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  • 消毒剂,你会用吗

    作者:叶俏

    消毒剂,就是能够起到杀灭病原微生物作用的产品.优质的消毒剂应具备杀死多种病原微生物、消毒能力强、作用迅速、无毒、无残留、无腐蚀、无刺激,对人和动物无害,对环境污染程度低的特点.消毒剂是如何分类的?市场上的消毒剂种类繁多,可以按照不同的方法进行分类.按照消毒效果分类:高效消毒剂,可以杀灭一切细菌繁殖体(包括分枝杆菌)、病毒、真菌及其孢子等,对细菌芽孢也有一定杀灭作用,达到高水平消毒要求;

  • 艾滋病患者合并分枝杆菌感染及其耐药性分析

    作者:唐柳生;蒙志好;陈敬捷;廖光付

    目的 研究柳州市2015年艾滋病患者合并分枝杆菌感染状况及其耐药性.方法 将经HIV抗体筛查和蛋白免疫印迹试验确证后的1106例艾滋病患者的各类样本采用中和离心法进行分枝杆菌培养,应用PNB法进行菌种鉴定,对分离的结核杆菌和非结核分枝杆菌进行耐药性试验.统计分析柳州市2015年艾滋病患者合并分枝杆菌感染状况及其耐药性.结果 共分离出结核杆菌121株,非结核分枝杆菌27例.结核杆菌总耐药率25.6%,耐多药(耐利福平及异烟肼以上)4株,其中3株来自痰标本,1株来自脑脊液标本;非结核分枝杆菌总耐药率100%.结论 艾滋病患者身体各部位均存在感染分枝杆菌的机会,虽然耐多药比率不高,但其总耐药率很高,特别是非结核分枝杆菌,应引起广大医务人员的重视.

  • 手工判读MGIT法检测分枝杆菌的效果评价

    作者:潘爱珍;柳正卫;张艳;朱丽萍;李媛

    目的 应用手工荧光判读仪对MGIT液体培养基进行快速检测分枝杆菌的效果评价.方法 收集2011年3月至2011年4月杭州市红十字会医院临床诊断为结核病的患者临床标本230份,其中涂片法抗酸染色阳性标本57份,阴性标本173份.分别对同份标本做L-J固体和MGIT液体培养法分离培养效果比较,结果统计学分析采用x2检验和非参数检验(Z),P值<0.05差异有统计学意义.结果 230份标本中,两种分离培养方法共分离出90株分枝杆菌菌株,检出率为39.1%( 90/230);其中MGIT液体培养检出率为34.3% (79/230),L-J培养检出率为27.4% (63/230).在173份抗酸染色阴性标本中,用液体培养和L-J培养分离培养检出率分别为19.1%(33/173)、11.0% (19/173).上述两组数据经统计学分析,培养检出率差异有统计学意义(P<0.05).MGIT液体培养法阳性报告时间中位数为13天;L-J培养法阳性报告时间中位数为21天,差异有统计学意义(Z=3.293,P<0.001).抗酸涂阳样本MGIT液体培养法阳性报告时间比抗酸涂阴标本提早7天.结论 手工MGIT液体培养法能快速检测分枝杆菌,检出率高,适合基层实验室推广应用.

  • 多位点PCR技术用于四川267株分枝杆菌临床分离株的鉴定

    作者:邓建平;董海燕;李群;赵秀芹;连璐璐;肖体权;万康林

    目的 初步了解四川省肺结核患者分枝杆菌菌种类型.方法 收集267株分枝杆菌临床菌株,经PNB/TCH鉴别培养基进行培养鉴定后,采用聚合酶链反应(PCR)对16S rRNA、Rv0577、IS1561、Rv1510、Rv1970、Rv3877/8和Rv3120基因位点进行扩增,鉴定至种,再经PRA-rpoB、hsp65基因测序进行验证.结果 267株分枝杆菌临床分离株多位点PCR结果显示结核分枝杆菌262株,非洲分枝杆菌Ⅰ型3株,非结核分枝杆菌2株.PNB/TCH鉴别培养基培养鉴定结果为结核分枝杆菌复合群266株,非结核分枝杆菌1株.2株非结核分枝杆菌分别为鸟分枝杆菌(M.avium)和脓毒分枝杆菌(M.septicum).多位点PCR结果与rpoB-PRA、hsp65基因测序结果一致.结论 多位点PCR技术鉴定分枝杆菌菌种结果准确可靠,且具有简便和快速等优点,有较大的分子流行病学应用价值,且对于临床诊断和治疗都具有重要意义.

  • 2010-2014年浙江省绍兴市涂阳肺结核患者耐药特征分析

    作者:高华强;金法祥;卢巧玲;牛文柯

    目的 了解绍兴市肺结核病患者耐药状况及影响因素,为制定耐药结核病防制策略提供科学依据.方法 对2010-2014年期间在绍兴市就诊的涂阳肺结核病患者的痰标本进行培养,经鉴定为结核分枝杆菌的菌株进行异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampicin,RFP)、链霉素(streptomycin,SM)和乙胺丁醇(ethambutal,EMB)4种一线抗结核药物的敏感性测试.结果 检测的3042份结核分枝杆菌阳性标本总耐药率为11.28%,其中,初治患者耐药率9.11%,复治患者耐药率26.60%,耐药顺位由高到低依次为INH、SM、RFP和EMB;耐多药率为5.33%,初治患者耐多药率2.96%,复治患者耐多药率22.07%.结论 绍兴市肺结核耐药率总体低于全国水平,但复治患者耐多药率较高,应加大耐多药结核病防控措施.

    关键词: 结核 分枝杆菌 耐药
  • HSP65基因PCR-限制性片断长度多态性分析毛细管电泳技术鉴定分枝杆菌的初步研究

    作者:王国庆;张朝武;黎源倩;周颖

    目的建立HSP65 PCR-RFLP毛细管电泳快速鉴定分枝杆菌的方法.方法采用PCR扩增分枝杆菌65-kDa热休克蛋白(HSP65)基因的一个约440bp片段,扩增产物分别经限制性内切酶BstEⅡ和HaeⅢ酶切后,用毛细管电泳-激光诱导荧光检测酶切片段.结果试验的全部7种分枝杆菌都有各自独特的酶切图谱模式,几乎所有酶切片段都能很好地分离.结论该方法用于分枝杆菌种水平的鉴定具有准确度、分辨率和灵敏度高的优点.

  • BACTEC MGITTM960全自动分枝杆菌培养鉴定/药敏仪基本原理及其应用

    作者:李晓妍;叶红梅;付香萍

    BACTECMGITTM960全自动分枝杆菌培养鉴定/药敏仪,能大大缩短分枝杆菌的检测时间,该仪器自动化程度高,无放射性污染,可进行药敏学动态研究.

  • 294株分枝杆菌药敏结果分析

    作者:叶振淮;王永祥;张进银

    我们统计了本院2007-2009年间从临床标本中培养检出的294株分枝杆菌,其检出率为16%,对检出的分枝杆菌进行药敏结果分析,以期能为临床合理用药治疗结核病提供一些参考数据.

  • 结核分枝杆菌Ag85B-ESAT-6融合蛋白重组耻垢分枝杆菌对小鼠的免疫原性研究

    作者:王平;王丽梅;张薇;柏银兰;康健;郝彦斐;罗泰来;徐志凯

    目的 评价表达Mtb Ag85B ESAT-6融合蛋白的莺组耻垢分枝杆菌(Ag85B-ESAT-6-rM.s)在小鼠中的免疫原性.方法 6周龄BALB/c小鼠经背部皮下注射1×106 CFU(colony-forming unit,菌落形成单位)的Ag85B-ESAT-6-rM.s,同时设M.s免疫组(10只)、B[CG免疫组(10只)、Ag85B-ESAT-6融合蛋白免疫组(10只)和生理盐水组(10只).接种免疫后1~6周,尾静脉采血,检测小鼠外周血CD4+和CD8+T细胞所占百分比;免疫后6周,MTS[ 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl )-2 H-tetrazolium,inner salt]法检测小鼠脾淋巴细胞增殖和酶联免疫斑点检测(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)检测脾淋巴细胞分泌γ干扰素(interferon γ,IFN-γ)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)等细胞因子的水平.结果 Ag85B-ESAT-6-rM.s免疫小鼠后能够明显刺激小鼠外周血CD4+和CD8+T细胞的产生,其所占百分比[(59.6±1.5)%]明显高于BCG免疫组[(48.8±2.3)%](t=12.252,P<0.05)和原始M.s免疫组[(45.7±1.6)%](t=20.166,P<0.05).Ag85B- ESAT-6-rM.s免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖指数(3.23±0.31)与BCG免疫刺激的增殖指数(2.95±0.36)相当(t=1.864,P>0.05),但其诱生IFN-γ的能力[斑点形成细胞(spot forming cells,SFC)][(167.5±36.6)SFC/106]明显高于BCG[(98.5±26.9)SFC/106](t=4.804,P<0.05).结论 Ag85B-ESAT-6融合蛋白在耻垢分枝杆菌中的表达能够明显提高M.s的免疫原性,并能够刺激小鼠机体产生有利于抗Mtb感染的免疫反应,作为TB新型候选疫苗具有一定的研究前景.

  • BACTEC960培养阳性530株分枝杆菌的形态学特征探讨

    作者:邹盛华;戴腊梅;张丽水

    目的 探讨分枝杆菌在BACTEC960中的生长特点和涂片抗酸染色形态特征,为菌群鉴定提供初步意见.方法 收集福州肺科医院临床标本经BACTEC960培养阳性530例,进行直接涂片抗酸染色、菌群鉴定和药敏试验.结果 结核分枝杆菌在MGIT培养管中呈絮状沉淀生长,镜检呈绳索状排列.非结核分枝杆菌(NTM)呈混浊生长,镜检呈散在、团粒状、块状、碎片状和松疏束状等不规则排列.结论 结核分枝杆菌在BACTEC960中培养形成有特点的缠结,在显微镜下很容易识别,对鉴定分枝杆菌有初筛作用.

  • BACTEC960培养阳性530株分枝杆菌的形态学特征探讨

    作者:邹盛华;戴腊梅;张丽水

    目的 探讨分枝杆菌在BACTEC960中的生长特点和涂片抗酸染色形态特征,为菌群鉴定提供初步意见.方法 收集福州肺科医院临床标本经BACTEC960培养阳性530例,进行直接涂片抗酸染色、菌群鉴定和药敏试验.结果 结核分枝杆菌在MGIT培养管中呈絮状沉淀生长,镜检呈绳索状排列.非结核分枝杆菌(NTM)呈混浊生长,镜检呈散在、团粒状、块状、碎片状和松疏束状等不规则排列.结论 结核分枝杆菌在BACTEC960中培养形成有特点的缠结,在显微镜下很容易识别,对鉴定分枝杆菌有初筛作用.

  • 内蒙古自治区结核分枝杆菌Spoligotyping分型及北京家族分析

    作者:余琴;苏云开;吕冰;马岩;连璐璐;杨晓敏;董海燕;刘耀;赵秀芹

    目的 了解内蒙古自治区结核分枝杆菌临床分离株的基因型构成,及该地区北京家族菌株的分布特征.方法 从内蒙古自治区结核病防治研究所收集2011年全年临床分离的372株结核分枝杆菌菌株及其372例来源患者的背景资料,采用间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)方法和BioNumerics 5.0软件进行基因分型分析,将372株临床菌株Spoligotyping分型结果与SpolDB 4.0数据库进行比对.另外,采用NTF及LSP对北京家族菌株进行分析.来源患者中汉族和蒙古族分别为282例及84例,其他为回族4例,维吾尔族和满族各1例,例数过少,因此仅分析主要民族与北京家族的易感性.以SPSS 13.0软件进行统计学分析,x2检验分析不同民族与北京家族易感性.结果 372株临床菌株共分为48种基因型,其中24种基因型为新的型别.85.48%(318/372)为北京家族,同时存在T家族(仅次于北京家族的主要流行基因型)占4.84% (18/372)、H家族(Haarlem)0.81%(3/372)、MANU家族(2004年先于印度Delhi发现)0.27%(1/372)和LAM家族(Latin American and Mediterranean,拉丁美洲和地中海家族)0.27%(1/372).汉族北京家族菌株占87.94%(248/282),非北京家族菌株占12.06% (34/282),蒙古族北京家族菌株79.76%(67/84),非北京家族菌株20.24% (17/84),差异无统计学意义(x2 =3.612,P=0.057).结论 内蒙古自治区结核分枝杆菌临床分离株基因具有多态性,且北京基因型为该地区主要流行株,而北京家族菌株与民族易感性间无关联.

  • 痰模型及目测涂片法检测抗酸杆菌的比较研究

    作者:刘庆福;刘予东;严秀丽

    目的 评价痰模型涂片法检测抗酸杆菌的价值.方法 对1089份初诊为活动性肺结核患者的痰标本,分别应用模型涂片法、目测涂片法检测抗酸杆菌,并与罗氏培养结果进行比较.检测结果比较采用x2检验和秩和检验,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 模型涂片法阳性检出率31.68%(345/1089),高于目测涂片的24.24%(264/1089)(x2=14.955;P<0.05),模型涂片法与目测涂片法的质量指标合格率分别为痰细胞(94.21%,86.41%)、痰膜大小(98.99%,75.30%)、厚薄(96.14%,74.29%)、染色(94.49%,87.60%)、痰膜脱落(97.43%,86.41%),较目测涂片法均明显提高(x2值分别为37.915、272.799、206.432、31.683、89.011,P值均=0.001).以罗氏培养结果为标准.模型涂片法灵敏度为82.69%(344/416),Kappa值为0.853,优于目测涂片法[灵敏度为63.46%(264/416),Kappa值为0.682].说明模型涂片法与罗氏培养法具有较好的一致性.结论 模型涂片既继承了目测涂片检测抗酸杆菌的简便快速,又较目测涂片制片质量和阳性检出率明显提高,具有较高的敏感度、特异度,适合基层实验室推广应用.

  • 广东省广州市2001-2004年分枝杆菌初步菌种鉴定与药物敏感性试验结果分析

    作者:吴龙章;黄洁玲;张院良;蔡杏珊;关平

    目的了解广州市2001-2004年3年间分枝杆菌菌种的分布状态和抗结核药物的耐受性情况,为临床诊断和治疗结核病提供可靠的科学依据.方法对2001年9月-2004年3月从1 459例患者中共分离出的2 154株分枝杆菌进行菌种鉴定,并采用绝对浓度间接法对结核分枝杆菌和部分非结核分枝杆菌进行4种抗结核药物的敏感性试验.结果非结核分枝杆菌的分离率由1998年7月-2001年9月的16.5%上升至20.3%;对2 154株分枝杆菌中的1 703株结核分枝杆菌复合群菌株进行的药物敏感性试验结果显示:原始耐药率由1998年7月-2001年9月的14.4%上升至20.3%.继发耐药率则由原来的35.4%下降至32.3%;而非结核分枝杆菌对抗结核药物基本上呈现高度的原始耐受性.结论对临床分离出的阳性标本,有必要进行分枝杆菌的菌种鉴定和药物敏感性试验.

  • 广东省广州市2001-2004年分枝杆菌初步菌种鉴定与药物敏感性试验结果分析

    作者:吴龙章;黄洁玲;张院良;蔡杏珊;关平

    目的了解广州市2001-2004年3年间分枝杆菌菌种的分布状态和抗结核药物的耐受性情况,为临床诊断和治疗结核病提供可靠的科学依据.方法对2001年9月-2004年3月从1 459例患者中共分离出的2 154株分枝杆菌进行菌种鉴定,并采用绝对浓度间接法对结核分枝杆菌和部分非结核分枝杆菌进行4种抗结核药物的敏感性试验.结果非结核分枝杆菌的分离率由1998年7月-2001年9月的16.5%上升至20.3%;对2 154株分枝杆菌中的1 703株结核分枝杆菌复合群菌株进行的药物敏感性试验结果显示:原始耐药率由1998年7月-2001年9月的14.4%上升至20.3%.继发耐药率则由原来的35.4%下降至32.3%;而非结核分枝杆菌对抗结核药物基本上呈现高度的原始耐受性.结论对临床分离出的阳性标本,有必要进行分枝杆菌的菌种鉴定和药物敏感性试验.

  • 利用多重PCR方法快速鉴定结核分枝杆菌北京基因型菌株

    作者:赵德福;谢彤;巨韩芳;穆成;赵慧

    目的 建立结核分枝杆菌北京基因型菌株快速鉴定方法,研究该家族在人群中的流行传播的规律和特点.方法 采用间隔区寡核苷酸(spoligotyping)分型与多重PCR方法分别对临床分离的112株结核分枝杆菌进行北京基因型菌株鉴定.结果 在分析的112株结核分枝杆菌中,107株为北京基因型,多重PCR鉴定结果与Spoligotyping分型符合率为100%.结论 与spoligotyping分型相比,多重PCR技术可以快速地区分北京基因型与非北京基因型株,且方法简单,更适于基层试验室中对北京基因型结核分枝杆菌在人群中的流行进行大规模监测.

  • 结核分枝杆菌Rv1009基因蛋白的克隆和表达

    作者:杨柳;苏哲;岳乔红;周萍;苏明权;刘家云;郝晓柯

    目的 克隆表达结核分枝杆菌促Rv1009基因,序列测定正确后进行融合、表达.方法 采用热启动聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv1009编码基因,用限制性内切酶消化后插入pGEX 4T-2载体中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),目的基因经IPTG诱导,表达Rv1009基因蛋白.结果 经PCR扩增在1300bp处发现一条目的片段,获得了结核分枝杆菌H37Rv株Rv1009基因蛋白,经诱导后高效表达分子量为64KD的外源蛋白,与预期分子量大小一致,凝胶自动扫描分析,在A600值为0.6,IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导表达3 h时融合蛋白表达量即达峰值,占菌体总蛋白的22.8%.结论 构建了结核分枝杆菌Rv1009基因重组表达载体,获得了RPF样融合蛋白的高效表达,为今后深入研究奠定了基础.

  • 结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果研究

    作者:梁艳;吴雪琼;张俊仙;阳幼荣;王兰;李洪敏;李忠明;史迎昌

    目的 研究结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果.方法 用结核分枝杆菌高耐利福平低耐异烟肼临床分离株HB240尾静脉注射BALB/c小鼠1个月后,将小鼠随机分成2组,第1组用利福平(RFP)、异烟肼(INH)治疗12周,第2组用RFP、INH和结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗(免疫5次)联合治疗12周;治疗结束后4和8周,分别取肺、肝和脾观察病理改变、称取质量、作菌落计数.结果 治疗结束后4和8周,第2组小鼠体质量均超过第1组,但无显著性差异(P>0.05).治疗结束后4周,第2组肺、脾脏指数(0.017,0.011)均略低于第1组(0.020,0.012)(P>0.05);治疗结束后8周,第2组肺、肝脏指数(0.021,0.047)均略低于第1组(0.022,0.048)(P>0.05);而第2组脾脏指数(0.008)显著低于第1组(0.012)(P<0.05).治疗结束后4周,第2组有4例脾脏未见明显病变,第1组仅1例脾脏未见明显病变;治疗结束后8周,第2组有1例肺门淋巴结肿大,而第1组有3例;第2组有5例脾脏未见明显病变,第1组仅2例脾脏未见明显病变.治疗结束后4周,第2组肺菌落计数和脾菌落计数比第1组显著减少,分别减少70%和80%.结论 DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病疗效高于单纯化疗.

  • 结核分枝杆菌Rv0867c基因的克隆表达及其纯化

    作者:高晓鹏;苏明权;刘家云;樊爱琳;郝晓柯

    目的 构建结核分枝杆菌Rv0867c基因的原核表达质粒,获得结核分枝杆菌Rv0867c基因的表达蛋白.方法 制备结核分枝杆菌基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增目的 基因片段;通过克隆载体pUC19构建质粒载体pUC19-Rv0867c,经序列测定证实正确,双酶切后连接于表达载体pPRO-EXHT,转化入大肠杆菌DH5α中,再经IPTG诱导表达带His标签的Rv0867c融合蛋白;用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的相对分子质量大小及表达形式.结果 成功扩增出了结核分枝杆菌Rv0867c基因,构建了具有正确基因序列的表达载体pPRO-EXHT-Rv0867c,转化入大肠杆菌DH5α中,经诱导产生高水平的表达产物.经SDS分析,在80kD处出现新生蛋白带,凝胶薄层扫描检测表达量约占菌体蛋白的23.7%.该融合蛋白以包涵体的形式存在,用Ni2+-NTA纯化柱在变性条件下进行纯化.结论 成功克隆了结核分枝杆菌Rv0867c基因并得到了其大肠杆菌表达产物,为进一步研究Rv0867c基因蛋白的活性及其功能,以及结核分枝杆菌快速促生长作用奠定了基础.

  • 应用PCR-RFLP分析结核分枝杆菌rpsL基因突变

    作者:吴雪琼;张俊仙;庄玉辉

    目的了解结核分枝杆菌链霉素(SM)耐药基因突变情况,建立快速检测耐药突变株的方法.方法通过PCR-RFLP分析62株结核分枝杆菌临床分离株的rpsL基因突变的部位和性质.结果以H37RV标准株为对照,13株敏感株的rpsL基因有MboⅡ酶切位点;37株耐SM分离株中,31株(83.8%)无MboⅡ酶切位点;12株耐其它抗结核药物株中,也有2株无MboⅡ酶切位点.结论大多数结核分枝杆菌SM耐药分离株的核糖体S12蛋白编码基因(rpsL)第43位密码子有点突变.PCR-RFLP可能成为快速检测结核分枝杆菌耐药突变株的一种新方法.

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