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珍珠烫伤膏干预小鼠溃疡性结肠炎的作用研究
目的:探讨珍珠烫伤膏对葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)诱导小鼠肠道炎性反应的疗效.方法:采用DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)模型,随机分为空白组、模型组、美沙拉嗪(Mesalazine,Mes)组和珍珠烫伤膏(Pearl Scald Ointment,Pso)低(Pso1)、高剂量组(Pso2),每组10只.给药10 d,观察并分析小鼠体质量、结肠长度、病理评分及炎性反应因子等方面的变化.结果:与模型组比较,珍珠烫伤膏各剂量组小鼠的疾病活动指数、结肠病变评分、HE染色病变评分及炎性反应因子水平均显著下降,由UC引起的体质量及结肠长度缩短均有所改善,差异有统计学意义(P<0.05).结论:珍珠烫伤膏对DSS诱导的溃疡性结肠炎有显著地改善作用,提示其对溃疡性结肠炎有一定的治疗作用.
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黄连-干姜药对预防DSS诱导的小鼠结肠炎作用及其机制
目的:研究黄连-干姜药对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导结肠炎的预防作用及其机制.方法:将45只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、黄连-干姜低、中、高剂量(1.2,2.4,4.8 mg·kg-1)组,黄连-干姜各剂量组预防性灌胃给药7d后(正常组和模型组灌胃等量生理盐水),在继续给予相应干预的同时,模型组和中药组分别给予3％ DSS水溶液自由饮用,连续饮用6d,正常组小鼠给予自来水自由饮用.记录每日疾病活动指数(DAI),取材后测量结肠长度,苏木素-伊红(HE)染色观察结肠病理变化并记录病理组织学评分,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠血浆中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测结肠上皮细胞中JAK2,STAT3蛋白磷酸化水平,激光共聚焦显微镜检测结肠组织中磷酸化STAT3(p-STAT3)表达水平.结果:模型组从第2天开始DAI较正常组均升高;黄连-干姜低剂量组DAI较模型组在第2,4,6天降低;黄连-干姜中剂量组除了第4天,均低于模型组;黄连-干姜高剂量组第2天即低于模型组,并持续至实验结束.模型组小鼠结肠长度较正常组显著缩短(P＜0.01),黄连-干姜各个剂量组结肠长度较模型组显著增长(P＜0.05).结肠组织HE染色观察发现模型组炎症损伤明显较正常组严重;黄连-干姜组炎症损伤明显轻于模型组,模型组病理学评分显著高于正常组(P＜0.01),黄连-干姜中、高剂量组病理学评分显著低于模型组(P＜0.05).小鼠血浆中IL-6,TNF-α含量模型组显著高于正常组(P＜0.01),黄连-干姜各剂量组均显著低于模型组(P＜0.01).结肠组织中JAK2和STAT3蛋白活化水平模型组显著高于正常组(P＜0.01),黄连-干姜各剂量组均低于模型组(P＜0.01,P＜0.05).结论:黄连-干姜药对可能通过抑制IL-6/STAT3信号通路从而预防DSS诱导的结肠炎症状及结肠组织炎症损伤.
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加味藿香正气软胶囊对DSS致小鼠结肠炎的作用及机制
目的:研究加味藿香正气软胶囊(JWHX)对葡聚糖硫酸钠(DSS)致小鼠结肠炎模型的抗炎机制.方法:将60只ICR雄性小鼠随机分为正常组、模型组、JWHX高、中、低剂量组(0.60,0.30,0.15 g·kg-1).采用35 g·L“DSS供小鼠自由饮用复制结肠炎模型,同时开始每天ig给药,连续7 d.每天进行疾病活动指数(DAI)评分,7d后处死小鼠,对各组小鼠结肠进行组织病理学评分,检测结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)含量及白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TN F-α)促炎性细胞因子.结果:与正常组比较,模型组结肠炎小鼠DAI评分,病理学评分,MPO,IL-6,TNF-α含量显著升高,小鼠结肠长度显著降低(P＜0.01);与模型组比较,JWHX高、中剂量组可显著降低DSS结肠炎小鼠的DAI评分和病理学评分,升高小鼠结肠长度,显著降低结肠中MPO,IL-6,TNF-α含量(P＜0.05,P＜0.01);JWHX低剂量组也能显著降低肠炎小鼠的DAI评分,升高小鼠结肠长度,显著降低结肠中MPO含量(P＜0.05).结论:JWHX对DSS致小鼠结肠炎具有一定治疗作用,其机制与抑制IL-6,TNF-α促炎性细胞因子产生相关.
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黄连素预防葡聚糖硫酸钠诱导溃疡性结肠炎的作用机制
目的:研究黄连素对DSS诱导溃疡性结肠炎的预防作用及其机制.方法:将36只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、黄连素低剂量组和黄连素高剂量组,预防性给药7d后,模型组和黄连素组分别给予3％DSS水溶液造模同时继续给予相应的干预,连续6d.记录每日DAI评分,取材后测量结肠长度,HE染色观察结肠病理变化并记录病理组织学评分,ELISA法检测结肠组织IL-6、TNF-α水平,Western blot法检测结肠组织中JAK2、STAT3蛋白磷酸化水平,激光共聚焦显微镜检测组织中p-STAT3表达水平.结果:黄连素组每日DAI评分显著低于模型组(P＜0.05,P＜0.01);结肠长度黄连素高、低剂量组显著长于模型组(P＜0.01);结肠组织HE染色观察发现黄连素高、低剂量组炎性反应损伤明显轻于模型组;结肠组织中IL-6、TNF-α含量黄连素高、低剂量组显著低于模型组(P＜0.01),JAK2、STAT3磷酸化水平黄连素高、低剂量组明显低于模型组(P＜0.01).结论:黄连素预防DSS诱导结肠炎症状及结肠组织炎性反应损伤程度,可能是通过抑制IL-6/STAT3信号通路而起到了治疗作用,黄连素可以作为IBD急性期的一种有效的预防药物.
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当归超临界提取物对AOM/DSS诱导的小鼠炎症相关性结直肠癌的化学预防作用
采用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠(AOM/DSS)诱导的雄性小鼠结肠癌模型,研究当归超临界提取物对诱发小鼠结肠癌的化学预防作用,并探讨其可能的作用机制.给予雄性Balb/c小鼠单剂量皮下注射AOM(10 mg· kg-1),1周以后,给予2％ DSS饮用7d,诱导结直肠癌.分别按照15,30,60 mg·kg-1灌胃给予药物组当归超临界提取物至第17周.当归超临界提取物组肿瘤发生率、小鼠的荷瘤数及荷瘤体积均低于AOM/DSS模型对照组.这可能与当归超临界提取物能够显著降低AOM/DSS诱导的小鼠炎症相关结直肠癌模型中PCNA,COX-2,iNOS的表达有关.研究结果表明,当归超临界提取物对AOM/DSS诱导的小鼠炎症相关性结直肠癌的发生、发展有一定的干预作用,可进一步用于人类结直肠癌的化学预防研究.
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红活麻总香豆素对葡聚糖硫酸钠所致小鼠结肠炎的作用研究
目的:研究红活麻总香豆素对葡聚糖硫酸钠(DSS)所致结肠炎小鼠的防治作用.方法:采用DSS诱发小鼠溃疡性结肠炎模型,给予红活麻总香豆素后,观察结肠炎小鼠体重变化,ELISA检测血清IL-6,IL-10,TGF-β1,IFN-γ的水平,分离结肠组织进行病理学检查,Western blot检测结肠组织TLR4和NF-κB的表达水平.结果:红活麻总香豆素能有效控制结肠炎小鼠体重下降；降低血清IL-6,IFN-γ,升高抑制性细胞因子IL-10,TGF-β1水平；减少结肠组织损伤,降低结肠组织TLR4和NF-κB的表达水平.结论:红活麻总香豆素通过调节促炎/抗炎细胞因子的水平,降低结肠组织TLR4和NF-κB的表达,发挥抗小鼠结肠炎的作用.
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锡类散结肠溶胶囊对DSS诱导小鼠结肠炎的干预作用研究
目的：探讨锡类散结肠溶胶囊对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导小鼠溃疡性结肠炎的疗效及可能作用机制。方法：BALB/c 雄性小鼠40只，随机分为正常组、模型组、对照组、治疗组，10只/组。除正常组饮用普通的饮用水外，其余各组小鼠饮予含5%DSS的饮用水7d，复制溃疡性结肠炎模型。对照组给予柳氮磺吡啶0.4g·kg-1·d-1、治疗组给予锡类散结肠溶胶囊，正常组、模型组给予同体积生理盐水，连续10d。观察小鼠结肠重量/单位长度比值变化，疾病活动度指数（DAI）及病理组织学损伤情况，采用免疫组化技术检测结肠黏膜肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素（IL-10）含量。结果：治疗组与对照组小鼠腹泻、便血情况明显好转，DAI评分均低于模型组；模型组小鼠结肠重量/单位长度比值与正常组、对照组、治疗组比较有显著性差异；经病理学观察，正常组小鼠结肠黏膜皱襞纹理清晰，无炎细胞浸润，模型组小鼠结肠可见充血水肿，伴有局部糜烂、溃疡，有较多炎细胞浸润，而治疗组与对照组小鼠组织学损伤均有所缓解，结肠充血水肿及炎细胞浸润现象减轻，溃疡面减少；与模型组比较，对照组、治疗组TNF-α水平明显降低，而IL-l0水平明显上调。结论：具有结肠定位释放效应的锡类散结肠溶胶囊对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎呈现较好的治疗效应，能明显缓解模型小鼠炎性症状。normal saline by gavage daily； the SASP control group and the XileiSan Jiechangrong capsule treatment group were administered with SASP 0.4g·kg-1·d-1 and the XileiSan Jiechangrong capsule by gavage daily respectively. The body weight and stool consistency and occult or gross blood were recorded to calculate the disease activity index. The ratio of colon weight and length were evaluated. The macroscopic and histopathological changes of the mice colon were observed. The level of TNF-α and IL-l0 were assessed by immunohistochemical method. Results： Compared with the DSS model group, the SASP control group and the XileiSan Jiechangrong capsule group signiifcantly ameliorated the symptom of UC and histopathological, reduced colonic DAI, decreased the levels of colonic TNF-α and increased the levels of colonic IL-10. Conclusion： The XileiSan Jiechangrong capsule demonstrated good effects on ulcerative colitis induced DSS. It provided an experimental basis to the research and development of XileiSan Jiechangrong capsule.
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CRF2受体拮抗剂Astressin2B减轻葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠实验性结肠炎
炎性肠病的研究多集中在遗传、免疫及微生物等方面，近年发现神经肽也参与该病发生，其中促肾上腺皮质激素释放因子（corticotrophin-releasing factor， CRF）不仅在脑组织中存在，周围组织也有表达，后者与炎性反应发生有关［1］，溃疡性结肠炎肠道炎性组织中CRF的表达增高， CRF基因敲除小鼠或CRF2受体缺陷小鼠肠道炎性反应减轻［2］，提示周围型CRF信号系统活化与肠道炎性的发生有关，Astressin2B是一选择性的CRF2受体拮抗剂，因其不通过血-脑脊液屏障，可以保证其对肠黏膜的局部作用，而不影响中枢组织的CRF2受体，本实验观察Astressin2B对肠道炎性反应改善作用及其可能机制。
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旋毛虫成虫可溶性虫体蛋白对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠急性结肠炎的影响
本文探讨旋毛虫成虫可溶性虫体蛋白(Soluble adult proteins,SAP)对葡聚糖硫酸钠(Dextran sulphate sodium,DSS)诱导的C57 BL/6小鼠结肠炎的影响.将36只小鼠随机均分为3组:对照组(PBS 组)、肠炎组(PBS+ DSS组)、虫体蛋白治疗组(SAP+ DSS组).小鼠连续饮用3％DSS溶液7d诱发急性肠炎,对照组给予双蒸水.诱发肠炎的同时,治疗组每天经腹腔注射25μg虫体蛋白,肠炎组注射PBS.每天观察对照组和实验组小鼠的临床表现,并进行临床疾病活动指数(DAI)评分.第7d将小鼠处死,观察结肠肉眼或大体病变及组织病理改变.同时提取小鼠脾淋巴细胞和肠系膜淋巴结细胞,用酶联斑点免疫试验检测细胞因子水平.结果显示,与肠炎组相比,虫体蛋白治疗组的小鼠肠炎症状明显缓解,结肠病理变化较轻,脾淋巴细胞和肠系膜淋巴结细胞的Th1型细胞因子IFN-γ分泌水平下降,Th2型细胞因子IL-4和调节性细胞因子IL-10分泌水平显著升高.表明旋毛虫可溶性成虫虫体蛋白对DSS诱导的C57BL/6小鼠结肠炎有缓解作用.
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内质网应激标志蛋白GRP78在小鼠实验性结肠炎中的表达研究
目的：探讨内质网应激标志蛋白GRP78在小鼠实验性结肠炎组织中的表达情况。方法将8周龄C57BL/6小鼠随机分为对照组、葡聚糖硫酸钠（DSS）组，每组7只，对照组正常饮水，DSS组饮用含2.5% DSS的饮水，共6 d建立小鼠急性结肠炎模型。通过疾病活动指数评分（DAI）、测量结肠长度、HE染色病理评分、炎性指标TNFα和IL-6 mRNA检测来评估结肠炎症损伤程度。采用免疫组织化学法和实时定量PCR法检测结肠组织中GRP78蛋白和mRNA表达情况。结果对照组未见肠炎表现，DSS组小鼠出现典型结肠炎表现。DSS组炎性指标 TNFα和IL-6 mRNA均较对照组显著升高。GRP78蛋白和mRNA在对照组高表达，在DSS 组表达显著减少（P＜0.05）。结论 GRP78在维持肠道正常生理功能中发挥重要作用，炎症状态下其表达受抑制。
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髓系衍生抑制性细胞在溃疡性结肠炎相关性结肠癌中的作用
目的研究溃疡性结肠炎相关性结肠癌小鼠骨髓及脾脏中髓系衍生抑制性细胞（ MDSCs）比例的变化，探讨其在结肠癌发生发展中的作用。方法采用氧化偶氮甲烷（ AOM）联合葡聚糖硫酸钠（ DSS）建立溃疡性结肠炎癌变的动物模型，同时流式细胞仪检测正常小鼠、溃疡性结肠炎小鼠、癌变小鼠骨髓和脾脏中MDSCs的比例。结果溃疡性结肠炎及溃疡性结肠炎相关性结肠癌小鼠骨髓和脾脏中MDSCs的比例较正常小鼠显著增高（ P＜0.05）。结论 AOM联合DSS所诱导的溃疡性结肠炎相关性结肠癌小鼠骨髓和脾脏中MDSCs比例的增加与结肠癌发生发展密切相关。
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中药肠炎清治疗小鼠葡聚糖硫酸钠所致结肠炎的机制
目的:探讨肠炎清的疗效及其机制.方法:以葡聚糖硫酸钠(DSS)饮水法复制小鼠实验性结肠炎40只,随机平均分为4组:肠炎清中药组、柳氮磺胺吡啶(SASP)西药组、肠炎清和SASP中西药结合组和模型组.观察肠炎清(灌胃剂量为0.2 mL/(20g·d)、1次/d、疗程7 d)对疾病活动指数(DAI)和肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性及TNF-α、IL-1 β和IL-6mRNA表达的影响.结果:与模型组相比,肠炎清可降低DAI(1.413±0.835 vs 2.167±0.911,P＜0.05)和MPO活性(72.4±0.590 nkat/g vs 117.0±0.902nkat/g,P＜0.05),并降低肠组织TNF-α(0.841±0.190 vs 1.320±0.282,P＜0.05)、IL-1β(0.641±0.095 vs 0.920±0.082,P＜0.05)和IL-6 mRNA (1.241±0.247 vs 1.620±0.312,P＜0.05)的表达,中西医结合组以上指标下降更为明显(DAI:0.608±0.449;MPO:27.3±0.211;TNF-α:0.339±0.081;IL-1β:0.239±0.073;IL-6:0.639±0.141)(P＜0.01).肠炎清与柳氮磺胺吡啶(SASP)的作用相当(P＞0.05).结论:肠炎清可治疗DSS结肠炎,其降低肠组织TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的表达可能是其疗效机制之一.
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双歧杆菌三联活菌对DSS诱导结肠炎鼠肠紧密连接蛋白JAM-1的影响
目的:探讨双歧杆菌三联活菌对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的结肠炎小鼠肠道炎症及紧密连接蛋白连接黏附分子l(junctional adhesion molecule-1,JAM-1)表达与分布的影响.方法:将SPF级♀Balb/c小鼠(8-10周龄)随机分为5组:正常对照NC组、益生菌BB组(正常小鼠予益生菌灌胃14 d)、急性DSS模型组(生理盐水灌胃14 d+第8天起4％DSS溶液自由饮用7 d)、BD组(益生菌灌胃7d+第8天起4％DSS溶液自由饮用7 d)、BDB组(益生菌灌胃14 d+第8天起4％DSS溶液自由饮用7 d).记录小鼠每日体质量变化.第15天处死小鼠、分离结肠,观察各组肠道损伤情况,以组织病理学积分评估结肠炎的严重程度.采用Western blot法、免疫组织化学法(IHC)检测结肠组织中JAM-1的表达及分布.结果:与DSS模型组相比,益生菌干预组(BD、BDB组)小鼠减轻的体质量得到不同程度恢复(95.17％±3.34％、87.17％±1.83％vs 81.49％±2.16％,P1 ＜0.01,P2=0.08),病变结肠缩短程度、肠黏膜水肿,上皮细胞破坏程度及肠道炎症细胞浸润减轻,且BD组小鼠的改善程度优于BDB组.Western blot结果显示给予益生菌干预,BD、BDB组肠黏膜组织JAM-1蛋白的表达水平较DSS组显著增加(0.725±0.027、0.739±0.033 vs 0.454±0.073,均P＜0.05).免疫组织化学结果显示DSS模型组小鼠结肠黏膜JAM-1染色强度明显减弱,染色细胞数减少,分布散乱、中断,益生菌处理后JAM-1染色强度及阳性细胞数减少程度显著改善.仅给予益生菌灌胃的小鼠,体质量、结肠大体、镜下表现以及结肠组织中JAM-1蛋白表达水平及分布,与正常小鼠无显著差异(P＞0.05).结论:双歧杆菌三联活菌可能通过影响JAM-1蛋白的表达与分布,改善肠黏膜的屏障功能,从而减轻小鼠急性期肠道炎症反应.
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平滑肌特异性PGC-1α转基因小鼠抗急性结肠炎的效应及其机制
目的:探讨平滑肌特异性过表达过氧化物酶增殖体激活受体y辅助激活因子1α(SMC-PGC-1α)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠急性结肠炎的影响.方法:按照SMC-PGC-1α转基因阴性/阳性(non-Tg/Tg)及诱导与否分为4组,每组10-13只.诱导组给予3％DSS自由饮用7 d诱导急性结肠炎,对照组则给予正常饮用水.通过疾病活动指数(disease activity index,DAI)评估及结肠组织病理学评分(histopathological score,HPS)来明确SMC-PGC-1α过表达对DSS诱导的小鼠急性结肠炎的影响,并通过对结肠炎相关基因mRNA表达水平的检测来研究SMC-PGC-1α抗结肠炎的作用机制.结果:诱导组相较于对照组:(1)体质量减轻明显(P＜0.01); (2)DAI明显升高(P＜0.01);(3)结肠长度明显缩短(non-Tg组中5.0 cm+0.3 cm vs 7.8 cm+0.2 cm; Tg组中4.9 cm+0.1 cm vs 8.0cm+0.3 cm,P＜0.01); (4)HSP明显加重(nonTg组中9.6+1.2 vs 1.2+0.4; Tg组中5.0+0.8 vs 1.2+0.6,P＜0.01).说明肠炎造模成功.诱导组中,Tg组相较于non-Tg组:(1)DAI明显降低(P＜0.01); (2)HPS明显减轻(5.0+0.8 vs 9.6+1.2,5.0+0.8 vs 1.2+0.6,P＜0.01); (3)TNFα基因表达水平降低(0.24+0.07 vs 0.45+0.10,P＜0.05);(4)PPARγ基因表达水平增高(0.98+0.15 vs 0.41+0.07,P＜0.05).结论:SMC-PGC-1α过表达可能通过激活PPARγ,降低炎症因子TNFα的表达,从而在DSS诱导的急性结肠炎中对结肠起到保护作用.
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Syndecan-1在急性结肠炎及慢性化小鼠模型中的表达及其意义
目的:探讨Syndecan-1在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎中的表达及其在肠道炎症中的作用.方法:54只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组和模型组,每组27只.模型组自由饮用3%DSS溶液,5 d后改饮用蒸馏水2、vk,建立急性结肠炎慢性化模型.正常对照组饮用蒸馏水19 d.于实验第5、12、19天分别处死2组各9只小鼠.HE染色评价小鼠结肠组织学改变:RT-PCR检测小鼠肠黏膜Sdc-1 mRNA及IL-8mRNA表达:免疫组织化学检测小鼠肠黏膜Sdc-1蛋白的表达.结果:第5、12、19天模型组小鼠结肠组织学评分均高于对照组(2.17±1.03、2.60±1.73、1.18±0.75 vs 0.04±0.13,均p<0.05);模型组小鼠肠黏膜Sdc-l mRNA表达水平均明显低于对照组(1.58±0.13、1.39±0.17、1.78±0.08 vs2.12±0.03,均P<0.05);模型组小鼠肠黏膜细胞表面Sdc-1蛋白水平均明显低于对照组(1.59±0.12、1.43±0.12、1.81±0.10 vs 2.20±0.04.均P<0.01);模型组小鼠结肠黏膜IL-8 mRNA表达评分均高于对照组(1.20±0.15、1.53±0.05、1.65±0.04 VS 1.02±0.08,均P<0.01).结论:小鼠结肠炎症的严重程度可能与肠黏膜Sdc-1 mRNA及蛋白表达水平减低均有关,而肠黏膜Sdc-1mRNA及蛋白表达水平减低可能与肠黏膜IL-8水平增高有关.
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姜黄素对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的疗效
目的:观察姜黄素对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的疗效,并探讨其作用机制.方法:选♀BALB/c小鼠60只,随机分为4组,每组15只.A组:正常对照组:B组:DSS结肠炎组,小鼠每日自由摄取5%DSS溶液:C组:姜黄素治疗组,小鼠自由摄取5%DSS溶液,每日腹腔注射姜黄素悬液30 mg/kg;D组:地塞米松治疗组,饮用5%DSS溶液,每日腹腔注射一次地塞米松针剂0.4 mg/kg.各组小鼠每日记录疾病活动指数(DAI)评分,HE染色观察小鼠结肠黏膜组织学改变.ELISA法测定结肠组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6含量.免疫组织化学染色观察核因子-κB(NF-κB)在结肠组织炎性细胞内的表达情况.Western blot检测结肠组织胞质NF-κB抑制蛋白IκB的表达情况.结果:DAI与组织学损伤评分显示C、D组分别与B组比较差异有统计学意义(DAI:1.64±0.92,2.80±0.92vs 7.67±1.56;组织学损伤评分:1.36±0.50,2.00±0.67 vs 2.83±0.83.均P＜0.01),C、D组比较差异有统计学意义(P＜0.01).TNF-α(ng/L)、IL-6(ng/L)的浓度在B组明显升高,且高于C、D组(TNF-α:102.75±3.52 vs 75.91±1.59,78.25±2.15:IL-6:80.94±3.26vs 59.65±1.39,65.57±4.04,均P＜0.01);NF-κB在C、D组中的表达较B组显著下降(2.73±0.79,4.22±1.09 vs 7.92±1.24,均P＜0.01),C、D组之间仍有统计学意义(P＜0.05).IκBα在C、D、B组中的表达水平逐渐降低,C、D组和B组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:姜黄素可以有效治疗DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎,其疗效优于地塞米松.其机制可能是通过抑制NF-κB信号通路及调节细胞因子TNF-α、IL-6等的释放而发挥作用.
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STAT3、PPAR-γ在小鼠溃疡性结肠炎的作用及姜黄素的影响
目的:探讨姜黄素通过信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)通路对小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型的作用,以及姜黄素对环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)的影响.方法:将♀BALB/c小鼠60只,随机分为6组,每组10只.A组:正常对照组;B组:模型组;C组:地塞米松组[1.5 mg/(kg·d)];L组:姜黄素低剂量组[25 mg/(kg·d)];M组:姜黄素中剂量组[50 mg/(kg·d)];H组:姜黄素高剂量组[100 mg/(kg·d)].小鼠UC模型采用葡聚糖硫酸钠诱导,观察小鼠疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分,HE染色观察结肠组织学改变以及免疫组织化学测PPAR-γ、STAT3,ELISA测COX-2的表达,Westem blot测p-STAT3的表达,逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)测STAT3mRNA的表达.结果:(1)B组小鼠症状、组织学都符合UC标准,DAI评分和组织学评分均高于A组,C组、L组、M组、H组DAI评分和组织学评分较B组都有不同程度的下降;(2)免疫组织化学显示:B组小鼠结肠PPAR-γ低于A组(23.15±2.33 vs 42.07±3.82,P＜0.01);B组小鼠结肠STAT3比A组、C组、L组、M组、H组高(66.36±6.08 vs 28.25±2.84,29.84±3.32,45.26±5.42,29.02±3.28,21.22±3.30,P＜0.01);(3)ELISA显示与B组相比,C组、L组、M组、H组COX-2含量较B组低(P＜0.01);(4)Western blot检测显示B组p-STAT3蛋白水平相比A组明显上升,C组、L组、M组、H组水平较B组降低(P＜0.05);(5)RT-PCR显示结肠组织STAT3 mRNA的表达:B组STAT3 mRNA表达水平相比A组明显上升,C、L、M、H组水平较B组降低(P＜0.05).结论:(1)STAT3、PPAR-γ可能参与了溃疡性结肠炎的发病;(2)姜黄素治疗小鼠UC模型的机制可能通过提高PPAR-γ的含量,抑制STAT3信号通路,减少COX-2的释放,减轻中性粒细胞的浸润,从而减轻小鼠结肠黏膜的损伤而达到治疗UC的作用.
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结肠黏膜低度炎症对大鼠内脏感觉的影响
目的: 探讨结肠黏膜低度炎症(lowgrademucosal inflammation, LGMI)对大鼠内脏感觉的影响.方法: 健康♂SD大鼠40只, 随机分为LGMI组和对照组( n = 20). LGMI组大鼠给予15 g/L葡聚糖硫酸钠(DSS)饮用7 d, 然后饮用蒸馏水7 d, 对照组大鼠饮用蒸馏水. 第14天进行气囊扩张大鼠腹部回缩反射(AWR)评分和腹壁肌电测定; 实验结束后取结肠组织作常规病理学检查; 免疫组织化学染色观察腰膨大部脊髓c-Fos、P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)表达变化.结果: LGMI组大鼠结肠黏膜炎症评分为1.56±0.78分, 对照组为0.46±0.54分, 2组比较差异有显著性意义( P = 0.003). 当结肠气囊压力为20 mmHg时, 2组大鼠的AWR评分和腹壁肌电幅值差异均无统计学意义; 当气囊压力为40、60、80 mmHg时, LGMI组的AWR评分和腹壁肌电幅值明显高于对照组(均P<0.05).LGMI组大鼠腰骶段脊髓c-Fos、SP、CGRP的平均吸光度值均高于对照组(165.26±10.12vs 126.52±11.48, 134.28±10.62 vs 120.82±8.92, 157.66±6.25 vs 118.67±5.68, 均P<0.01).结论: LGMI触发了内脏感觉过敏, 可能在IBS的发病中起重要作用.
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葡聚糖硫酸钠致溃疡性结肠炎大鼠模型的肠道微生态
目的:采用多聚酶链反应-变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)技术研究葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)所致溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠肠道菌群的多样性和丰度,从“肠道微生态”这一全新角度为该模型提供更丰富的数据,也为深入探讨UC的发生发展提供新的实验依据.方法:26只健康♂SD大鼠随机分为空白组和UC模型组,模型组饮用4％的DSS溶液7d复制UC模型.收集两组大鼠粪便排泄物,采用PCR-DGGE法研究肠道菌群的多样性、相似性及丰度;对优势条带进行回收测序,鉴定菌种.所得结果及数据采用Quantity one、Chromas、MGAE5、SIMCA-P+及SPSS18.0等软件进行分析.结果:DSS诱导UC后7d,模型大鼠出现便血、病理形态学改变等典型的UC炎性病变特征.样本优势条带菌种鉴定显示大鼠的肠道细菌主要归属于拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)及变形菌门(Proteobacteria)3大类,但与空白组相比,模型组肠道菌群的丰度及多样性指数明显降低(P＜0.05).菌种鉴定表明UC组乳酸杆菌(Lactobacillus sp)和毛螺科菌(Lachnospiraceae bacterium)菌种显著较少,而双酶梭菌(Clostridium bifermentans)等菌种含量明显增多(均P＜0.05).结论:饮用4％DSS溶液7d造成的UC大鼠模型的肠道微生态存在显著失衡,多样性和丰度均下降,含量变化较为显著的是乳酸杆菌、毛螺科菌和双酶梭菌.
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BALB/C小鼠炎症性肠病动物模型建立方法探讨
目的:对三硝基苯磺酸(TNBS)、葡聚糖硫酸钠(DSS)及恶唑酮三种外源性化学刺激物建立的BALB/C小鼠炎症性肠病(IBD)模型的特征加以比较探讨,以筛选合适的克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)的动物模型.方法:将BALB/C小鼠50只随机平均分成5组,即恶唑酮组、TNBS组、DSS组、A对照组(500 mL/L乙醇灌肠)、B对照组(自由饮用蒸馏水),每组小鼠给药后观察并记录每只小鼠一般变化,实验第8 d处死全部小鼠,留取结肠标本,行病理切片检查.结果:恶唑酮组、TNBS组、DSS组小鼠给药后均出现IBD的一般表现,恶唑酮组、TNBS组及DSS组小鼠DAI计分分别较A对照组及B对照组有统计学差异(P<0.05).恶唑酮组、DSS组小鼠病理改变类似人UC病理改变,病理计分较A、B对照组有统计学差异(P<0.05);TNBS组小鼠病理改变类似人CD病理改变,病理计分较A对照组有统计学差异(P<0.05).结论:BALB/C小鼠恶唑酮致敏后灌肠及自由饮用DSS能够诱导出较理想的病理改变类似于人UC的动物模型;TNBS灌肠能够诱导出较理想的病理改变类似于人CD的动物模型.
