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荧光定量PCR方法检测乙肝病毒DNA实验条件的研究
乙肝病毒血清标志物(HBV-M)检测是目前诊断乙型肝炎常用的指标,即俗称的"两对半".主要反映人体对乙肝病毒(HBV)的免疫反应状态,由于不同血清标志模式反映不同的临床意义,非传染病专业的医师很难准确掌握.
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人巨细胞病毒感染与急性脑卒中的相关性研究
近年来,人巨细胞病毒(human cytomegalovir-us,HCMV)感染与包括脑卒中等在内的多种动脉粥样硬化性疾病的关系引起了关注。Yi 等[1]用免疫组织化学、原位杂交、聚合酶链反应(PCR)等3种方法对35例缺血性脑卒中患者和20例对照组患者颈内动脉的 HCMV-DNA 和抗原进行检测,发现脑卒中组患者的 HCMV 即刻早期基因/蛋白明显高于对照组。尽管大部分研究认为 HCMV 感染与脑卒中危险性相关,但也有少数流行病学研究得出了相反的结果[2,3]。另外,以往更多研究检测HCMV 方式是 HCMV 抗体检测,不能反映潜在的HCMV 感染情况。本研究拟采用荧光定量 PCR法检测 HCMV,探讨 HCMV 与脑卒中的关系。
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维德维康推出食品安全快速检测新方案:荧光定量快速检测系统
中国有句古话叫“民以食为天”,食品安全是人类生存和社会发展基本的一项生存条件.食品的安全关系到全人类的生存、延续,是人类的重要课题.近年来,频繁曝光的食品安全事件,使食品安全问题日益成为全社会关注的焦点,加强对食品安全的监控已成为政府和社会关注的重大问题,政府对食品安全监管的要求也越来越高.目前,食品中有害化合物主要来源于农药、兽药、霉菌毒素和非法添加物等的残留以及食品添加剂的滥用,这些有害化合物通过食物链的生物富集终进入人体,从而引起人类急性食物中毒或慢性中毒的发生,导致细菌耐药性增强,甚至引发“三致”(致突变、致畸、致癌).因此,食品中的农药残留、兽药残留、非法添加物、真菌毒素等的检测技术的应用具有重要的现实意义.
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基于PCR技术探究食品检测新技术的应用
“民以食为天,食以安为先”,食品安全问题事关人民群众的切身利益,食品安全的维护对于稳定人民生活、促进社会发展具有重要作用。目前,生物技术已成为食品安全检测技术中具竞争力和挑战力的新技术,如免疫学检测技术、PCR技术、基因探针技术、生物传感器技术、生物芯片技术等生物技术已广泛应用在食品检测领域。PCR技术自1985年发明以来,因其灵敏、快速、操作简便的优点,在食品检测领域得到广泛应用。近年来,关于PCR改进技术在食品检测中的应用研究越来越多。本文详细介绍了常规PCR检测及其改进技术多重PCR检测、荧光定量PCR检测技术的原理,基于原理,分别介绍三种技术在食品检测中的应用研究进展。
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不止于快,更致于准-维德维康快检产品新突破
维德维康首次向业界公布了食品安全快速检测新方案—荧光定量快速检测系统。据了解, NC膜下方固定的荧光染料正是该系统的“秘密武器”。大限度地减少甚至避免各类食品安全事件带来的伤害,有效提高食品安全监管工作效率,提升食品安全监管系统的完善水平。
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荧光定量快检产品-林可霉素荧光定量快速检测试纸条
林可霉素(Lincomycin)属于林可胺类抗生素,主要用链霉菌发酵得到,对革兰氏阳性菌有较强抗菌作用,对支原体也有抑制作用。林可霉素对敏感人群副作用较强,可引起消化道反应,如恶心、呕吐等,还可导致过敏反应,如皮疹、荨麻疹、多形性红斑等。该药物常作为饲料添加剂,预防动物疾病,不规范用药可导致在动物组织、动物产品以及乳品中残留,不仅影响动物性产品的加工生产,而且还会严重影响消费者的身体健康。农业部颁布的《动物性食品中兽药高残留限量》(235号公告)规定了林可霉素在牛奶中的大残留限量为150μg/kg。针对林可霉素的定量测定国际通用方法为采用仪器方法,仪器方法灵敏度高,但是操作复杂,费用昂贵,需要专门的技术人员进行操作,不宜推广。因此,急需建立一类准确、快速、简便的林可霉素检测方法。近几年,虽然胶体金免疫层析技术已经诞生,但由于胶体金标记抗体检测信号的局限性,限制了其方法学的灵敏度。荧光定量检测系统由于简单快速、即时定量,从而作为一项新的检测方法崭露头角。
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荧光定量RT-PCR快速检测A型流感病毒
目的 利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测A型流感病毒的方法.方法 根据A型流感M2基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用十倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线并与普通RT-PCR法进行比较;特异性检验后进行临床标本的检验.结果 A型流感病毒检测反应的灵敏度为2.56×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0.999,扩增效率为108.5%,5种非A型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法具有很好的稳定性、重现性和特异性.结论 本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测A型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测.
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荧光定量基因检测系统的设计
本文对荧光定量PCR原理进行了简要叙述,介绍了荧光定量基因检测系统的总体设计过程,该系统采用基因扩增技术与计算机技术相结合的方法,能实现对PCR扩增过程进行实时检测,并可对扩增过程中的数据进行实时采集、后期处理等操作.
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肺泡灌洗液荧光定量PCR测定在菌阴肺结核诊断价值
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荧光定量PCR技术用于乙型肝炎病毒宫内感染监测的临床观察
目的:探讨应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)在宫内感染监测中的意义.方法:应用FQ-PCR检测142例HBsAg阳性孕妇血清及其新生儿脐带血的HBV-DNA,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测孕妇血清及其新生儿脐带血的乙肝血清学标志物,并对其结果进行分析.结果:新生儿脐带血HBV-DNA阳性率(16.2%)高于HBsAg的阳性率(9.85%),P<0.01;血清HBeAg阳性孕妇,其新生儿脐带血HBV-DNA阳性率为41.0%(16/39),高于HBeAg阴性孕妇组的阳性率6.80%(7/103),P<0.01;新生儿脐带血的HBV-DNA阳性率随孕妇HBV-DNA含量增加而增加(P<0.01).结论:孕妇血清HBV-DNA高含量是乙型肝炎宫内感染的高危因素.应用FQ-PCR检测新生儿脐带血HBV-DNA是监测乙型肝炎发生宫内感染的较敏感指标.
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荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义
乙型肝炎是一种由乙肝病毒(HBV)感染引起的传染病.我国属HBV感染高流行区,我国是乙肝携带者高于人群的10%.急性乙肝中有20%会转为慢性,进而可能发展为肝硬化和肝癌,因此准确迅速诊断对乙肝的治疗和预后显得极为重要.荧光定量PCR技术把PCR、杂交及光谱技术相融合,达到了对原始模板量定量的目的.HBV-DNA是乙肝病毒的遗传物质,HBV-DNA(PCR)是从血清中检测HBV存在的灵敏而直接的方法.进一步证实HBV-DNA检测在乙型肝炎早期诊断、传染性识别、病毒复制水平判断以及抗病毒药物的选择、治疗效果以及监测的临床价值.以285份血清标本分别用酶免法检测乙肝两对半和荧光定量PCR法检测HBV-DNA,进行对比分析.
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荧光定量PCR检测性病临床结果分析
目的:探究荧光定量PCR技术性病检测中的应用价值,以便指导临床实践中性病检测方法的选择.方法:采用荧光定量PCR检测技术对收治的泌尿生殖系统感染及不孕症患者980例进行性支原体、衣原体及淋病奈瑟球菌的检测,统计其阳性率.结果:980例患者中检测阳性603例,阳性率61.53%.结论:荧光定量PCR技术具有较高的检测阳性率,有助于患者接受及时有效的治疗.
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流感样病例暴发流行的病原学研究与方法比较
目的 对 2007 年 5 月下旬至 6 月上旬深圳市龙岗区某鞋厂流感暴发流行情况进行病原学研究.方法 采集发热患者的鼻咽拭子 27 份,急性期患者血清标本 17 份和恢复期患者血清标本 12 份.27 份鼻咽拭子标本,采用荧光定量 RT-PCR 方法 、胶体金法、MDCK 细胞培养、鸡胚分离培养方法 进行病原学检测;血清标本采用血清学和血凝抑制试验检测.结果 27 份鼻咽拭子标本中荧光定量 RT-PCR 检测阳性 17 份,阳性率为 62.96%(17/27);胶体金法检测阳性 12 份,阳性率 44.44%(12/27);MDCK 细胞分离培养,其中 2 份鼻咽拭子标本中分离出 2 株 H3N2 亚型流感病毒,阳性率 7.41%(2/27);鸡胚分离培养未分离出流感病毒.6 例病人的双份血清学检测结果 显示:恢复期抗体比较急性期抗体有 4 倍或以上增长. 结论 该起流感样病例暴发流行由 H3N2 亚型流感病毒引起.荧光定量 PCR 法的特异性高、灵敏度好,可用于流感病毒的快速检测.
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强力打造民族品牌——晶芯(R)荧光定量PCR系列通用试剂盒
荧光定量基因扩增PCR检测技术近几年来得到长足发展,已广泛应用于医院、大学、研究机构、检验检疫等从事基因诊断和研究的部门.该项技术可应用于传染病(如肝炎、性病、非典、禽流感、爱滋病等),遗传病,癌症等以检测核酸DNA/RNA为特征的疾病诊断,以及转基因生物改良、动植物检疫、动物性别判断和法医等方面.
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乙型肝炎病毒恒温扩增试纸条法检测在临床中的应用
PCR技术近年来广泛应用于临床诊断和治疗中,尤其是荧光定量PCR被现有三级医院所广泛使用,但在二级及二级以下医院却难以广泛开展,主要原因为:现有定量PCR仪比较昂贵,少则也要50多万元人民币,定性PCR虽不要昂贵的仪器,但存在污染,况且不能定量.恒温扩增试纸条法刚好解决了以上的问题,现报告如下.
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小青龙汤对肺源性心脏病大鼠血浆AngⅡ、ALD、Na+-K+-ATP酶含量和血浆中AT1和AT2mRNA的表达影响*
目的:观察小青龙汤对肺源性心脏病大鼠血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、钠钾泵(Na+-K+-ATP酶)的含量和血浆中AT1和AT2mRNA表达的影响,以进一步探讨宣肺利水法的可能作用机理。方法:Wistar大鼠60只,每组20只,随机分为正常组、模型组和小青龙汤组;利用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定AngⅡ、ALD及Na+-K+-ATP酶的含量,并用荧光定量PCR检测AT1和AT2 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组的AngⅡ、ALD及Na+-K+-ATP酶含量明显升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,小青龙汤组的AngⅡ、ALD及Na+-K+-ATP酶含量明显降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组的AT1 mRNA表达有所上升,AT2 mRNA表达有所降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,小青龙汤组的AT1 mRNA表达有所下降,AT2 mRNA表达有所升高(P<0.01)。结论:小青龙汤可有效调节血浆中AT1和AT2 mRNA的表达,影响ALD的含量,从而发挥宣肺利水的作用。
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开展乙肝病毒核酸相关抗原(HBV-NRA)前相关临床分析
我国属于乙型肝炎病毒(HBV)感染高流行区,一般人群的HBsAg阳性率高达9.09%[1],隐匿型乙型肝炎和乙肝肝炎病毒变异的存在,要求检测乙肝病毒方法和手段也越来越高.乙型肝炎病毒载量(HBV-DNA)与乙肝病毒前S1蛋白(Pr-S1)以及乙肝病毒核心抗原(HBcAg)均是反映乙肝病毒复制的敏感指标[2].检测HBV-DNA由于对仪器、设备、实验室条件及人员素质有较高要求,一般中小型医院难于开展,而乙肝病毒前S1蛋白(Pre-S1)以及乙肝病毒核心抗原(HBcAg)与HBV-DNA具有相关性,因此又称乙肝病毒核酸相关抗原(HBV Nucleicacid Related Antigen.HBV-NRA),可联合检测,相对容易开展、普及.我科在开展乙肝病毒核酸相关抗原(HBV-NRA)前,与荧光定量PCR法检测HBV-DNA比对,来探讨开展HBV-NRA可行性及临床意义,现介绍如下:
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HBV-DNA荧光定量与血清标志物和GPT检测的相关性探讨
目C区PCR检测HBV-DNA与乙型肝炎病毒血清标志物(两对半)和谷丙转氨酶检测的相关性.方法 用ELISA方法 检测HBV感染者乙肝免疫学检测,用PCR方法 检测HBV-DNA,并对结果 进行分析.结果 大三阳组标本,HBV-DNA阳性率达到97.7%,与文献报道有些出入[1];小三阳组标本,HBV-DNA阳性率为69.4%,与文献报道基本一致[2];HBsAg(+)、HBeAg(+)组标本,HBV-DNA阳性率为90.6%;HBsAg(+)、HBcAb(+)组标本,HBV-DNA阳性率为71.4%;HBsAg(-)、HBeAg(-),HBV-DNA阳性率为4.5%,与文献报道基本一致[3].HBV-DNA阳性患者中,转氨酶异常者占65.5%,HBV-DNA阴性患者中,谷丙转氨酶异常者占26.1%.结论 HBV-DNA荧光定量PCR检测在临床上对乙型肝炎基因诊断,特别是进行抗病毒治疗和治疗监测方面均优于HBV血清学标志物.
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HBV-DNA室内质控物的制备及质控图的绘制
目的:制备HBV-DNA实时荧光定量PCR检测室内质控物,并利用Excel表格进行质控图的绘制.方法:样本来自本院检测HBV-DNA的患者,检测浓度分别在104IU/ml、107IU/ml和阴性的血清样本各10例,分装数管,-20℃保存,连续检测20次,计算均值,标准差和变异系数,绘制质控图.结果:HBV-DNA室内质控A组的均值对数值为4.424,标准差为0.241,变异系数为4.3%;B组的均值对数值为7.632,标准差0.235,变异系数4.4%.稳定性好,有临床应用价值,质控图利用Excel表格标示出警告线和失控线,有利于动态监控.结论:用实时荧光定量PCR方法进行HBV-DNA检测的质控物制备,稳定性良好,质控图操作方便,一目了然,适合临床实验室应用和推广.
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性病门诊中单纯疱疹病毒的荧光定量PCR检测与分析
单纯疱疹病毒(herpes simplex virus, HSV)系双链DNA病毒, 人类是其唯一的自然宿主.HSV主要引起生殖器疱疹(genital herpes, GH), 即感染泌尿生殖器及肛门部位的皮肤黏膜, 导致生产一种慢性、复发性的性传播疾病[1].GH的发生和复发可给患者带来很大的身心痛苦, 影响其生活质量.绝大多数GH由HSV-2引起, 目前尚无彻底治愈的方法[2],因此, GH已成为一个为人关注的危害人类健康的公共卫生问题.为了解本地区GH中HSV-2的感染现状, 我们对性传播疾病(STD)门诊中疑似GH的患者进行了HSV的定量检测, 现将结果报道如下.