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丙肝病毒核心抗原检测应用全自动酶免分析仪的诊断作用研究
目的:研究丙肝病毒核心抗原检测应用全自动酶免分析仪的诊断作用.方法:选取30例丙肝或疑似丙肝患者为研究组对象,选择同期健康体检者30例为对照组.两组均实施HCV-Ab和HCV-cAg检测,并采用RT-PCR证实阳性者.结果:观察组经RT-PCR证实阳性者为27例,而HCV-cAg检测出23例阳性,诊断符合率为85.18%(23/27),而对照组经RT-PCR证实阳性者为1例,HCV-cAg检测出3例阳性,而HCV-Ab检测均为阴性,两组间对比差异具有统计学意义(P<0.05).结论:丙肝病毒核心抗原检测应用全自动酶免分析仪诊断后,能够达到较高的诊断符合率,且对于丙肝患者的早期诊断具有积极的诊断作用,值得推广应用.
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开展乙肝病毒核酸相关抗原(HBV-NRA)前相关临床分析
我国属于乙型肝炎病毒(HBV)感染高流行区,一般人群的HBsAg阳性率高达9.09%[1],隐匿型乙型肝炎和乙肝肝炎病毒变异的存在,要求检测乙肝病毒方法和手段也越来越高.乙型肝炎病毒载量(HBV-DNA)与乙肝病毒前S1蛋白(Pr-S1)以及乙肝病毒核心抗原(HBcAg)均是反映乙肝病毒复制的敏感指标[2].检测HBV-DNA由于对仪器、设备、实验室条件及人员素质有较高要求,一般中小型医院难于开展,而乙肝病毒前S1蛋白(Pre-S1)以及乙肝病毒核心抗原(HBcAg)与HBV-DNA具有相关性,因此又称乙肝病毒核酸相关抗原(HBV Nucleicacid Related Antigen.HBV-NRA),可联合检测,相对容易开展、普及.我科在开展乙肝病毒核酸相关抗原(HBV-NRA)前,与荧光定量PCR法检测HBV-DNA比对,来探讨开展HBV-NRA可行性及临床意义,现介绍如下:
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抗HBcAg人源性单链抗体细胞内表达及其抗病毒复制的实验研究
应用人源性抗HBcAg单链抗体细胞内表达技术,探讨抗HBV复制基因治疗的应用价值.应用噬菌体展示和基因重组技术,从HBV感染的外周血淋巴细胞克隆了人源性抗HBcAg单链抗体,并重组至逆转录病毒载体.以人肝癌细胞smmc-7721和PLC/PRF/5为靶细胞进行基因共转染,分别测定实验组细胞上清中的HBsAg和HBeAg,与对照组做比较,观察抗HBcAg单链抗体细胞内表达的抗病毒治疗作用.结果显示,在急性HBV感染的细胞株中,抑制病毒复制效率为49%~61%,在慢性病毒感染细胞,抑制率为41%~54%.实验结果表明,应用单链抗体细胞内表达技术,在抗病毒治疗研究中具有潜在的应用价值.应对HBV的4个开放阅读框架编码产物进行全面的对比研究,以发现抑制效率高、实用价值大的靶基因.
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核心抗原酶联免疫检测在丙型肝炎病毒感染诊断中的价值
目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原( HCV-cAg)酶联免疫检测( ELISA)在丙型肝炎早期诊断中的应用价值。方法83例抗-HCV阳性、500例ALT异常但抗-HCV阴性血清同时进行HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR。结果83例抗-HCV阳性血清中HCV-cAg和HCV RNA阳性分别为33例和36例,其中32例共阳性;500例ALT异常但抗-HCV阴性的血清中有3例HCV-cAg和HCV RNA同为阳性。抗-HCV阳性和阴性血清HCV-cAg和HCV RNA检测结果符合率分别为94.0%和100%。结论 HCV-cAg ELISA敏感性与HCV RT-PCR类似,能够有效缩短窗口期,操作简便,费用低廉,在丙型肝炎早期诊断中具有很好的前景。
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丙型肝炎病毒游离核心抗原检测试剂盒临床考核数据分析
用国外丙型肝炎病毒游离核心抗原检测试剂盒对自然供血员及丙型肝炎可疑感染者血样共9215份血清进行检测,并对检测数据进行统计分析.结果发现,该试剂在9215份血清中筛出两份HCV游离核心抗原阳性血清,其中一份为抗原和抗体同时阳性血清,产生的抗体为核心区抗体.另外一份为单独游离核心抗原阳性血清.临床考核发现该试剂出现了较多的假阳性结果.
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HCV核心-包膜E2抗原融合基因DNA疫苗的构建及对小鼠的免疫应答试验
目的观察一种结构新颖的HCV融合抗原DNA疫苗在BALB/c小鼠的免疫效果,探讨其用于防治丙型肝炎的可行性. 方法用重叠延伸PCR拼接编码小鼠IgG kappa链信号肽和通用型辅助性T细胞表位PADRE的DNA片段,PCR分别扩增HCV核心抗原基因和包膜E2抗原基因,将3段基因插入真核表达载体pcDNA3.1,构成重组表达质粒pST-CE2t,转染COS7细胞,免疫组化检测HCV抗原的表达.将pST-CE2t和HCV核心抗原DNA疫苗pcDNA3.1 core分别肌肉注射接种BALB/c小鼠,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和CTL反应. 结果 pST-CE2t可在COS7细胞内表达HCV核心抗原和E2抗原,接种于BALB/c小鼠能有效诱导体液和细胞免疫应答,其中抗HCV核心抗原免疫应答的强度明显超过pcDNA3.1 core,且更趋向于TH1型免疫应答. 结论 pST-CE2t对于丙型肝炎的防治有潜在的应用价值.
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HCV-RNA与HCV-cAg检测的相关性分析
目的 探讨丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)与HCV-RNA检测的相关性及其在丙型肝炎病毒感染诊断中的价值.方法 采用双抗体夹心酶联免疫分析法(ELISA)检测HCV-cAg;采用实时荧光定量PCR法检测HCV-RNA,以了解两者检测方法的相关性.结果 在160例HCV-RNA阳性血清中,HCV-cAg阳性148例,阳性符合率92.5%;在60例HCV-cAg阳性血清中,HCV-RNA阳性59例,阳性符合率98.3%.结论 通过对HCV-RNA与HCV-cAg检测,说明HCV核心抗原与HCV-RNA检测可作为反映HCV复制的间接指标,预防窗口期感染.由于HCV-cAg在方法学上与HCV-RNA相比,具有方法简便、快速、价廉,所需设备简单,易于普及应用等优点,特别是在不具备HCV-RNA检测条件的基层医疗单位作为HCV感染检测的直接证据具有重要的意义.
关键词: 丙型肝炎病毒(HCV) 核心抗原 HCV-RNA -
维持性透析患者严重的感染症之一:病毒性肝炎
乙型肝炎及丙型肝炎的病原学一、乙型肝炎病毒(HBV)为DNA病毒,其直径为42~47 nm的球型颗粒(Dane颗粒 ).HBV由两层外壳及内核组成.外壳有许多小球状颗粒,含表面抗原(HbsAg).内核由环状双股DNA、DNA多聚酶、核心抗原(HbcAg)和e抗原(HbeAg).
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携带乙肝核心抗原基因复制缺陷型重组腺病毒的高效制备和表达
目的 构建表达乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的复制缺陷型重组腺病毒载体.方法 扩增乙肝病毒(HBV)C基因片段,亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共同电转化到大肠杆菌BJ5183内进行同源重组,经卡那霉素抗性筛选和酶切鉴定筛选出携带HBV C区基因的重组腺病毒载体,用脂质体包裹Pac Ⅰ酶切线性化的重组质粒,转染到293细胞内进行重组腺病毒的包装.体外转染真核细胞,通过示踪基因绿色荧光蛋白表达的观察、RT-pCR和ELISA检测目的 基因的表达.结果 成功获得重组腺病毒质粒pAd-HBc.重组质粒pAd-HBc导入293细胞,经过包装和二次扩大培养获得了具有感染能力的重组腺病毒颗粒Ad-HBc,其病毒滴度达5×109 pfu/mL,并能在真核细胞中有效表达目的 基因.结论 成功构建表达HBcAg复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步开展HBV基因治疗研究提供实验基础.
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门脉高压性胃病的病理观察及其影响因素分析
[摘要]目的 探讨门脉高压性胃病(PHG)的病理特点,分析PHG的影响因素.材料方法 对36例肝炎后肝硬化PHG患者的胃黏膜活检组织光、电镜下观察并进行幽门螺杆菌特殊染色,乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)和核心抗原(HBcAg)免疫组化染色.
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丙型肝炎病毒检测方法的研究进展及其临床意义
丙型肝炎病毒(HCV)为嗜肝性慢性病毒.HCV感染后,患者的起病和临床症状极不典型,以亚临床感染为多见,容易造成漏诊.HCV感染的慢性化发生率明显高于乙型肝炎,较乙型肝炎易早期出现肝硬化、肝癌,死亡率较高.因此HCV的检测对丙型肝炎病毒感染的早期诊断和指导临床治疗有重大的意义.目前用于HCV感染诊断的两项主要指标为抗-HCV和HCVRNA,现多采用的第三代检测抗-HCVEIA试剂增加了HCV基因组NS5区表达的蛋白作为抗原,进一步提高了试剂的敏感性,但还存在"窗口期"漏检的问题.HCV RNA检测灵敏度高、特异性强,具有早期诊断的意义,但检出率较低,检测复杂,也可出现假阳性.作为抗-HCV检验的补充试验,HCV核心抗原的检测对处于HCV感染"窗口期"的个体检测有很大价值.
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乙型肝炎病毒增强子的结构和调控研究
0引言HBV属嗜肝DNA病毒,其基因组为3.2kb部分双链的环状DNA.他的复制需要一个RNA中间物-前基因组RNA,经过反转录产生新的DNA分子.HBV基因组的功能单位十分密集,高度压缩,重复利用.目前已确定有四个主要的开放阅读框架,分别负责编码核心抗原(pre-C/C)、核酸聚合酶(P)、表面抗原(preS/S)和X蛋白(X).这些基因的表达受到顺式元件-启动子和增强子的调控.目前在HBV基因组已发现并鉴定的顺式元件有四个启动子(C、X、SP Ⅰ、SPⅡ)、两个增强子(Enh Ⅰ和EnhⅡ)和糖皮质激素应答元件[1-4].其中增强子的作用主要是调控HBV的转录和复制.
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丙型肝炎的实验室诊断和临床意义
0引言丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染的实验室诊断是丙型肝炎诊断的重要依据,主要包括特异性抗体(抗-HCV)的检查、HCV基因和HCV核心抗原的检测以及肝细胞损害的检查.抗-HCV阳性是感染的标记,感染的间接证据;而病毒基因和抗原检测阳性是病毒存在的直接证据.
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慢性乙型肝炎患者表位特异性CTL定量检测的评价
目的:评价慢性乙肝患者体内不同表位特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)的功能状态.方法:采用MHC/肽四聚体复合物技术,即tetramer技术,定量外周血HLA-A2限制性表位即核心抗原core18-27、被膜抗原env 183-191、335-343、聚合酶抗原pol 575-5834种表位特异性CTL,通过多元回归分析进行综合评价.结果:慢性乙肝患者体内存在多克隆CTL反应,core 18-27为优势生表位.4种表位特异性CTL的频率与病毒载量无相关性(P>0.05);表位特异性CTL与血清转氨酶水平均无显著相关性(P>0.05).结论:体内存在的CTL数量并不能代表机体的保护性免疫状态.
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乙肝病毒核心抗原单链抗体细胞内免疫抗乙肝病毒基因治疗研究
目的:研究乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)人源单链抗体(ScFv)细胞内免疫抗乙型肝炎病毒(HBV)基因治疗的作用.方法:用噬菌体表面展示技术筛选特异性的HBcAg人源可变区单链抗体,聚合酶链反应(PCR)法和基因重组技术体外扩增HBcAg单链抗体基因,并构建表达HBcAgScFv基因的重组逆转录病毒载体pLXSN-HBcAg,转染PA317细胞,逆转录PCR(RT-PCR)方法验证细胞培养液上清分泌的假病毒颗粒中HBcAg ScFv的表达;将假病毒颗粒感染2.2.15细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测其上清HBsAg和HBeAg,定量检测HBV DNA.结果:成功筛选出HBcAg ScFv,PCR扩增出750bp的全基因,构建HBcAg ScFv基因的逆转录病毒载体,转染PA317细胞,在上清中检测出含HBcAg ScFv假病毒颗粒的存在,上清感染2.2.15细胞后第3、5、7、14天,HBsAg、HBeAg逐渐下降,到14d时HBsAg已变为阴性,DNA定量检测无明显变化.结论:HBcAg ScFv能成功地在逆转录病毒载体中表达,并有抑制HBsAg、HBeAg表达的作用.
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应用抑制性消减杂交技术筛选乙型肝炎病毒核心抗原反式调节基因
目的:筛选与克隆HBcAg反式调节基因,了解其在体内的调节功能线索及机制.方法:以分子生物学技术构建HBcAg的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HBcAg,以表达质粒pcDNA3.1(-)-HBcAg转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果:成功构建人HBcAg激活基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到33个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200-800 bp插入片段.对插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得17种编码基因.结论:筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢及肿瘤发生密切相关的蛋白编码基因,推测了HBcAg在体内可能存在的调控机制的线索,尚需进一步的实验证明.
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EB病毒相关血液系统疾病免疫治疗的研究进展
EB病毒(EBV)属于疱疹病毒γ亚科,在细胞外成熟的病毒颗粒呈球形.EBV基因是线性双链DNA,平均172 kb,其中含有一系列0.5 kb的末端重复序列,多个内部重复序列将病毒基因分成长短不等的独特序列区.全球90%的人口潜伏感染过EBV.EBV初次感染常发生在口咽部,可以是无症状的,也可表现为单核细胞增多症.EBV具有高度的免疫原性.在初次感染时,正常人体内可激发强大的体液免疫及包括CD+4细胞和CD+8细胞在内的细胞免疫,EBV血清阳性的免疫功能正常的人群可以控制初次感染和周期性感染的再次激活.在清除初次感染后,EBV在感染的B细胞内作为游离体形式存在,表达很有限的一部分EBV抗原而形成潜伏感染,这些抗原包括EBV核心抗原(EBNA)1、2、3A、3B、3C和LP,潜伏模蛋白(LMP)1、2.
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三种丙型肝炎病毒核心抗原检测方法初步比较
目的 对三种丙型肝炎病毒核心抗原(HCV cAg)的检测试剂进行初步比较.方法 对72份抗体检测阳性样本进行HCV核糖核酸(RNA)、HCV核心抗原检测,其中HCV cAg分别采用A、B、C3种试剂平行检测,实验室检测和数据统计均采用盲法.结果 A、B、C3种HCV cAg检测试剂与核酸检测的符合率分别为97.22%、72.22%、54.16%,两两之间差异均有统计学意义(P<0.05).试剂A对HCVcAg的检出率与HCV RNA的检出率高度一致(Kappa =0.8421,95%可信区间:0.6290~1.0000).方法B、C与核酸检测无一致性,差异有统计学意义(P<0.05).Cochran-Armitage趋势性检验表明,三种试剂对HCV cAg的检出率均随HCV RNA浓度升高而提高(Z统计量单侧P<0.0001).结论 方法A可作为条件有限时核酸检测的替代方法;三种HCV Ag检测方法的检测水平之间存在较大差距;三种方法对HCV cAg的检出能力均随核酸浓度的升高而增强.
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丙型肝炎病毒核心抗原检测技术及其临床意义
丙型肝炎病毒(HCV)感染是在世界范围内引起输血后肝炎的主要病因之一.目前中国HCV感染的诊断和筛查主要采用基于酶免疫分析法(EIA)的HCV抗体检测技术,但该方法存在较长的窗口期,残余风险高.核酸检测(NAT)的应用可显著缩短窗口期,但成本高昂.HCV核心抗原(HCVcAg)作为HCV感染的标志几乎与核糖核酸(RNA)同时出现,且浓度呈现动态相关,可用于HCV感染的检测.与NAT相比,HCV核心抗原的检测成本相对较低,对实验室条件要求不高.目前多种基于不同方法的HCVcAg检测试剂盒已投入市场.该文对已有的几种HCV核心抗原检测技术在其原理、检测效果以及临床意义等方面进行综述.
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Kimura 病一例
患者男,40岁.发现左腮腺区无痛性肿块15年.患者15年前无意发现左侧腮腺区有一无痛性肿块,当时大小约 2 cm×2 cm,后于5年前在原肿块上方发现有一约1 cm× 1 cm大小的肿块.2年前又在原肿块下后方发现一约1 cm×1 cm肿块,均无疼痛及任何不适,也未予治疗.2个月前 3个肿块开始有不同程度的增大.体检:左侧腮腺区可扪及大小不等的3个瘤体:左侧腮腺后下极肿块约3 cm×3 cm大小,左侧耳屏前肿块大小约1.5 cm×1.5 cm,左侧下颌角处肿块约1 cm×1 cm大小.彼此有粘连,质地中等偏硬,表面光滑度尚可,与周围组织界限欠佳,活动度较大,均无压痛.双侧颏下区及颈部区未扪及肿大淋巴结.实验室检查:白细胞5.94×109/L,嗜酸性粒细胞1.31×109/L (0.22),中性粒细胞2.49×109/L(0.42).乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、E抗原(HBeAb)、核心抗原(HbcAb)均为阳性.