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菖蒲郁金汤化裁方对慢加急性肝衰竭大鼠血脑屏障通透性及脑组织IL-6、IL-1β含量的影响
目的 观察菖蒲郁金汤化裁方对慢加急性肝衰竭(ACLF)大鼠脑组织IL-6、IL-1β及血脑屏障通透性的影响.方法 30只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和菖蒲郁金汤化裁方给药组,采用人血清白蛋白免疫诱导大鼠肝纤维化模型,再予D-GalN/LPS联合腹腔注射急性攻击,建立ACLF大鼠模型.肝纤维化模型造模完成后,给药组在急性攻击前予菖蒲郁金汤化裁方灌胃5天,正常组、模型组均予0.9％氯化钠注射液灌胃5天,各组均在急性攻击8h后麻醉处死.HE染色、电镜观察各组大鼠肝、脑组织病理变化,ELISA法观察各组大鼠脑组织白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)含量,Western Blot检测紧密连接蛋白(ZO-1)、P-糖蛋白(P-gp)、窖蛋白(Caveolin-1)的表达含量.结果 与模型组相比,菖蒲郁金汤化裁方给药可降低ACLF大鼠神经元损伤、减轻脑血管水肿,减少脑组织内IL-6、IL-13表达含量(P ＜0.05,P＜0.01),降低ZO-1、P-gp、Caveolin-1蛋白表达(P＜0.05).结论 菖蒲郁金汤化裁方具有保护神经元、减少脑微血管水肿的作用,其作用机制可能通过开放血脑屏障,增加药物在脑内浓度,而发挥抗炎作用.
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藿香正气液对湿阻证大鼠回肠黏膜ZO-1表达的影响
目的:研究藿香正气液对湿阻证大鼠回肠黏膜紧密连接蛋白(ZO-1)表达的影响.方法:将24只SD大鼠随机分为正常组、模型组、藿香正气液组,每组8只.正常组常规喂养,其余各组采用改进的环境加疲劳法制造湿阻证模型,连续造模6d.造模成功后正常组和模型组予生理盐水ig20 mL·kg(-1)),治疗组予藿香正气液ig(20 mL·kg(-1)),1次/d,连续8d.采用RT PCR方法观察回肠黏膜ZO-1的表达情况.结果:与正常组相比,模型组大鼠脾虚症状明显,胃肠黏膜有明显充血水肿,且胃黏膜有明显出血点及血块,且回肠黏膜ZO-1表达减少(P<0.01),而藿香正气液组表达增加(P<0.01).结论:藿香正气液可明显改善湿阻证大鼠脾虚腹泻等症状,其机制可能与提高回肠黏膜ZO-1的表达量有关.
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大黄通过调控紧密连接蛋白治疗大鼠脓毒症
目的:探究大黄治疗脓毒症大鼠的分子机制.方法:100只Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,大黄高、中、低剂量组(150,100,50 mg·kg-1),除假手术组只暴露盲肠,不进行结扎与穿孔,其余各组采用盲肠结扎法制作大鼠脓毒症模型,记录各组大鼠死亡情况,采用细菌16S rRNA实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测大鼠结肠及肠系膜淋巴结、血液中金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌数量,采用qPCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测大鼠结肠紧密连接蛋白紧密连接相关蛋白-1 (ZO-1)和闭锁蛋白(Occludin)水平.结果:与假手术组比较,脓毒症模型组大鼠病死率高,不同标本的金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌检出率和数量明显升高,ZO-1和Occludin mRNA及蛋白表达明显降低(P＜0.01);与模型组比较,大黄高、中剂量组大鼠病死率降低,大鼠不同标本的上述两细菌检出率和数量有所减低,细菌移位情况减少,大鼠结肠的ZO-1和Occludin mRNA及蛋白表达明显升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论:大黄可调控结肠紧密连接蛋白表达保护肠黏膜屏障,从而抑制脓毒症大鼠细菌移位治疗脓毒症.
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巴豆不同炮制品肠道毒性差异及炮制对巴豆脂肪油、总蛋白的影响
为考察不同巴豆制霜过程对巴豆脂肪油、总蛋白及致肠道毒性的影响,将巴豆生品进行热压去油,冷压去油和淀粉稀释法炮制,得3种巴豆制霜品.小鼠灌胃给药,采用ELISA法测定小鼠血清中二胺氧化酶(DAO)和D-乳酸含量,考察肠道通透性的变化;采用Western blot法测定不同肠段中紧密连接蛋白(occludin,claudin-1)表达变化,考察巴豆生品及其制霜品对肠道损伤的毒性差异.分别采用GC-MS和SDS-PAGE分析巴豆制霜前后脂肪油和总蛋白的变化.结果显示,巴豆生品能够显著增加小鼠肠道通透性和降低十二指肠、空肠紧密连接蛋白表达.制霜后小鼠肠道通透性和紧密连接蛋白表达均趋向正常,毒性降低.不同巴豆霜肠道毒性大小为:冷压巴豆霜＞稀释巴豆霜≈热压巴豆霜.3种巴豆霜脂肪油成分组成一致,但总蛋白含量和组成具有明显差异.含量高低:冷压巴豆霜＞热压巴豆霜＞稀释巴豆霜,其中冷压和稀释巴豆霜总蛋白条带相对分子质量分布一致,热压巴豆霜总蛋白组成发生显著变化,条带减少,变淡.表明在巴豆制霜中,稀释和加热过程均能够降低蛋白含量,且加热导致部分蛋白变性失活.稀释和加热均能降低巴豆霜毒性,但加热过程减毒作用更显著,表明加热是巴豆制霜过程中的关键步骤.
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bFGF促进大鼠血脊髓屏障的修复
目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 对脊髓损伤后大鼠血脊髓屏障的修复作用.方法 将大鼠随机分为假手术组、模型组、bFGF干预组(80 μg/kg).BBB法评价大鼠后肢运动功能后,于术后14 d处死;HE染色、NeuN染色观察脊髓损伤神经元丢失情况;伊文思蓝、FITC-dextran法检测血脊髓屏障的通透性;Western blot 检测黏附连接蛋白(p120-catenin和 β-catenin)和紧密连接蛋白(occludin 和claudin-5)表达.结果 术后3 d开始,bFGF干预组BBB 评分明显高于模型组(P<0.05);与模型组相比,术后3 d,bFGF干预组神经元丢失明显减少(P<0.05);术后1 d,bFGF干预组血脊髓屏障的通透性减少,p120-catenin、β-catenin、occludin 和claudin-5蛋白表达明显上升(P<0.05).结论 bFGF能够减少大鼠脊髓损伤后神经元的丢失,促进黏附连接蛋白和紧密连接蛋白的表达,促进血脊髓屏障的修复.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 脊髓损伤 黏附连接蛋白 紧密连接蛋白 血脊髓屏障 -
袖状胃切除术对高脂饮食诱导肥胖大鼠肠道屏障的影响
目的 研究袖状胃切除术对高脂饮食诱导肥胖大鼠肠道屏障的影响.方法 建立高脂饮食诱导肥胖大鼠模型共30只,随机分为普通饮食组(CD,n=10)、假手术组(SO,n=10)和袖状胃切除组(SG,n=10),术后4周时分别检测24 h尿乳果糖/甘露醇比值(L/M)、门静脉血清内毒素水平和小肠黏膜紧密连接蛋白claudin-1和occludin表达水平.结果 术后4周时,SG组大鼠体质量明显低于CD组(P<0.001)和SO组(P<0.001).SG组大鼠24 h尿L/M值明显低于CD组(P<0.001)和SO组(P<0.01).SG组门静脉血清内毒素水平明显低于CD组(P<0.01)和SO组(P<0.05).术后4周时,SG组大鼠小肠黏膜中claudin-1表达水平明显高于CD组(P<0.001)和SO组(P<0.01),occludin表达水平明显高于CD组(P<0.001)和SO组(P<0.001).结论 袖状胃切除术可使高脂饮食诱导的肥胖大鼠体质量下降,降低24 h尿L/M值和门静脉血清内毒素水平,提高小肠黏膜中claudin-1和occludin蛋白的表达水平.
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Claudin-5和CD99在胰腺实性-假乳头状肿瘤和神经内分泌肿瘤中的表达及其意义
目的 研究内皮细胞间紧密连接蛋白Claudin-5和细胞间黏附分子CD99在鉴别胰腺实性-假乳头状瘤(SPN)与胰腺神经内分泌性肿瘤(P-NET)中的意义.方法 应用免疫组织化学MaxVision法检测于2003至2012年收集的37例SPN、21例P-NET组织中Claudin-5和CD99的表达情况.结果 37例SPN,Claudin-5在细胞膜表达,阳性率为100％；21例P-NET,Claudin-5均不表达；两者之间差异有统计学意义(P＜0.01).CD99在SPN和P-NET中的表达模式不同,前者呈核旁点状聚集,后者在细胞膜表达,其表达率分别为91.9％(34/37)和61.9％(13/21)；两者之间差异有统计学意义(P＜0.01).Claudin-5和CD99在SPN中的表达呈显著正相关(r=0.421,P=0.001).结论 对于大体和镜下特征与P-NET相似的SPN病例,仅依靠形态学诊断十分困难.免疫组织化学联合检测Claudin-5和CD99则对鉴别诊断有重要意义.
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Claudin-low型乳腺癌的临床病理及预后特征
目的 探讨Claudin-low型乳腺癌患者的临床病理及预后特征.方法 收集2010年1月至2011年12月青岛市中心医院233例浸润性乳腺癌患者病例及随访资料,采用组织芯片及免疫组织化学法检测Claudin-1、-3、-4、-7、-8的表达情况,并分析浸润性乳腺癌患者Claudin蛋白表达情况、Claudin-low型乳腺癌患者的临床病理及预后特征.结果 Claudin蛋白表达以Claudin-3(72/212,33.9%)和Claudin-4(56/212,45.2%)的表达率相近,Claudin-4的表达量高.21例Claudin-low型乳腺癌(21/212,9.0%)中,11例为三阴性乳腺癌(11/21,52.4%),组织学类型以非特殊型浸润性癌(14/21,66.7%)和化生性癌(3/21,14.3%)为主,其中化生性鳞状细胞癌不呈现Claudin-low型表达.与非Claudin-low型乳腺癌相比,Claudin-low型乳腺癌组织学3级及肿瘤直径>2 cm的比例较高,仅略低于三阴性乳腺癌.5年无病生存率(P>0.05)和总生存率(P=0.018)均低于非Claudin-low型乳腺癌.结论 Claudin-low型乳腺癌在临床病理及预后特征与其他各型乳腺癌存在不同之处,与差的预后相关.
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CORM-2减轻脂多糖诱导Caco-2细胞屏障损伤的作用
目的 探讨外源性一氧化碳释放分子-2(CORM-2)减轻脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的Caco-2细胞屏障损伤的作用及机制.方法 用50μg/mL LPS刺激24 h,建立LPS诱导的Caco-2细胞单层损伤模型.将100μmol/L CORM-2置于37℃、5％CO2的细胞培养箱中18h,其中的CO已全部释放,即为无活性的CORM-2(iCORM-2).实验设正常对照组、LPS损伤组、CORM-2预处理+LPS损伤组(用不同浓度CORM-2(10μmol、50μmol、100μmol)预处理1h,PBS水洗三遍,然后50μg/mL LPS刺激24h处理,再分为LC1(10 μmol/L CORM-2预处理)、LC2 (50μmol/L CORM-2预处理)、LC3(100 μmol/L CORM-2预处理)、LC4 (iCORM-2预处理)4个亚组.采用流式细胞术检测各组Caco-2单层细胞的凋亡率.免疫荧光法检测Caco-2单层细胞及紧密连接蛋白(tight junction proteins,TJ)的分布及结构变化.ELISA法检测各组Caco-2细胞炎症因子(TNF-α、IL-1 β与HMGB-1)的分泌水平.Western blotting法检测各组Caco-2细胞紧密连接蛋白(occludin、ZO-1、claudin-1与claudin-4)的表达变化.结果 LPS损伤后,与对照组相比,LPS损伤组Caco-2单层细胞的凋亡率明显升高(P＜0.05)、细胞炎症因子(TNF-α、IL-1 β与HMGB-1)分泌增加(P＜0.05)、相邻Caco-2细胞间TJ结构遭受破坏,TJ相关蛋白(occludin、ZO-1、claudin-1与claudin-4)的表达量降低(P＜0.05);经过CORM-2预处理后,Caco-2单层细胞的凋亡率显著降低(P＜0.05)、TNF-α、IL-1 β和HMGB-1的分泌明显减少(P＜0.05),LPS诱导引起的TJ结构损害减轻,TJ蛋白的表达量升高(P＜0.05),且与CORM-2的预处理浓度呈正相关.结论 CORM-2呈浓度依赖性减轻LPS诱导的Caco-2细胞屏障结构损伤.其作用机制可能是通过抑制炎症细胞因子TNF-α、IL-1β与HMGB-1的产生和释放、降低Caco-2单层细胞的凋亡率、改善Caco-2细胞间TJ结构的变化和相关蛋白的表达与分布而实现.
关键词： 外源性一氧化碳释放分子 脂多糖 Caco-2细胞单层 紧密连接蛋白 -
丙咪嗪对小鼠急性肺损伤肺泡上皮屏障功能保护作用的研究
目的 研究丙咪嗪对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)肺泡上皮屏障功能的保护作用,并探讨可能机制.方法 32只雄性SPF级Balb/c小鼠随机数字法分为4组(健康对照组、丙咪嗪组、LPS组、LPS+丙咪嗪组).采用LPS (20mg/kg)腹腔注射建立小鼠ALI模型,并在腹腔注射LPS前30 min给予丙咪嗪(25 mg/kg)干预,处死前10 min,给予尾静脉注射FITC-FD4,12 h后麻醉下放血处死小鼠,随后取出支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织.常规HE染色观察肺组织病理变化及病理学评分;肺组织湿/干比(W/D)和BALF/血清FD4比值的测定分别评估肺水肿和肺泡上皮细胞通透性;采用real-time PCR、Western blot和免疫组织化学方法检测不同组紧密连接蛋白Occludin、Claudin-4和ZO-1的表达情况.数据分析采用SPSS 16.0软件,多组间的均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验.结果 LPS+ Imipramine组小鼠病理评分(9.22 ±0.21)较LPS组(11.23±0.55)降低,差异具有统计学意义(P＜0.05);LPS+ Imipramine组肺组织湿/干比小于LPS组,差异具有统计学意义(P＜0.05);LPS+Imipramine组较LPS组相比,BALF/血清FD4比值下降差异具有统计学意义(P＜0.05);方差分析结果显示,4组之间的Occludin、Claudin-4、ZO-1蛋白mRNA及蛋白表达水平差异均有统计学意义(均P ＜0.05),组间两两比较发现与LPS组相比,LPS+ Imipramine组小鼠肺各紧密连接蛋白mRNA及蛋白的表达水平均升高(均P＜0.05);免疫组织化学结果显示,紧密连接蛋白Occludin、Claudin-4主要位于肺泡上皮细胞膜,ZO-1主要位于肺泡上皮细胞胞浆内,在健康对照组和丙咪嗪组蛋白表达明显,LPS组蛋白表达较健康对照组均降低(均P＜0.05),LPS+ Imipramine组较LPS组蛋白表达均上升(均P ＜0.05).结论 丙咪嗪可通过上调肺泡上皮细胞紧密连接蛋白的表达增强肺泡上皮细胞屏障功能,进而保护LPS诱导的小鼠ALI.
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小鼠脊髓损伤后基质金属蛋白酶-9及血脊髓屏障的变化
目的：探讨脊髓损伤后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达变化对血脊髓屏障(BSCB)通透性的影响。方法 C57BL/6小鼠(n=68)随机分为假手术组、损伤后2 d组(S2)、损伤后7 d组(S7)和损伤后14 d组(S14)，每组17只。损伤组采用改良Allen's法制作中度脊髓损伤模型。在损伤后的第2、7、14天分别对小鼠进行盲法的小鼠后肢运动功能(BMS)评分和BMS亚评分；各组小鼠腹腔注入伊文思蓝，检测BSCB通透性；采用免疫荧光法检测紧密连接蛋白(occludin)表达，采用免疫印迹法检测occludin和MMP-9表达。结果术后2 d BMS评分显著降低，BSCB通透性显著增高；术后14 d BMS评分升高(P<0.01)，BSCB通透性下降(P<0.05)。术后7 d，occludin表达下调，MMP-9表达上调(P<0.05)；术后14 d occludin表达上调，MMP-9表达下调(P<0.05)。结论脊髓损伤后MMP-9可能通过介导occludin表达，影响BSCB通透性改变。
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梗阻性黄疸肠黏膜屏障损伤的研究现状
梗阻性黄疸会损伤肠黏膜屏障功能并带来严重感染并发症,但其损伤机制尚未完全清楚.随着近年来肠黏膜屏障功能检测方法的进步,肠黏膜屏障损伤机制方面的研究有不少进展,本文就有关研究的现状进行综述.
关键词： 梗阻性黄疸 肠黏膜屏障 实时定量PCR 紧密连接蛋白 可溶性髓细胞表达触发受体 -
肠内肠外营养对大鼠肠道损伤后屏障功能恢复的实验研究
目的 比较肠内、肠外两种营养支持途径及不同营养物质对胃肠手术后大鼠肠屏障功能的恢复情况.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为4组:空白对照组(C组)、肠外营养组(PN组)、普通肠内营养组(EN组)、富含谷氨酰胺的肠内营养组(G-EN组).PN组、EN组、G-EN组行盲肠切除+胃造口置管手术并联合使用阿莫西林50 mg+甲硝唑20 g两次进行干预.术后第1天起各组等氮等热卡连续给予营养支持7 d,于末段回肠5 cm处取肠段1 cm,在光镜下观察肠黏膜形态;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)比较血浆D-乳酸含量,检测肠道黏膜通透性;双抗体夹心ABC-ELISA法检测肿瘤坏死因子水平(TNF-α);免疫组化法观察肠黏膜occludin蛋白表达.结果 PN组肠黏膜明显萎缩,其绒毛高度、黏膜厚度、隐窝深度、绒毛表面积及肠黏膜occludin蛋白表达均显著低于C组、EN组、G-EN组(P<0.05),D-乳酸及TNF-α水平显著高于C组、EN组、G-EN组(P<0.05);EN组肠黏膜萎缩较明显,其肠黏膜形态及肠黏膜occludin蛋白表达均低 于C组、G-EN组(P<0.05),D-乳酸及TNF-α水平显著高于C组及G-EN组(P<0.05);G-EN组肠道形态、肠黏膜occludin蛋白表达、D-乳酸及TNF-α水平与C组无统计学差异(P>0.05).结论 谷氨酰胺强化的肠内营养在维护肠黏膜屏障功能、减轻炎症反应,增加肠上皮occludin蛋白表达等方面优于单独使用肠内营养液或肠外营养液,更有助于胃肠手术后大鼠肠屏障功能的恢复.
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两歧双歧杆菌干预周期对IL-10基因敲除小鼠结肠上皮屏障保护作用的影响
目的:探讨不同两歧双歧杆菌菌株(Bifidobacterium bifidum,B.bifidum S17)干预周期对IL-10-/-小鼠结肠上皮肠屏障功能保护作用的影响.方法:分成4组:WT组、WT+BB f(B.bifidum)组、IL-10-/-组和IL-10-/-+BB f组,周期设为2、4、6wk,5只/组,分别灌饲PBS液或B.bifidum溶液,检测结肠组织肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和干扰素γ(interferon-γ,INF-γ)浓度,小鼠结肠上皮通透性和TER,紧密连接蛋白的表达.结果:B.bifidum干预4 wk的小鼠结肠组织TNF-α、IL-1β、INF-γ浓度,结肠黏膜上皮通透性、TER和紧密连接蛋白表达较对照组、干预2 wk有显著性差异(均P＜0.01),与干预6 wk相比较无显著性差异.结论:B.bifidum干预4 wk可检测明确的肠屏障保护作用,增加干预周期,并不能增加肠屏障保护效果.
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急性胆道梗阻肠黏膜屏障破坏与氯离子通道-2的关系
目的:探讨急性胆道梗阻肠黏膜屏障破坏与肠上皮细胞氯离子通道-2(chloride channel-2,CLC-2)的关系.方法:建立急性胆道梗阻(阻塞性黄疸)大鼠动物模型,术后7d连续注射Lubiprostone(Lu组)、类高血糖素多肽-2(GLP-2组)、两者共同使用(Lu+GLP组),以假手术组(Sham组)和阻塞性黄疸组(obstructive jaundice,OJ组)作为对照.分别检测实验动物乳果糖/甘露醇(L/M)比值、血浆内毒素水平,并用Westernblots检测末端回肠紧密连接蛋白闭锁小带-1(zonula occludens-1,ZO-1)、CLC-2的表达,并利用图像分析系统对Western blots图像进行定量分析.结果:各实验组的L/M比值均高于Sham组(P=0.00),Lu组(0.545±0.03)、GLP组(0.512±0.03)和Lu+GLP组(0.482±0.05)的数据均低于OJ组(0.656±0.04)(均P=0.00).手术后各组的血浆内毒素均升高,OJ组高,Lu组、GLP组和Lu+GLP组均有所下降.通过Western blots研究发现CLC-2蛋白的表达条带出现在90-100KD,ZO-1蛋白条带在200 kD左右.定量研究显示OJ组的ZO-1相对表达量(0.178±0.03)明显下降,Lu组(0.209±0.03)高于OJ组而低于Sham组(P=0.02),而Lu+GLP组接近于Sham组.CLC-2蛋白的表达量Sham组为(0.267±0.04),OJ组(0.195±0.04)、GLP-2组(0.217±0.05)和Lu+GLP组(0.222±0.03)均下降明显(均P=0.00).结论:CLC-2和紧密连接蛋白共同参与肠黏膜屏障的维护,急性胆道梗阻破坏肠黏膜屏障与肠上皮细胞的CLC-2有关,促进或激活CLC-2后能活化紧密连接蛋白,修复受损的肠黏膜屏障.
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双歧杆菌三联活菌对DSS诱导结肠炎鼠肠紧密连接蛋白JAM-1的影响
目的:探讨双歧杆菌三联活菌对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的结肠炎小鼠肠道炎症及紧密连接蛋白连接黏附分子l(junctional adhesion molecule-1,JAM-1)表达与分布的影响.方法:将SPF级♀Balb/c小鼠(8-10周龄)随机分为5组:正常对照NC组、益生菌BB组(正常小鼠予益生菌灌胃14 d)、急性DSS模型组(生理盐水灌胃14 d+第8天起4％DSS溶液自由饮用7 d)、BD组(益生菌灌胃7d+第8天起4％DSS溶液自由饮用7 d)、BDB组(益生菌灌胃14 d+第8天起4％DSS溶液自由饮用7 d).记录小鼠每日体质量变化.第15天处死小鼠、分离结肠,观察各组肠道损伤情况,以组织病理学积分评估结肠炎的严重程度.采用Western blot法、免疫组织化学法(IHC)检测结肠组织中JAM-1的表达及分布.结果:与DSS模型组相比,益生菌干预组(BD、BDB组)小鼠减轻的体质量得到不同程度恢复(95.17％±3.34％、87.17％±1.83％vs 81.49％±2.16％,P1 ＜0.01,P2=0.08),病变结肠缩短程度、肠黏膜水肿,上皮细胞破坏程度及肠道炎症细胞浸润减轻,且BD组小鼠的改善程度优于BDB组.Western blot结果显示给予益生菌干预,BD、BDB组肠黏膜组织JAM-1蛋白的表达水平较DSS组显著增加(0.725±0.027、0.739±0.033 vs 0.454±0.073,均P＜0.05).免疫组织化学结果显示DSS模型组小鼠结肠黏膜JAM-1染色强度明显减弱,染色细胞数减少,分布散乱、中断,益生菌处理后JAM-1染色强度及阳性细胞数减少程度显著改善.仅给予益生菌灌胃的小鼠,体质量、结肠大体、镜下表现以及结肠组织中JAM-1蛋白表达水平及分布,与正常小鼠无显著差异(P＞0.05).结论:双歧杆菌三联活菌可能通过影响JAM-1蛋白的表达与分布,改善肠黏膜的屏障功能,从而减轻小鼠急性期肠道炎症反应.
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暴发性肝衰竭时肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降
目的:研究暴发性肝衰竭小鼠大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达的变化.方法:BALB/c小鼠150只随机分为生理盐水对照组(n=30)、内毒素(LPS)对照组(n=30)、D-氨基半乳糖(D-GalN)对照组(n=30)和暴发性肝衰竭(LPS+GalN)组(n=60).采用D-GalN和LPS联合ip制备暴发性肝衰竭小鼠动物模型.应用免疫组织化学技术、Western blot及实时定量PCR检测暴发性肝衰竭进程中,小鼠大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin的定位、表达及mRNA的变化.结果:occludin蛋白主要沿小鼠大肠黏膜上皮细胞膜的顶端呈线状分布,在暴发性肝衰竭组小鼠,6 h时occludin的阳性染色开始减少,9 h时更为明显.Western blot结果与免疫组织化学结果相一致,6 h时开始下降(0.48±0.07),9 h达到低值(0.36±0.05),与生理盐水对照组(0.71±0.09)相比差异显著(P＜0.05).实时定量PCR结果显示,暴发性肝衰竭小鼠2 h时occludin mRNA即开始下降(0.85±0.12),6 h时达到低值(0.72±0.04),与生理盐水对照组(1.00±0.05)相比有明显差异(P＜0.05),9 h时有所恢复(0.93±0.10).结论:在暴发性肝衰竭过程中,大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降,其mRNA也呈下调趋势.
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苗族腌汤对急性肝衰竭大鼠肠黏膜Occludin及肝组织IL-22的影响
目的 通过检测肠黏膜紧密连接蛋白Occludin的表达及肝组织中白介素-22(interleukin-22,IL-22)的含量,初步探讨腌汤对急性肝衰竭(acute liverfailure,ALF)的食疗作用.方法 40只♂SD大鼠随机分成正常组、模型组、双歧杆菌三联活菌组、腌汤腌组,每组10只,双歧杆菌三联活菌组、腌汤组分别予双歧杆菌三联活菌、腌汤灌胃,1次/d,连续9d,正常对照组、模型组则用等容积的生理盐水灌胃.于实验第8天,除正常组外,其余3组予硫代乙酰胺(生理盐水配制)按300 mg/kg皮下注射,1次/d,连续2d,建立大鼠ALF模型.于实验的第10天,股动脉放血处死大鼠,留取血清测血清谷丙转氨酶,谷草转氨酶含量;留取距回盲部3 cm回肠组织及肝组织行肠黏膜紧密连接蛋白Occludin及肝组织IL-22的检测.结果 与正常组比,各组大鼠血清转氨酶水平及肝组织IL-22含量明显增加(P＜0.01).与模型组比,双歧杆菌三联活菌组、腌汤组血清转氨酶的水平有所下降(P＜0.01),双歧杆菌三联活菌组与腌汤组相比,差别无统计学意义(P＞0.05);与模型组相比,双歧杆菌三联活菌组、腌汤组大鼠肝组织IL-22含量增加(P＜0.05),与双歧杆菌三联活菌组比较,腌汤组无明显差异(P＞0.05);除正常组外,各组大鼠肠黏膜Occludin表达水平下降(P＜0.01),与模型组相比,双歧杆菌三联活菌组、腌汤组肠黏膜Occludin的表达水平明显上升(P＜0.05),与双歧杆菌三联活菌组相比,腌汤组Occludin的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 苗族腌汤可能通过保护大鼠肠黏膜屏障,上调IL-22的表达对ALF发挥食疗作用.
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谷氨酰胺对体外培养肠上皮细胞屏障通透性的影响
目的:探讨谷氨酰胺保护肠黏膜屏障功能的作用机制.方法:Caco-2细胞(20-30代)应用含有不同浓度谷氨酰胺(0、0.1、1、4 mmol/L)的DMEM培养液在Transwell上培养21d,检测跨上皮电阻的变化.免疫荧光染色检测紧密连接蛋白occludin的定位、表达.应用不同裂解液制备NP-40可溶性及不溶性蛋白框架.分别进行蛋白印迹杂交检测活性和非活性occludin蛋白的相对含量.结果:与0mmol/L GLN组比较,补充GLN后,跨上皮电阻明显升高(21.4±0.1,124.5±0.3,173.6±0.2 vs 11.3±0.3,均P＜0.05).免疫荧光染色可见0mmmol/L GLN组occludin呈团状分布于细胞胞质内,随着GLN浓度的增加,occludin阳性荧光染色呈沿细胞膜分布的蜂巢状线性荧光.GLN缺乏不影响65kDa occludin蛋白的表达,但能降低85kDa occludin蛋白的表达(1.04±0.03,1.17±0.04,1.29±0.03,1.43±0.06,P＜0.05).结论:谷氨酰胺缺乏能够减少活性紧密连接蛋白occludin的表达,增加肠上皮细胞屏障通透性,补充GLN能够阻断这些改变.
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白头翁醇提物对大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白的保护作用
目的:探讨白头翁醇提物对三硝基苯磺酸诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白的调控,进一步阐明白头翁醇提物对大鼠实验性结肠炎的肠黏膜屏障的保护作用.方法:建立TNBS诱导大鼠结肠炎模型.实验分为正常组、模型组、白头翁醇提物治疗组和双歧杆菌嗜酸乳杆茵肠球菌三联活菌(金双歧)组.进行疾病活动指数(DAI)和组织学损伤评分,用ELISA法测定结肠组织TNF-α、IL-10和血清内毒素,采用免疫组织学染色检测紧密连接(tight iunction,TJ)相关蛋白occludin的分布.结果:TNBS诱导大鼠结肠炎后,DAI和组织学损伤评分增高,结肠组织TNF-α水平升高、IL-10水平降低和血清内毒素水平升高,而经白头翁醇提物和双歧杆菌嗜酸乳杆菌肠球菌三联活菌处理后,DAI和组织学损伤评分有明显下降(6.50±1.27,5.90±1.67 vs 9.20±1.75:5.00±1.05,4.80±1.25 vs 7.10±0.99,均P<0.05),结肠组织TNF-α水平降低(521.24±109.37 ng/L,503.98±126.63 ng/L vs 657.54±149.60 ng/L,均P＜0.05)、血清内毒素水平降低(0.148±0.093EU/mL,0.153±0.106 EU/mL vs 0.213±0.023EU/mL,均P＜0.05)和IL-10水平升高(92.19±30.09 ng/L,95.57±27.71 ng/L vs 42.92±23.74ng/L,均P＜0.05);TNBS诱导大鼠结肠炎后,TJ结构遭到破坏,TJ相关蛋白的表达减少,而白头翁醇提物和双歧杆菌嗜酸乳杆菌肠球菌三联活茵(金双歧)处理后可使TNBS引起的TJ结构受损减轻,相关蛋白的表达增多.结论:白头翁醇提物可以对TNBS诱导大鼠结肠炎肠黏膜屏障具有明显的保护作用,其机制可能是通过调节肠道微生态、上调肠上皮细胞紧密连接蛋白ocluudin的表达、降低结肠组织TNF-α含量、提高IL-10水平,从而抑制内毒素通过紧密连接进入体循环.
