相比,β1,4-GalT-Ⅰ在RA患者滑膜组织中表达增高(P＜0.01),且与显微镜下炎症严重程度(r=0.68,P＜0.01)和血沉(r=0.73,P＜0.01)相关.结论 RA患者膝关节滑膜组织中β1,4-GalT-Ⅰ表达水平可以作为判断病情活动的参考指标.
关键词： 类风湿关节炎 β1 4-半乳糖基转移酶-Ⅰ -
正义和反义β1,4-半乳糖基转移酶V表达质粒在星形胶质细胞瘤细胞中的表达与鉴定
目的 构建β1,4-半乳糖基转移酶V(β1,4-galactosyltransferase V, β-1,4-GalT-V)正、反义表达质粒,为探讨神经胶质瘤细胞表达β-1,4-GalT-V的生物学意义提供研究基础.方法 构建β-1,4-GalT-V表达质粒,并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中;用Western blot和Northern blot鉴定转染后基因表达情况.结果 通过酶切鉴定和测序分析证实,成功构建了β-1,4-GalT-V表达质粒.将构建的表达质粒转染到胶质细胞瘤细胞SHG-44中,正义表达质粒能增加胶质细胞瘤细胞SHG-44中的β-1,4-GalT-V表达量,而转染反义质粒则能降低细胞中β-1,4-GalT-V表达量.结论 正、反义β-1,4-GalT-V表达质粒在人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中的稳定转染和表达,对分析胶质瘤细胞表达β-1,4-GalT-V的意义以及对肿瘤细胞的增殖、迁移和黏附等的影响,提供了研究基础.
关键词： β1 4-半乳糖基转移酶V 星形胶质细胞瘤 SHG-44细胞 表达质粒 -
β3GnT8/β3GalT7表达载体构建及其功能
目的 探讨β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶/β1,3半乳糖基转移酶(β3GnT8/β3GalT7)与肿瘤浸润、转移的相关性.方法 构建并鉴定β3GnT8正义和反义表达载体.将空载体(A组)、正义(B组)及反义(C组)重组载体分别转染人胃癌SGC7901细胞中;另设SGC7901细胞为对照(D)组.采用RT-PCR和Western blot法分别检测四组细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-14和转化生长因子β1 (TGF-β1)的mRNA和蛋白表达.结果 获得β3GnT8/β3GalT7基因正义和反义表达载体,并成功转染SGC7901细胞.D组TGF-β1、MMP-2和MMP-14表达低于B组,但高于C组.结论β3GnT8/β3GalT7表达与MMP-2、MMP-14和TGF-β1阻表达呈正相关,故可能参与肿瘤的发生、发展过程.
