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百草枯对小胶质细胞TLR-4蛋白及TNF-α和IL-1β基因表达水平的影响
目的 探讨百草枯(paraquat,PQ)对小胶质细胞TLR-4蛋白及TN F-α和IL-1β基因表达水平的影响,为进一步探究百草枯诱导小胶质细胞炎症反应可能的作用机制提供线索.方法 小鼠小胶质(BV2)细胞分为PQ(40 μmol/L)染毒组、LPS阳性对照组(1μg/ml)和阴性对照组,分别处理6、12和24 h.Western blotting法检测TLR-4蛋白表达,荧光定量PCR法检测TNF-α和IL-1β基因表达水平.结果 6、12和24 h,PQ染毒组、LPS阳性对照组小胶质细胞TLR-4蛋白表达水平、TNF-α和IL-1β基因表达水平均显著增加.结论 PQ能增加小胶质细胞TLR-4蛋白表达,进而可能激活TLR-4信号通路,使炎症因子表达增加,诱导炎症反应.
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不同类型脂肪酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用及Toll样受体4表达的影响
目的 观察不同类型脂肪酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用及探讨可能的作用机制.方法 250 μmol/L的棕榈酸(PA)、花生四烯酸(AA)以及二十碳五烯酸(EPA)分别与HepG2细胞共同培养24 h,葡萄糖氧化酶法测定细胞上清液中葡萄糖含量,酶联免疫吸附法测定炎性因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,以及实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Toll样受体4(TLR4) mRNA的表达.结果 PA组培养液中葡萄糖含量显著高于空白对照组(P＜0.05),EPA组可增加葡萄糖消耗量,与PA组及AA组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).各脂肪酸干预组细胞上清液中炎性因子IL-6和TNF-α含量均增加,EPA组增加量低,PA组和AA组上清液中IL-6含量与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05).各脂肪酸干预组与空白组比较TLR4 mRNA表达量均增加(P均＜0.05),EPA组增加量低.结论 高浓度PA降低了HepG2细胞对胰岛素的敏感性,能够引起胰岛素抵抗,AA具有降低胰岛素敏感性的趋势,而EPA则具有增加胰岛素敏感性的趋势,TLR4信号转导通路及其启动的炎症反应可能是其重要的作用机制.
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Toll样受体4基因多态性与2型糖尿病并发肺结核患者发生糖尿病性下肢血管病变的关系研究
目的 探索Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)基因多态性与2型糖尿病并发肺结核(type 2 diabetes mellitus complicated with pulmonary tuberculosis,T2DM-PTB)患者发生糖尿病性下肢血管病变(lower extremity arterial disease,LEAD)的关系.方法 选取2013年9月至2015年6月期间,在黑龙江省传染病防治院就诊的T2DM-PTB发生LEAD的患者87例(观察组)及T2DM-PTB未发生LEAD患者68例(对照组),所有患者于纳入研究时采集基本信息及血液样本.基因组DNA提取试剂盒提取血液DNA,采用实时荧光定量PCR技术(Taqman探针法)对TLR4基因的3个基因位点(rs7873784、rs1927911及rs1927914)进行基因多态性检测.结果 观察组和对照组的TLR4基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点等位基因分布:rs7873784位点G等位基因两组分别为91.38％(159/174)、91.18％(124/136),C等位基因两组分别为8.62％(15/174)、8.82％(12/136),两组间差异无统计学意义(x2=0.00,P=0.950);rs1927911位点T等位基因两组分别为59.20％(103/174)、61.76％(84/136),C等位基因两组分别为40.80％(71/174)、38.24％(52/136),两组间差异无统计学意义(x2 =0.21,P=0.646);rs1927914位点T等位基因两组分别为59.77％(104/174)、64.71％(88/136),C等位基因两组分别为40.23％(70/174)、35.29％(48/136),两组间差异无统计学意义(x2=0.79,P=0.374).观察组和对照组的TLR4基因SNP位点基因型分布:rs7873784位点GG基因型两组分别为82.76％(72/87)、82.35 ％(56/68),GC基因型两组分别为17.24％(15/87)、17.65％(12/68),两组间差异无统计学意义(x2=0.00,P=0.947);rs1927911位点TT基因型两组分别为32.18％(28/87)、35.30％(24/68),CT基因型两组分别为54.02％(47/87)、52.94％(36/68),CC基因型两组分别为13.80％(12/87)、11.76％(8/68),两组间差异无统计学意义(x2 =0.24,P=0.887);rs1927914位点TT基因型两组分别为33.33％(29/87)、42.65％(29/68),CT基因型两组分别为52.87％(46/87)、44.12％(30/68),CC基因型两组分别为13.80％(12/87)、13.23％(9/68),两组间差异无统计学意义(x2=1.49,P=0.475).TLR4基因rs7873784位点:与野生纯合基因型GG相比,GC基因型的调整OR值为0.90(95％CI:0.39～2.06,P=0.80).rs1927911位点:与野生纯合基因型TT相比,CT基因型及CC基因型的调整OR值分别为1.00(95％CI:0.51～1.97,P=1.00)和1.29(95％CI:0.46～3.66,P=0.63);rs1927914位点:与野生纯合基因型TT相比,CT基因型及CC基因型的调整OR值分别为1.27(95％CI:0.64～2.51,P=0.49)和1.24(95％CI:0.47～3.27,P=0.67).3个基因位点各基因型间的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论 TLR4基因rs7873784、rs1927911和rs1927914位点多态性与T2DMTB患者发生LEAD无关.
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类风湿关节炎外周血TLR4表达及其与IL-37水平的相关性
目的 研究类风湿关节炎(RA)外周血Toll样受体4(TLR4)表达水平,并观察其与白介素-37(IL-37)的相关性.方法 选取2015年5月-2016年5月潍坊医学院附属医院收治的45例RA患者为研究组,另选取同期骨21例关节炎患者为骨关节炎组,健康体检者21名为对照组,应用流式细胞仪检测入选者外周血TLR4表达,并观察其与IL-37水平相关性.结果 研究组TLR4阳性率和IL-37水平为(28.43±3.21)％和(78.56±8.97)ng/L,均显著高于骨关节炎组的(10.21±4.32)％、(17.25±5.68)ng/L和对照组的(13.08±2.05)％、(10.08±2.56)ng/L,比较差异具有统计学意义(P＜0.05),骨关节炎组和对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);相关性分析显示:TLR4阳性率与IL-37水平呈正相关关系.结论 RA患者外周血TLR4表达上调,且与IL-37水平呈正相关关系.
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甲氨蝶呤对寻常型银屑病外周血TLR4及TLR9表达调控的研究
目的:研究甲氨蝶呤(MTX)对寻常型银屑病患者外周血Toll样受体(TLR)4和TLR9表达的影响.方法:利用荧光定量聚合酶链反应法测定22例寻常型银屑病患者治疗前后外周血及20例正常对照者外周血中TLR4mRNA及TLR9mRNA的定量表达.结果:银屑病外周血中TLR4mRNA及TLR9mRNA的表达均高于正常对照者外周血的表达水平(t=11.26,P＜0.001;t=8.39,P＜0.001).银屑病患者经过MTX治疗4 w后,病情明显改善,外周血中TLR4mRNA及TLR9mRNA的表达水平低于患者治疗前的表达水平(t=3.49,P=0.0015;t=7.75,P＜0.001),但与正常对照者的表达水平差异无统计学意义(t=1.76,P=0.0925;t=1.38,P=0.1741).结论:TLR4及TLR9的表达增高与银屑病的发病有关.MTX能抑制寻常型银屑病外周血TLR4mRNA及TLR9mRNA的过度表达,这可能是MTX治疗银屑病的作用机制之一.
关键词： 甲氨蝶呤 银屑病 Toll样受体4 Toll样受体9 荧光定量聚合酶链反应 -
TLR-4在多器官功能障碍综合征大鼠肺组织表达的变化及意义
目的:检测TOLL样受体4(TLR4)在多器官功能障碍综合征大鼠肺组织中表达的变化,探讨其与肺组织中血栓调节蛋白(TM)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的关系.方法:雄性SD大鼠采用二次打击建立MODS模型,随机分为正常对照组和MODS模型6 h,12 h,24 h,48 h组,不同时相点处理动物.肉眼、光镜观察肺组织的形态结构变化;流式细胞技术(FCM)检测TLR-4蛋白表达;免疫组化法测定TM和MMP-9蛋白表达.结果:①正常对照组肺组织结构无改变;MODS组肺组织损伤较重;②与对照组比较,造模后6 h肺组织TLR4的表达显著增高,12 h达到高峰,24～48 h开始下降;③与对照组相比,肺组织TM的阳性表达6h组有所增加,12 h达到高峰,随后24～48 h下降,至48 h与正常对照组TM的阳性表达无显著性差异.肺组织MMP-9的阳性表达6～48 h组均比正常对照组有所增加.结论:在MODS肺组织发生病变的早期,TLR4表达上调,TLR-4的激活可能通过促进多种炎性因子的分泌损伤肺内皮细胞和基质,TLR4可能参与了MODS后肺组织损伤的病理生理过程,有可能成为治疗MODS的新靶点.
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针灸联合中药保留灌肠对急性盆腔炎患者子宫血流动力学及血清高迁移率族蛋白1与toll样受体4水平的影响
目的 探讨针灸联合中药保留灌肠对急性盆腔炎患者子宫血流动力学指标及血清高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)、toll样受体4(toll-like Receptor 4,TLR4)水平的影响.方法 将符合入选标准的66例急性盆腔炎患者按随机数字表法分为2组,每组33例.常规治疗组采用西医常规治疗治疗,联合治疗组在常规治疗组基础上给予针灸联合中药保留灌肠治疗.2组均治疗10d.采用彩色多普勒超声诊断仪检测子宫血流动力学指标,包括大血流速度(maximum velocity,Vmax)、搏动指数(pulsatility index,PI)、阻力指数(resistance index,RI).采用ELISA法检测血清HMGB1、TLR4水平,评价临床疗效.结果 联合治疗组总有效率为90.91%(30/33)、常规治疗组为69.70%(23/33),2组比较差异有统计学意义(χ2=8.246,P<0.05).治疗后,联合治疗组Vmax左侧[(39.16±0.73)cm/s比(35.47±0.83)cm/s]、右侧[(41.23±1.12)cm/s比(36.24±0.75)cm/s]高于常规治疗组(P<0.01),PI左侧[(2.23±0.25)cm/s比(3.11±0.45)cm/s]、右侧[(2.17±0.22)cm/s比(2.62±0.23)cm/s],RI左侧[(0.48±0.08)cm/s比(0.73±0.13)cm/s]、右侧[(0.43±0.11)cm/s比(0.71±0.16)cm/s]低于常规治疗组(P<0.01);血清HMGB1[(17.45±5.01)ng/ml比(21.32±6.15)ng/ml,t=2.803]、TLR4[(1.05±0.64)ng/ml比(1.75±0.91)ng/ml,t=3.614]水平低于常规治疗组(P<0.01).结论 针灸联合中药保留灌肠可较好改善急性盆腔炎患者子宫血流动力学状态,其机制可能与抑制HMGB1、TLR4释放及其诱发的炎症反应有关.
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槲皮素对脂多糖刺激巨噬细胞炎症因子释放的影响
目的 观察槲皮素对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞炎症因子释放的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法测定不同浓度槲皮素对RAW264.7细胞活性的影响.将细胞分为五组:A组(对照组)、B组(LPS干预组)、C组(LPS+槲皮素50 μmol/L)、D组(LPS+槲皮素150 μmol/L)和E组(LPS+槲皮素250μmol/L).real-time测定各组细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(Myd88)、NF-κB (p65) mRNA的表达；酶联免疫吸附测定(ELISA)测定各组细胞上清液白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌水平.结果 槲皮素在0～250 μmol/L浓度范围内对RAW264.7细胞活性没有影响.同对照组相比,槲皮素可有效降低LPS引起的TLR4、MyD88、NF-κB (p65)的mRNA表达和细胞上清液中IL-6、TNF-α分泌水平,并呈剂量依赖性(P＜0.01).结论 槲皮素可能通过抑制TLR-Myd88-NF-κB传导通路的活化,减少巨噬细胞炎症因子的分泌.
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楤木总皂苷对2型糖尿病模型小鼠肾组织Toll样受体的影响
目的 观察楤木总皂苷对2型糖尿病模型小鼠肾损伤的保护作用,探讨其作用机制.方法 将50只小鼠按随机数字表法分为正常组,模型组,楤木总皂苷低、中、高剂量组,每组10只.除正常组外,其余各组于高脂高糖饮食8周后一次性注射STZ溶液45 mg/kg,诱导2型糖尿病小鼠模型.造模成功后,楤木总皂苷低、中、高剂量组分别灌胃楤木总皂苷30、60、120 mg/kg,正常组和模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续给药8周.分别于给药后4、8周,检测各组小鼠24 h尿蛋白含量.末次给药后,检测各组小鼠血糖、胰岛素及血清TNF-α、IL-1β和NF-κB水平,采用免疫组化染色、Western blot法、实时定量PCR检验肾组织中Toll样受体(Toll-like-receptors, TLR)-2、TLR4蛋白和mRNA表达.结果 与模型组比较,楤木总皂苷低、中、高剂量组小鼠24 h尿蛋白含量、血糖、胰岛素抵抗指数降低(P<0.05),胰岛素含量增加(P<0.05),血清 TNF-α[(16.66±0.20)ng/L、(14.49±0.27)ng/L、(13.52± 0.22)ng/L 比(20.33±0.56)ng/L]、IL-1β[(0.46±0.04)ng/L、(0.44±0.04)ng/L、(0.37±0.04)ng/L 比(0.55± 0.05)ng/L]、NF-κB[(28.71±6.14)ng/L、(26.26±5.48)ng/L、(25.69±5.61)ng/L比(36.55±8.90)ng/L]含量降低(P<0.05),肾组织TLR2 mRNA [(1.92±0.18)、(1.46±0.23)、(1.28±0.21)比(2.69±0.22)]、TLR4 mRNA[(2.20±0.19)、(2.08±0.27)、(1.57±0.22)比(2.78±0.23)]、TLR2蛋白[(0.82±0.11)、(0.52± 0.06)、(0.44±0.07)比(0.77±0.13)]、TLR4蛋白[(0.52±0.04)、(0.42±0.09)、(0.26±0.06)比(0.86±0.12)]表达降低(P<0.05).结论 楤木总皂苷可明显降低2型糖尿病模型小鼠血糖、胰岛素抵抗指数和24 h尿蛋白,升高胰岛素,其作用机制可能与抑制肾组织TLR2和TLR4蛋白表达,降低炎症反应有关.
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益气活血中药黄芪-丹参对脂多糖致急性肺损伤大鼠防治作用的机制研究
目的：观察益气活血中药黄芪-丹参对脂多糖( lipopolysaccharide, LPS)致急性肺损伤( acute lung injury, ALI)大鼠TLR-4/NF-κB信号通路的影响。方法 SD雄性大鼠40只,随机分成正常对照组、模型对照组、地塞米松组、益气活血中药组,各组10只；除正常对照组气管内滴注生理盐水,其余各组滴注LPS(5 mg/kg)制备ALI模型；造模前后各3天干预组予以2 mL相应药物(益气活血中药0.59 g/mL或地塞米松5 mg/kg),其余组予以等量的生理盐水灌胃；于末次灌胃给药2小时后处死大鼠,免疫组织化学法检测大鼠肺组织中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR-4)、白介素1受体相关激酶1(interleukin-1 receptor-associated kinase-1,IRAK-1)、核转录因子κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)蛋白表达的含量,qPCR测定肺组织中TLR-4、IRAK-1、NF-κB mRNA表达量。结果 LPS造模组大鼠肺组织中TLR-4、IRAK-1、NF-κB mRNA表达和蛋白表达均高于正常对照组(P<0.01),且模型对照组高于地塞米松组和中药组(P<0.01)；中药组TLR-4、IRAK-1 mRNA表达和蛋白表达量与地塞米松组无明显差异(P>0.05),而NF-κB mRNA表达和蛋白表达量高于地塞米松组(P<0.05)。结论益气活血中药黄芪-丹参对LPS致ALI大鼠的防治作用可能与其下调TLR-4/NF-κB信号通路有关。
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橙皮苷对IgA肾病大鼠肾脏组织中TLR-4和NF-κB表达的影响研究
目的：研究橙皮苷对IgA 肾病大鼠肾脏组织中TLR-4和NF-κB表达的影响,探讨橙皮苷对肾脏是否有保护作用及其作用机理。方法雄性SD大鼠60只随机分为正常组、模型组和橙皮苷治疗组,IgA模型建立成功后,橙皮苷治疗组给予橙皮苷10 mg/( kg·d)灌胃治疗,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,治疗4周后、8周后分别处死大鼠,检测其24小时尿蛋白、血尿素氮、血白蛋白、白介素-1(interleukin-1,IL-1)和白介素-6(IL-6),免疫组化、RT-PCR以及Western blot检测肾组织中TLR-4和NF-κB表达。结果在整个实验过程中,正常组饮食正常,精神良好,模型组和橙皮苷治疗组在造模成功后表现有一定的食欲不振和精神萎靡,使用橙皮苷治疗后,上述情况有所缓解；与正常组相比,模型组24小时尿蛋白、血尿素氮、IL-1和IL-6明显升高(P<0.05),白蛋白明显下降(P<0.05),治疗4周后,上述指标有明显改善,治疗8周后其基本和治疗4周后一致；RT-PCR、Western blot和免疫组化可见,相较于正常组,模型组TLR-4和NF-κB蛋白及mRNA表达明显增加(P<0.05),橙皮苷治疗4周后,其有明显降低,治疗8周后,表达更弱(P<0.05)。结论橙皮苷可明显下调TLR-4和NF-κB的表达,进而降低炎症反应,改善肾功能,终保护肾脏组织。
关键词： 橙皮苷 IgA肾病 Toll样受体4 自然细胞杀伤因子-κB -
健心颗粒对慢性心衰大鼠心室肌 toll样受体4、肿瘤坏死因子-α蛋白表达的影响
目的：探讨健心颗粒对慢性心衰大鼠心室肌toll样受体(toll-like receptors, TLR)4、肿瘤坏死因子( tumor necrosis factor, TNF)-α蛋白表达的影响。方法将15周龄的自发性高血压大鼠120只随机分为培哚普利组、健心颗粒低剂量组、健心颗粒中剂量组、健心颗粒高剂量组、阴性对照组,每组24只。前四组分别予培哚普利0．36 mg/( kg·d),健心颗粒1．6 g/( kg·d)、3．2 g/( kg·d)、6．1 g/( kg·d),以2 mL生理盐水溶解,阴性对照组予生理盐水2 mL,灌胃给药,每天2次。实验后每7天各组分别随机处死6只大鼠,采用免疫印迹检测上述各点心室肌组织TLR4蛋白表达,免疫组织化学显色检测上述各点心室肌组织TNF-а蛋白表达。结果第7天,对照组、健心颗粒低、中、高剂量组间比较,大鼠心室肌 TLR4、TNF-α蛋白表达无显著差异( P>0．05 ),但培哚普利组明显下降(P<0．05)；第14天、21天,与对照组比较,其他各组大鼠心室肌TLR4、TNF-α蛋白表达均显著下降(P>0．05),但培哚普利组较其他组下降更明显(P<0．05)；第28天,与对照组比较,其他各组大鼠心室肌TLR4、TNF-α蛋白表达均显著下降(P>0．05),但培哚普利组、健心颗粒中、高剂量组明显低于低剂量组(P<0．05)。结论健心颗粒具有显著抗炎作用。
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丹蛭降糖胶囊对糖尿病大鼠心肌组织TLR4、TNF-α、IL-8表达和心脏病理影响
目的:本文主要探讨丹蛭降糖胶囊(Dan Zhi Jiang Tang Capsule,DJC)对糖尿病大鼠心肌组织Toll 样受体4(Toll-Like Receptor 4,TLR4)、肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factorα,TNFα)、白介素-8(Interleukin-8,IL-8)的干预及对心脏病理的影响.方法:取50只雄性大鼠,除正常组8只外,其余组给予高脂饲料喂养4周,按35 mg· kg-1给大鼠腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)1次,建立糖尿病大鼠模型.造模成功后将大鼠随机分为模型组、DJC高剂量组、DJC低剂量组、吡格列酮组.DIC高、低剂量组每日分别给予1.08、0.54 g·kg-1灌胃,吡咯列酮组予10 mg·kg-1灌胃,模型组、正常组予以等量生理盐水灌胃,连续8周,并继续喂高脂饲料;测定血糖、HbA1c、血脂;观察心肌组织TLR4、TNF-α、IL-8蛋白表达.结果:与正常组相比,模型组大鼠心肌组织TLR4、TNFα、IL-8表达增加(P＜0.01);与模型组相比,DJC高、低剂量组大鼠心肌组织TLR4、TNFα、IL-8表达减少(P＜0.05或P＜0.01).病理染色发现模型组大鼠心肌组织严重受损,DJC高剂量组大鼠心肌组织损伤程度明显减轻,且优于低剂量组和吡格列酮组.与正常组相比,模型组大鼠血糖、HbA1c、TG、TC、LDL-C水平明显升高(P＜0.05或P＜0.01),与模型组相比,DJC高、低剂量组大鼠血糖、HbA1c、TG、TC、LDL-C水平明显下降(P＜0.05或P＜0.01).结论:丹蛭降糖胶囊能够明显下调TLR4、TNF-α、IL-8高表达水平,减轻糖尿病大鼠心肌病变程度;具有良好的降糖调脂作用.
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艾灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠TLR4和TNF-α蛋白及其mRNA表达影响的研究
目的:观察艾灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠Toll样受体4(TLR4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白及其mRNA表达的影响,进一步探讨艾灸治疗溃疡性结肠炎的作用机制.方法:将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸组和柳氮磺胺吡啶(Sulfasalazine,SASP)组.采用隔药灸天枢和气海穴及SASP灌胃进行干预.干预结束后,应用HE染色光镜下观察各组大鼠结肠病理学变化,分别采用Westernblot法和FQ-PCR法检测大鼠结肠TLR4和TNF-α蛋白及其mRNA表达.结果:造模大鼠存在结肠组织病理学损伤,隔药灸组和SASP组大鼠结肠病理学与模型组相比均有一定的改善;与正常组比较,模型组大鼠结肠TLR4和TNF-α蛋白及其mRNA表达均显著增加(P＜0.05);经隔药灸和SASP干预后,大鼠结肠TLR4和TNF-α蛋白及其mRNA表达均显著降低(p＜0.05).结论:TLR4、TNF-α可能在溃疡性结肠炎中发挥炎症损伤作用,隔药灸能下调溃疡性结肠炎大鼠结肠TLR4和TNF-α的表达,提示其机制可能是通过下调TLR4和TNF-α表达介导的级联反应达到艾灸治疗溃疡性结肠炎的目的.
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艾灸对类风湿性关节炎大鼠踝关节滑膜组织Toll样受体4/核因子-κB信号通路的影响
目的:观察艾灸对类风湿性关节炎(RA)大鼠踝关节滑膜组织Toll样受体4/核因子-κB(TLR 4/NF-κB)信号通路的影响,分析艾灸治疗RA的生物学机制.方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、激动组、拮抗组,每组10只.风、寒、湿环境+弗氏完全佐剂复制RA模型.造模3 d后对艾灸组、激动组和拮抗组大鼠双侧"肾俞""足三里"穴各施灸20 min,激动组和拮抗组分别在艾灸前30 min经尾静脉注射TLR 4激动剂或拮抗剂.采用Western blot法测定各组大鼠踝关节滑膜组织NF-κB抑制因子α(IκBα)、IκB激酶复合物β(IκKβ)、髓样分化因子88(MyD 88)、TLR 4、NF-κB p 65蛋白的表达水平.结果:与正常组比较,造模后大鼠右后踝关节肿胀显著(P<0.01),踝关节滑膜组织IκBα、IκKβ、TLR 4、MyD 88、NF-κB p 65的表达水平均显著升高(P<0.01).与模型组比较,各治疗干预组大鼠右后踝关节肿胀度和踝关节滑膜组织IκKα、IκBβ、TLR 4、MyD 88、NF-κB p 65的表达水平均明显下降(P<0.01,P<0.05).与艾灸组比较,激动组右后踝关节肿胀度及踝关节滑膜组织IκBα、IκKβ、TLR 4、MyD 88、NF-κB p 65表达水平均升高(P<0.05,P<0.01);拮抗组踝关节滑膜组织IκBα、TLR 4、MyD 88、NF-κB p 65的表达水平显著降低(P<0.01).结论:艾灸能够显著减轻RA大鼠关节肿胀程度,RA的发病及艾灸对其治疗作用与TLR 4/NF-κB信号通路密切相关,艾灸可以有效抑制RA大鼠TLR 4/NF-Κb活化的信号途径,下调相关炎性因子的表达.
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电针对慢性神经痛大鼠穴区高迁移率族蛋白1及其受体CD24表达的影响
目的:观察电针干预治疗慢性压迫性损伤(CCI)大鼠过程中,大鼠"足三里"穴区局部高迁移率族蛋白1(HMGB 1)及其受体CD 24表达及β-内啡肽(β-EP)含量的变化,探讨穴区电针刺激缓解慢性神经痛的机制.方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组、CCI模型组、电针组,每组10只.正常对照组大鼠行假手术,其余两组结扎坐骨神经造成慢性神经痛模型.手术后1周开始测定大鼠双侧热刺激缩腿反应的潜伏期(PWL).电针组于CCI术后8 d电针双侧"足三里""阳陵泉"穴,连续5 d.电针结束后用免疫沉淀法检测"足三里"穴区乙酰化HMGB 1蛋白表达,用蛋白免疫印迹、荧光定量PCR分别检测HMGB 1和Toll样受体4(TLR 4)蛋白、CD 24 mRNA的表达,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测穴位局部组织β-EP的含量,并在穴位局部注射CD 24的中和抗体,观察阻断H M GB 1-CD 24通路对电针效应的影响.结果:与正常对照组比较,CCI后各组动物双侧PWL差值明显增加(P<0.05);与CCI模型组比较,电针组动物的痛觉过敏明显减轻(P<0.05).CCI后穴位局部的HMGB 1和TLR 4蛋白表达比正常对照组明显升高(P<0.05);电针后,和CCI模型组比较,HMGB 1乙酰化程度增高,CD 24 mRNA表达升高,同时穴位局部β-EP含量显著升高(P<0.05),但是HMGB 1及TLR 4蛋白表达未见明显变化(P>0.05).穴位局部注射CD 24的中和抗体后,电针升高局部β-EP含量、抑制动物痛觉过敏的作用明显减弱(P<0.05).结论:电针"足三里""阳陵泉"穴可缓解CCI大鼠的神经病理性疼痛,其效应与穴位局部H M GB 1活性及其受体CD 24表达升高导致的局部β-EP含量增加有关.
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针刺“百会”透“曲鬓”穴拮抗急性脑出血大鼠炎性损伤的机制研究
目的：：探讨针刺“百会”透“曲鬓”穴拮抗急性脑出血大鼠炎性损伤的作用机制。方法：54只 Wis-tar大鼠随机分为假手术组、模型组及针刺组,每组按造模后1、3、7 d 分为3个亚组,每组6只。采用自体血注入法建立脑出血大鼠模型。针刺组取“百会”透患侧“曲鬓”进行治疗,24 h 治疗1次。采用 Longa 评分法及肢体对称实验评分法对脑出血后大鼠神经功能进行评估,采用免疫组化法检测脑出血组织 Toll 样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素(IL)-6的阳性表达。结果：模型组大鼠脑出血损伤后出现不同程度的神经功能缺损症状表现,术后3 d 大鼠神经功能缺损重；针刺后神经功能缺损明显减轻,针刺组各时间点与模型组比较差异有统计学意义(P <0.01)。在各时间点假手术组大鼠脑组织可见少量 TNF-α、TLR-4、IL-6阳性表达；模型组在各时间点 TNF-α、TLR-4、IL-6阳性表达均高于假手术组(P <0.01)；针刺组在各时间点与模型组比较,TNF-α、TLR-4、IL-6阳性表达明显下调(P <0.01)。TLR-4与 IL-6表达呈正相关,TLR-4与 TNF-α表达呈正相关。结论：针刺“百会”透“曲鬓”穴可以抑制 TLR-4蛋白的表达,降低血肿组织中炎性因子 TNF-α、IL-6的含量,减轻脑出血后炎性损伤,改善大鼠神经功能缺损表现。
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穴位局部Toll样受体4与针刺信息启动
针刺是通过将针刺入穴位,调动机体固有的神经-内分泌-免疫网络而发挥效应的,但针刺作为一种物理性刺激,要实现对机体固有系统的调节,必须首先将物理性信号转化为生物性信号.Toll样受体4(TLR 4)作为一种重要的模式识别受体,不仅可以识别外源性的病原体相关分子模式,还可识别内源性的损伤相关分子模式,并且其与机体的神经、免疫系统有着密切的关系.笔者从TLR 4与针刺信号转换、针刺临床现象、相关针刺作用机制3个方面进行探讨,发现穴位局部的TLR 4可能参与针刺信息启动.
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隔药饼灸对兔动脉粥样硬化斑块中Toll样受体与核因子表达的影响
目的:观察隔药饼灸对兔动脉粥样硬化(AS)斑块中Toll样受体2(TLR 2)、TLR4、核转录因子κB(NF-κB) mRNA表达的影响,探讨隔药饼灸稳定兔AS斑块的作用机制.方法:新西兰大耳白兔随机分为空白组、模型组、直接灸组、隔药饼灸组、药物组,每组12只.采用高脂饲料喂养及腹主动脉球囊损伤法建立兔AS模型.直接灸组及隔药饼灸组分别直接灸及隔药饼灸“巨阙”及双侧“天枢”“丰隆”或双侧“心俞”“脾俞”“肝俞”,每日1次,治疗8周.运用酶法测定血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG);比色法测定血浆高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL),并计算HDL/LDL;电泳法测定血浆载脂蛋白A(Apo-A)、载脂蛋白B(Apo-B);HE染色观察腹主动脉斑块组织结构及斑块的血管内膜厚度、内膜中膜厚度(IMT);实时荧光定量PCR技术检测兔AS斑块中TLR 2、TLR 4、NF-κB mRNA的表达水平.结果:与空白组比较,模型组血浆TC、TG、LDL、Apo B含量显著升高(P＜0.01),Apo A含量、HDL/LDL显著降低(P＜0.01),主动脉内膜厚度、IMT显著增加(P＜0.01),TLR2、TLR 4、NF-κB mRNA表达水平显著升高(P＜0.01).与模型组比较,各治疗组血浆TC、TG、LDL、Apo-B含量显著降低(P＜0.05,P＜0.01),Apo-A含量、HDL/LDL显著升高(P＜0.01),主动脉内膜厚度、IMT显著降低(P＜0.01),TLR 2、TLR 4、NF-κB mRNA表达水平显著降低(P＜0.05,P＜0.01).与直接灸组比较,隔药饼灸组和药物组血浆TC、TG、LDL、Apo-B显著降低(P＜0.05,P＜0.01),Apo-A含量、HDL/LDL显著升高(P＜0.01),主动脉内膜厚度、IMT降低(P＜0.01,P＜0.05),TLR 2、TLR 4、NFκB mRNA表达水平显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:隔药饼灸通过抑制兔AS斑块中TLR 2、TLR 4、NF-κB mRNA的表达,可能起到稳定AS斑块的作用.
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基于HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路考察木瓜提取物对脊髓损伤大鼠的保护作用
目的:探讨木瓜醇提取物对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠神经功能的保护作用,并初步探讨其可能机制.方法:制备SCI大鼠模型,根据处理方式分为假手术组(Sham组),模型组(SCI组),木瓜提取物治疗组(Pap组);重组高迁移率族蛋白B1(high mobility group histone B1,HMGB1)处理组(rHMGB1组);重组HMGB1+木瓜提取物处理组(rHMGB1+Pap组).应用basso beattie bresnahan(BBB)评分评估大鼠后肢运动功能;检测脊髓组织含水量评估脊髓水肿情况;应用苏木素-伊红(HE)染色进行组织学评估;运用酶联免疫吸附检测白细胞介素-1β(interleuki-1β,IL-1β),肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α),白细胞介素-6(interleuki-6,IL-6)水平;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测脊髓组织细胞凋亡情况;应用免疫组织化学和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测组织中HMGB1,Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4),核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65蛋白表达情况;Western blot检测半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白;应用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测HMGB1,TLR4,NF-κB p65 mRNA表达情况.结果:与Sham组比较,SCI组大鼠BBB评分明显降低(P＜0.05).SCI组和rHMGB1组脊髓组织松散,呈现嗜中性粒细胞浸润的组织学损伤;而Pap组和rHMGB1+Pap组中组织学损伤情况得到明显改善.与Sham组比较,SCI组大鼠脊髓组织中含水量,HMGB1,TLR4,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平,IL-1β,IL-6,TNF-α水平,凋亡阳性细胞数,Caspase-3蛋白表达水平均明显增加(P＜0.05).Pap组和rHMGB1+Pap组含水量,HMGB1,TLR4,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平,IL-1β,IL-6,TNF-α水平,凋亡阳性细胞数,Caspase-3蛋白表达水平均明显低于SCI组(P＜0.05).rHMGB1+Pap组含水量,HMGB1,TLR4,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平,IL-1β,IL-6,TNF-α水平,凋亡阳性细胞数,Caspase-3蛋白表达水平明显低于rHMGB1组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:木瓜提取物能够通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB p65信号通路活化,减轻SCI后的炎症反应、减少脊髓组织细胞凋亡,从而诱导脊髓组织修复和运动功能恢复.
