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流式微球捕获芯片技术检测森林脑炎患者外周血细胞因子及淋巴细胞亚群变化
目的 用流式微球捕获芯片技术及流式细胞术,分析蜱传脑炎(Tick-borne encephalitis,TBE)患者与健康体检者外周血中细胞因子及淋巴细胞亚群百分比的差异.方法 选取2015年5月至2016年9月因蜱咬伤而在内蒙古林业总医院住院且血清森林脑炎病毒特异性抗体IgM阳性和(或)IgG≥1∶20的患者纳入TBE患者组;牙克石地区健康成年体检者纳入对照组.采用流式微球捕获芯片技术检测两组研究对象外周血细胞因子IL-17A、IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-6、IL-4和IL-2的含量,流式细胞术分别检测外周血T淋巴细胞(CD3+、CD3+CD8+和CDTCD4+)、B淋巴细胞(CD3-CD19+)和NK细胞(CD3-CD16+CD56+)的细胞百分比.采用秩和检验和t检验分别比较两组间细胞因子含量和细胞百分比的差异.结果 TBE患者组外周血中7种细胞因子含量均高于对照组,差异均有统计学意义(P均值＜0.05);TBE患者组外周血CD3+CD19+细胞百分比为(14.40±6.69),高于对照组(10.87±3.26),差异有统计学意义(t=3.34,P＜0.01),但两组间其他细胞的细胞百分比均无统计学意义.结论 血清IL-17A、IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-6、IL-4、IL-2及外周血B淋巴细胞的变化在森林脑炎免疫炎症反应中发挥作用,可以作为森林脑炎的辅助检查指标.
关键词： 蜱传脑炎 森林脑炎 细胞因子类 流式微球捕获芯片技术 -
四种血清细胞因子检测诊断糖尿病并发肺结核患者的价值
目的对糖尿病并发肺结核患者血清中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-6及IL-37的表达情况进行分析并探究其临床意义.方法 采用数字表法随机选取2015年6月至2016年12月之间本院患有糖尿病及肺结核的患者,分为3个组(每组40例):分别为糖尿病组(实验1组)、肺结核组(实验2组)、糖尿病并发肺结核组(实验3组);再采用数字表法随机选取健康志愿者作为对照组(40名).利用酶联免疫吸附试验对上述4组人群血清中的TNF-α、IFN-γ、IL-6及IL-37的表达情况进行分析比较.结果 实验1、2、3组患者的TNF-α、IFN-γ、IL-6及IL-37在外周血血清中的表达水平[实验1组分别为(0.39±0.11)、(0.23±0.09)、(11.20±4.32)、(6.64±2.99) g/L;实验2组分别为(0.65±0.13)、(0.27±0.08)、(17.80±4.10)、(8.75±3.52) g/L;实验3组分别为(0.99±0.14)、(0.38±0.07)、(25.80±5.29)、(9.87±3.95) g/L]的检测水平均明显高于对照组[分别为(0.27±0.12)、(0.20±0.05)、(5.71±3.97)、(4.32±2.18) g/L](实验1组与对照组比较,t值分别为20.785、0.367、27.659、3.984.除IFN-γ以外,P值均<0.05;实验2组与对照组比较,t值分别为65.818、1.039、13.682、5.440,P值均<0.05;实验3组与对照组比较,t值分别为115.997、2.736、18.849、5.292,P值均<0.05);且病情越重细胞因子水平越高,即实验3组的4个细胞因子水平均明显高于实验1、2组患者(实验1组与实验3组比较,t值分别为-51.961、-8.544、-14.977、-6.158,P值均<0.05;实验2组与对照组比较,t值分别为65.818、1.039、13.682、5.440,P值均<0.05),而实验2组的4个细胞因子水平均高于实验1组(实验1组与实验2组比较,t值分别为-22.517、-5.081、-28.844、-7.938,P值均<0.05);在实验3组患者中,有空洞者的IL-37水平为(10.85±4.19) g/L,明显高于无空洞者[(4.98±2.38) g/L](t=9.124,P<0.05).结论 TNF-α、IFN-γ、IL-6及IL-37的水平变化与糖尿病并发肺结核患者的免疫反应有密切的相关性,这4种细胞因子表达水平的高低与病情相关.
关键词： 糖尿病并发症 结核 肺 细胞因子类 结果评价(卫生保健) -
结核分枝杆菌ESAT6-RpfE亚单位疫苗的构建与免疫原性研究
目的 构建Mtb ESAT6-RpfE(早期分泌抗原靶6-复活促进因子E)的原核表达载体,表达和纯化融合蛋白,并对其免疫原性进行研究.方法 分别以Mtb H37Rv及临床株的基因组为模板,PCR扩增esat6、rpfE基因,依次插入pET30a质粒并在大肠埃希菌BL21中表达纯化ESAT6-RpfE蛋白.采用完全随机的方法将C57BL/6小鼠分组,每组6只,共进行了两次实验,第一次实验分为ESAT6、RpfE、ESAT6-RpfE、PBS、BCG五组,佐剂为二甲基三十六烷基胺(dimethyl-dioctyldecyl ammonium bromide,DDA)；第二次实验有ESAT6-RpfE、PBS、BCG三组,佐剂为DPG[DDA+ poly(I:C)+明胶].分别于0、3、6周皮下免疫C57BL/6小鼠.末次免疫8周后,用特异性抗原ESAT6及RpfE刺激,检测其分泌IFN-γ的水平；ELISA检测血清特异性抗体IgG2b、IgG1.结果 PCR扩增的esat6、rp/E基因序列与GenBank报道一致；融合蛋白主要以包涵体形式表达；亚单位疫苗免疫动物能够分泌RpfE特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[(427.13±100.46)]显著高于PBS组(26.13±22.34;q=7.924,P＜0.001)；分泌ESAT6刺激特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[(506.50±140.40)]明显高于PBS组(19.25±14.75；q=11.36,P＜0.001)和BCG组(125.5±46.41；q=8.882,P＜0.001).FSAT6-RpfE免疫组能诱导产生特异性抗体.结论 成功构建并表达ESAT6-RpfE融合蛋白.此融合蛋白可在C57BL/6小鼠中诱导抗原特异性的免疫应答,可作为新型结核亚单位疫苗的候选疫苗予以进一步研究.
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细胞因子基因多态性与肺结核并发糖尿病易感性的相关性研究
目的 探索细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)+874A/T位点、白细胞介素(IL)-10-1082G/A位点和-592A/C位点基因多态性与肺结核并发糖尿病(pulmonary tuberculosis and diabetic mellitus,PTB-DM)易感性的关系,以及遗传危险因素在PTB-DM发病机制中的作用,为PTB-DM高危人群基因多态性筛查提供理论依据.方法 采用病例对照研究方法,纳入江苏省2013年4月1日至2014年3月31日3个市(县)142例PTB-DM患者(PTB-DM组),同期选取诊断为结核病的患者147例(TB组)和糖尿病患者141例(DM组)作为对照.通过结构式问卷调查获取研究对象社会人口学信息,采集患者血样并提取DNA,采用聚合酶链式反应并限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLF)方法检测IFN-γ+ 874A/T位点、IL-10-1082G/A位点和-592A/C位点基因多态性.采用EpiData和SPSS 16.0统计软件录入与分析数据,运用单因素方差分析和多因素logistic回归分析IFN-γ+874A/T位点、IL-10-1082G/A位点和-592A/C位点基因多态性与PTB-DM易感性的相关性.结果 IFN-γ+874A/T、II-10-592A/C、IL-10-1082G/A位点经PCR扩增和基因多态性位点分型鉴定,分别获得等位基因A和T、A和C、G和A,以及基因型AA、AT、TT;AA、AC、CC;GA、AA.基因多态性检测结果显示,仅PTB-DM组I1-10-1082G/A位点A等位基因频率(92.61％,263/284)高于DM组(87.59％,247/282)(x2=3.995,P=0.046)、AA基因型频率(85.21％,121/142)高于DM组(75.18％,106/141)[校正OR(aOR)=1.970;95 ％CI:1.066～3.643;P=0.030].IL-10-592和-1082两位点间存在连锁不平衡(D’=0.959,r2=0.181,P＜0.001),PTB-DM患者的IL-10 C-A单倍型频率(25.90％)明显高于DM组患者(17.60％)(OR=1.590,95％CI=1.056～2.396,P=0.026).结论 IL-10-1082位点的AA基因型可能与PTB-DM易感性有关,为疾病共患的危险因素;IL-10单倍型与PTB-DM易感性存在相关性,其C-A单倍型可能使DM患者共患TB的风险上升.而IL-10-592A/C位点和IFN-γ +874A/T位点可能与DM患者对TB的易感性、或者TB患者对DM的易感性无关.
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结核抗原诱导的人外周血细胞因子调控网络在结核病诊断中的价值
目的 γ-干扰素(IFN-γ)释放试验(IGRA)是目前广泛运用的结核病筛查和诊断技术,但其无法区分活动性结核病和潜伏性结核感染(LTBI).本研究旨在发现更加合适的血清标志物(细胞因子)可以替换IGRA,用于活动性结核病的诊断和LTBI者的筛查,以及这些细胞因子之间的相互调控网络关系.方法 40份健康人(简称“健康组”)血液样本,40份确诊为活动性肺结核患者(简称“肺结核组”)的血液样本,40份LTBI者(简称“LTBI组”)的血液样本;通过结核分枝杆菌特异性抗原[早期分泌抗原靶6(ESAT6)和培养滤液蛋白10(CFP10)]进行刺激;通过人细胞因子芯片对刺激后的细胞因子表达变化进行检测;并筛选显著变化的因子,进行细胞因子调控网络构建.结果 在肺结核组患者的外周血中嗜酸粒细胞趋化蛋白(CCL)1 (I-309)、趋化因子CXCL9[又称为Mig,即monokine induced by IFN-γ(IFN-γ诱导的单核因子)]、白细胞介素(IL) 10、IL6、集落刺激因子(CSF)2、CSF3、IL8、IL1α、IL7、转化生长因子(TGF)-β1、CCL2、IL2、IL13、肿瘤坏死因子(TNF)α等因子在结核特异性抗原刺激后显著上调(2.06倍至3.18倍);而在健康组和LTBI组当中却没有显著上调.在肺结核组和LTBI组患者的外周血中CCL3、IL1b、CCL8、IFN-γ、CXCL10因子在结核分枝杆菌特异性抗原刺激后明显上调(2.44倍至11.56倍);而在健康组中这些因子没有明显的上调.趋化因子CCL4和巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α因子在健康组、LTBI组和肺结核组外周血中,经过结核分枝杆菌特异性抗原刺激后,表达都明显上调.细胞因子调控网络显示,这些表达上调的因子,主要集中于IFN-γ和IL1α因子调控网络中.结论 CXCL10(IP-10)、CCL3、CCL8和IL1β因子可能比IFN-γ更适合用于结核病或LTBI者的筛查.
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结核分枝杆菌Rpf-DNA疫苗对Mtb感染小鼠免疫保护作用的研究
目的 评价Mtb复苏因子DNA疫苗(resuscitation-promoting factor DNA,Rpf-DNA)对Mtb感染宿主的免疫保护作用.方法 构建复苏因子D(Rpf D-DNA)和复苏因子E(Rpf E-DNA)质粒疫苗,180只BALB/c 小鼠(4周龄)分为6组,每组30只,分别用空质粒、Rpf D-DNA质粒、Rpf E-DNA质粒、BCG、生理盐水免疫,H37Rv标准株气溶胶感染.检测血清复苏因子(Rpf)抗体、IFN-γ; RpfD、E刺激淋巴细胞后进行淋巴细胞增殖、细胞杀伤实验；检测细胞上清IFN-γ、IL-12、IL-2;对肺组织进行病理学检测和细菌负荷(CFU)计数.结果 (1)疫苗免疫组血清Rpf D、Rpf E抗体水平；Rpf D组0.32±0.1,Rpf E组0.39±0.1,BCG组0.02±0.01,空质粒组0.01±0.0,生理盐水组0.09±0.04,空白对照组0.03±0.01,RpfD组与RpfE组抗体水平与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D:45.6,43.2,45.1,45.7；Rpf E:51.6,53.6,51.0,52.2;P值均＜0.01.血清IFN-γ:Rpf D组(43.9±24.8)pg/ml,Rpf E组(45.9±21.0)pg/ml,BCG组(21.0±11.0)pg/ml,空质粒组(7.9±4.9) pg/ml,生理盐水组(4.7±2.1) pg/ml,空白对照组(5.8±4.7)pg/ml,RpfD、RpfE质粒组与BCG组比较差异有统计学意义(F值分别为Rpf D:10.2；Rpf E:12.4;P值均＜0.05),与空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D:15.6,17.8,17.3;Rpf E:17.5,21.1,20.7;P值均＜0.01.(2)淋巴细胞增殖实验CCK-8:Rpf D组176.0±4.2,Rpf E组183.0±4.3,BCG组101.0±1.1,空质粒组100.0±6.8,生理盐水组104.0±8.4,空白对照组116.0±2.2,RpfD、RpfE质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:9.5,10.1,10.0,9.0;Rpf E:11.2,12.9,11.7,10.3;P值均＜0.05.细胞杀伤实验:Rpf D组32.0±3.2,Rpf E组30.0±4.2,BCG组16.0±5.9,空质粒组3.3±1.5,生理盐水组6.7±0.5,空白对照组7.3±3.5,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:8.8,14.5,13.7,11.9;Rpf E:8.1,12.5,11.6,11.1;P值均＜0.05.(3) Rpf D、Rpf E蛋白各自刺激淋巴细胞后上清细胞因子检测:IL-2:Rpf D组9.5±2.4,RpfE组9.2±1.2,BCG组2.4±2.1,空质粒组1.2±0.3,生理盐水组1.8±1.0,空白对照组1.5±0.7,Rpf D、Rpf E质粒组与其他各组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:12.5,14.6,13.5,13.9；Rpf E:12.0,13.6,13.1,13.2;P值均＜0.05.IFN-γ:Rpf D组22.2±5.7,Rpf E组28.7± 14.4,BCG组16.1±10.1,空质粒组9.8±1.6,生理盐水组13.2±2.1,空白对照组15.7±2.9,RpffD、RpfE质粒组与其他各组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:7.8,12.6,8.7,8.3;Rpf E:11.3,16.4,14.7,14.2;P值均＜0.05.结论 实验表明复苏因子疫苗能诱导Mtb感染小鼠产生体液免疫和细胞免疫,有希望成为结核病候选疫苗之一.
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肺结核患者血细胞因子水平与肺纤维化的相关性研究
目的 评价6种血清细胞因子与肺纤维化及其功能损害程度间的关系.方法 测定133例肺结核患者的肺功能、胸部HRCT和血细胞因子,根据肺功能结果分为正常组(47例)、限制性轻度减退组(36例)、限制性显著减退组(25例)和限制性严重减退组(25例).并计算反映肺纤维化程度的HRCT分值.结果 肺功能4组中,血清细胞因子IL-1、IL-2、IL-5、IL-6、IFN-Υ、TNF-α的均值经检验H值分别为101.282、96.454、0.990、0.538、102.300、97.715,提示IL-1、IL-2、IFN-Υ、TNF-α的均数在4组间的差异有统计学意义(P=0.000).HRCT分值的变化范围是1～15分,IL-1、TNF-α与HRCT分数呈显著正相关(分别为R=0.757 P=0.000,R=0.972 P=0.000),而IL-2、IFN-Υ与HRCT分数呈显著负相关(分别为R=-0.738 P=0.000,R=-0.750 P=0.000),IL-5、IL-6与HRCT分数无关(分别为R=0.102 P=0.241,R=0.048 P=0.584).按HRCT分数的大小,将133例病人分为低分组(99例)和高分组(34例),IL-1、TNF-α的均数在2组的差异有统计学意义(P=0.000).各细胞因子之间也存在相互关系,其中IL-1和TNF-α,IL-5和IL-6以及IL-2和IFN-Υ之间关系密切,而且变化方向相同.IL-1和IL-2,IL-1和IFN-Υ,IL-2和TNF-α以及IFN-Υ和TNF-α之间关系亦非常密切,但变化方向相反.结论 血清细胞因子与肺结核患者的肺功能、肺纤维化程度有相关性,其中IL-1、TNF-α的相关性强.
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牛分枝杆菌感染巨噬细胞(THP-1)全基因表达谱变化的研究
目的 分析可用于牛结核病免疫学诊断的候选靶标,同时初步探讨由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)引起人结核病的免疫学发病机制.方法 牛分枝杆菌(AF 2212/97)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis(H37 Rv))感染人的模式巨噬细胞(THP-1),采用含有22 000个基因全长的基因芯片分析感染72 h后的THP-1细胞全基因组的在转录水平的表达谱变化.在确定所分析的芯片的特异性和稳定性均达到要求的基础上,通过GO显著性统计分析,研究表达变化的基因所对应蛋白的分子功能,生物过程以及细胞组分;进一步采用Pathway显著性统计分析,研究表达差异蛋白之间的相互作用.结果 感染H37Rv后的THP-1细胞,存在290个差异基因表达,其中170个上调表达,120个下调表达,与以往的结果类似.牛分枝杆菌感染的THP-1细胞中有1 899(8.6%)个基因差异表达,其中1 075个基因被上调表达(56.6%),其他43.4%被下调.1 899个基因中1 674个在GenBank有记录,263个是新基因,,基质金属蛋白酶12(H200000442)被上调达60.4921倍;下调幅度大的蛋白丝氨酸/半胱氨酸抑制酶(H200006177)被下调6.29倍.采用GO分析发现,这些基因对应的多为炎症因子蛋白、凋亡蛋白、细胞外基质蛋白、T细胞受体信号通路相关蛋白等.其中与炎症相关的的蛋白有47个,如TNF、IL8、CXCL3、CCL8、CCL7、IFNK、IL-26、CCL28等.随后的Pathway分析差异表达基因对应的2 014个蛋白,展示了一系列的引起结核病发病的重要信号传导通路.结论 基因表达谱研究可为牛结核病发病机制及其诊断研究提供大量有益的生物学信息.
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结核分枝杆菌膜囊泡的分离及其对细胞因子释放的作用
目的 分离体外培养的结核分枝杆菌分泌的膜囊泡,检测其形态和粒径分布,初步探索结核分枝杆菌膜囊泡对巨噬细胞中细胞因子释放的作用.方法 采用结核分枝杆菌实验室标准菌株H37Rv,通过7H9培养基复苏、扩大培养标准株H37Rv至对数生长期,菌体全部接种于苏通培养基中继续培养3周,离心取上清,超滤浓缩结合超速离心分离提取结核分枝杆菌H37Rv膜囊泡,通过透射电镜观察膜囊泡的大小、形态,采用纳米颗粒跟踪仪分析膜囊泡的粒径及分布.同时,设置不处理对照组、H37Rv感染组[按照感染复数(multiplicity of infection,MOI)=20∶1]和H37Rv膜囊泡处理组(按照膜囊泡∶细胞=100∶1)处理佛波酯(50 ng/ml)诱导贴壁的单核巨噬细胞(THP-1)4 h,更换新鲜培养基后0 h、4 h、8 h、24 h收集细胞培养上清,采用Milliplex多细胞因子检测试剂盒检测细胞因子的释放情况,通过曼-惠特尼U(Mann-Whitney U)检验对各时间点H37Rv膜囊泡处理组和不处理对照组之间肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素10(IL-10)释放量进行比较,以P<0.05为差异有统计学意义. 结果 按照调整后的提取方法得到的提取物中可检测到H37Rv分泌的膜囊泡,平均粒径为137 nm,主要分布在30~510 nm之间,<250 nm的膜囊泡数量占总量的96.88%.4 h、8 h和24 h 的TNF-α、IL-6和IL-1β释放量与不处理对照组[分别为348.19(333.99,360.47) pg/ml、412.38(406.67,418.79) pg/ml、324.44(316.11,331.14) pg/ml;3.01(2.81,3.02) pg/ml、5.40(5.26,5.83) pg/ml、13.22(11.80,13.77) pg/ml;118.92(113.97,122.47) pg/ml、132.33(125.87,137.62) pg/ml、169.31(167.75,172.49) pg/ml]相比,H37Rv膜囊泡处理组[分别为507.33(501.80,513.84) pg/ml、4483.00(4130.75,4522.50) pg/ml、8170.00(8058.25,8206.75) pg/ml;12.88(12.04,13.84) pg/ml、68.51(66.88,69.77) pg/ml、335.44(331.02,340.64) pg/ml;800.57(791.18,809.60) pg/ml、1559.00(1546.00,1566.00) pg/ml、4316.50(4094.75,4389.75) pg/ml]均明显增加,差异均有统计学意义(U值均<0.001,P值均<0.01);但4 h、8 h和24 h的IL-10释放量[不处理对照组分别为1.23(1.21,1.31) pg/ml、1.56(1.31,1.82) pg/ml、5.41(4.99,5.89) pg/ml;H37Rv膜囊泡处理组分别为4.56(4.49,4.82) pg/ml、1.43(1.28,1.89) pg/ml、1.56(1.48,1.68) pg/ml]差异均无统计学意义(U值分别为6.00、17.00、7.00,P值分别为0.065、0.898和0.087). 结论 本研究建立了结核分枝杆菌膜囊泡分离提取的技术流程,可以得到纯度较好、形态完整、粒径正常的膜囊泡.同时,结核分枝杆菌膜囊泡可以诱发巨噬细胞中细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放.
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MF59佐剂增强热灭活卡介苗的免疫原性
目的 研究MF59佐剂[一种由角鲨烯、山梨糖醇三油酸酯(Span85)、吐温80和柠檬酸缓冲液组成的水包油乳剂]对热灭活BCG(hBCG)免疫小鼠诱导免疫应答的影响,验证自制MF59增强hBCG诱导细胞免疫反应的作用.方法 BALB/c (SPF级)小鼠分成A～G组,每组8只,于第0、2、4周皮下注射0.2 ml MF59、低剂量hBCG(0.025 mg/ml)、中剂量hBCG(0.25 mg/ml)、高剂量hBCG(2.5 mg/ml)、MF59+低剂量hBCG、MF59+中剂量hBCG、MF59+高剂量hBCG.末次免疫2周,解剖小鼠.取小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞,并在体外经BCG PPD刺激培养,ELISA检测培养上清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-1β、Ib-2、IL-4、IL-12含量,酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测脾细胞分泌IFN-γ、IL-2和IL-4的斑点形成细胞数(SFCs).所有试验组的平均值比较采用一元方差分析、每两组平均值比较采用小显著差异法,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 MF59作为高剂量hBCG的佐剂(G组)免疫小鼠,其脾细胞体外经BCG PPD刺激培养,分泌IFN γ的SFCs[(151.3±66.6)个]、IL-2的SFCs[(247.8±58.0)个]和IL-4的SFCs[(65.8±24.6)个]显著高于其他组[其他组IFN-γ、IL-2和IL-4的SFCs的高平均值分别为(30.4±13.0)个、(37.1±10.8)个和(16.4±9.7个)](分泌IFN-γ的SFCs比较,t=3.2,P=0.007;分泌IL-2的SFCs比较,t=3.6,P=0.003;分泌IL-4的SFCs比较,t=3.0,P=0.01).MF59与不同剂量hBCG联合免疫小鼠,其腹腔巨噬细胞体外经BCG PPD刺激培养,培养上清IL-1β水平分别为(663.3±177.5) pg/ml、(813.8±193.4)pg/ml和(742.3±316.1)pg/ml,均显著高于A、B和C组[分别为(104.7±65.8)pg/ml、(82.9±54.8) pg/ml和(66.5±53.5) pg/ml](E、F和G与A组比较:t=2.9,P=0.01;t=3.5,P=0.004;t=2.5,P=0.031.E、F和G与B组比较:t=3.1,P=0.007;t=3.6,P=0.003;t=2.6,P=0.024.E、F和G与C组比较:t=3.0,P=0.01;t=3.5,P=0.004;t=2.5,P=0.031).A、C和G组小鼠的腹腔巨噬细胞体外经BCG-PPD刺激培养,培养上清IL-12水平[分别为(36.3±20.5)pg/ml、(94.5±20.6)pg/ml和(128.2±54.6) pg/ml]均显著低于E和F组[(545.7±97.2) pg/ml和(665.5±295.4) pg/ml](A、C和G组与E组比较:t=-5.1,P=0.000;t=-4.5,P=0.000;t=-3.7,P=0.002.A、C和G组与F组比较:t=-4.4,P=0.001;t=-3.7,P=0.002;t=-2.9,P=0.012).结论 MF59与高剂量hBCG联合免疫小鼠,可以增强脾细胞体外分泌BCG-PPD特异的IFN-γ、IL-2和IL-4;MF59与低、中剂量hBCG联合免疫小鼠,可以增强腹腔巨噬细胞体外分泌BCG-PPD特异的IL-1β和IL-12.
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联合检测三种细胞因子对结核性和恶性胸腔积液的鉴别诊断价值
目的 探讨联合检测胸腔积液中三种细胞因子——腺苷脱氨酶(ADA)、y-干扰素诱导蛋白10(IP-10)、白细胞介素-27(ID27)水平对结核性和恶性胸腔积液的鉴别诊断价值.方法 选取2015年10月至2016年4月在贵州医科大学附属医院呼吸内科及贵州省肿瘤医院胸部肿瘤科住院的45例结核性胸腔积液患者和45例恶性胸腔积液患者作为研究对象.采用酶联免疫吸附法测定两组患者IP-10、IL-27水平;通过查阅病历获取ADA检测结果.应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)获得ADA、IP-10及IL-27单项及联合检测的佳临界值、敏感度和特异度.结果 结核性胸腔积液组ADA、IP-10、IL27水平分别为40.76(29.19～46.31) U/L、63.01(55.87～73.71) ng/L、60.92(37.98～74.53) ng/L,明显高于恶性胸腔积液组[分别为8.46(6.70～17.26) U/L、29.72(19.36～38.50) ng/I、20.86(13.98～30.10) ng/L],差异均有统计学意义(U值分别为-7.88、-7.32、-7.46,P值均＜0.01).应用ROC曲线得出ADA、IP 10、IL-27诊断结核性胸腔积液的佳临界值分别为24.95 U/L、50.61 ng/L、36.91 ng/L,敏感度分别为91.11％(41/45)、86.67％ (39/45)、86.67％ (39/45),特异度分别为95.56％(43/45)、88.89％(40/45)、93.33％(42/45);IP-10-+-IL-27、ADA+IP-10、ADA+ID27联合诊断结核性胸腔积液的敏感度分别为86.67％(39/45)、97.78％(44/45)、100.00％(45/45),特异度分别为97.78％ (44/45)、100.00％ (45/45)、100.00％ (45/45).结论 ADA、IP-10、IL-27检测对结核性和恶性胸腔积液鉴别具有重要意义,联合检测更有助于结核性和恶性胸腔积液的鉴别诊断.
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慢性阻塞性肺疾病合并肺结核患者部分细胞因子水平的表达及其意义
目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)合并肺结核患者部分细胞因子水平的表达及其意义.方法 对2012年7月至2013年6月间住院诊治的50例COPD合并肺结核患者(研究组)、50例肺结核患者(肺结核对照组)、50例COPD患者(COPD对照组),以及50名健康志愿者(健康对照组)的细胞免疫功能进行检测.采用流式细胞仪抗体双标法检测各组人员的外周血自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)、T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)的表达率,采用ELISA法测定患者血清中白细胞介素(IL)-1、可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)、IL-6、γ干扰素(IFN-γ)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平.多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验.结果 COPD对照组的NK细胞比率[(15.34±8.11)％]高于研究组[(12.37±6.96)％]和肺结核对照组[(12.53±7.14)％](t值分别为2.20和2.08,P值均＜0.05),研究组CD4+T淋巴细胞比率[(30.09±11.09)％]低于肺结核对照组[(39.80±9.42)％](t=2.80,P＜0.01).研究组的IL-1表达水平[(30.14±20.84) ng/L]高于COPD对照组[(23.54±9.94) ng/L](t=2.00,P＜0.05);COPD对照组的sIL-2R的表达水平[(114.70±49.32) pmol/L]低于研究组[(168.78±94.92) pmol/L]与肺结核对照组[(182.68±74.91)pmol/L](t=4.07和5.12,P值均＜0.01);在IL-6的表达上,肺结核对照组[(75.62±75.97) ng/L]高于研究组[(51.46±35.86) ng/L]与COPD对照组[(48.90±30.04) ng/L](t值分别为2.68和2.97,P值均＜0.01);研究组[(28.82±32.40) ng/L]与肺结核对照组[(29.90±23.79) ng/L]的IFN-γ表达均高于COPD对照组[(16.60±9.27) ng/L](t值分别为2.89和3.15,P值均＜0.01).结论 与对照组相比,研究组患者存在以NK细胞、CD4+T淋巴细胞为主的细胞免疫功能低下,同时还存在IL-1、sIL-2R、IL6、IFN-γ等细胞因子表达异常.
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脂肪因子与糖尿病合并肺结核关系的研究进展
结核病是当今严重的传染病之一.结核病与糖尿病关系密切,糖尿病患者被认为是结核病易感人群之一,以病情进展快、疗效差、耐药性高、预后凶险为特征的糖尿病合并肺结核患者的大量出现,给治疗和控制带来了新挑战.笔者针对某些脂肪因子的改变与糖尿病及结核病的关系进行综述,目的在于加深对糖尿病合并肺结核发病机制的认知,从而对于这类患者的早期诊断及治疗、控制疾病进程,以及提高治愈率起到积极作用.
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细胞因子表达水平与三氯乙烯药疹样皮炎的关系
目的 探讨三氯乙烯( TCE)药疹样皮炎病例血清中细胞因子含量,寻找TCE药疹样皮炎相关的效应标志物.方法 选取TCE药疹样皮炎病例22例为病例组、与病例同车间的健康TCE作业工人22名为暴露对照组、未从事过TCE作业的健康工人22名为非暴露对照组,采用液相悬浮芯片技术检测各组研究对象血清中8种细胞因子[分别为白细胞介素1β(IL-1β)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素5(IL-5)、白细胞介素8(IL-8)、巨噬细胞趋化蛋白1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β)]的含量,并采用Spearman秩相关分析其相互间及IL-5与嗜酸性粒细胞间的相关性.结果 病例组血清中IL-1 β、IFN-γ、IL-5、IL-10、MCP-1、MIP-1β及IL-8含量的中位数分别为:0.15、80.13、2.95、6.45、83.83、1057.90、440.22 pg/ml,均高于暴露对照组(分别为0.09、16.93、0.11、0.07、28.75、241.07、28.26 pg/ml,P值均＜0.01)和非暴露对照组(分别为0.09、3.14、0.11、0.07、25.27、209.64、207.34 pg/ml,P值均＜0.01);病例组中TNF-α含量的中位数为13.26 pg/ml,高于暴露对照组(4.87 pg/ml,P＜0.01),但与非暴露对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).暴露对照组IL-5含量的中位数为0.11 pg/ml,高于非暴露对照组(0.11 pg/ml,P＜0.01),非暴露对照组IL-8含量的中位数为207.34 pg/ml,高于暴露对照组(28.26 pg/ml,P＜0.01).病例组中,除了 TNF-α与IFN-γ、TNF-α与IL-5之间无相关性以外,其余细胞因子两两之间均为正相关(rIL-1β,IFN-γ=0.500,rIL-1β,TNF-α=0.348,rIL-1β,MCP-1=0.537,rIL-1β,MIP-1β =0.477,rIL-1β,IL-8=0.466,rIL-1β,IL-5=0.610,rIL-1β,IL-10=0.626,rIFN-γ,MCP-1=0.460,rIFN-γ,MIP-1β=0.491,rIFN-γ,IL-8=0.322,rIFN-γ,IL-5=0.532,rIFN-γ,IL-10=0.511,rTNF-α,MCP-1=0.325,rTNF-α,MIP-1β=0.283,rTNF-α,IL-8=0.430,rTNF-α,IL-10=0.271,rMCP-1,MIP-1 β=0.659,rMcP-1,IL-8=0.526,rMcP-1,IL-5=0.504,rMCP,IL-10=0.614,rMIP-1β,IL8=0.601,rMIP1β,IL-5=0.451,rMIP-1β,IL-10 =0.579,rIL-8,IL-5=0.255,rIL-8,IL-10=0.403,rIL-5,IL-10=0.798,P值均＜0.05).嗜酸性粒细胞数量增多的病例组,其血清中IL-5含量的中位数为8.92 pg/ml,高于嗜酸性粒细胞数量降低的病例组(IL-5含量中位数为1.04 pg/ml,P＜0.05).结论 IL-1 β、IFN-γ、TNF-α、IL-8、MCP-1、MIP-1β、IL-5及IL-10表达异常与TCE药疹样皮炎的发病相关,各细胞因子通过复杂的网络系统在发病过程中协同发挥作用,可作为健康监护和临床治疗的参考指标.
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微囊藻毒素-LR对小鼠单核细胞和淋巴细胞的影响
目的 探讨微囊藻毒素-LR(MC-LR)对小鼠血液中单核细胞和淋巴细胞的影响及毒性效应,筛查血液中早期灵敏效应指标.方法 1月龄SPF级雄性昆明小鼠按体重采用随机数字表法分为5组,每组7只,分别分为对照组、低剂量组、中低剂量组、中高剂量组、高剂量组,每天给予1次腹腔注射染毒,分别给予生理盐水及3.125、6.250、12.500、25.000 μg/kg剂量的MC-LR.染毒7d后采用放射免疫方法检测重要相关细胞因子,KCl-SDS沉淀法检测淋巴细胞DNA-蛋白质交联(DNAprotein crosslinks,DPC)情况,流式细胞仪检测单核细胞吞噬功能及单核细胞和淋巴细胞的活性氧变化(reactive oxygen species,ROS),并分析其变化情况.结果 中低、中高和高剂量MC-LR染毒组小鼠白细胞介素-6[分别为(346.837±25.536)、(360.847±37.886)、(434.245±35.858) pg/ml]均高于对照组[(232.775±32.816) pg/ml](t值分别为-7.258、-6.760、-10.966,P值均＜0.05)；高剂量组肿瘤坏死因子-α含量[(10.782±0.966) fmol/ml]低于对照组[(16.878±3.378) fmol/ml](t=4.591,P＜0.05).中低和高剂量组淋巴细胞DPC[分别为(242.576±7.545)、(241.472±2.793) ng/ml]高于对照组[(228.657±4.130) ng/ml](t值分别为-4.282、-6.801,P值均＜0.05)；低、中低、中高和高剂量组淋巴细胞DCF荧光强度(依次为3299.37±120.54、3281.38±58.34、3308.06±136.12、3346.92±108.69)均低于对照组(3770.81±131.39)(t值分别为6.995、9.007、6.472、6.577,P值均＜0.05).低、中低、中高和高剂量单核细胞DCF荧光强度(依次为3271.51±140.79、3270.05±117.92、3326.90±114.39、3292.49±145.97)均低于对照组(3841.72±130.92)(t值分别为7.847、8.584、7.835、7.411,P值均＜0.05).其他检测指标未见明显改变.结论 在体内实验中,可观察到MC-LR对血液中单核细胞和淋巴细胞有一定的影响.经比较,白细胞ROS为本实验中灵敏效应指标.
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解毒化瘀颗粒结合西医常规疗法治疗登革热临床研究
目的 评价解毒化瘀颗粒结合西医常规疗法治疗登革热的疗效.方法 将符合入选标准的33例登革热患者,采用随机数字表法分为治疗组14例和对照组19例,对照组采用西医常规疗法治疗,治疗组在对照组基础上联用解毒化瘀颗粒.2组均治疗10 d.观察并比较患者并发症的发生率、退热时间、重症及实验室指标的检测结果.结果 治疗前,治疗组血清ALT、AST水平明显高于对照组(t值分别为2.830、2.109,P值分别为0.014、0.044),但后续治疗中治疗组ALT变化趋势平缓,AST恢复时间缩短,差异无统计学意义(P>0.05).治疗组可溶性血管细胞间黏附分子-1(soluble vascular cell adhesion molecule-1,sVCAM-1)在治疗后及治疗后3 d时较对照组同时段升高(t值分别为2.780、2.130,P值分别为0.018、0.460),后迅速下降.治疗组单核细胞趋化因子-1(monocyto chemotactic protein-1,MCP-1)在治疗后6 d较对照组同时段下降(t=-2.164,P=0.042).结论 解毒化瘀颗粒联合西医常规疗法可明显减轻登革热患者的肝脏损伤,降低血浆sVCAM-1、MCP-1浓度.
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海珠喘息定片联合生物共振诊断治疗仪治疗支气管哮喘临床研究
目的 评价海珠喘息定片联合生物共振诊断治疗仪治疗支气管哮喘的疗效.方法 将符合入选标准的94例支气管哮喘患者采用随机数字表法分为2组,每组47例.对照组采用生物共振诊断治疗仪治疗,观察组在对照组基础上口服海珠喘息定片.2组均治疗50 d.采用全自动肺功能检测仪检测用力肺活量(forced vital capacity,FVC)、呼气峰流速值(peak expiratory flow,PEF)、第1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in 1 second,FEV1)、FEV1/FVC;采用ELISA法检测血清hs-CRP、IL-8、IL-4、TNF-α含量,以及基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinase 1,TIMP-1)、Toll样受体2(toll like receptor 2,TLR2)及嗜酸性阳离子蛋白(eosinophil cationic protein,ECP)含量,评价临床疗效.结果 观察组总有效率为91.5%(43/47)、对照组为72.3%(34/47),2组比较差异有统计学意义(Z=4.201,P=0.037).治疗后,观察组FVC[(2.45±0.37)L比(1.93±0.32)L,t=3.561]、PEF[(6.16±1.25)L/s比(5.56±1.10)L/s,t=3.413]、FEV1/FVC[(68.39±6.44)%比(62.31±5.97)%,t=3.315]及FEV1[(2.61±0.56)L比(2.21±0.47)L,t=3.672]均高于对照组(P<0.05);观察组血清hs-CRP[(8.14±0.42)mg/L比(12.41±0.65)mg/L,t=3.424]、IL-8[(113.47±11.13)ng/L比(153.81±19.73)ng/L,t=3.692]、TNF-α[(0.31±0.04)ng/L比(0.70±0.13)ng/L,t=3.923]、IL-4[(39.43±6.23)ng/L比(47.75±8.23)ng/L,t=3.783]水平均低于对照组(P<0.05);观察组血清MMP-9[(84.89±9.19)ng/ml比(113.35±11.35)ng/ml,t=3.671]、TIMP-1[(91.53±8.78)ng/ml比(131.15±12.45)ng/ml,t=3.782]、ECP[(19.43±1.33)ng/L比(25.75±2.13)ng/L,t=3.561]水平均低于对照组(P<0.05),TLR2[(270.31±7.01)ng/L比(198.70±10.13)ng/L;t=3.871,P=0.038]含量高于对照组.结论 海珠喘息定片联合生物共振诊断治疗仪可效改善支气管哮喘患者的肺功能,降低炎性细胞因子水平,提高临床疗效.
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补肾活血中药含药血清对滑膜细胞分泌TNF-α、IL-1β水平的影响
目的:探讨补肾活血中药是否可以抑制兔滑膜细胞分泌TNF-α、IL-1β等炎性因子.方法:制作补肾活血方含药血清,体外分离并培养兔滑膜细胞,并鉴定、传代.实验分含空白血清对照组、含10%西乐葆血清组、含5%、10%、20%中药血清组等5组.以西乐葆含药血清作为对照,将不同浓度的中西药血清加入培养传代的第3代滑膜细胞,继续培养.观察药物对滑膜细胞分泌TNF-α、IL-1β水平的影响.结果:补肾活血方含药血清具有和西乐葆含药血清类似的抑制滑膜细胞分泌TNF-α、IL-1β的作用,其抑制TNF-α分泌的作用随药物浓度的增加作用增强.结论:补肾活血中药可抑制滑膜细胞分泌TNF-α、IL-1β等炎性因子.
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幽门螺旋杆菌感染与骨质疏松症的研究进展
幽门螺旋杆菌是一种易侵犯胃黏膜的传染性病原体,感染机体后,可刺激体内肿瘤坏死因子及白细胞介素等细胞因子的释放.这些细胞因子调控骨的吸收或转化,促进破骨细胞形成及骨吸收,从而导致局部或全身的骨质疏松.幽门螺旋杆菌感染后可能引起血清雌激素、维生素B12等的降低,后两者可能是影响骨质疏松发病的重要因素.同时,幽门螺旋杆菌感染与胃炎、消化道溃疡、胃癌的发病密切相关,而这些疾病及治疗可能与骨质疏松相关,质子泵抑制剂(proton pump inhibitor,PPI)的应用可能会影响肠道钙的吸收,降低血钙以及增加骨折风险,胃切除术可能导致骨代谢障碍.
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软骨组织工程中细胞因子功能的研究进展
随着骨关节疾病发病率的增加以及人们对生活质量提出的更高要求,修复软骨损伤成为骨科临床一个重要的问题.软骨组织工程以其不损伤自身组织、可调控、创伤小等优点成为修复软骨组织损伤的突破口.本文就多种细胞因子在促进软骨种子细胞生长起的作用的新研究做一综述.
