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抗增殖因子通过下调紧密连接蛋白 Zo-1、Occludin的表达促进间质性膀胱炎的发生
目的：研究紧密连接蛋白 ZO-1（zonula occludens proteins）、Occludin 在间质性膀胱炎（IC）与正常对照（NC）之间的表达差异并分析其与抗增殖因子（APF）的关联性，探讨它们在IC发病中的作用，为阐明IC的发病机理提供新的思路。方法通过组织块培养法培养正常及IC膀胱上皮细胞，利用流式细胞检测法测定其纯度；运用离子交换层析等技术纯化 APF，检测 APF 对膀胱上皮细胞的抑制效果并评价 APF 的活性；以纯化的 APF 培养 IC 膀胱上皮细胞，以 PBS 处理组为对照，采用Western-blot方法检测ZO-1及Occludin在处理前后的表达变化并分析APF与Occludin，ZO-1之间的关系。结果组织块培养法成功培养出膀胱上皮细胞，纯化的 APF 对膀胱上皮细胞生长的抑制率为78.5%；IC患者的ZO-1、Occludin的表达水平均低于正常组，且在经纯化的APF培养处理的膀胱上皮细胞中，ZO-1、Occludin的表达明显较PBS对照组低，P<0.01）。结论紧密连接蛋白 ZO-1、Occludin 在IC 中呈低表达，纯化的 APF 可进一步降低 ZO-1、Occludin 的表达水平，提示 APF 在 IC 中的病因作用可能是通过抑制紧密连接蛋白表达而产生，即APF可能通过下调紧密连接蛋白ZO-1、Occludin，破坏膀胱黏膜紧密连接结构，提高膀胱黏膜上皮的通透性，从而促进间质性膀胱炎的发生。
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别嘌醇对2型糖尿病小鼠肾小管间质细胞表型改变的保护作用与机制
目的：探讨别嘌醇对2型糖尿病db/db 小鼠肾小管间质转分化的抑制作用及其可能机制。方法将 db/m 小鼠作为正常对照组（ db/m组），将2型糖尿病db/db小鼠随机分为db/db小鼠对照组（ db/db组）和db/db小鼠别嘌醇50 mg· kg-1· d-1干预组（ db/db＋A 组），共干预12 w。疗程结束后检测小鼠血糖、血尿酸、血尿素氮、血肌酐、血甘油三酯和24 h尿蛋白水平；采用PAS及 Masson染色观察肾脏组织病理学变化；免疫组化染色观察α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏素（E-cadherin）、转化生长因子β（TGF-β）、抗增殖因子（prohibitin）的表达分布；Western印迹检测肾皮质TGF-β、prohibitin的蛋白表达水平。结果与正常对照组比较，db/db组血糖、血尿酸、血尿素氮、血肌酐、血甘油三酯和24 h 尿蛋白水平均显著增高（P＜0.01）；肾组织TGF-β和α-SMA蛋白表达水平明显上调（P＜0.01）；而prohibitin 、E-cadherin蛋白表达明显下降（P＜0.01）。 db/db＋A 组血尿酸、血尿素氮、24 h尿蛋白水平均较 db/db组明显降低（ P＜0.01）。肾组织 TGF-β和α-SMA 蛋白表达水平也较 db/db 组有所下降；prohibitin、E-cadherin蛋白表达有所升高（ P＜0.01）。肾组织病理检查显示：db/db组肾小管上皮细胞空泡样变、肾小管管腔扩张、肾间质纤维增生等肾小管间质损伤明显，db/db＋A 组上述病变程度较db/db组减轻。结论别嘌醇对2型糖尿病小鼠肾小管间质损伤具有保护作用，其机制可能与恢复肾组织prohibitin含量、抑制TGF-β过度表达、进而抑制肾小管间质细胞转分化有关。
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尿酸对人肾小管上皮细胞线粒体氧化损伤与凋亡的影响
目的 观察尿酸对人肾小管上皮细胞线粒体氧化损伤及相关凋亡途径的影响,探讨其可能作用机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),分别加入不同浓度的尿酸(480μmol/L、720 μmol/L)进行干预,于0h、24h、48 h收集细胞;应用MitoSOX染色检测活细胞线粒体中ROS的产生;JC-1染色检测线粒体膜电位的变化;Western印迹和免疫荧光化学法对凋亡诱导因子(AIF)和抗增殖因子(prohibitin)蛋白表达进行细胞亚定位及半定量分析;Annexin V-FITC及PI双染法检测细胞凋亡.结果 480 μmol/L尿酸刺激细胞24 h,线粒体ROS产量较正常对照组升高(P＜0.05),且随尿酸刺激浓度升高和时间延长逐渐上调,线粒体膜电位则逐渐降低.480 μmol/L尿酸刺激细胞24h,细胞凋亡率和AIF蛋白表达均较正常对照组无明显变化(P＞0.05),而刺激48 h时两者升高且其差异有统计学意义(P＜ 0.05);720μmol/L尿酸干预24h时,AIF蛋白表达和细胞凋亡率已较正常对照组升高(P＜0.05),干预48 h时升高更为显著.480μmol/L尿酸刺激细胞24h,prohibitin蛋白表达较正常对照组下降(P＜0.05),720 μmol/L尿酸干预48 h,降低为明显.结论 尿酸可诱导HK-2细胞线粒体ROS合成增多,膜电位下降,线粒体相关蛋白prohibitin表达下调,激活线粒体途径导致细胞凋亡.
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尿酸对人肾小管上皮细胞氧化应激和TGF-β表达的影响
目的 观察尿酸对人肾小管上皮细胞氧化应激和TGF-β表达的影响,并探讨其可能作用靶点与机制.方法 体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分别加入不同浓度的尿酸(UA,240、480、720 μmol/L)干预48 h后收集细胞;应用Western blot和免疫荧光化学法对转化生长因子(TGF-β)、抗增殖因子(PHB)蛋白表达进行细胞亚定位及半定量分析.MitoSOX染色检测活细胞线粒体中活性氧(ROS)的产生;分光光度计检测细胞上清液中丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性.结果 Western blot和免疫荧光结果显示,240 μmol/L尿酸干预HK-2细胞48 h,TGF-β、PHB蛋白均较正常组无明显改变,480 μmol/L尿酸干预HK-2细胞,TGF-β表达升高,而PHB较前降低;尿酸浓度为720 μmol/L时,TGF-β上调与PHB下降更加显著.线粒体中ROS的产生量也在480 μmol/L尿酸干预48 h时明显升高,且随尿酸刺激浓度升高继续上调;240μmol/L尿酸刺激细胞48 h,细胞上清中MDA含量、T-SOD活性较正常组无明显差异,480 μmol/L尿酸干预HK-2细胞48 h,MDA含量上升、T-SOD活性降低,尿酸浓度为720 μmol/L时,上述变化更为显著.结论 尿酸可诱导肾小管上皮细胞氧化应激反应,并使TGF-β蛋白表达上调,其机制可能与抑制线粒体相关蛋白PHB表达,使线粒体ROS合成增多有关.
