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膜联蛋白A2和葡萄糖调节蛋白78表达与前列腺癌的关系
目的 分析膜联蛋白A2(Annexin A2)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)分别在人前列腺增生细胞系(BPH-1)、雄激素非依赖性前列腺癌细胞系(LNCaP)和雄激素依赖性前列腺癌细胞系(PC-3)中的差异表达. 方法 利用双向凝胶电泳结合质谱的蛋白质组学技术,分析Annexin A2和GRP78在三种细胞系的表达；分别采用免疫印迹法和免疫荧光染色法对其进行半定量和定位验证. 结果 Annexin A2在BPH-1和LNCaP中低表达,在PC-3细胞中高表达；GRP78在PC-3、BPH-1及LNCaP中表达量逐渐升高(P＜0.05). 结论 Annexin A2和GRP78的差异表达可能与前列腺癌发展的不同阶段激素依赖性有关,有望作为前列腺癌诊断和治疗的重要指标.
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GRP78在蛋白酶体抑制剂诱导卵巢癌细胞凋亡中的作用
目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在蛋白酶体抑制剂诱导卵巢癌细胞凋亡中的作用.方法:对3种卵巢癌细胞系SKOV3、A2870和CAOV3分别设空白对照组和不同蛋白酶体抑制剂处理组;对SKOV3细胞分别转染GRP78小干扰RNA(siRNA)和随机序列核酸siRNA组.利用蛋白酶体抑制剂MG132(5 μmol/L)、PSI(20 nmol/L)和EPOX(10 nmol/L)作用3种细胞系,实时定量PCR和Western blot检测各组细胞GRP78 mRNA和蛋白表达.MTT和流式细胞术检测细胞活力和凋亡率.结果:各种蛋白酶体抑制剂均增加卵巢癌细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平.当GRP78 siRNA靶向沉默GRP78表达后,蛋白酶体抑制剂作用后SKOV3细胞活力明显降低.结论:GRP78诱导表达干扰蛋白酶体抑制剂抗卵巢癌活性;沉默GRP78基因表达可提高蛋白酶体抑制剂对卵巢癌细胞的杀伤作用.
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络气郁滞证大鼠主动脉组织葡萄糖调节蛋白78mRNA表达的研究
目的 观察络气郁滞证大鼠主动脉组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA表达的变化.方法 20只Wistar大鼠按体重随机分为正常组、络气郁滞组,实验末检测血清同型半胱氨酸(Hcy)、一氧化氮(NO)、血浆内皮素(ET),观察主动脉组织超微结构,以RT-PCR方法检测主动脉组织中GRP78mRNA的表达.结果 与正常组比较,络气郁滞组血清Hcy明显增高.NO明显下降(P<0.05),ET明显升高(P<0.05);主动脉组织超微结构发生明显改变,主动脉组织中GRP78mRNA的表达较正常组比较明显增强(P<0.01).结论 络气郁滞证大鼠的主动脉组织GRP78mRNA表达增强,其血管内皮功能障碍可能与主动脉组织内质网的应激有关.
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电针预处理对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马葡萄糖调节蛋白78和生长停滞及DNA损伤基因153表达的影响
目的:探讨电针预处理对短暂性全脑缺血再灌注大鼠海马葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)和生长停滞及DNA损伤基因153(GADD 153)表达的影响.方法:SD大鼠随机分为假手术组、缺血组和电针预处理组,每组48只.采用四血管阻断法建立全脑缺血再灌注模型.电针预处理组于模型建立前5d电针刺激“大椎”“百会”两穴,30 min/d.分别于再灌注6、12、24、48 h处死动物.Western blot方法检测海马GRP 78和GADD 153表达;HE染色法计数存活神经元数目;TUNEL法测定凋亡神经元数目.结果:与假手术组相比,缺血组再灌注12、24、48 h海马存活神经元计数减少,各时点凋亡神经元数目增多(P＜0.05),缺血组在再灌注6、12、24、48h海马GRP 78和GADD 153表达上调(P＜0.05);与缺血组比较,电针预处理组再灌注24、48 h时海马存活神经元计数升高,在12、24、48 h凋亡神经元数目减少(P＜0.05),再灌注各时点GRP 78表达上调,GADD 153表达下调(P＜0.05).结论:电针预处理对缺血再灌注大鼠有显著的脑保护作用,这可能与其上调脑缺血区GRP 78表达,下调GADD 153的表达,从而减轻内质网应激反应有关.
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针刺对戊四唑诱发惊厥大鼠海马葡萄糖调节蛋白78和C/EBP同源蛋白表达的影响
目的:观察针刺对惊厥大鼠海马神经元内葡萄糖调节蛋白78 (Grp 78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白表达的影响,探讨针刺抗惊厥的可能机制.方法:SD大鼠随机分为正常对照组(n=6)、模型组(n=18)、针刺组(n=18).腹腔注射戊四唑(50 mg/kg)复制惊厥大鼠模型.针刺组立即针刺“百会”“大椎”30 min.各组分别于造模后2、12、48 h采用免疫组化法观察各组大鼠海马CA 1区Grp 78和CHOP蛋白表达情况.结果:模型组大鼠在惊厥发作2、12h海马CA1区Grp 78蛋白表达与正常组比较明显增强(P＜0.01);针刺组大鼠在惊厥发作12h和48 h与模型组比较Grp 78蛋白表达显著增加(P＜0.01,P＜0.05).在惊厥发作各个时段与正常组比较,模型组大鼠海马CA1区CHOP蛋白表达明显上调(P＜0.01);针刺组海马CA 1区CHOP蛋白阳性表达在惊厥发作各个时段与模型组比较明显减少(P＜0.05,P＜0.01).结论:针刺能明显调节惊厥大鼠海马神经元Grp 78蛋白和CHOP蛋白的表达,从而起到保护惊厥性脑损伤作用.
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白芍总苷对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞内质网应激及凋亡的影响
目的:观察白芍总苷预处理对心肌缺血再灌注大鼠细胞内质网应激及凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:雌性SD大鼠制备大鼠心肌缺血再灌注模型,随机分为假手术组、缺血再灌注组及低、中、高剂量白芍总苷组(造模前分别予以白芍总苷50,100,200 mg· kg-1·d-1 ig),观察各组动物心脏功能的变化,三苯基四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死面积,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测心肌组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78),凋亡促进因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及Caspase-12蛋白表达,原位细胞凋亡检测(TUNEL)方法检测细胞凋亡.结果:与假手术组比较,T波上抬及左心室舒张末期压力明显升高,左心室收缩压、左心室大收缩期及舒张期压力变化率(±dp/dtmax)明显降低,GRP78,CHOP,Caspase-12,Caspase-3蛋白表达明显升高(P＜0.01),心肌梗死面积及细胞凋亡明显;与缺血再灌注组比较,白芍总苷呈剂量依赖性的降低T波上抬及左心室舒张末期压力,升高心脏左心室收缩压、左心室±dp/dtmax,降低GRP78,CHOP,Caspase-12,Caspase-3蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01),减少心肌梗死面积及细胞凋亡.结论:白芍总苷能改善缺血再灌注的心功能、心肌梗死及凋亡,作用可能是与抑制心肌内质网应激相关蛋白GRP78表达,下调CHOP,Caspase-12,Caspase-3水平有关.
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丹芍化纤胶囊对大鼠肺纤维化内质网应激相关蛋白GRP78及NF-κB表达的影响
目的:观察内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78( GRP78)及核因子-κB( NF-κB)在盐酸博来霉素诱导的肺纤维化中的变化及中药丹芍化纤胶囊对其表达的影响.方法:选取SD大鼠30只,随机分为正常组、肺纤维化模型组和丹芍化纤胶囊治疗组,每组各10只.正常组气管内滴注生理盐水,模型组和丹芍组气管内一次性灌注盐酸博来霉素5mg/kg诱导肺纤维化,丹芍组于造模第2天给予丹芍化纤胶囊混悬液灌胃(0.8g·kg-1·d-1)治疗,正常组及模型组则给予等量生理盐水灌胃.实验第28天称大鼠体质量,处死各组大鼠,称肺湿重并收集肺组织,行HE和Masson染色观察肺组织病理变化；采用免疫组织化学的方法检测肺组织中GRP78及NF-κB蛋白的表达情况.结果:与正常组比较,模型组大鼠肺组织中GRP78及NF-κB表达明显升高(P＜0.01)；经丹芍化纤治疗后,大鼠肺组织中GRP78及NF-κB蛋白表达显著降低(P＜0.01).结论:GRP78及NF-κB可能参与了盐酸博来霉素诱导的肺纤维化过程.丹芍化纤胶囊对肺纤维化的干预机制可能与抑制肺组织中GRP78及NF-κB的表达,减轻内质网应激所引起的损伤有关.
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七味铁屑胶囊对NAFLD大鼠的疗效观察及ERS相关因子的影响
目的:观察七味铁屑胶囊对非酒精性脂肪性肝病( NAFLD)大鼠的疗效及初步探讨对ERS相关调控因子的影响.方法:Wistar大鼠60只,随机分为正常组(N组)、模型组(F组)、七味铁屑胶囊治疗组(Q组)、易善复胶囊阳性对照组(P组).分别给予药物干预12周后,观察各组大鼠病理组织学特点,血清AST、ALT、TG、FFA和肝组织GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α蛋白表达水平.结果:12周时与F组比较,Q组和P组大鼠肝脏病理学改变明显减轻,其炎症程度、血清AST、ALT、TG、FFA水平及肝组织GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α表达量均明显降低(P＜0.01)；Q组和P组二者之间无统计学差异.结论:七味铁屑胶囊对单纯高脂饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪性肝病疗效确切,可能通过下调GRP78水平,恢复内质网稳态,减轻脂质在肝内堆积,抑制炎症反应,从而改善肝脏脂肪变性及炎症.
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电针预处理对全脑缺血/再灌注损伤大鼠海马葡萄糖调节蛋白78表达的影响
目的:探讨电针预处理对短暂性全脑缺血再灌注大鼠的作用及作用机制.方法:健康雄性SD大鼠144只随机分为假手术组(S组)、缺血组(I/R组)和电针预处理组(EA组),每组48只.I/R组采用四血管阻断法建立全脑缺血再灌注模型,脑缺血5 min后再灌注.EA组于模型建立前5天电针刺激“大椎”“百会”两穴,1次/d,30 min/次.S组只暴露双侧翼孔,不烧灼椎动脉,暴露双侧颈总动脉并置线不夹闭.I/R组和EA组分别于再灌注6、12、24、48 h,S组于对应时点,处死动物,断头取脑海马组织.Western-blot方法测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达;HE染色法计数存活神经元数目;TUNEL法测定凋亡神经元数目.结果:与S组相比,I/R组及EA组再灌注12 h后各时点海马存活神经元计数降低,I/R组自再灌注6h后、EA组再灌注12 h后凋亡神经元数目增多(P＜0.05),I/R组及EA组再灌注各时点GRP78表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,EA组再灌注24 h和48 h时海马存活神经元计数升高,12 h、24 h和48 h凋亡神经元数目减少(P＜0.05),再灌注各时点GRP78表达较I/R组进一步上调(P＜0.05).结论:电针预处理对缺血再灌注大鼠有显著的脑保护作用,其作用机制与其进一步上调缺血区GRP78的表达,从而减轻内质网应激有关.
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小柴胡汤对大鼠肝细胞脂肪变性及葡萄糖调节蛋白表达的影响
目的 探讨小柴胡汤防治大鼠肝细胞脂肪变性的疗效及作用机制.方法健康Wister大鼠分为正常组、模型组及小柴胡汤低、高剂量组和东宝肝泰组,除正常组以外,其他各组采用四氯化碳联合高脂饮食诱导大鼠脂肪肝模型,各组大鼠给药干预4周后,采用HE染色观察肝组织病理变化,采用全自动生化仪及分光光度计测定血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及肝组织中胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)的含量,采用RT-PCR和Western blot检测肝组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达.结果 小柴胡汤低、高剂量组的肝指数、血清ALT、AST水平及肝组织中TC、TG含量较模型组明显降低(P＜0.05);病理HE染色显示,小柴胡汤组肝脂肪变性程度较模型组明显减轻;RT-PCR 和Western blot检测结果表明,小柴胡汤组肝组织中GRP78的表达显著低于模型组.结论 小柴胡汤具有抑制大鼠肝细胞脂肪变性的作用,其作用机制可能与内质网应激有关.
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淫羊藿苷对HCY诱导增殖血管平滑肌细胞GRP78表达的影响
目的:研究淫羊藿苷(ICA)对同型半胱氨酸(HCY)诱导的增殖血管平滑肌细胞(VSMC)葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因表达的影响,探讨ICA抗动脉粥样硬化的机制.方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48 h后,用流式细胞仪Annexin/PI双染法检测凋亡率;RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达;目的基因克隆、鉴定并测序.结果:0.2,0.4 mg·L~(-1)的IcA可显著促进兔VSMC凋亡,且存在剂量依赖性,与半胱氨酸组相比,差异显著(P＜0.01);RT-PCR结果显示:0.2,0.4 mg·L~(-1)的淫羊藿苷作用于VSMC 48 h后,GRP78 mRNA表达水平显著升高,与半胱氨酸组相比差异显著(P＜0.05);测序结果表明,来源于VSMC的全长648 bp的基因片断与兔葡萄糖调节蛋白78基因高度同源.结论:ICA促进GRP78 mRNA表达,诱导兔VSMC凋亡,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.
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电针对脑缺血再灌注大鼠内质网应激关键因子GRP-78、Caspase-12表达的影响
目的 观察电针对脑缺血再灌注大鼠不同时间点脑缺血区脑神经细胞凋亡及内质网应激凋亡通路信号分子葡萄糖调节蛋白(GPR78)和Caspase-12影响.方法 126只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,其中假手术组6只,模型组和电针组各60只.模型组和电针组再随机分为再灌注6、12、24、48、72 h组,每组12只,采用改良线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型.电针组电针百会和大椎,每次30 min,每12h治疗1次,假手术组和模型组大鼠捆绑固定30 min,不做任何治疗.假手术组于手术后24 h、各组大鼠于相应时间进行神经学分级评定后处死大鼠并提取脑组织,观察海马CA1区形态学改变.TUNEL法检测各组神经细胞凋亡指数,免疫组化法和Western blot检测脑组织GRP78、Caspase-12蛋白表达的变化.结果 模型组和电针组海马CA1出现不同程度细胞凋亡变形.与本组前一时间点比较,模型组及电针组再灌注12、24、48、72 h神经功能评分降低(P ＜0.05,P＜0.01),再灌注12、24 h神经细胞凋亡指数、Caspase-12阳性细胞数、Caspase-12蛋白表达升高(P ＜0.05,P＜0.01),再灌注48、72 h神经细胞凋亡指数、Caspase-12阳性细胞数及蛋白表达降低(P ＜0.05,P＜0.01),再灌注12 h GRP78阳性细胞数、GRP78蛋白表达升高(P ＜0.05,P＜0.01),再灌注24、48、72 h GRP78阳性细胞数及蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01).与模型组同期比较,电针组再灌注12、24、48、72 h神经学评分、Caspase-12阳性细胞数降低(P＜ 0.05,P＜0.01);电针组各时间点神经细胞凋亡指数、GRP78阳性细胞数及蛋白表达、Caspase-12蛋白表达降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论 缺血再灌注24 h为神经元凋亡高峰,Caspase-12的免疫活性出现的时间晚于GRP78.电针可能通过抑制GRP78、Caspase-12的释放和激活减轻脑缺血再灌注后不同时间所致缺血脑神经细胞凋亡.
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脾虚型功能性消化不良大鼠胃组织GRP78/BiP蛋白表达及脾虚1号方干预研究
目的 探讨脾虚型功能性消化不良(FD)大鼠胃组织GRP78/BiP蛋白表达及脾虚1号方的干预作用.方法 70只10日龄雄性SD大鼠随机分为正常组(1 0只)、FD模型组(1 0只)、脾虚型FD模型组(50只).正常组给予2％蔗糖溶液灌胃,0.2 mL/d,连续6天;FD模型组、脾虚型FD模型组给予0.1％蔗糖碘乙酰胺溶液灌胃,0.2 mL/d,连续6天.脾虚型FD模型组正常饲料喂养至6周龄后叠加改良小平台法,连续14天.造模结束后随机分为脾虚型FD模型组,西药组,中药低、中、高剂量组,每组各1 0只,连同正常组、FD模型组,每天分别给予蒸馏水1 mL/100 g、多潘立酮0.3125 mg/100 g、脾虚1号方0.1275、0.255、0.51 g/100 9,灌胃14天.采用Western blot和免疫组化方法检测胃窦组织GRP78/BiP蛋白表达量.结果 与正常组比较,脾虚型FD模型组大鼠胃窦黏膜GRP78/BiP蛋白光密度值和蛋白灰度值均升高(P ＜0.05,P ＜0.01);与脾虚型FD模型组比较,中药低剂量组大鼠胃窦黏膜GRP78/BiP蛋白表达量降低,而中药中剂量组大鼠胃窦组织GRP78/BiP蛋白灰度值降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论 脾虚型FD大鼠胃窦GRP78/BiP蛋白表达升高,存在内质网应激现象,脾虚1号方能够减少GRP78/BiP蛋白的表达,减轻内质网应激现象的发生.
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心康冲剂对慢性心力衰竭大鼠心室重构的影响
目的 探讨心康冲剂治疗慢性心力衰竭的可能作用机制.方法 90只SD大鼠随机分为正常组10只,模型组,对照组及心康低、中、高剂量组各16只.除正常组外,其余各组通过腹腔注射注射用盐酸阿霉素1.5 mg/kg制造慢性心力衰竭大鼠模型.心康低、中、高剂量组分别给予0.5、1、2g/(kg·d)心康冲剂.对照组给予0.06g/(kg·d)芪苈强心胶囊.正常组、模型组予1.0g/(kg· d)生理盐水灌胃.各组均每日1次,连续灌服8周.观察大鼠心功能,TUNEL染色法观察心肌细胞凋亡,Masson染色法观察心肌纤维化,采用Real-time PCR法及免疫组化法检测心肌组织半胱天冬酶12 (Caspase-12)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)蛋白及mRNA表达水平. 结果 与模型组比较,心康低、中、高剂组心肌细胞凋亡和纤维化明显减少.与模型组比较,对照组及心康低、中剂量组左室舒张期内径(LVIDd)、左室收缩末期内径(LVESD)及Caspase-12、GRP78、CHOP蛋白,心康中剂量组Caspase-12、GRP78、CHOP mRNA明显下降,左室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)及心输出量(CO)明显升高(P＜0.05);与对照组比较,心康低剂量组LVIDd、LVESD下降,LVEF及CO增大,心康中剂量组LVESD、Caspase-12表达下降,LVIDd、CHOP mRNA表达升高,心康低、中剂量组CHOP、Caspase-12 mRNA蛋白表达下降(P＜0.05). 结论 心康冲剂能下调心肌组织Caspase-12、GRP78、CHOP表达、减轻内质网应激凋亡、抗心室重构,可能是其治疗慢性心力衰竭的机制之一,以心康冲剂低、中剂量疗效更佳.
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通络益肾方对高糖诱导肾小球系膜细胞GRP78mRNA及JNK mRNA表达的影响
目的 探讨通络益肾方治疗糖尿病肾病的可能作用机制. 方法 35只SD大鼠随机分为空白组、西药组及中药大、中、小剂量组,每组7只.中药大、中、小剂量组小鼠每日分别给予6.20、3.10、1.55 g/ml的通络益肾方2 ml灌胃;西药组小鼠每日灌胃洛汀新(0.09 mg/ml)、糖适平(0.27 mg/ml)混合液2ml.每日1次,连续给药10天.于末次灌胃2h后制备含药血清.大鼠肾小球系膜细胞株HBZY-1细胞分正常组、模型组、西药组及中药大、中、小剂量组,同步化24 h后,正常组加5.6 mmol/L低糖+10％的胎牛血清100 μl,模型组加30 mmol/L高糖+10％的空白血清100μl,中药大、中、小剂量组加30 mmol/L 高糖及10％的中药大、中、小剂量含药血清100μl,西药组加30 mmol/L高糖+10％的西药血清100μl.分别培养12h、24h、48h和72h后,采用流式细胞术检测系膜细胞凋亡情况,RT-PCR检测各组系膜细胞葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、c-Jun氨基末端激酶(JNK) mRNA的表达水平.结果 与正常组同时间点比较,模型组系膜细胞在24h、48h和72h凋亡率持续增加(P＜0.01).与模型组同时间点比较,各给药组24h、48h和72h时系膜细胞凋亡率均明显下降(P＜0.01);中药大、中、小剂量组在各时间点系膜细胞凋亡率随着药物剂量升高而降低,呈剂量依赖性(P＜0.01).与正常组同时间点比较,模型组GRP78 mRNA 在24 h、48 h持续升高,而72h明显下降,JNK mRNA表达在48、72 h时明显增加(P＜0.05或P＜0.01).与模型组同时间点比较,各给药组系膜细胞GRP78 mRNA、JNK mRNA在48h、72h时明显减低,且以中药大剂量组低(P＜0.05或P＜0.01). 结论 通络益肾方可抑制肾小球系膜细胞凋亡,其作用机制可能与延缓GRP78 mRNA增幅、下调JNK mRNA表达有关.
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慢肾康宁对肾间质纤维化大鼠内质网应激PERK-ATF4通路的影响
目的 探讨慢肾康宁对肾间质纤维化大鼠肾脏组织的保护作用及机制.方法 60只雄性Wistar大鼠,随机选取7只为正常组,其余53只采用2.5％腺嘌呤悬浮液灌胃建立肾间质纤维化模型,21d后将50只造模成功的大鼠随机分为模型组、氯沙坦组[10 mg/(kg·d)]、慢肾康宁低剂量组[7.5g/(kg·d)]、慢肾康宁中剂量组[15 g/(kg·d)]、慢肾康宁高剂量组[30g/(kg·d)],每组10只,分别给予相应药物灌胃,正常组和模型组以等量蒸馏水灌胃,连续30d.实验结束后,检测各组大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、24小时尿蛋白定量(24hMTP),估算肾小球滤过率(eGFR),HE和Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组织化学方法检测肾组织内质网应激标志性蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78),TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡水平,实时定量PCR测定肾组织GRP78、转录激活因子4(ATF4)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP) mRNA表达水平.结果 与模型组比较,氯沙坦组和慢肾康宁各剂量组SCr、BUN、24hMTP均显著下降(P＜0.01),eGFR上升(P＜0.01).病理观察,模型组可见肾小管上皮细胞凋亡、坏死、脱落,肾小管扩张、炎性细胞浸润,肾间质内腺嘌呤代谢产物沉积和胶原纤维增生,氯沙坦组和慢肾康宁各组较模型组病理变化轻.与模型组比较,各给药组GRP78表达水平及细胞凋亡水平均下降(P＜0.05或P＜0.01).各给药组GRP78、ATF 4、CHOP mRNA表达水平较模型组降低(P＜0.05).结论 慢肾康宁对肾间质纤维化大鼠肾脏组织内质网应激PERK-eIF2α-ATF4-CHOP通路过度表达有很好的抑制作用,具有肾脏保护功能,这可能是它减轻肾间质纤维化的重要机制之一.
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抗乳腺癌单克隆抗体mAb109的放射性标记与生物评价
目的 探索单克隆抗体mAb109的标记方法,并进行荷瘤动物模型的生物分布和显像研究.方法 采用2-巯基乙醇(2-mercaptoethanol,2-ME)法还原单克隆抗体mAb109,并测定还原抗体浓度和巯基含量.通过葡庚糖转络合法用放射性核素99Tcm标记mAb109,测定标记抗体的标记效率和稳定性.建立乳腺癌动物模型,并进行体内分布和显像研究.结果 还原抗体保持了较高的完整性,平均每分子抗体含有5.38个巯基.葡庚糖转络合法标记mAb109具有较高的标记率(＞90％)和体外稳定性.标记抗体在肿瘤部位有显著的富集,且具有较长的滞留时间.荷瘤动物模型注射99Tcm-mAb109后,可以得到清晰的肿瘤影像.结论 99Tcm-mAb109具有较高的标记效率,对所采用的葡萄糖调节蛋白78(glucose-related protein 78,GRP-78)阳性动物模型具有一定的靶向性.
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内质网应激诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡
目的 探讨内质网应激(ERS)致雌激素受体阴性(ER-)人乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡及钙激活中性蛋白酶2 (calpain2)在凋亡效应中的作用.方法 实验设空白对照组(DMEM)、对照组(DMEM+ DMSO)和实验组,用不同浓度衣霉素(TM)诱导乳腺癌细胞不同时间,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖抑制率及凋亡率;Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达量,以GRP78表达高点确定ERS模型建立,检测凋亡相关蛋白caspase4和CHOP表达以及calpain及其内源性抑制酶calpastatin的表达,用ERS抑制剂(4-PBA)和calpain抑制剂(calpeptin)分别预处理细胞2h,观察对上述效应的影响.结果 9、12和18μmol/L TM诱导ERS对该细胞增殖有明显抑制效应,抑制率分别为33.88％±1.32％、5t.51％ ±8.85％和55.77％ ±2.61％,细胞凋亡率分别为9μmol/L TM组16.70％±0.46％和12μmol/L TM组28.1％±1.09％,与对照组相比有明显差异(P＜0.05);9μmol/L TM诱导细胞24 h的GRP78表达上调高(P＜0.01);ERS还可明显上调caspase4、CHOP和calpain表达,下调calpastatin表达(P＜0.01或P＜0.05),上述效应均能被4-PBA和calpeptin减弱或阻断(P＜0.05).结论 ERS可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,calpain2参与调控凋亡发生.
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单侧输尿管梗阻的大鼠内质网应激相关蛋白表达上调
目的 探究内质网应激(ERS)相关凋亡通路在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化中的作用机制.方法 将大鼠随机分为假手术组及UUO模型组,UUO组行左侧输尿管结扎术,于术后3、7和14 d HE和Masson染色观察肾脏病理变化;眼底静脉丛取血,分离血清测定血尿素氮及肌酐;Western blot 检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、内质网源性转录因子(CHOP)、凋亡相关蛋白半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)及caspase-12蛋白表达.结果 与假手术组相比,UUO模型组可见:1)肾小管扩张和肾间质纤维化程度随输尿管梗阻时间延长而渐进性加重;2)GRP78、CHOP、caspase-3及caspase-12蛋白表达在术后3 d均有上调,随着梗阻时间延长,上述蛋白表达更显著(P<0.01).结论 内质网应激相关标志性蛋白在UUO大鼠肾间质纤维化的早期即存在表达上调,可能促进了肾间质纤维化不断进展.
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不同＋Gz重复持续暴露对大鼠肝脏组织损伤及GRP78的表达影响
目的：探讨不同正加速度（＋Gz）暴露下大鼠肝脏损伤及葡萄糖调节蛋白78（GRP78／Bip）在肝脏组织内分布和表达的变化。方法将SD大鼠24只，随机分为对照、＋6Gz、＋9Gz和＋12Gz组，每组6只，峰值作用时间3 min，加速度增长率0.5 G／s，间隔30 min，重复间断连续5次。 HE染色观察肝组织，并测定血浆天冬氨酸转氨酶（ AST）和丙氨酸转氨酶（ALT），用免疫组化法和Western blot测定肝脏组织中GRP78的表达。结果与对照组相比，＋9Gz组、＋12Gz组转氨酶水平均显著升高；且在ALT水平上，＋12Gz组高于＋9Gz组（P＜0.05）；HE染色显示正加速度组肝细胞排列紊乱，形态不规则，细胞间隙不清晰，空泡样改变，且随G值增长而加重。与对照组相比，GRP78／Bip表达分布主要集中在细胞胞质内；各实验组的GRP78表达均显著升高（ P＜0.05）。且＋12 Gz组明显高于＋6 Gz组和对照组（P＜0.05），肝脏组织中GRP78／Bip蛋白表达水平随G值升高而升高；＋12Gz组和＋9Gz组都高于＋6Gz组和对照组（ P＜0.05）。结论 GRP78／Bip的表达可能在加速度引起的肝脏应激反应有着正相关的作用。
