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高氧对肠上皮细胞表达分泌片的影响
目的:研究高氧对肠上皮细胞分泌片(SC)表达的影响.方法:采用细胞计数和Giemsa染色方法检测不同氧浓度对细胞生长和细胞分裂能力的影响,采用免疫组织化学方法检测不同氧浓度对Caco-2表达SC的影响.结果:细胞计数显示400 mL/L氧浓度利于细胞生长:600、900 mL/L氧浓度导致细胞迅速死亡.不同氧浓度干预细胞3 d细胞分裂指数有明显不同,分裂细胞百分数分别为正常氧浓度2.5%;400 mL/L氧浓度为3.3%;600 mL/L氧浓度为1.3%:900 mL/L氧浓度大部分细胞死亡.与正常氧浓度相比,氧浓度为400、600mL/L时Sc表达增强,900 mL/L氧浓度时SC表达明显减弱,甚为阴性,但600 mL/L氧浓度SC表达较400 mL/L氧浓度减弱.结论:适度的高氧促进细胞生长和促进肠上皮细胞表达SC,严重高氧则抑制肠上皮细胞SC表达及肠上皮细胞生长,肠上皮细胞SC表达增多有助于保护肠黏膜及平衡肠黏膜作用,阻滞细菌入侵肠道.
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重症肝炎患者血sIgA和肝脏分泌片的变化
目的:研究重症肝炎患者血清IgA、sIgA和肝脏IgA、分泌片(SC)的变化,了解重症肝炎患者血清sIgA升高的原因.方法:血清IgA采用免疫速率比浊法,血清sIgA采用放射免疫分析法,采用免疫组化方法检测肝脏IgA、SC的变化.结果:与对照组相比,血清IgA、sIgA明显升高,肝脏IgA沉积,但肝脏SC无明显变化.结论:重症肝炎时血中sIgA可能是肝脏SC脱落进入胆汁与其内的pIgA结合返流入血形成.
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维生素A及其配体和TNF-α调节肠上皮细胞分泌片的表达
目的 探讨维生素(VA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人结肠腺癌细胞细胞系(Caco-2)细胞表达分泌层(SC)的影响.方法 采用免疫组化、ELISA、Western blot、RT-PCR方法检测全反式维甲酸(ATRA)和TNF-α对Caco-2细胞分泌SC的影响.结果 ATRA和TNF-α促进Caco-2细胞分泌SC,但在ATRA缺无时TNF-α作用较弱,当ATRA和TNF-α共作用时SC的产生明显增加,与无ATRA比较,用ATRA和TNF-α刺激后SC阳性细胞、培养上清液中游离SC、Caco-2细胞SC蛋白和SC基因的表达明显增加(P<0.01).结论 ATRA和TNF-α上调Caco-2细胞分泌SC,充分说明VA是维持黏膜完整性的重要因子.
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高氧致新生大鼠肠屏障功能的变化
目的 研究高氧对新生大鼠肠屏障功能的影响.方法 采用Western blot检测高氧对新生大鼠肠道表达分泌片(SC)、Occludin和ZO-1蛋白影响.结果 高氧组新生大鼠肠道SC蛋白表达量与空气对照组相比明显增加(P＜0.01),但高氧组新生大鼠肠道紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达量与空气对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 高氧刺激肠道上皮分泌SC增加,使得高氧对紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达没有明显的影响,以此增强肠道屏障功能.
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肿瘤坏死因子对肠上皮细胞分泌片的影响
目的:研究TNF-α对Caco-2细胞表达SC的影响.方法:采用免疫组化、ELISA、Western blot、Real-time PCR方法检测肠上皮细胞表达SC的变化.结果:与无TNF-α刺激比较,用不同浓度TNF-α刺激后SC阳性细胞、培养上清液中游离SC、Caco-2细胞SC蛋白和SC基因的表达明显增加(P＜0.01).结论:TNF-α上调Caco-2细胞内SC的表达.
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分泌片ELISA方法的建立和应用
目的 建立检测SC的ELISA方法.方法 采用交叉方阵滴定法,比较3种封闭液、不同稀释度的包被抗体和酶标抗体对检测结果的影响,确定ELISA方法的佳实验条件.结果 包被抗体浓度1:400,酶标抗体浓度为1:800,适封闭条件为0.5%新生胎牛血清.检测240例肝脏病变患者血清和粪便中SC明显升高,与正常对照组比较均有显著性差异(P＜0.01).结论 建立的双抗体夹心EIJSA方法检测SC简便实用,可用于临床和科研研究.
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生长抑素对猕猴小肠黏膜浆细胞分泌IgA的影响
目的 探讨肠缺血/再灌注(intestinal ischemia reperfusion,IIR)时生长抑素(somatostatin,SST)对猕猴小肠浆细胞产生IgA的影响.方法 随机将15只猕猴平均分成正常组、IIR及IIR+SST 3组.IIR组在失血20%基础上,夹闭肠系膜上动脉1 h后恢复血液灌流.测定IIR 24 h后外周血及小肠黏膜内生长抑素浓度以及小肠组织内IgA、分泌片、浆细胞和肠腔分泌型IgA的水平.IIR+SST组在夹闭肠系膜上动脉前,持续静滴SST 5 μg·kg-1·h-1,IIR+SST组及正常组(假手术组)其余操作同IIR组.结果 ① IIR后,外周血及小肠黏膜SST明显减少,而在IIR+SST组明显回升(P<0.05).②肠黏膜sIgA的水平在IIR组和IIR+SST组之间没有差异,都明显低于正常(P<0.05).③ IIR组黏膜固有层浆细胞较正常明显减少,伴黏膜固有层IgA的锐减(P<0.05),补充SST后浆细胞(P<0.05)和IgA都明显增加(P<0.01).④黏膜下层浆细胞在IIR组和IIR+SST组都较正常组明显增多(P<0.05),而IgA在IIR后减少(P<0.05),补充SST后明显回升(P<0.01).结论 IIR时,机体内源性SST水平降低,肠道血清型IgA和sIgA均严重匮乏,获得性体液免疫严重受抑;SST可促进IIR时猕猴肠黏膜浆细胞分泌IgA.
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在急性肝坏死中TNF-α的作用和肠道IgA、SC的变化
目的 IgA和SC是SIgA的重要组成,肠黏膜的SIgA是肠免疫屏障重要组成部分.为了解急性肝坏死的发病原因,研究TNF-α在急性肝坏死中的作用和肠道SIgA变化.方法 用TNF-α/GalN代替LPS/GaLN诱导急性肝坏死动物模型,用Anti-TNF-α和anti-TNF-R1封闭由LPS/GaLN诱导的急性肝坏死.采用免疫组化方法和Real-time PCR方法检测急性肝坏死动物模型肠道IgA、SC的变化.结果 TNF-α/GalN诱导了急性肝坏死,Anti-TNF-α和anti-TNF-R1封闭了由LPS/GaLN诱导急性肝坏死.急性肝坏死肠组织IgA、SC明显减弱.结论 TNF-α在急性肝坏死过程中发挥重要作用.急性肝坏死肠道SC、IgA减少导致肠道SIgA的减少,肠道SIgA的减少可能是急性肝坏死并发自发性腹膜炎的原由之一.
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高氧对新生大鼠肠道分泌片表达的影响
目的 研究高氧对新生大鼠肠道分泌片表达的影响.方法 采用免疫组织化学和Weastern blotting 检测高氧对新生大鼠肠黏膜分泌分泌片的影响.结果 SC染色可见正常肠组织肠上皮细胞浆内和膜上呈黄色阳性,高氧组染色明显加强.Weastern blotting结果显示高氧组SC OD值/β-actin OD值第14天是(0.919±0.060)、第21天是(0.934±0.044).空气对照组SC OD值/β-actin OD值第14天是(0.702±0.032)、第21天是(0.704±0.022).高氧组新生大鼠肠组织表达分泌片较空气对照组明显升高(P＜0.01).结论 在持续高氧作用下新生大鼠肠黏膜分泌大量分泌片,这可能有利于维护肠道免疫屏障的完整.
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重症肝炎患者肠道分泌片和紧密连接蛋白的变化
目的 研究重症肝炎患者肠道分泌片(SC)和紧密连接蛋白(ZO-1、Occludin)的变化,了解重症肝炎患者伴发腹部症状的原因.方法 采用免疫组织化学方法分别检测肠道SC和ZO-1、Occludin.结果 与对照组比较,重症肝炎患者肠道SC和ZO-1、Occludin染色明显减弱.对照组光密度sC为(9.47±3.84),ZO-1为(1.08±0.35),Occludin为(12.08±8.06);重症肝炎患者光密度SC为(0.59±0.10),ZO-1为(0.41±0.30),Occludin为(2.92±1.37),与对照组比较,重症肝炎患者SC、ZO-1和Occludin光密度显著减少(P＜0.01).结论 重症肝炎患者肠道SC和ZO-1、Occludin表达下降,导致肠道屏障功能发生异常,这是引起腹部症状的原由之一.
