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清肠化湿方对小鼠溃疡性结肠炎模型结肠黏膜上皮细胞Caspase-3、ZO-1的影响
目的：以核因子-κB（ nuclear facter-κB，NF-κB）p65反义寡核苷酸（ ASODN）及西药柳氮磺胺吡啶（ SASP）为对照，观察清肠化湿方对三硝基苯磺酸（ TNBS）法诱导小鼠溃疡性结肠炎（UC）模型结肠黏膜天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、闭锁小带蛋白-1（ZO-1）表达的影响。方法采用TNBS诱导小鼠UC模型，并随机分为清肠化湿方组、SASP组、清肠化湿方=SASP组、ASODN组、模型对照组、空白对照组，治疗7 d后处死小鼠，取小鼠结肠标本，采用HE染色法观察各组小鼠结肠病理形态，并采用Western blot法检测各组小鼠结肠上皮细胞Caspase-3及ZO-1蛋白表达水平。结果模型对照组小鼠 Caspase -3蛋白表达明显高于空白对照组（ P ﹤0.05）；清肠化湿方组Caspase-3蛋白表达低于模型对照组（ P﹤0.05），与空白对照组比较差异无统计学意义（P﹥0.05）。模型对照组小鼠ZO-1蛋白表达明显低于空白对照组（P﹤0.05）；清肠化湿方组ZO-1蛋白表达高于模型对照组（P﹤0.05），与空白对照组比较差异无统计学意义（P﹥0.05）。结论清肠化湿方对UC模型小鼠具有治疗作用，其抑制肠上皮细胞Caspase-3蛋白表达、增强ZO-1的表达，抑制肠黏膜组织细胞凋亡，恢复正常的肠黏膜屏障形态和功能可能是其作用机制的一部分。
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化痰通络方对急性脑梗死大鼠溶栓后脑微血管内皮细胞构成蛋白基因表达的影响
目的:观察化痰通络法对急性脑梗死大鼠重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓后脑微血管内皮细胞构成蛋白基因表达的影响,为化痰通络法防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注损伤提供实验依据.方法:240只健康SD大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、rt-PA组、化痰通络方低、中、高剂量联合rt-PA组(联合组),每组40只,采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),rt-PA组与化痰通络方联合rt-PA组于血栓注入后3h一一次性予以rt-PA溶栓治疗,后者联合给予低、中、高剂量(生药3.6,7.2,14.4 g·kg-1)化痰通络方灌胃治疗,每日2次,分别于造模后6,24,72 h,7d4个时点,应用RT-PCR法观察不同时相大鼠皮质及海马紧密连接蛋白Occludin,claudin-1,Zonula occludins protins-1(ZO-1)基因的表达.结果:在不同时点,各实验组在不同脑组织中Occludin,claudin-1,Z0-1基因表达量均在6h高,24 h低,72 h,7d数值逐渐升高,且联合组升高趋势更明显.与组内6h时比较,rt-PA组、联合低、中、高剂量组Occludin,claudin-1,ZO-1基因表达量多于24,72h(p ＜o.05).而同一时点与模型组相比,联合中、高剂量组各时点Occludin,claudin-1基因表达量均明显升高(P＜0.05).而ZO-1基因表达量虽具有相似变化趋势,但仅在24,72 h,7d差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:化痰通络方联合rt-PA溶栓,可通过调控微血管内皮细胞构成蛋白Occludin,claudin-1,ZO-1基因的表达,进而保护血脑屏障完整性,防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注损伤的发生与发展.
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银莱汤对食积肺炎小鼠肠黏膜机械屏障的作用及机制
目的:制作食积肺炎动物模型,探讨银莱汤对动物模型肠黏膜机械屏障的作用机制,证明肺与胃肠同治理论的有效性,为指导临床疾病的防治提供实验研究依据.方法:实验小鼠随机分为正常组、感染组、食积组、食积感染组、食积治疗组、食积感染治疗组.制作食积肺炎动物模型,给予银莱汤治疗,观察实验各组肠黏膜形态学变化、肠组织ZO-1及血清内毒素水平.结果:食积组、食积感染组小鼠肠黏膜上皮细胞及杯状细胞增大增多,排列紊乱;食积治疗组、食积感染治疗组肠黏膜上皮细胞及杯状细胞排列整齐.食积组、食积感染组小鼠肠组织ZO-1水平较正常组显著下降(P＜0.01);食积治疗组显著高于食积组(P＜0.01);食积感染治疗组显著高于食积感染组(P＜ 0.01).各组小鼠血清内毒素水平与正常组比较均无显著性差异.结论:肺与胃肠积热会影响肠黏膜分泌功能,造成肠黏膜机械屏障损伤,其损伤机制与肠黏膜ZO-1的破环有关.银莱汤能够调节肠黏膜分泌功能,修复肠黏膜ZO-1,对肠黏膜机械屏障具有保护作用.
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糖肾煎对早期2型糖尿病肾病大鼠足细胞α-actinin-4、ZO-1表达的影响
目的:探讨α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)、紧密连接蛋白(zo-1)在早期糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏表达与DN的关系,中药糖肾煎对保护肾脏的作用机制.方法:采用单肾切除+高脂饲料+小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射,结合行为干预建立早期(气阴两虚型)2型糖尿病肾病病证结合大鼠模型,按随机数字表法分为假手术组(N组)、模型组(M组)、糖肾煎组(T组)、贝那普利组(B组).干预16周,观察各组大鼠一般状况、空腹血糖(FBG)、负荷后血糖(P2hBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛索抵抗指数(HOMA-IR)、24 h尿白蛋白(24 h-UAlb)、尿β2微球蛋白(U-β2MG)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr))、足细胞密度及病理改变,应用免疫组化及荧光定量PCR方法观察α-actinin-4、ZO-1及mRNA表达.结果:与N组比较,M组一般状况较差,FBG、P2hBG、FINS、HOMA-IR、24 h-UAlb、U-β2MG水平指标均有明显上升,a-actinin-4、ZO-1的累积光密度值(IOD)下降,PCR表达下降,足细胞密度较少,足突增宽、融合;与M组比较,T、Z组各指标均有改善;与B组比较,T组HOMA-IR、α-actinin-4、ZO-1的IOD有所改善,余指标比较差异无统计学意义.结论:中药糖肾煎能上调足细胞α-actinin-4、ZO-1的表达从而保护足细胞、延缓DN的进展.
关键词： 2型糖尿病肾病 α-actinin-4 ZO-1 糖肾煎 -
帕金森病模型大鼠十二指肠黏膜紧密连接蛋白表达下调
目的 研究紧密连接蛋白在6-羟多巴(6-OHDA)制备的帕金森病(PD)大鼠模型十二指肠黏膜的表达变化.方法 用6-OHDA损毁双侧中枢黑质多巴胺能神经元建立大鼠模型.用免疫荧光组织化学和蛋白免疫印迹检测紧密连接蛋白claudin-1、occludin和ZO-1肠黏膜的定位和表达.结果 紧密连接蛋白claudin-1、occludin和ZO-1在PD大鼠模型十二指肠黏膜上均有表达,但仅ZO-1(P<0.001)和occludin(P<0.01)表达明显下调,而claudin-1无显著变化.结论 PD大鼠模型十二指肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1、occludin的表达显著下调,可能与帕金森病十二指肠溃疡的发生发展相关.
关键词： PD大鼠模型 十二指肠 claudin-14 occludin ZO-1 -
ID4、ZO-1基因甲基化定量检测在急性白血病诊断中的意义
目的 探讨ID4、ZO-1基因甲基化定量检测作为基因标志在急性白血病(acute leukemia,AL)中的意义.方法 采用硫化测序PCR (bisulfite sequencing PCR,BSP)法及甲基化特异性PCR(methylightion specific PCR,MSP)法检测AL中NB4细胞和健康供者骨髓(normal bone marrow,NBM)细胞的ID4、ZO-1基因的甲基化状况并进行分析.结果 BSP法检测ID4基因在AL NB4细胞中甲基化阳性率为86.0％,显著高于NBM细胞甲基化阳性率(4.8％),差异有统计学意义(P＜0.05);ZO-1基因在AL NB4细胞系中甲基化阳性率为88.4％,显著高于NBM细胞甲基化阳性率(1.9％),差异有统计学意义(P＜0.05).采用MSP法检测9种AL细胞系,ID4、ZO-1基因甲基化水平在淋系来源的细胞系高于髓系来源的细胞系.结论 ID4、ZO-1基因甲基化水平检测可作为新的AL基因标志物.
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非酒精性脂肪肝大鼠小肠黏膜上皮屏障及紧密连接蛋白表达的变化
目的：非酒精性脂肪性肝病（ NAFLD）与肠道屏障功能受损密切相关，本研究探讨非酒精性脂肪肝时肠上皮紧密连接蛋白Zonula Occluden-1（ZO-1）和Occludin的表达变化及其在肠黏膜屏障功能减退中的作用。方法30只雄性SD大鼠随机分为对照组（普通饮食）和高脂模型组，分别于造模的12周、16周检查肝指数（肝湿重/体重）、血清丙氨酸氨基转移酶（ ALT）、血清胆固醇（ TC）、甘油三酯（ TG）、肝组织匀浆丙二醛（ MDA）和超氧化物歧化酶（ SOD）水平，光镜下观察末端回肠黏膜形态，透射电镜下观察小肠上皮细胞紧密连接超微结构，免疫组化方法检测小肠紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达。结果16周模型组大鼠肝脏脂肪变性明显，肝指数[（6.3±0.18）％ vs．（5.8±0.12）％]、血清 ALT [（68.61±12.12） U/L vs．（25.10±9.06）U/L]、血 TG[（1.30±0.14）mmol/L vs．（0.72±0.06）mmol/L]和肝组织匀浆 MDA 水平[（6.02±0.92）μmol/g vs．（2.15±0.66）μmol/g]均显著高于对照组（P＜0.01），肝组织匀浆SOD水平显著低于对照组[（5.12±1.88）U/g vs．（10.52±2.2）U/g，P＜0.01]；模型组大鼠末端回肠黏膜形态和小肠上皮细胞紧密连接超微结构未见明显异常，但肠上皮细胞凋亡增加。与对照组比较，16周模型组大鼠小肠ZO-1及Occludin蛋白的表达皆显著下降（0.65±0.12 vs．1.08±0.08；0.62±0.08 vs．0.95±0.10， P ＜0.01）。结论非酒精性脂肪肝时肠黏膜上皮屏障功能减退可能与小肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达异常有关。
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莫沙比利通过p38/MAPK通路保护氯吡格雷所致胃黏膜上皮细胞损伤
目的:探讨莫沙比利对氯吡格雷所致人胃黏膜上皮细胞(gastric mucosal epithelium cells,GES-1)损伤的保护作用及其机制.方法:建立GES-1单层细胞模型,将细胞分为阴性对照组、氯吡格雷IC50浓度(0.36 mmol/L)损伤组及不同浓度莫沙比利(0.4、0.5、0.6μmol/L)联合氯吡格雷IC50浓度组,噻唑蓝比色法(MTT)和流式细胞仪检测各组细胞增殖、凋亡情况；采用Western blot检测各细胞组p-P38以及紧密连接蛋白Occludin、ZO-1的表达量.结果:莫沙比利对氯吡格雷致GES-1细胞损伤有抑制作用(P＜0.05)；与阴性对照组相比,氯吡格雷损伤组p-P38表达显著增加,而莫沙比利组p-P38表达量较氯吡格雷损伤组减少(P＜0.05)；同时随-p-P38表达量的减少,Occludin、ZO-1表达量逐渐增加.结论:莫沙比利能够抑制氯吡格雷所致GES-1细胞损伤,可能是通过抑制p38MAPK的磷酸化、上调紧密连接蛋白Occludin、ZO-1的表达,从而达到保护胃黏膜的作用.
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血小板活化因子受体拮抗剂对幼年大鼠肠黏膜上皮细胞间紧密连接蛋白的影响
目的:探讨血小板活化因子(platelet activating factor,PAF)受体拮抗剂对肠黏膜上皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1的影响.方法:18日龄Wistar大鼠,随机分为对照组,内毒素组(LPS组)和PAF受体拮抗剂组(预防组和治疗组).LPS组和对照组分别腹腔注射内毒素(5mg/kg)和生理盐水(1 mL/kg).预防组和治疗组分别于每一时相点注射LPS前、后30 min腹腔注射PAF受体拮抗剂BN52021(5 mg/kg).按时间点分别处死动物,取回肠用于电镜观察,免疫组化及RT-PCR检测ZO-1.结果:电镜下对照组肠微绒毛及细胞间紧密连接未见异常.实验组上皮细胞连接增宽;微绒毛变细、稀疏,部分断裂、脱落;细胞器受损.拮抗剂组改变较实验组减轻.紧密连接蛋白ZO-1正常时均匀一致地分布于小肠上皮细胞连接处的尖端,呈蜂巢状,实验组ZO-1分布不均,染色变淡.免疫组化平均光密度值及RT-PCR结果可见LPS组ZO-1表达明显低于对照组,6 h表达低,光密度从对照组0.2247降至LPS组0.1985,ZO-1 mRNA从1.18降至0.16(P＜0.01).预防组及治疗组变化趋势同LPS组,6 h预防组及治疗组光密度分别为0.199 2和0.203 8,ZO-1 mRNA分别为0.47和0.53,与对照组相比均有显著差异(P＜0.01).各时相点ZO-1较LPS组高,预防组较治疗组ZO-1略低,无统计学差异.结论:PAF可降低肠道紧密连接蛋白ZO-1,从而损害肠道的屏障功能,而PAF受体拮抗剂可减轻肠道屏障功能损伤的程度.
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PAF对肠上皮细胞紧密连接的影响及ITF的保护作用
目的:探讨血小板活化因子(PAF)是否会引起肠黏膜屏障的破坏以及这种破坏机制是否与紧密连接相关,并观察肠三叶因子(ITF)的保护作用.方法:培养人结肠腺癌细胞株caco-2,分别设正常对照组:不加刺激物及干预因素;实验组:加入PAF,终浓度分别为50 ng/L、100 ng/L和200 ng/L;ITF预防组:先加入ITF0.3 g/L,30 min后加入PAF 100 ng/L;ITF治疗组:先加入PAF 100 ng/L,30 min后加入ITF0.3 g/L,24 h后进行实验.MTT比色法检测细胞活力;测定跨上皮电阻TER和荧光黄的透过量反映肠上皮细胞单层通透性:RT-PCR法检测紧密连接蛋白ZO-1和Occludin mRNA表达的变化;免疫荧光染色观察紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的形态学.结果:PAF未影响到细胞的增殖和细胞活力.各浓度PAF作用24 h后,细胞单层通透性增加,跨上皮电阻(TER)下降,荧光黄透过增加.ITF治疗组及预防组TER下降值较模型组明显降低(122.2±14.7,100.3±10.9 vs 210.3±26.4,P＜0.05),荧光黄透过量减少(10226.1±556.2,9711.2±364.9 vs 11601.2±693.5,P＜0.05),预防组作用更明显.PAJF作用后,ZO-1和Occludin mRNA表达均有下降,以100 ng/L组改变为明显.ITF预防组较之表达增加(1.28±0.06 vs 1.07±0.05,1.13±0.07 vs 0.81±0.06,P＜0.05),ITF治疗组改变不明显.免疫荧光染色发现ZO-1和Occludin主要分布在细胞内近胞膜处.PAF作用后,ZO-1及Occludin形态学改变,预防性给予ITF后,可明显减轻这种改变.结论:PAF可引起肠黏膜屏障破坏,其机制可能和紧密连接蛋白的破坏相关;ITF可以通过改变紧密连接蛋白的表达而部分恢复肠黏膜正常通透性,起到保护作用.
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结肠上皮黏膜细胞屏障损伤致细菌移位的机制及防治研究进展
结肠上皮黏膜细胞屏障损伤是发生细菌移位的根本原因.结肠黏膜上皮细胞间的紧密连接,是机体防止肠道内细菌发生移位的机械屏障的重要组成部分.结肠上皮黏膜细胞旁间隙是由蛋白复合体封闭,蛋白复合体被认为可以调节细胞之间的通透性,在众多蛋白复合体中,ZO-1、Claudin-1和Occludin具代表性,已经成为实验判断结肠上皮黏膜细胞屏障损伤程度的重要指标.内毒索是细菌释放产物,抗内毒索是保护结肠黏膜屏障、预防和治疗细菌移位的方法之一.抗内毒素药物众多,但至今还没有一种能被临床广泛认同的药物.清胰汤和柴芩承气汤等我国传统中药具有保护肠黏膜屏障,抑制肠道细菌移位的作用.氧化苦参碱具有抗菌、抗炎、免疫调节等多种药理作用,在重症感染时对肠黏膜具有保护作用,但其作用机制目前还不完全清楚,有待深入研究.我国传统中药在重症感染时结肠上皮黏膜细胞屏障损伤导致细菌移位的防治临床应用中前景广阔.
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抗增殖因子通过下调紧密连接蛋白 Zo-1、Occludin的表达促进间质性膀胱炎的发生
目的：研究紧密连接蛋白 ZO-1（zonula occludens proteins）、Occludin 在间质性膀胱炎（IC）与正常对照（NC）之间的表达差异并分析其与抗增殖因子（APF）的关联性，探讨它们在IC发病中的作用，为阐明IC的发病机理提供新的思路。方法通过组织块培养法培养正常及IC膀胱上皮细胞，利用流式细胞检测法测定其纯度；运用离子交换层析等技术纯化 APF，检测 APF 对膀胱上皮细胞的抑制效果并评价 APF 的活性；以纯化的 APF 培养 IC 膀胱上皮细胞，以 PBS 处理组为对照，采用Western-blot方法检测ZO-1及Occludin在处理前后的表达变化并分析APF与Occludin，ZO-1之间的关系。结果组织块培养法成功培养出膀胱上皮细胞，纯化的 APF 对膀胱上皮细胞生长的抑制率为78.5%；IC患者的ZO-1、Occludin的表达水平均低于正常组，且在经纯化的APF培养处理的膀胱上皮细胞中，ZO-1、Occludin的表达明显较PBS对照组低，P<0.01）。结论紧密连接蛋白 ZO-1、Occludin 在IC 中呈低表达，纯化的 APF 可进一步降低 ZO-1、Occludin 的表达水平，提示 APF 在 IC 中的病因作用可能是通过抑制紧密连接蛋白表达而产生，即APF可能通过下调紧密连接蛋白ZO-1、Occludin，破坏膀胱黏膜紧密连接结构，提高膀胱黏膜上皮的通透性，从而促进间质性膀胱炎的发生。
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紧密连接蛋白Zo-1和Occludin在间质性膀胱炎中的表达及其作用的研究
目的 检测紧密连接蛋白Zo-1、Occludin在间质性膀胱炎(IC)及正常对照组中的表达,研究其表达水平与IC症状评分之间的关系,探讨它们在IC发病中可能扮演的角色.方法 采用免疫组化及Western-blot方法检测Zo-1及Occludin在IC组及对照组膀胱组织细胞中的表达,比较两组表达水平的差异;对每个患者分别进行O'Leary-Sant间质性膀胱炎症状评分(ICSI)、问题评分(ICPI)和盆腔症状(PUF)评分,评价Zo-1及Occludin的表达水平与IC症状之间的关系,同时分析ICSI、ICPI、PUF三者之间的相关性.结果 在19例对照组膀胱上皮组织的石蜡切片中,可见其阳性染色强,移行上皮层完整,而15例IC患者的膀胱上皮组织阳性染色弱到中等,细胞层变薄或者缺失;IC患者的Zo-1、Occludin的表达均低于对照组,且其表达水平与患者症状评分呈负相关(P值均＜0.05);IC患者中ICSI与ICPI、ICPI与PUF、PUF与ICSI总分平均值相关系数分别为:0.801、0.799、0.875(P值均＜0.001);结论 紧密连接蛋白Zo-1、Occludin在IC中呈低表达,并且与IC症状的严重程度呈负相关;提示Zo-1、Occludin的表达下调可能在间质性膀胱炎的发病中起到一定的作用.
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1,25-(OH)2 D3对糖尿病大鼠ZO-1表达的影响
目的 观察糖尿病(DM)大鼠肾小球ZO-1蛋白的表达,1,25-(OH)2D3对ZO-1蛋白表达及分布的影响.方法 Wistar大鼠随机分为3组:对照组、糖尿病组(DM组)、1,25-(OH)2D3组.链脲菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病动物模型,1,25-(OH)2D3组在糖尿病建立时即开始渗透性微量泵按3ng/100g·d皮下给予1,25-(OH)2D3,给药10周处死小鼠,检测血糖、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CysC)、尿红细胞、24h尿蛋白定量(24hUPE);光镜观察肾小球细胞数,细胞外基质(ECM)聚积;Western印迹检测ZO-1蛋白的表达;免疫金荧光染色电镜观察肾小球ZO-1分布的改变.结论 DM组大鼠CysC、尿红细胞、24hUPE均高于1,25-(OH)2D,组,差异均有统计学意义(P＜0.05).1,25-(OH)2D3组大鼠较DM组肾小球细胞数减少,细胞外基质聚积减轻(P＜0.05或P＜0.01).Western印迹示1,25-(OH)2D3组和对照组肾小球ZO-1表达无显著差异,均明显高于DM组(P＜0.01).免疫金荧光染色显示DM组肾小球ZO-1表达缺失及易位分布明显,1,25-(OH)2D3组ZO-1的表达缺失及易位分布较轻.结论 1,25-(OH)2D3可减少尿蛋白的排泄,抑制肾小球细胞数及细胞外基质的增殖,增加足细胞特异蛋白ZO-1的表达,减少其易位,对肾脏有保护作用.
关键词： 糖尿病 1 25-(OH)2D3 ZO-1 -
铅暴露对体外血脑脊液屏障功能及ZO-1和闭合蛋白表达的影响
目的 通过建立体外血脑脊液屏障(BCB)模型,研究铅诱导BCB损伤的可能机制.方法 使用Z310细胞建立BCB体外细胞模型,分别加入Pb(AC)2 2.5,5.0和10.0 mmol·L-1,暴露24,48和72 h.采用跨内皮电阻(TEER)检测法及葡聚糖法检测BCB模型通透性;Western蛋白印迹法和免疫荧光法检测BCB中紧密连接蛋白ZO-1和闭合蛋白表达及分布.结果 与细胞对照组相比,Pb(AC)2 2.5,5.0和10.0 mmol·L-1暴露48 h对Z310细胞存活率和密度均无明显影响.暴露后第12天,与细胞对照组比较,Pb(AC)2 5.0和10.0 mmol· L-1组TEER值明显降低(P＜0.05),葡聚糖通过率显著增高(P＜0.05).Western蛋白印迹法和免疫荧光法检测结果显示,与细胞对照组相比,Pb(AC)2各浓度暴露48 h后,ZO-1和闭合蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).结论 铅暴露能够破坏BCB模型的通透性,其机制可能与抑制紧密连接蛋白的表达有关.
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乳腺癌细胞中miR-1246、ZO-1、vimentin的表达及相关性研究
目的 检测miR-1246、ZO-1、vimentin在乳腺正常上皮细胞MCF10A和乳腺癌癌细胞MCF7、MDA-MB-231中的表达,并探讨miR-1246在促进乳腺癌上皮-间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法 用荧光定量PCR法检测乳腺正常上皮细胞MCF10A、乳腺癌细胞MCF7、MDA-MB-231中miR-1246的相对表达量,用免疫印迹法检测乳腺正常上皮细胞MCF10A、乳腺癌细胞MCF7、MDA-MB-231中紧密连接蛋白ZO-1、波形蛋白vimentin的表达情况.采用SPSS16.0统计软件分析,用U检验、t检验和Spearman相关分析分析数据.结果 miR-1246和ZO-1在恶性乳腺癌细胞中的表达明显降低(P＜0.05),vimentin在恶性乳腺癌细胞中的表达明显增加(P＜0.05),miR-1246与ZO-1表达呈正相关(r=0.940,P＜0.05),miR-1246与vimentin表达呈负相关(r=-0.714,P＜0.05).结论 miR-1246表达水平与EMT标志物ZO-1、vimentin的表达水平存在一定的相关性,提示miR-1246在促进乳腺癌EMT过程中扮演重要角色.
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复合膳食纤维对急性重症胰腺炎大鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白和肌球蛋白轻链激酶的影响
目的 探讨含复合膳食纤维(DFC)肠内营养(EN)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜屏障功能的影响.方法 采用5％的牛黄胆酸钠(0.1 mL/100 mg)逆行注射入胰胆管法制备大鼠重症急性胰腺炎(SAP)模型.60只随机分为三组:SAP+肠内营养乳剂(瑞素)组(A组),SAP+瑞素加复合膳食纤维(20g/L)1组[可溶性膳食纤维(SDF)∶不可溶性膳食纤维(IDF)=2∶1,B组],SAP+瑞素加膳食纤维(20 g/L)2组(SDF∶IDF=1∶2,C组),于术后48 h处死动物,比较各组肠黏膜病理改变,紧密连接蛋白occludin、ZO-1以及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的变化.结果 B组与C组大鼠肠黏膜损伤相对于A组较轻(P＜0.05),C组大鼠肠黏膜损伤相对于B组较轻(P＜0.05).B组与C组大鼠肠黏膜紧密连接蛋白occludin、ZO-1以及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的分布表达相对于A组增高(P＜0.05),且C组occludin及ZO-1的分布和表达高于B组(P＜0.05).而C组MLCK的分布和表达高于B组,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 添加DFC的肠内营养在SAP大鼠肠黏膜屏障功能中起重要的保护作用,且适当加大不可溶性膳食纤维(IDF)的比例更有助于肠道黏膜屏障的保护,改善受损的肠屏障功能.这一作用可能是通过调控紧密连接蛋白occludin、ZO-1以及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的分布和表达来实现的.
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凝血酶抑制剂nexin-1对大鼠脑出血后脑水肿的保护作用机制的研究
目的：探讨凝血酶抑制剂nexin-1对大鼠脑出血后脑水肿的保护作用机制。方法：将90只大鼠采用随机数字表法分为对照组、模型组和干预组，采用尾状核注射自体动脉血的方法复制脑出血模型，在造模的过程中往干预组尾状核部位注射凝血酶抑制剂nexin-1，其余组注射生理盐水。在给药12、24 h和36 h后，采用免疫组化法检测脑组织中的PAR-1，采用Western blotting法检测脑组织中的Caspase-3、Claudin-5和ZO-1。结果：模型组脑组织中PAR-1和Caspase-3的表达程度高于对照组及干预组，比较差异均有统计学意义（P<0.05）；模型组脑组织中的Claudin-5和ZO-1的表达水平低于对照组（P<0.05），干预组脑组织中的Claudin-5和ZO-1的表达程度高于模型组，以上比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：凝血酶抑制剂nexin-1对大鼠脑出血后脑水肿的保护作用可能是通过降低脑组织中PAR-1、Caspase-3的表达以及升高脑组织中Claudin-5和ZO-1的表达来实现的。
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异丙酚在血脑屏障氧糖剥夺体外模型中对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响
目的 探讨异丙酚在血脑屏障氧糖剥夺(OGD)体外模型中对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响及其机制.方法 分离纯化Bal b/c小鼠的脑微血管内皮细胞进行体外培养,构建血脑屏障体外模型,并通过OGD处理模拟体内缺氧、缺血状态将细胞分为对照组、OGD损伤组、不同浓度(5、10、20、40 μmol/L)异丙酚处理组及蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波酯(TPA)处理组.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测内皮细胞存活力,电阻仪检测内皮细胞阻抗(TEER)值,聚合酶链反应(PCR)和Western blot分别检测异丙酚对ZO-1 mRNA和蛋白表达的影响,PKC活性检测试剂盒测定PKC活性;通过加入PKC激活剂检测PKC在异丙酚调节ZO-1表达过程中的作用.结果 10、20、40 μmol/L异丙酚可显著抑制OGD诱导的内皮细胞活力,TEER值降低和ZO-1表达水平下降(P＜0.05);此外,10、20、40 μmol/L异丙酚还可抑制OGD诱导的PKC激活(0.856±0.124、1.017±0.104、0.930±0.149 vs 0.595±0.112).在PKC激活剂的作用下,异丙酚对ZO-1 mRNA和蛋白表达的上调作用均无显著影响(0.361±0.441 vs 0.344±0.023,P=0.403;0.169±0.011vs 0.161±0.019,P=0.489).结论 异丙酚可通过抑制PKC信号通路上调血脑屏障OGD体外模型紧密连接蛋白ZO-1的表达.
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糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障结构的损伤及其机制
目的:研究糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障结构关键蛋白紧密连接蛋白(ZO-1)、基底膜蛋白(CoⅣ)、周细胞蛋白(a-SMA)的表达情况及其损伤机制.方法:采用高脂灌胃14 d后,再尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,38mg/kg),随机分为2组(n=15):糖尿病组和糖尿病并发抑郁症组;正常大鼠随机分为2组(n=15):空白对照组和抑郁症组.糖尿病组与空白对照组正常饲养,糖尿病并发抑郁症组和抑郁症组慢性不可预知性应激28 d.检测各组大鼠血糖值的变化,Open-field及Morris实验评价大鼠行为学变化,透射电子显微镜观察大鼠海马血脑屏障形态学改变,免疫组化法检测大鼠海马血脑屏障关键蛋白ZO-1、CoⅣ、a-SMA表达情况.结果:与空白对照组比较,糖尿病并发抑郁症组大鼠血糖异常升高,自主活动次数减少,逃避潜伏期延长,空间探索时间减少(P＜ 0.05,P＜0.01);海马血脑屏障内皮模糊,毛细血管管腔狭窄,周边胶质细胞终足水肿,ZO-1、α-SMA表达显著减少(P＜0.05),CoⅣ的表达显著增加(P＜0.05);与糖尿病组比较,糖尿病并发抑郁症组大鼠自主活动次数显著减少(P＜0.01),逃避潜伏期延长(P＜0.05),海马血脑屏障毛细血管管腔更为狭窄、胶质细胞终足水肿更为明显,a-SMA表达显著下降(P＜0.05).结论:糖尿病并发抑郁症血脑屏障关键蛋白ZO-1、CoⅣ、α-SMA表达紊乱可能是其结构损伤发生机制之一.
