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胶体金免疫层析试验在检测急诊患者血液传播疾病中的应用
目的 探讨胶体金免疫层析试验检测法(gold immunochromatography assay,GICA)在检测急诊病人乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒抗体、人类免疫缺陷病毒抗体中的临床应用价值.方法 随机选择2010年2月至2013年2月在四川省双流县第一人民医院就诊患者1080人作为研究对象,采集患者血清标本进行GICA与酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA).以ELISA法检测结果为金标准,计算GICA检测乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒抗体、人类免疫缺陷病毒抗体的灵敏度、特异度、漏诊率和准确性.结果 用GICA检测乙型肝炎病毒表面抗原的灵敏度为91.3％ (21/23),特异度为99.6％(1053/1057),漏诊率为8.7％ (2/23),准确性为99.4％(1074/1080)；应用GICA检测抗丙型肝炎病毒抗体的灵敏度为57.1％(4/7),特异度为99.8％(1071/1073),漏诊率为42.9％(3/7),准确性为99.5％(1075/1080).应用GICA检测人类免疫缺陷病毒抗体的灵敏度、特异度和准确性为100.0％.结论 GICA可用于乙型肝炎病毒表面抗原和人类免疫缺陷病毒抗体的筛检,但对丙型肝炎病毒抗体的检测漏诊率高,不适宜用于丙型肝炎病毒抗体的筛检.
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复发性流产患者抗心磷脂抗体和抗β2-GPI抗体的检测与分析
复发性流产(recurrent miscarriage,RM)病因复杂,其中约40％～60％原因不明[1].抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome,APS)是一种自身免疫性疾病,常伴持续性抗磷脂抗体(anti-phospholipid antibody,APA)阳性,是引起复发性流产的主要原因之一.APA在正常妇女中的阳性率为1％～5％,但在复发性流产妇女中可达到15％～50％[2].根据APA成分可将其分为两类,一类抗体与磷脂结合介导反应,主要为抗心磷脂抗体(anti-cardiolipin antibodies,ACA)等,而另一类与磷脂结合蛋白结合介导反应,主要是抗β2-GPI(β2-glycoprotein Ⅰ)抗体[2].ACA与磷脂的免疫病理反应是通过β2-GPI而起作用.研究[3]发现一部分APS患者ACA呈阴性,而β2-GPI抗体呈阳性,此外抗β2-GPI抗体也能通过与β2-GPI结合发挥与ACA
关键词： 抗心磷脂抗体 抗beta 2糖蛋白Ⅰ抗体 复发性流产 酶联免疫吸附测定 -
BrdU-ELISA局部淋巴结实验对3种香料皮肤致敏性的评价
变应性接触性皮炎是常见的一种免疫源性皮肤反应,通常由皮肤接触致敏性化学物引起,因此进行致敏性检测是对化学物安全性评价的重要内容之一.
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丝状噬菌体pⅧ展示系统表达赭曲霉毒素A模拟表位及应用研究
目的 传统赭曲霉毒素A(OTA)竞争抗原毒性强、成本高、制备难度大.将OTA模拟表位展示于丝状噬菌体pⅧ表面,获得无毒、易于制备的OTA竞争抗原替代物.方法 构建带有OTA模拟表位的重组噬菌粒pC89-COTA,为了提高OTA模拟表位与抗体的结合率,在OTA模拟表位序列5’端引入了肠激酶酶切位点.噬菌粒转化进大肠杆菌XL1-blue后再经野生KM13噬菌体感染,获得带有OTA模拟表位的重组噬菌体.用该噬菌体代替竞争抗原建立OTA的无毒ELISA分析方法.结果 成功表达出带有OTA模拟表位的重组噬菌体,经肠激酶酶切的OTA模拟表位噬菌体与OTA抗体的结合效率显著高于未酶切的噬菌体.利用酶切后的噬菌体建立OTA的无毒ELISA分析方法,其低检出限为100pg/ml,线性范围为250pg/ml～1000pg/ml.进行加标回收实验,回收率为99.8％ ～ 112.3％,相对标准偏差为8.19％ ～11.64％,测试16份市售样品,阳性率为31.25％.结论 成功表达了OTA模拟表位噬菌体,建立了OTA的无毒ELISA检测方法.
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化学发光法与 ELISA 法检测乙型肝炎病毒标志物的结果比较
目的：比较化学发光法与酶联免疫分吸附测定法（ELISA）检测乙型肝炎病毒标志物的异同及优劣。方法收集2015年5~10月门诊及住院445份乙型肝炎病毒感染者的血清，分别用化学发光法及 ELISA 检测乙型肝炎病毒标志物，包括乙型肝炎表面抗原（ HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（ HBsAb）、乙型肝炎 e 抗原（HBeAg）、乙型肝炎 e 抗体（HBeAb）以及乙型肝炎核心抗体（ HBcAb），比较同一份标本检测结果。结果ELISA 法中 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 及 HBcAb 阳性率分别为90.11%、6.07%、29.21%、56.04%及91.01%。化学发光法中 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 及 HBcAb 阳性率分别为97.08%、6.52%、29.44%、57.75%及95.28%。两组检测 HBsAb、HBeAg 及 HBeAb 阳性差异无统计学意义（P >0.05），HBsAg、HBcAb 阳性率检测差异有统计学意义（P <0.05）。结论化学发光法与 ELISA 法均具有较高的阳性率，但化学发光法为定量检测更敏感。
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全血γ-干扰素释放试验在继发性肺结核中的辅助诊断价值
目的 研究分析全血γ-干扰素释放试验(the whole blood interferon gamma release assay in vitro,IGRA-ELISA)在继发性肺结核中的辅助诊断及临床应用价值.方法 前瞻性纳入2012年8月至2013年6月淮安市第四人民医院143例疑似活动性肺结核患者,包括110例活动性肺结核患者,其中继发性肺结核66例,和33例非结核病患者进行IGRA-ELISA、结核抗体、抗酸染色和结核分枝杆菌培养检测.采用SPSS 18.0统计学软件进行统计分析,计数资料采用卡方检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 在继发性肺结核中,IGRA-ELISA敏感度为90.9％(60/66),均高于结核抗体检测(57.6％,38/66)、抗酸染色检测(16.7％,11/66),且IGRA-ELISA与另两种方法敏感度比较差异有统计学意义(x2=1.588,P=0.000;x2 =1.320,P=0.000;x2 =6.005,P=0.000).特异度方面3种检测方法均在90％以上,分别为93.9％(31/33),93.9％(31/33),90.9％(30/33),IGRA-ELISA、结核抗体与抗酸染色检测方法特异度两两比较,差异无统计学意义(x2=7.220,P=1.000;x2=4.311,P=1.000;x2=0.213,P=1.000).细菌培养阳性的继发性肺结核患者中,IGRA-ELISA阳性率为96.0％(24/25),而培阴的继发性肺结核患者中IGRA-ELISA阳性率为87.8％(36/41).结论 相比其他检测方法,IGRA-ELISA在继发性肺结核诊断中的敏感度和特异度高,可作为继发性肺结核辅助诊断的有效依据,尤其是培阴继发性肺结核患者的辅助诊断.
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2005-2008年住院结核病人HIV抗体检测资料分析
目的 了解结核病专科医院结核病人HIV感染率及其流行病学的特征.方法 采用ELISA法,对2005年6月1日-2008年12月31日期间,住院结核病人进行HIV抗体检测.结果 接受HIV抗体检测的结核病人3 924例,HIV阳性检出4例,检出率1.02‰,TB/HIV双重感染者以青壮年人为主,逐年呈上升趋势.结论 结核病专科医院应重视流动病人HIV抗体的检测,对控制TB/HIV双重感染有重要意义.
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结核分枝杆菌三种蛋白在结核病血清学诊断中的评价研究
目的 对结核分枝杆菌相对分子质量为38 000(以下采用38 kD表示)、线粒体通透性转换蛋白64 (mitochondrial permeability transition 64,MPT-64)和肝素结合血凝素(heparin-binding haemagglutinin,HBHA)蛋白在外周血中抗体的表达水平进行检测和比较,并对它们在结核病血清学方面的诊断价值进行评估.方法 选取2012年7月至2013年10月北京胸科医院收治的肺结核患者作为活动性肺结核(ATB)组,共78例;选取同期36例潜伏结核感染(LTBI)患者作为LTBI组;同期在北京胸科医院进行体检的31名健康人群(HC)作为HC组.将本实验室前期纯化的38 kD、MPT64和HBHA作为抗原应用于免疫学的检测,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中三种蛋白抗体的表达水平,经过统计学处理后,分别比较ATB、LTBI和HC三组之间的差异,并结合受试者工作特征曲线计算各蛋白抗原的敏感度和特异度,评价三种蛋白血清抗体的临床诊断价值.结果 ELISA检测ATB组38 kD蛋白抗体的吸光度(A)450 nm处的A值(0.343±0.120)高于LTBI组(0.221±0.102)和HC组(0.143±0.097),差异有统计学意义(t=3.07, P<0.05);MPT64抗体的A450值(0.234±0.102)高于LTBI组(0.198±0.087)和HC组(0.123±0.075),差异有统计学意义(t=3.79, P<0.05);HBHA抗体的A450值(0.263±0.113)高于LTBI组(0.188±0.091)和HC组(0.148±0.078),差异有统计学意义(t=2.70, P<0.05).以38 kD、MPT64和HBHA蛋白抗体表达水平从LTBI组鉴别ATB组时的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分别为0.78、0.61和0.62,敏感度分别为71.79%、62.82%和52.56%,特异度为72.22%、58.33%和69.44%;从HC组鉴别ATB组时的AUC分别为0.91、0.81和0.79,敏感度分别为87.17%、69.23%和73.08%,特异度为80.65%、74.19%和74.19%;从HC组鉴别LTBI组AUC分别为0.63、0.75和0.69,敏感度分别为58.33%、77.78%和63.89%,特异度为64.52%、51.61%和74.19%.结论 MTB 38 kD、MPT64和HBHA蛋白都有较好的免疫反应性,3种蛋白抗体在不同患者人群血清中的表达水平有差异,对肺结核诊断价值的评估结果表明采用ELISA对外周血中MTB蛋白抗体进行检测可作为结核病临床检测诊断的辅助方法.
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血清半乳甘露聚糖检测对呼吸系统疾病患者侵袭性肺曲霉病的诊断价值
目的 评价ELISA试验检测曲霉半乳甘露聚糖(galactomannan,GM)对呼吸系统疾病患者侵袭性肺曲霉病(invasive pulmonary aspergillosis,IPA)的诊断价值.方法 采用ELISA方法检测135例(分为确诊IPA患者4例,临床诊断IPA患者20例,拟诊IPA患者48例,非IPA患者63例)可疑IPA患者的306份血清GM抗原,进行受试者工作特征(ROC)曲线分析,估计ROC曲线下面积；通过ROC曲线分析敏感度和特异度的关系,确定合适阈值.结果 IPA组(24例)患者血清(GM值(1.37±1.21)明显高于非IPA组患者(63例)血清GM值(0.49±0.18)(F=31.10,P＜0.05).IPA患者与非IPA患者的GM试验ROC、曲线下面积为0.746 (95％CI=0.621～0.872),经分析取临界值(cut-off值)为0.63,敏感度为66.7％,特异度为73.0％.结论 通过ELISA检测GM通用于临床诊断呼吸系统疾病患者IPA的感染,具有一定的诊断价值.
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全血γ-干扰素释放试验在诊断结核分枝杆菌感染中的应用价值
目的 探讨全血γ-干扰素释放试验(interferon gamma release assay,IGRA)在诊断结核分枝杆菌(Mtb)感染中的应用价值.方法 前瞻性纳入2014年6月至2014年11月期间,天津市结核病控制中心门诊就诊的150例经临床确诊为活动性肺结核患者(活动性肺结核组)和180例非结核呼吸系统疾病患者(非结核组).每例患者均进行IGRA-ELISA、PPD试验、金胺O荧光染色和结核分枝杆菌培养检测.采用SPSS 13.0统计学软件进行分析处理,率的比较采用卡方检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 IGRA-ELISA和PPD试验诊断活动性肺结核组和非结核组的敏感度分别为90.7％(136/150)和74.7％(112/150),特异度分别为85.0％(153/180)和48.3％(87/180),经卡方检验,差异均有统计学意义(x2=13.420,P＜0.01;x2=54.540,P＜0.01). 150例活动性肺结核组中IGRA-ELISA阳性率为90.7％,远高于涂片阳性率12.0％(18/150)和培养阳性率24.0％(36/150).菌阳和菌阴肺结核患者中IGRA-ELISA阳性率分别为95.8％(46/48)和88.2％(90/102)(x2=0.397,P＞0.05),二者之间差异无统计学意义.结论 IGRA-ELISA对诊断结核分枝杆菌感染有较高的敏感度和特异度,且操作简单,可用于结核病尤其是涂阴肺结核和肺外结核的辅助诊断.
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高敏感度酶联免疫吸附测定法检测分泌蛋白MPB64对于活动性肺结核诊断的价值
目的 评价以结核分枝杆菌(MTB)分泌蛋白MPB64为检测抗原的高敏感度酶联免疫吸附测定法(high sensitivityenzyme-linked immunosorbent assay,HI-ELISA)用于检测痰液中MTB的价值.方法 选取97份储存的疑似肺结核患者的痰标本,分别进行BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960培养”)、MTB/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测系统(Gene Xpert MTB/RIF,简称“Xpert检测”)和HI-ELISA检测,通过与MGIT960培养比较来评价HI-ELISA的诊断效能.结果 本研究97份痰标本中,MGIT 960培养、HI-ELISA检测MTB的阳性率分别为36.08％(35/97)、32.99％(32/97);与MGIT 960培养比较,HI-ELISA的检测敏感度、特异度、总体符合率分别为88.57％(31/35)、98.39％(61/62)、94.85％(92/97).在Xpert检测阳性的66份痰标本中,MGIT960培养、HI-ELISA检测MTB的阳性率分别为51.51％(34/66)、48.48％(32/66);与MGIT 960培养相比,HI-ELISA的检测敏感度、特异度、总体符合率分别为91.18％(31/34)、96.88％(31/32)、93.93％(62/66).Xpert检测MTB为阴性的31份痰标本中,仅有1份标本的MGIT 960培养阳性而HI-ELISA未能检测到MTB,其他30份标本检测结果全部相符,符合率为96.77％(30/31).结论 HI-ELISA可以特异性检测MTB活菌,对活动性肺结核的诊断及治疗评价有很高的应用价值.
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不同抗原全血ELISA检测技术对活动性肺结核的辅助诊断价值研究
目的 探讨克隆表达的抗原PPD、早期分泌抗原靶6(ESAT-6)/培养滤液蛋白10(CFP-10)融合蛋白(简写为E/C)和ESAT-6的全血干扰素释放试验对活动性肺结核的辅助诊断价值.方法 选取活动性结核组96例和对照组91例共计187例,抽取清晨空腹肝素钠抗凝外周静脉血5 ml,分别给以抗原PPD、E/C和EAST-6刺激,通过ELISA的方法检测抗原刺激后血浆中IFN-γ的数值.结果 在活动性肺结核组中3种抗原刺激后IFN-γ含量的中位数分别为ESAT-6[96(41～379)pg/ml]、E/C[3180(1192～7231)pg/ml]、PPD[4348(1230～9026) pg/ml];明显高于对照组中IFN-γ含量ESAT-6[10(4～52)]、E/C[210(49～523)]、PPD[1800 (70～3021) pg/ml],U值分别为1190.5、2405和1309.5,P值均＜0.01;ESAT-6、E/C和PPD的全血ELISA敏感度分别为78.1％(75/96)、87.5％(84/96)和85.4％(82/96),特异度分别为76.9％(70/91)、83.5％(76/91)和65.9％(60/91).结论 融合蛋白ESAT-6/CFP-10对活动性结核病具有一定的辅助诊断价值.
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干扰素体外释放酶联免疫法在结核病诊断中的价值
目的 分析于扰素体外释放酶联免疫法(quantitative diagnostic kit for Mycobacterium tuberculosis IFN-γ release assay,TB-IGRA)在结核病诊断中的应用价值.方法 用北京万泰生物药业股份有限公司生产的结核分枝杆菌相关γ-干扰素检测试剂盒(体外释放酶联免疫法)(Wantai quantitative diagnostic kit for Mycobacterium tuberculosis IFN-γ release assay,WT-IGRA)(简称WT试剂)和澳大利亚Cellestis有限公司生产的QuantiFERON(R)-TB( QuantiFERON(R)-TB GOLD in tube,QFT-GIT)(简称QFT试剂)检测病区与门诊结核患者(249例)及健康者(140例)的全血标本,结果与其结核菌素试验( PPD)、痰结核分枝杆菌培养及痰涂片结果相比较,分析TB-IGRA阳性率、特异度及试剂间的相关性.结果 249例结核病患者,WT试剂和QFT试剂阳性率分别为76.3%(190/249)和67.1%(167/249),特异度都是83.3%(100/120)；痰菌阳性和痰菌阴性结核病组,WT试剂阳性率分别为74.1%(43/58)和76.1%(83/109),差异无统计学意义(x2=0.082,P＞0.05)；QFT试剂阳性率分别为67.2%(39/58)和65.1%(71/109),差异无统计学意义(x2=0.075,P＞0.05)；WT试剂与QFT试剂总符合率为84.3%.结论 TB-IGRA对结核病有一定的诊断价值.
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结核分枝杆菌重组蛋白Rv0222的表达及血清学鉴定
目的 构建Mtb重组蛋白Rv0222的重组质粒,评价其用于结核病血清学诊断的价值.方法 通过PCR从Mtb染色体基因组中扩增出Rv0222基因片段,插入pMD18-T载体后,再亚克隆入表达载体pET30a中,诱导表达重组菌,组氨酸标签(His-tag)亲和层析纯化蛋白,通过免疫印迹法分析重组蛋白的免疫反应性,通过间接ELISA方法检测142例血清样本,来自82例结核病患者(痰涂片或痰培养阳性,抗结核治疗症状减轻者),28例非结核病患者(8例肺癌、15例肺炎和5例肺气肿)和32例健康体检者,检测数据通过专业医学软件MedCalc 11.5.0分析ROC曲线下面积和佳阳性判定值.结果 成功构建重组载体,重组蛋白Rv0222经电泳后显示相对分子质量约为27 000,镍柱纯化后蛋白纯度达95％以上,通过蛋白免疫印迹法证实重组蛋白Rv0222与结核病患者血清能特异性结合.酶联免疫检测ROC曲线下面积为0.893,佳阳性判定值为0.12时,结核病患者组抗体检测敏感度为69.5％(57/82),非结核病患者和健康体检者抗体检测特异度为90.0％(54/60),结核病患者与非结核病患者及健康体检者相比,差异有统计学意义(t=25.78,P＜0.0001).结论 成功构建pET30a-Rv0222表达载体,获得高纯度的重组蛋白Rv0222,ELISA结果显示Rv0222蛋白有望成为结核病血清学诊断的有效抗原之一.
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两种γ-干扰素释放试验方法在结核病诊断中的应用价值比较
目的 对比研究两种γ-干扰素释放试验方法IGRA-ELISA技术和结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)在结核病诊断中的应用价值.方法 前瞻性研究纳入2014年1月1日至2014年12月31日在上海市肺科医院结核科门诊及住院诊治的疑似结核病患者81例,终53例确诊为活动性结核病、28例为非活动性结核病.每例患者分别采用IGRA-ELISA技术和T-SPOT.TB两种方法进行平行检测,采用卡方检验比较两种诊断方法的检测结果,两种方法检测结果一致性评价采用Kappa一致性检验.结果 81例疑似结核病患者中,IGRA-ELISA检测阳性52例,阴性29例;T-SPOT.TB检测阳性54例,阴性27例,两种方法阳性符合率92.6％(50/54),阴性符合率92.6％(25/27),总符合率为92.6％(75/81).两种诊断方法检测结果比较,差异无统计学意义(x2 =55.984,P＞0.05),诊断一致性高(Kappa值=0.836).IGRA-ELISA技术和T-SPOT.TB检测活动性结核病的阳性检出率分别为81.1％(43/53)和84.9％(45/53),远高于涂片(21.2％,11/52)、核酸检测(16.7％,6/36)和结核抗体检测(36.5％,19/52),两种诊断技术检测非活动性结核病的阴性检出率均为67.9％(19/28).结论 IGRA-ELISA技术和T-SPOT.TB检测性能相似,在结核病诊断方面均具有较高的敏感度,对临床有较好的应用价值.
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白细胞介素-9在肺结核患者血浆和T细胞中表达水平的研究
目的 比较肺结核患者、结核潜伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)者和健康人群血浆中白细胞介素-9 (interleukin-9,IL-9)表达水平,以及各人群辅助性T细胞9(Th9)细胞亚群经结核特异性早期分泌抗原靶蛋白6(early secreting antigen target 6 kD,ESAT-6)刺激前后的变化,探索IL-9的表达特点.方法 选取2015年4月至2016年4月于首都医科大学附属北京胸科医院结核科住院治疗的43例初治肺结核患者作为肺结核组;LTBI组和健康对照组均来自2015年12月于本院进行体检的健康体检者,其中健康对照组33名,LTBI组38例.收集研究对象血浆,采用酶联免疫吸附法检测其血浆中IL-9水平;采用流式细胞术检测各组人群外周血单核淋巴细胞经ESAT-6刺激前后Th9细胞的比率.结果 肺结核组血浆IL-9表达水平为175.04(149.67～221.70) pg/rnl,LTBI组为60.21(48.43～102.37) pg/ml,健康对照组为88.19(73.82～113.79) pg/ml.肺结核组血浆IL-9表达水平明显高于LTBI组(Z=7.64,P＜0.01)和健康对照组(Z=5.18,P＜0.01).肺结核组Th9淋巴细胞比率为0.17％ (0.14％～0.23％),LTBI组为0.14％(0.10％～0.16％),健康对照组为0.15％(0.11％～0.20％),各组间比较差异无统计学意义(H=4.45,P＞0.05).经ESAT-6刺激培养后,肺结核组Th9细胞比率为o.11％(0.09％～0.14％),LTBI组为0.10％(0.07％～0.12％),健康对照组为o.11％(0.11％～0.14％),三组比较差异无统计学意义(H=1.13,P＞0.05);各组刺激前后Th9细胞比率,肺结核组差异有统计学意义(Z=-3.20,P＜0.05);LTBI组差异有统计学意义(Z=-3.32,P＜0.05).结论 IL-9在肺结核患者血浆中的表达水平高于LTBI者和健康人群,其对肺结核诊断具有一定的辅助价值.
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三种细胞因子在肺结核与肺癌胸腔积液中的诊断价值
目的 分析肺结核患者(TB)和肺癌患者胸腔积液中巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)、孤核受体α(RORα)和孤核受体γ(RORγ)水平的差异,探讨其在肺结核与肺癌鉴别诊断中的价值.方法 通过简单随机抽样,将已确诊为肺结核和肺癌的冻存胸腔积液样本进行编号,抽取样本各80例,总结研究对象的基本信息,采用酶联免疫吸附法检测各样本中的MIF、RORα及RORγ水平.采用SPSS 20.0软件进行统计学对比分析,本研究中两组计量资料不符合正态分布,采用“Mann-Whitney U检验”,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 肺结核组和肺癌组胸腔积液中的MIF水平中位数(四分位数)[M(Q1,Q)]分别为5.83(2.41,16.43)、2.79(0.91,11.12) ng/L,差异有统计学意义(U=2314.50,P＜0.01);肺结核组和肺癌组胸腔积液中RORα水平[M(Q1,Q3)]分别为0.63(0.37,1.66)、0.63(0.57,2.16) ng/L,差异无统计学意义(U=3525.00,P＞0.05);肺结核组和肺癌组胸腔积液中RORγ水平[M(Q1,Q3)]分别为3.23(1.82,5.26)、3.44(1.94,7.11) ng/L,差异无统计学意义(U=3431.50,P＞0.05).结论 肺结核患者胸腔积液中MIF水平高于肺癌患者,检测胸腔积液中MIF水平对肺结核与肺癌的鉴别有一定诊断价值;而胸腔积液中RORα及RORγ水平检测的价值仍有待进一步验证.
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全血γ-干扰素释放试验对结核病与恶性肿瘤患者检测结果的比较研究
目的 对结核病、恶性肿瘤患者的全血γ-干扰素释放试验检测结果进行比较,分析其临床意义.方法 搜集2014年3月至2014年12月就诊于西安市结核病胸部肿瘤医院的结核病、肺炎、恶性肿瘤164例患者,以及同期来我院进行健康体检的人员50名.其中结核病组患者51例,恶性肿瘤组72例,肺炎组41例,健康对照组50例.所有研究对象均采用海口维堤瑷生物研究院结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒.所有数据处理采用SPSS 13.0统计学软件进行分析;计数资料采用x2检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 各组全血γ-干扰素释放试验的检测阳性率分别为结核病组98.0％(50/51)、恶性肿瘤组50.0％(36/72)、肺炎组29.3％(12/41)、健康对照组8.0％(4/50).与健康对照组相比,结核病组、恶性肿瘤组和肺炎组患者的全血γ-干扰素释放试验检测阳性率均较高,差异有统计学意义(x2值分别为82.26、23.62、7.03,P值均＜0.05).各类恶性肿瘤患者之间全血γ-干扰素释放试验检测的阳性率均相似,分别为:肺腺癌组54.8％(17/31);肺鳞癌组38.9％(7/18);小细胞肺癌组40.0％(4/10);其他恶性肿瘤组61.5％(8/13),差异无统计学意义(x2=2.27,P＞0.05).结论 海口维瑅瑷全血γ-干扰素释放试验试剂盒对结核病诊断的敏感度很高,但特异度较低;在恶性肿瘤患者中的检测阳性率也较高,其原因有待进一步研究.
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PstS1-ESAT-6抗原血清学和γ-干扰素释放试验辅助诊断结核病的价值
目的 分析重组融合蛋白PstS1-ESAT-6抗原血清学和γ-干扰素释放试验辅助诊断结核病的潜在价值.方法 选取40只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级BALB/c小鼠和18只SPF级豚鼠,均分别注射卡介苗(BCG)或热灭活结核分枝杆菌.选取解放军第三○九医院全军结核病研究所于2012年3-8月收治入院的129例结核病患者(结核病组)、54例非结核性肺部相关疾病患者(非结核病组)和194名健康者(健康对照组)作为研究对象.研究对象均采集外周静脉血.外周血单个核细胞(PBMC)和免疫的小鼠脾淋巴细胞经重组融合蛋白PstS1-ESAT-6体外刺激,应用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测经抗原刺激后释放γ-干扰素(IFN-γ)的效应T淋巴细胞即斑点形成细胞(SFC);应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血血浆和免疫小鼠血清抗重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的IgG;应用孟都法(Mantoux)检测健康者BCG-PPD皮试、免疫豚鼠BCG-PPD皮试及重组融合蛋白PstS1-ESAT-6皮试.结果 结核病组PBMC体外经重组融合蛋白PstS1-ESAT-6刺激,分泌IFN-γ的SFC数为(45.02±68.03)/2.5×105个PBMC,高于非结核病组的(11.87±38.63)/2.5×105个PBMC和健康对照组的(5.24±15.46)/2.5×105个PBMC (F=32.96,P=0.000).ELISPOT诊断结核病患者的敏感度为82.2％(106/129),诊断非结核病组患者和健康者的特异度分别为87.0％(47/54)和90.2％(175/194),两者特异度比较差异无统计学意义(x2=0.45,P=0.500).结核病组血浆中抗重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的IgG水平(平均A492值为0.82±0.66)高于非结核病组[平均A492值为(0.60±0.30)]和健康对照组[平均A492为(0.36±0.20)](F=43.60,P=0.000);ROC分析确定检测临界值为0.49,其用于诊断结核病的敏感度为62.2％(69/111)、诊断非结核病组的特异度为40.4％(19/47)、诊断健康者的特异度为84.5％(164/192),诊断非结核病组与健康组的特异度比较,差异有统计学意义(x2=42.60,P＜0.01).热灭活结核分枝杆菌免疫豚鼠均产生BCG-PPD和重组融合蛋白PstS1-ESAT-6皮试反应,所有豚鼠皮肤出现红肿或硬结平均直径＞5 mm;热灭活结核分枝杆菌免疫小鼠,重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的ELISPOT和ELISA检测均为阴性.BCG免疫豚鼠只产生BCG-PPD皮试反应,硬结平均直径为(10.08±0.36) mm,不产生重组融合蛋白PstS1-ESAT-6皮试反应;BCG免疫小鼠,重组融合蛋白PstS1-ESAT-6的ELISPOT检测阴性,而ELISA检测为阳性.结论 ELISPOT用于结核病诊断优于血清学诊断,但其诊断活动性结核病价值还需进一步论证.
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γ-干扰素释放试验与其他三种检测技术临床诊断能力的比较研究
目的 分析γ-干扰素释放试验(IGRA,本研究采用IGRA-ELISA法)与齐尔-尼尔森(Ziehl-Neelsen)染色法(简称"Z-N法")、结核抗体(TB-Ab)胶体金快速检测方法(简称"TB-Ab法")和荧光探针PCR法(简称"荧光PCR法")等检测技术在北京同仁医院应用于TB辅助诊断中的作用,对IGRA-ELISA检测技术作出客观评价.方法 选取本院2012年8月至2013年7月进行TB诊断的1228例患者作研究对象,其中包括IGRA-ELISA 827例、TB-Ab法306例、Z-N法324例和荧光PCR法83例,共1540例次.采用SPSS 16.0软件统计分析和绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计数资料采用x2检验,P＜0.05为差异有统计学意义,分别计算各技术ROC曲线下的面积(AUC),比较各技术辅助诊断价值的大小.结果 IGRA-ELISA的阳性检出率为36.0％ (298/827),均高于TB-Ab法(6.2％,19/306)、Z-N法(3.1％,10/324)和荧光PCR法(3.6％,3/83),差异有统计学意义(x2值分别为98.6、128.9、35.8,P值均＜0.001).IGRA-ELISA的阳性诊断率10.3％ (85/827),均高于TB-Ab法(1.3％,4/306)、Z-N法(2.5％,8/324)和荧光PCR法(3.6％,3/83),与TB-Ab法和Z-N法相比较差异有统计学意义(x2值分别为24.8、19.1,P值均＜0.001);而与荧光PCR法相比较差异无统计学意义(x2=3.8,P＞0.05).IGRA-ELISA的敏感度为97.7％ (85/87),均高于TB-Ab法(17.4％,4/23)、Z-N法(28.6％,8/28)和荧光PCR法(25.0％,3/12),差异有统计学意义(x2值分别为76.0、65.4、56.4,P值均＜0.001).IGRA-ELISA的特异度为71.2％ (527/740),均低于TB-Ab法(94.7％,268/283)、Z-N法(99.3％,294/296)和荧光PCR法(100.0％,71/71),差异有统计学意义(x2值分别为65.1、101.6、27.7,P值均＜0.001).IGRA-ELISA的阳性预测值为28.5％ (85/298),均低于Z-N法(80.0％,8/10)和荧光PCR法(100.0％,3/3),差异有统计学意义(x2 =12.1,7.3,P值均＜0.01);但高于TB-Ab法(21.1％,4/19)且差异无统计学意义(x2=0.5,P＞0.05).IGRA-ELISA的阴性预测值为99.6％ (527/529),均高于TB-Ab法(93.4％,268/287)、Z-N法(93.6％,294/314)和荧光PCR法(88.8％,71/80),差异有统计学意义(x2值分别为28.9、27.8、46.3,P值均＜0.001).IGRA-ELISA的ROC曲线的AUC为0.846,P＜0.001,95％CI为0.815～0.877;AUC均大于TB-Ab法(0.521)、Z-N法(0.622)和荧光PCR法(0.625).结论 在本院的TB辅助诊断中,IGRA与其他3种检测技术比较有较高的敏感度,阳性预测值不高却有较高的阳性检出率和阳性诊断率,特异度较低因阴性预测值较高有较好的阴性排查能力,AUC大有相对较好的辅助诊断价值.
