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抗河豚毒素单克隆抗体联酶前纯化条件优化的研究
目的 了解不同辛酸浓度下盐析法、不同离心力对抗河豚毒素(TTX)单克隆抗体的纯化效果以及纯化后酶标抗体性能的影响,优化出纯化抗TTX单克隆抗体的方法,为免疫学方法检测TTX提供依据.方法 在传统辛酸-硫酸铵蛋白纯化方法的基础上进行改进,考察不同的辛酸浓度、不同的离心力对抗TTX单克隆抗体纯化效果的影响,并将纯化后抗体与辣根过氧化物酶(HRP)连接,用间接竞争酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测酶标抗体的生物学活性及各项性能指标并比对.结果 不同方法纯化获得的抗体及其酶结合物的各项指标参数、活性不同,当腹水稀释液与辛酸体积比为1 000∶11、纯化过程中离心力10 000 r/min时纯化获得的抗体虽然产量有所下降但纯度较高,酶标抗体的生物活性、各项指标均优.结论 经过对抗TTX单克隆抗体纯度、抗体中蛋白含量、酶标抗体各项性能指标的对比,优化出用于抗TTX抗体纯化用腹水稀释液与辛酸比值1 000∶11 (V/V)、离心力10 000 r/min的试验条件.
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免疫球蛋白G抗体介导的食物不耐受
食物不耐受与传统意义的食物过敏在概念和内涵上存在着差异.据估计人群中有高达45%的人可能对某些食物存在不同程度的不耐受;婴儿与儿童的比例还可能更高.然而,多数人因为不知道自己对哪些食物不耐受而感到困惑.研究证明使用ELISA方法可以检测食物特异性的免疫球蛋白G(IgG)抗体水平,通过针对每个个体食物敏感性的检测,可以为患者提供精准可靠的饮食剔除依据和治疗依据.
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HBV-DNA荧光定量与血清标志物和GPT检测的相关性探讨
目C区PCR检测HBV-DNA与乙型肝炎病毒血清标志物(两对半)和谷丙转氨酶检测的相关性.方法 用ELISA方法 检测HBV感染者乙肝免疫学检测,用PCR方法 检测HBV-DNA,并对结果 进行分析.结果 大三阳组标本,HBV-DNA阳性率达到97.7%,与文献报道有些出入[1];小三阳组标本,HBV-DNA阳性率为69.4%,与文献报道基本一致[2];HBsAg(+)、HBeAg(+)组标本,HBV-DNA阳性率为90.6%;HBsAg(+)、HBcAb(+)组标本,HBV-DNA阳性率为71.4%;HBsAg(-)、HBeAg(-),HBV-DNA阳性率为4.5%,与文献报道基本一致[3].HBV-DNA阳性患者中,转氨酶异常者占65.5%,HBV-DNA阴性患者中,谷丙转氨酶异常者占26.1%.结论 HBV-DNA荧光定量PCR检测在临床上对乙型肝炎基因诊断,特别是进行抗病毒治疗和治疗监测方面均优于HBV血清学标志物.
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检测禽流感病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法的建立
禽流行性感冒(avian influenza,AI)简称禽流感,是由正粘病毒科流感病毒属A 型流感病毒引起的禽类传染病.高致病性禽流感(highly pathogenic avian influenza,HPAI)被世界动物卫生组织(world organization for animalhealth,OIE)列为A 类传染病.我国也把禽流感列为一类动物疫病.禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)可感染几乎所有野生禽及家禽,AI 的暴发和流行,给养禽业造成了巨大的经济损失[1],且和其他动物流感有紧密联系,并威胁着人类的健康[1-2].1997 年在香港[2]、2003 年在荷兰[3]、2004 年以来每年在东南亚都有人感染AI 而死亡的报道,因此防控禽流感已成为全世界的一项重要任务.
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粪钙卫蛋白在溃疡性结肠炎诊断中的价值
目的:研究粪便钙卫蛋白检测作为一种无创性方法用于诊断溃疡性结肠炎(UC)活动性的价值.方法:UC患者82例,60例经结肠镜检查正常的患者作为对照,留取结肠镜检查1wk内的粪便样本10g,采用ELISA方法进行粪便钙卫蛋白检测.对23例活动期3级患者实施随访,监测粪便钙卫蛋白水平,用于指导临床治疗用药并观察疗效.结果:UC缓解期组粪便钙卫蛋白水平和正常对照组之间差异无统计学意义,活动期粪便钙卫蛋白水平与缓解期和正常对照组比均有统计学意义(603.2μg/g vs 8.2μg/g,6.6μg/g,P<0.01),活动期1级(103.5μg/g)、2级(582.9μg/g)和3级(1340.6μg/g)两两比较差异均有统计学意义(P<0.01).粪便钙卫蛋白水平与UC内镜分级显著相关(r=0.89,P<0.01).UC活动期3级患者23例经治疗后至缓解期,粪便钙卫蛋白水平显著下降,其治疗前后相比差异有统计学意义(1383.5μg/g vs 8.0μg/g,P<0.01).结论:粪便钙卫蛋白能较准确地诊断UC活动期和缓解期,用于指导临床治疗较好.
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前列腺液中性粒细胞弹性蛋白酶测定在慢性前列腺炎诊断中的意义
文献报道过氧化物酶阳性的白细胞和中性粒细胞可作为下尿路感染性疾病的炎症标记物[1].2005年9月至2005年12月我们采用ELISA方法检测35例慢性前列腺炎(CP)患者前列腺液(EPS)中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)浓度,探讨NE在CP诊断中的意义,现报告如下.
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血清IgG抗体含量与口腔厌氧菌致牙髓感染的关系
目的:利用抗原与抗体特异反应的特点,通过检测血清抗体IgG水平分析口腔厌氧菌与牙髓感染的关系,以降低感染率。方法将2013年1月-2014年1月患有不同牙髓疾病的患者分为B、C、D组,每组各10例,另选10名健康受试者为A组;应用ELISA方法测定健康受试组与感染组患者的血清中10株国际口腔厌氧标准菌株的IgG抗体含量,特异性分析牙髓感染与口腔厌氧菌的关系,数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果健康受试组的中间普氏菌血清抗体平均值显著低于B、C、D组( P<0.05);且各组OD值与 A组健康受试者相比>2.1,全部为阳性;健康受试组的牙龈卟啉单胞菌血清抗体平均值与牙髓感染组、牙髓‐牙周联合病症组患者差异有统计学意义(P<0.05),但与牙周疾病组患者相比较,差异无统计学意义;各组厌氧菌血清抗体OD值之间差异均无统计学意义。结论通过ELISA方法分析与牙髓感染相关的厌氧菌,此种方法无需微生物培养,且其检出率及精确度远高于传统的微生物培养法,可作为临床上检测牙髓感染致病菌的常规方法。
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稽留流产患者绒毛组织中TLR4、NF-κB和HBD2的表达及其相关性
稽留流产是常见的病理性妊娠之一,病因复杂,发病机制尚未完全阐明.生殖免疫学认为,稽留流产是母胎间免疫平衡失调,母体对胎儿产生免疫排斥的结果.Toll样受体4( Toll-like receptor 4,TLR4)是天然免疫系统中一类重要的模式识别受体,研究发现,滋养细胞能够表达TLR4;TLR4通过一系列跨膜信号传导激活核因子κB(NF-κB),引起大量炎症因子的合成和释放,发挥天然免疫和获得性免疫的作用[1-3].研究发现,人β防御素2(human β defensin,HBD2)具有直接杀伤细菌和抗病毒等活性,对维持生殖道微生物环境的稳态及妊娠的成功起关键作用[1].为探明TLR4、NF-κB、HBD2在稽留流产与健康早期妊娠妇女绒毛组织中的表达情况,本研究采用逆转录PCR( RT-PCR)和ELISA方法对其mRNA和蛋白表达水平进行检测,以探讨TLR4、NF-κB和HBD2在稽留流产发病过程中的作用.
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ELISA检测抗HCV影响因素分析
ELISA方法的检测原理是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记.结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性.在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应.用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开.
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小儿肺炎支原体感染所致的传染性单核细胞增多综合征13例临床分析
目的 了解小儿肺炎支原体感染引起传染性单核细胞增多综合征(传单综合征)的临床特征,及时做出诊断和对症治疗,防止误诊.方法 对可疑传单综合征的13例患儿采用ELISA方法检测患儿血清肺炎支原体抗体(MP-IgM)、EB病毒(EBV)、巨细胞包涵体病毒(CMV)、柯萨奇病毒(CVB)、腺病毒(ADV)的特异性抗体(IgM).结果 4例MP-IgM≥1∶80,9例MP-IgM≥1∶160,为阳性,应用阿奇霉素治疗21天痊愈.结论 MP感染可引起多脏器、多系统损害,可致传单综合征,临床症状复杂,若及时诊断,应用阿奇霉素治疗有效.
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检测侵染生姜的烟草花叶病毒ELISA的建立
目的:建立检测侵染生姜的烟草花叶病毒的ELISA方法.方法:用RT-PCR方法检测侵染生姜的烟草花叶病毒,挑选仅含烟草花叶病毒的生姜叶片,采用离心方法提取叶片中的烟草花叶病毒,通过12% SDS-PAGE 和5%~20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳分离出烟草花叶病毒的外壳蛋白CP,将含CP的聚丙烯酰胺凝胶磨细后免疫小鼠,获得抗血清.用Western blot检测抗血清特异性,ELISA检测抗血清的结合性,通过亲和层析纯化抗血清中的IgG.以待测生姜叶片液为抗原包被,纯化的抗血清IgG为一抗,羊抗小鼠 IgG为二抗,建立检测侵染生姜的烟草花叶病毒的间接ELISA.结果:抗血清中的IgG仅仅与烟草花叶病毒的CP结合,并能够结合天然烟草花叶病毒颗粒.建立的ELISA对花叶病生姜叶片的检测结果与RT-PCR检测结果一致.结论:成功地建立了检测侵染生姜的烟草花叶病毒的ELISA方法.
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ELISA测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C
目的 建立ELISA方法测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C.方法 以双抗体夹心ELISA方法测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C. 结果 该方法的线性范围可达100 mg/L.参考值范围为:男,1.81±0.73 mg/L.女,1.72±0.69 mg/L.回收率为:99.1±3.1%.批内和批间分别为:5.8±0.5%、7.3±0.7%.结论 该方法操作简便,快速,准确,适于临床常规应用.
关键词: ELISA方法 半胱氨酸蛋白酶抑制剂C 肾功能 -
ELISA法测定血清瘦素
目的 建立ELISA测定血清瘦素的方法.方法 制备瘦素单克隆抗体,以双抗体夹心法测定血清瘦素.结果 方法的平均回收率为89.7-92.1%,取浓度为1.21 μg/L、6.32 μg/L瘦素标本其批内变异分别为4.4%和2.6%;批间变异分别为5.7%和4.9%.方法 的线性为:1.25-20 μg/L.与放射免疫法比较有良好的相关性(r2=0.9988).参考值范围为:5.26-5.92 μg/L.结论 该法简便、快速、特异、敏感,适于临床常规应用.
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ELISA法测定血清S100B蛋白
目的 建立ELISA测定血清S100B蛋白的方法.方法 制备S100B单克隆和多克隆抗体,以双抗体夹心法测定血清S100B蛋白.结果 方法的平均回收率为93.7%-104%,批内及批间平均变异分别为3.7%和5.9%,方法的线性为0-12.5μg/l,参考值范围为0.14-0.38μg/l.结论 该法简便、快速、特异、敏感,适于临床常规应用.
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分泌片ELISA方法的建立和应用
目的 建立检测SC的ELISA方法.方法 采用交叉方阵滴定法,比较3种封闭液、不同稀释度的包被抗体和酶标抗体对检测结果的影响,确定ELISA方法的佳实验条件.结果 包被抗体浓度1:400,酶标抗体浓度为1:800,适封闭条件为0.5%新生胎牛血清.检测240例肝脏病变患者血清和粪便中SC明显升高,与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.01).结论 建立的双抗体夹心EIJSA方法检测SC简便实用,可用于临床和科研研究.
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HER-2/neu在乳腺癌血清中的表达及意义
目的 分析乳腺癌HER-2/neu表达水平并探讨其临床意义.方法 用EHSA方法分析127例乳腺癌患者,30例良性疾病及40名健康体检者血清可溶性HER-2/neu水平并用免疫组化(IHC)方法分析乳腺癌组织切片中癌细胞的HER-2/neu染色.结果 乳腺癌患者血清中可溶性HER-2/neu水平与正常对照和良性乳腺疾病相比,有显著性差异(P<0.05).随TNM分期进展,乳腺癌患者可溶性HER-2/neH阳性率逐步升高.结论 乳腺癌患者血清中可溶性HER-2/neu水平呈过度表达,而且与免疫组化结果呈正相关.
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酶联免疫吸附方法检测梅毒抗体假阳性结果分析
目的 探究酶联免疫吸附(ELISA)方法检测梅毒抗体假阳性结果分析.方法 随机选取2015年6月—2016年6月治疗的300例梅毒患者,平均分为三组,分别为ELISA组、WB组以及TPPA组,每组100例患者.ELISA组采用ELISA方法对患者血清进行相应的检测,WB组采用WB试验进行检测,TPPA组采用TPPA的方法进行检测,后制定出检测梅毒抗体假阳性的方法.结果 ELISA组的假阳性率要比WB组和TPPA组都要低,差异有统计学意义(P<0.05),WB组的假阳性率要比TPPA组的假阳性率要低,差异有统计学意义(P<0.05),采用ELISA方法检验的老年组和中青年组这两组之间,老年组的梅毒特异性抗体假阳性率要比中青年组要低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 对于临床检验中的梅毒检验,在临床中采用ELISA方法进行临床中梅毒抗体假阳性的检测,灵敏度更好,发现梅毒抗体假阳性的效率更高,值得在临床检验中进一步的推广和应用.
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乙型肝炎患者血浆中触珠蛋白和补体B因子的检测及临床意义
肝脏是机体解毒、生物合成、生物转化的重要器官.乙型肝炎患者由于肝细胞变性、坏死,必然造成严重的蛋白合成障碍、代谢紊乱以及有毒物质的积聚,血浆中的蛋白质和多肽也必然发生明显改变[1].笔者通过差异蛋白质组学方法研究发现,慢性重型乙型肝炎患者血浆中触珠蛋白(HP)和补体B因子(CFB)水平相对健康正常人有显著差异.为进一步探讨乙型肝炎患者触珠蛋白和补体B因子的变化及临床意义,我们采用ELISA方法检测85例乙型肝炎患者血浆中这两种蛋白含量,现报道如下.
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大疱性类天疱疮患者血清与疱液中巨噬细胞游走抑制因子的检测
目前认为大疱性类天疱疮(BP)的发病不仅与自身抗体的产生有关,而且与细胞因子网络的紊乱密切相关.巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)作为一种前炎症因子,在细胞因子网络平衡中发挥一定作用.本研究采用ELISA方法检测BP患者活动期血清、疱液中MIF的含量和缓解期血清中MIF的含量,以探讨MIF在BP发病机制中的作用及其临床意义.
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银屑病患者皮损和血清中血小板内皮细胞黏附分子-1的表达分析
研究证实多种细胞黏附分子在银屑病的发病中起作用.白细胞与血管内皮细胞通过黏附分子相瓦作用,经过滚动,黏附和跨膜迁移向病灶部位趋化游走的过程中,不同阶段所涉及的黏附分子不尽相同[1],其中中性粒细胞穿越血管内皮细胞到达血管外炎症部位这一跨膜迁移过程是由PECAM-1特异性调控的.PECAM-1即血小板内皮细胞黏附分子-1,又名CD31,是相对分子质量为130 000的糖蛋白,属于免疫球蛋白超家族成员,常被用来作为血管内皮细胞的特异性标记物.我们采用免疫组化和ELISA方法研究PECAM-1在银屑病患者皮损及血清巾的表达情况,探讨PECAM-1与银屑病发病关系.