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RNAi介导的Bip表达下调促进基于蛋白质剪接的双链共转基因细胞分泌FⅧ凝血活性
目的 探讨用RNA干扰技术下调内质网蛋白伴侣免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)的表达,对基于蛋白质剪接的双链共转凝血因子VIII (FⅧ)基因HEK293细胞分泌剪接FⅧ蛋白的量和活性的影响.方法 以培养的HEK293细胞,用含蛋白内含子的B区缺失型FⅧ( BDD-FⅧ)的重链和轻链基因表达载体共转染经Bip-siRNA处理的细胞,免疫印迹法检测Bip的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长,用酶联免疫吸附( ELISA)和发色分析法分析转基因细胞分泌的剪接BDD-FⅧ蛋白量和活性.结果 RNA干扰下调Bip表达作用明显,细胞生长不受影响；Bip下调的共转基因细胞分泌的剪接BDD-FⅧ和重链量分别为(142±33) μg/L和(197±43) μg/L,明显高于对照细胞[分别为(89±23)μg/L和(120±27) μg/L]；Bip下调的共转基因细胞分泌的FⅧ凝血活性为(1 050±160)IU/L,明显高于对照细胞[640±170(IU/L)].结论 Bip表达下调通过促进剪接BDD-FⅧ的分泌可有效提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅧ基因功效,为进一步动物体内实验提供了依据.
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EPL和PTS在生物合成主链环肽方面的应用研究进展
内含肽作为宿主蛋白的组成成分，不仅可将自身从宿主蛋白中剪切，而且还可催化外显肽的连接。内含肽广泛分布于生物界的三大领域及病毒蛋白中。蛋白质剪接是由内含肽介导的一种翻译后自催化加工过程，整个过程不需要酶或辅因子的参与。蛋白质剪接包括四步分子内的反应及内含肽和外显肽中部分发挥关键催化功能的氨基酸残基。表达蛋白质连接（ EPL）和蛋白质反式剪接（ PTS）技术是借助内含肽及蛋白质剪接发展起来的。该文主要就这两项技术在生物合成主链环肽文库方面的应用领域及未来的应用前景进行了综述。
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内含肽作为药物靶标的研究进展
蛋白质剪接是内含肽介导的自我催化过程.内含肽是镶嵌在蛋白质前体中的多肽序列,可以自我催化从蛋白质前体中断裂,使两侧的外显肽连接成成熟的蛋白质.由于内含肽主要存在于微生物中,属于基因插入序列,在核酸代谢中起重要作用,这使得内含肽成为非常有吸引力的药物靶标.
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蛋白质内含子研究进展
介绍了蛋白质内含子的结构、功能和其介导的蛋白质剪接机理及应用研究进展.蛋白质内含子目前已广泛应用于蛋白质纯化、蛋白质连接、以及环肽和毒素蛋白的制备,且对蛋白质结构和功能关系的研究具有重要价值.
