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丹蒌片对兔动脉粥样硬化模型ERS相关基因表达的影响
目的:建立兔动脉粥样硬化模型,研究丹蒌片对兔粥样硬化病变及内质网应激(ERS)相关基因免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)表达的影响,为丹蒌片临床的应用提供实验依据.方法:雄性日本大耳白兔24只随机分为正常组、模型组、可定组和可定+丹蒌片联合用药组,每组6只.正常组饲喂普通饲料,模型组在普通饲料中加入2％胆固醇及0.02％蛋氨酸;可定组、可定+丹蒌片组在普通饲料中加入2％胆固醇及0.02％蛋氨酸及相应的对照药物,复制家兔动脉粥样硬化病变模型.分别在用药前与饲养9周后检测胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)值,载脂蛋白A(ApoA),载脂蛋白B(ApoB);饲养9周后取实验动物胸主动脉上段,苏木素-伊红(HE)常规染色后观察组织形态变化;应用原位杂交技术检测BIP基因表达.结果:与正常组比较,模型组兔血脂TC,TG,LDL-C,ApoB含量明显升高,HDL-C,ApoA含量明显降低(P＜0.05);与模型组比较,可定组、丹蒌片联合用药组明显降低兔血脂TC,TG,LDL-C,ApoB含量,明显升高HDL-C,ApoA含量(P＜0.01).HE染色正常组血管内膜形态正常;模型组内膜严重增生,内皮细胞损伤;可定组血管内膜轻度增生;可定+丹蒌片组血管内膜形态接近正常.原位杂交结果显示,模型组BIP蛋白的表达明显升高;可定组及可定+丹蒌片组可下调BIP蛋白的表达.结论:丹蒌片联合可定能延缓动脉粥样硬化的发展,且效果显著.
关键词： 丹蒌片 动脉粥样硬化 内质网应激 免疫球蛋白重链结合蛋白 -
丹参酮ⅡA对血管平滑肌细胞内质网应激相关基因表达的影响
目的:研究丹参酮ⅡA对同型半胱氨酸(HCY)诱导增殖血管平滑肌细胞(VSMC)内质网应激(ERS)相关基因免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)表达的影响,探讨丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化的机制.方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的丹参酮ⅡA共同培养,Annexin/PI双染法、原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,观察凋亡细胞形态；实时荧光定量PCR检测Bip基因表达.结果:丹参酮ⅡA可显著促进兔VSMC凋亡,细胞凋亡率与HCY组相比差异显著(P＜0.01),且存在剂量依赖性；丹参酮ⅡA组Bip mRNA表达水平显著升高,与HCY组相比差异显著(P＜0.05,P＜0.01).结论:丹参酮ⅡA上调Bip基因表达,放大ERS信号,诱导兔VSMC凋亡,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.
关键词： 丹参酮ⅡA 血管平滑肌细胞 同型半胱氨酸 免疫球蛋白重链结合蛋白 细胞凋亡 -
脾虚型功能性消化不良大鼠胃组织GRP78/BiP蛋白表达及脾虚1号方干预研究
目的 探讨脾虚型功能性消化不良(FD)大鼠胃组织GRP78/BiP蛋白表达及脾虚1号方的干预作用.方法 70只10日龄雄性SD大鼠随机分为正常组(1 0只)、FD模型组(1 0只)、脾虚型FD模型组(50只).正常组给予2％蔗糖溶液灌胃,0.2 mL/d,连续6天;FD模型组、脾虚型FD模型组给予0.1％蔗糖碘乙酰胺溶液灌胃,0.2 mL/d,连续6天.脾虚型FD模型组正常饲料喂养至6周龄后叠加改良小平台法,连续14天.造模结束后随机分为脾虚型FD模型组,西药组,中药低、中、高剂量组,每组各1 0只,连同正常组、FD模型组,每天分别给予蒸馏水1 mL/100 g、多潘立酮0.3125 mg/100 g、脾虚1号方0.1275、0.255、0.51 g/100 9,灌胃14天.采用Western blot和免疫组化方法检测胃窦组织GRP78/BiP蛋白表达量.结果 与正常组比较,脾虚型FD模型组大鼠胃窦黏膜GRP78/BiP蛋白光密度值和蛋白灰度值均升高(P ＜0.05,P ＜0.01);与脾虚型FD模型组比较,中药低剂量组大鼠胃窦黏膜GRP78/BiP蛋白表达量降低,而中药中剂量组大鼠胃窦组织GRP78/BiP蛋白灰度值降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论 脾虚型FD大鼠胃窦GRP78/BiP蛋白表达升高,存在内质网应激现象,脾虚1号方能够减少GRP78/BiP蛋白的表达,减轻内质网应激现象的发生.
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RNAi介导的Bip表达下调促进基于蛋白质剪接的双链共转基因细胞分泌FⅧ凝血活性
目的 探讨用RNA干扰技术下调内质网蛋白伴侣免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)的表达,对基于蛋白质剪接的双链共转凝血因子VIII (FⅧ)基因HEK293细胞分泌剪接FⅧ蛋白的量和活性的影响.方法 以培养的HEK293细胞,用含蛋白内含子的B区缺失型FⅧ( BDD-FⅧ)的重链和轻链基因表达载体共转染经Bip-siRNA处理的细胞,免疫印迹法检测Bip的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长,用酶联免疫吸附( ELISA)和发色分析法分析转基因细胞分泌的剪接BDD-FⅧ蛋白量和活性.结果 RNA干扰下调Bip表达作用明显,细胞生长不受影响；Bip下调的共转基因细胞分泌的剪接BDD-FⅧ和重链量分别为(142±33) μg/L和(197±43) μg/L,明显高于对照细胞[分别为(89±23)μg/L和(120±27) μg/L]；Bip下调的共转基因细胞分泌的FⅧ凝血活性为(1 050±160)IU/L,明显高于对照细胞[640±170(IU/L)].结论 Bip表达下调通过促进剪接BDD-FⅧ的分泌可有效提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅧ基因功效,为进一步动物体内实验提供了依据.
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丹参酮ⅡA对HCY诱导增殖血管平滑肌细胞ERS相关基因免疫球蛋白重链结合蛋白表达的影响
目的 探究丹参酮ⅡA对同型半胱氨酸(HCY)诱导增殖血管平滑肌细胞(VSMC)内质网应激(ERS)相关基因免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)表达的影响.方法 通过HCY诱导构建兔VSMC增殖模型,给予瑞舒伐他汀或不同浓度的丹参酮ⅡA进行培养,采用实时荧光定量PCR测定实验兔Bip mRNA基因表达.结果 模型组Bip mRNA表达(3.27±0.30)高于空白对照组(0.13±0.35),差异具有统计学意义(P<0.05);丹参酮ⅡA组0.5 mg/L剂量的Bip mRNA表达(4.53±0.60)、1.0 mg/L剂量的Bip mRNA表达(12.71±0.27)、瑞舒伐他汀组Bip mRNA表达(8.80±0.21)均高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 丹参酮ⅡA对HCY诱导增殖VSMC ERS相关基因Bip表达具有明显作用.
关键词： 丹参酮ⅡA 血管平滑肌细胞 同型半胱氨酸 免疫球蛋白重链结合蛋白 -
免疫球蛋白重链结合蛋白和钙网蛋白在肝细胞癌中的表达与转移的关系
目的 探讨免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)和钙网蛋白(CRT)在肝细胞癌中的表达与转移的关系.方法 采用Western印迹及实时荧光定量PCR技术检测Bip与CRT在正常肝脏细胞株及肝癌细胞株表达;收集2014年6月至2015年5月在郑州大学第一附属医院住院患者手术的肝细胞癌标本43例,用免疫组织化学染色和Western印迹技术检测43例肝细胞癌组织及相应的癌旁组织和5例肝血管瘤旁组织中Bip和CRT蛋白的表达,并分析与临床病理资料的关系.结果 Bip和CRT在肝癌细胞株及肝细胞癌组织中高表达,在肝细胞癌组织中总的阳性表达率分别为86.0％(37/43)和65.1％(28/43),Bip在转移组高表达率为100％ (19/19),明显高于非转移组的75.0％(18/24),两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);CRT在转移组高表达率为84.2％ (16/19),明显高于非转移组的50.0％(12/24),差异有统计学意义(P＜0.05)且两者表达呈正相关;Bip阳性率及表达量与肝细胞癌的TNM分期,转移相关(均P＜0.05),CRT阳性率及表达量均与肝细胞癌的转移相关(P＜0.05).结论 Bip和CRT的表达与肝细胞癌的转移相关,对肝细胞癌患者预后的监测有潜在意义.
关键词： 癌 肝细胞 免疫球蛋白重链结合蛋白 钙网蛋白 转移 -
葛根通脉饮对兔动脉粥样硬化模型内质网应激信号转导通路相关分子表达的调控作用
目的：探讨葛根通脉饮对兔动脉粥样硬化（ AS）模型内质网应激（ ERS）信号转导通路免疫球蛋白重链结合蛋白（ BIP） mRNA及其蛋白表达的调控作用。方法选取健康日本大耳白兔32只，将其随机分为正常组、模型组、葛根通脉饮低剂量组（葛低组）、葛根通脉饮高剂量组（葛高组），每组8只。正常组饲喂基础饲料；模型组饲喂高胆固醇饲料（在基础饲料中加入1%胆固醇及0.02%蛋氨酸）；葛低组、葛高组在饲喂高胆固醇饲料的同时，分别给予葛根通脉饮5 g·kg-1·d-1和10 g·kg-1·d-1。饲喂9周后，取兔胸主动脉上段，采用组织形态观察法观察胸主动脉病变情况，采用组织原位杂交及Western blotting杂交方法分别检测胸主动脉血管平滑肌细胞（ VSMC）细胞质中BIP mRNA及其蛋白表达量。结果形态学观察显示，模型组血管病变典型，AS模型制备成功；葛低组、葛高组血管病变得到修复，其中葛高组血管修复效果明显。组织原位杂交及Western blotting杂交结果显示，4组兔胸主动脉VSMC BIP mRNA及其蛋白表达量间有差异（ P<0.05）；其中模型组、葛低组、葛高组BIP mRNA及其蛋白表达量高于正常组，葛低组、葛高组低于模型组，葛高组又低于葛低组（ P<0.05）。结论葛根通脉饮可拮抗由同型半胱氨酸（ Hcy）诱导的血管损伤，且高剂量的葛根通脉饮效果优于低剂量葛根通脉饮；葛根通脉饮抗AS作用机制与其对ERS通路BIP mRNA及其蛋白表达的调控有关。
关键词： 葛根 同型半胱氨酸 动脉粥样硬化 免疫球蛋白重链结合蛋白 -
电针对帕金森病模型大鼠黑质内Bip、CHOP蛋白表达的影响
目的 观察电针对鱼藤酮诱导的帕金森病(PD)模型大鼠黑质内质网应激相关蛋白表达的影响.方法 将120只健康雄性SD大鼠随机分正常组、假手术组、模型组、电针预治疗组、电针治疗7 d组、电针治疗14 d组、电针治疗21 d组、电针治疗28 d组,每组15只,采用颈背部皮下注射鱼藤酮法制备PD模型,假手术组只注射不含鱼藤酮的等量葵花油乳化液.正常组、假手术组、模型组不做任何治疗;电针治疗组在造模完成后选取风府、太冲穴给予电针治疗;电针预治疗组电针治疗7 d后再造模.运用免疫组化法检测大鼠黑质内TH、α-syn的阳性表达,并用Western blot法检测大鼠中脑黑质区内Bip、CHOP蛋白表达的变化.结果 模型组大鼠表现出明显的PD症候群特征,电针干预后大鼠行为学评分明显降低(P<0.01);与正常组和假手术组相比,模型组大鼠黑质区α-syn的阳性表达与Bip、CHOP蛋白的表达均显著提高,大鼠黑质区TH的阳性表达均显著降低(P<0.01);与模型组相比,电针治疗各组大鼠黑质区α-syn的阳性表达以及Bip、CHOP蛋白的表达均显著降低(P<0.01),大鼠黑质区TH的阳性表达显著提高(P<0.01).结论 电针防治PD的机制可能与电针能明显抑制内质网应激相关蛋白的表达,保护多巴胺能神经元有关.
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苦参素对食管癌 Eca-109细胞 BIP 和 CHOP mRNA 表达的影响
目的：探讨苦参素对食管癌Eca-109细胞内质网应激相关基因免疫球蛋白重链结合蛋白（ BIP）和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（ CHOP）表达的影响。方法：体外培养食管癌Eca-109细胞，分为空白对照组、5-氟尿嘧啶组（2 g/L）和不同剂量的苦参素组（2．0、1．0、0．5 g/L）。采用MTT法检测细胞增殖能力， Annexin V-PI法检测细胞凋亡率，实时荧光定量PCR法检测BIP和CHOP mRNA的相对表达量。结果：各组Eca-109细胞吸光度值、凋亡率、BIP 和CHOP mRNA 相对表达量比较，差异均有统计学意义（ F ＝3．883、476．221、129．331、14．139，P均＜0．05）。与空白对照组相比，苦参素组和5-氟尿嘧啶组Eca-109细胞吸光度值降低，凋亡率升高，BIP mRNA相对表达量降低，CHOP mRNA相对表达量升高（P均＜0．05）。结论：苦参素可抑制Eca-109细胞增殖，促进其凋亡，BIP基因可能是其作用靶点之一，凋亡过程由CHOP介导。
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丹蒌片对同型半胱氨酸诱导的兔主动脉内皮细胞 CHOP、BIP蛋白表达和凋亡的影响
目的：观察丹蒌片对同型半胱氨酸（HCY）诱导的兔主动脉内皮细胞凋亡及内质网应激相关蛋白 C／EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（CHOP）、免疫球蛋白重链结合蛋白（BIP）表达的影响。方法：以 HCY诱导建立兔主动脉内皮细胞损伤模型，分别用瑞舒伐他汀（他汀）、丹蒌片含药血清或二者联合共同培养48 h 后， Annexin V－PI 法检测细胞凋亡率，Western blot 法检测 CHOP、BIP 蛋白表达情况。以未诱导细胞作空白对照。结果：模型细胞凋亡率及 BIP、CHOP 蛋白表达水平均高于空白对照（P ＜0．05）。丹蒌片和他汀可明显降低模型细胞的凋亡率，二者具有协同作用（F丹蒌片＝475．288，F他汀＝235．248，F交互＝121．377，P ＜0．05）；丹蒌片可显著下调模型细胞BIP、CHOP 蛋白的表达水平，与他汀无协同作用（F丹蒌片＝7．017，8．147，P 均＜0．05；F交互＝0．590，1．406，P 均＞0．05）。结论：丹蒌片可通过下调 CHOP、BIP 的表达抑制血管内皮细胞凋亡。
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成对同源异型结构域蛋白转录因子1和免疫球蛋白重链结合蛋白在皮肤恶性黑色素瘤组织的表达及临床意义
目的 探讨皮肤恶性黑色素瘤(CMM)组织中同源异型结构域蛋白转录因子1(PITX1)和免疫球蛋白重链结合蛋白(BiP/GRP78)的表达及其意义.方法 应用免疫组织化学法检测40例CMM、23例皮肤交界痣及20例正常皮肤组织中PITX1及BiP/GRP78蛋白的表达,探讨其与CMM发生及浸润的关系.结果 3种组织中PITX1及BiP/GRP78蛋白阳性表达率比较差异有统计学意义(x2=8.940、10.023,P＜0.05);CMM组织中PITX1的表达低于交界痣及正常皮肤组织,而BiP/GRP78的表达高于交界痣及正常皮肤组织(P＜0.05).CMM、交界痣及正常皮肤组织中PITX1阳性率分别为30.0％、47.8％和70.0％,BiP/GRP78阳性率分别为60.0％、34.8％和20.0％.CMM组织中PITX1的表达与肿瘤的浸润深度明显相关(P＜0.05).CMM组织中PITX1和BiP/GRP78的表达呈负相关(r=-0.198,P＞0.05).结论 PITX1和BiP/GRP78在CMM的发生发展中起重要作用.
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甲醛对人肝癌细胞株HepG2内质网应激相关Bip和CANX mRNA及蛋白表达水平的影响
目的:研究甲醛(FA)染毒是否会诱导人肝癌细胞株HepG2内质网应激相关基因Bip和CANX mRNA和蛋白表达水平的改变,引起内质网应激反应.方法:用Hoechst 33258进行核染色,以观察不同浓度(0、0.02、0.1、0.5、2.5、12.5 mmol/L)FA分别染毒肝细胞株24和48 h后的细胞核形态学变化.再分别用0.004、0.02、0.1 mmol/L的FA处理人肝癌细胞株HepG2细胞24 h和48 h后,采用荧光定量PCR(qPCR)和Western blot检测内质网应激相关基因免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)及钙连蛋白(CANX)mRNA和蛋白的表达水平.结果:Hoechst 33258染色结果表明,染毒24和48 h后,0.5、2.5、12.5 mmol/L FA组出现大量核呈固缩状态或颗粒状荧光死亡细胞,阴性对照组和0.1 mmol/L及以下剂量组细胞核荧光染色较浅,细胞核未固缩,故后续试验采用0.1 mmol/L及以下剂量.经0.004、0.02和0.1 mmol/L FA处理细胞24和48 h后,qPCR检测结果显示,甲醛各剂量染毒组Bip和CANX的mRNA表达量与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).Western blot结果表明,染毒24 h,不同剂量甲醛处理组与阴性对照组相比,Bip和CANX蛋白表达量均无显著差异(P>0.05);染毒48 h,与阴性对照组相比,各FA处理组Bip蛋白表达量升高,0.02和0.1 mmol/L FA处理组CANX蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:甲醛染毒可诱导HepG2细胞内质网应激相关蛋白Bip和CANX表达水平升高,引起肝细胞发生内质网应激反应.
关键词： 甲醛 内质网应激 肝细胞 免疫球蛋白重链结合蛋白 钙连蛋白
