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免疫层析法与酶联免疫吸附法检测血中HBsAg、抗-HCV、抗-HIV的比较
[目的]分析比较乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、HIV抗体(抗-HIV)的免疫层析快速试剂在实际应用中的灵敏度、特异度和准确度,为今后的工作提供参考.[方法]对502份健康体检血清标本同时用快速免疫层析法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV,对其灵敏度和特异度进行比较.[结果]与ELISA相比,502份血清标本中HBsAg金标法有2份假阴性,5份假阳性,灵敏度为99.6%,特异度为99.0%,准确度为98.6%;抗-HCV金标法无假阴性,有9份假阳性,灵敏度为100%,特异度为98.2%,准确度为98.2%;抗-HIV硒标法有2份假阳性,灵敏度为100%,特异度为99.6%,准确度为99.6%.[结论]金标法检测HBsAg灵敏度和特异度稍低于ELISA,有漏检和误检现象,而抗-HCV、抗-HIV快速法与ELISA比较灵敏度相当,而特异度稍低,因此,都要结合ELISA结果才可出具终检测报告,抗-HIV的检测任何一种方法出现阳性时都要进行确认试验.
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ELISA法与TRUST法梅毒血清学试验的比较
[目的]根据对比结果,找出1种较为理想的实验方法进行梅毒筛查,防止漏检、误检,提高检测的准确度.[方法]采用酶联免疫吸附试验(ELISA)与甲苯胺红卡片试验不加热血清反应(TRUST)对14 608名出入境人员及82名梅毒病人进行梅毒血清学检测,对ELISA法和TRUST法检测出的阳性样品均用梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验(TPPA)进行确证.[结果]14 608名出入境人员梅毒筛查,ELISA试验与TPPA试验完全符合,TRUST试验有11例不符合;82名梅毒病人检测,TRUST试验有1例不符合,ILISA试验完全符合.[结论]ELISA法筛查梅毒具有灵敏度高、特异性好、自动化程度高、易于大批量检测等优点,适合于对出入境人员进行梅毒检测.
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用酶联免疫吸附法检测HIV抗体的质量控制
[目的]酶联免疫吸附法(ELISA)是卫生部艾滋病参比中心推荐的检测HIV抗体初筛的首选方法.由于ELISA法敏感度高,往往受人为因素、环境因素、试剂因素及仪器等因素的一些改变而影响检验结果的准确性.因此,加强实验室的质量控制,是保证检验结果准确性的关键.
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风疹IgG抗体ELISA检测方法的建立和应用
目的:建立血清风疹IgG抗体(RV-IgG)酶联免疫测定(ELISA)方法,初步探讨其应用价值.方法:采用RV-GOS株感染Vero细胞制备风疹病毒(RV)抗原,并经浓缩和纯化后,建立定量间接ELISA方法.应用该方法对深圳市宝安区20～40岁270例育龄妇女血清进行RV-IgG检测,与FDA认证的意大利Dia Sorin公司生产的RV-IgGELISA方法检测试剂盒进行比较.结果:两种方法相关系数为0.92,P＜0.05,呈显著相关;敏感性、特异性和准确性分别为97.79%(221/226)、95.45%(42/44)、97.41%(263/270);批间、批内变异系数分别为7.90%～10.67%,10.63%～16.98%,基本符合ELISA方法的标准(10%～15%).结论:该ELISA方法敏感性高、特异性强,且简便、快速,重复性好,具有实际应用价值.
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2种白细胞介素在人类鼻息肉中的含量及意义
目的:探讨细胞因子白细胞介素5(IL-5)及白细胞介素10(IL-10)调节功能紊乱在鼻息肉发病中的重要作用.方法:采用ELISA法检测IL-5,IL-10在30例鼻息肉患者鼻息肉组织中的含量,并以鼻息肉患者和健康下鼻甲粘膜作对照.结果:①鼻息肉组织中IL-5的含量高于鼻息肉患者和健康下鼻甲粘膜(P>0.05),后两者之间相差无显著性(P>0.05).②鼻息肉组织中IL-10的含量亦高于鼻息肉患者和健康下鼻甲粘膜(P<0.05),后两者之间相关无显著性(P>0.05).结论:鼻息肉的形成与细胞因子 IL-5的增高有关,细胞因子分布失衡在鼻息肉形成中发挥着重要作用.
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荧光定量PCR、ELISA和快速培养法在小儿MP感染动态诊断中的应用价值研究
目的:评估荧光定量PCR (FQ-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和肺原支原体(MP)快速培养法在小儿MP感染动态诊断中的临床应用价值.方法:纳入2016年3月-2017年3月宁海县第一医院儿科门诊就诊后住院,经临床及实验室诊断MP感染的患儿90例,同时应用FQ-PCR、ELISA、和快速培养法对患儿入院首诊、出院、随访第1、3个月时MP进行检测.结果:患儿就诊时FQ-PCR检测MP DNA阳性率95.56％(86例);ELISA检测MP-IgM抗体阳性率68.89％(62例),MP快速培养法阳性率24.44％(22例).首诊时三种检测法MP阳性率在各年龄段比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);ELISA在首诊病程＞1周者MP阳性检出率高于≤1周者(P＜0.05).1个月随访时,MP DNA阳性率62.22％(56例),MP-IgM抗体阳性率95.56％(86例),快速培养法阳性率21.11％(19例);有27例患儿仍存在咳嗽,其中22例MP-DNA阳性,24例MP-IgM抗体阳性.3个月随访时,MP DNA阳性率13.33％(12例),MP-IgM抗体阳性率80.00％(72例),快速培养法阳性率3.33％(3例);上述27例患儿中,仍有7例存在咳嗽,其中4例MP-DNA阳性,5例MP-IgM抗体阳性.结论:在三种诊断MP感染的方法中,FQ-PCR敏感,其次为ELISA,MP快速培养法低.随访1月时,仍有近1/2以上患儿MP DNA阳性,与咳嗽症状密切相关;MP-IgM抗体阳性率自出院至随访3月时多保持高水平.
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抗微囊藻毒素单克隆抗体的研制
为研制抗微囊藻毒素(Microcystins,简称MC)的特异性单克隆抗体,用MC-KLH偶联物免疫6～8周龄雌性BalB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,经过3～4次亚克隆建立稳定分泌抗MC的杂交瘤细胞株.将杂交瘤细胞注射入BalB/c小鼠腹腔,生产出抗MC的单克隆抗体.得到了抗微囊藻毒素单克隆抗体细胞株,命名为G5,抗体亚类为IgG2a,亲和力常数2.9×10-11 mol/L,分子量150 KD,加标回收率在81.5%～125.0%之间,与其他结构类似物的交叉反应率＜1%.筛选出的抗微囊藻毒素单克隆抗体具有较好的特异性.
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淡水湖泊中微囊藻毒素的污染
为探讨淀山湖、东湖、鄱阳湖水系浮游藻类和藻类毒素的污染及鱼体内微囊藻毒素的富集情况,于2000年7月和10月,采集了上述湖泊的水样和鱼样,用ELISA方法对样品的微囊藻毒素进行了测定.结果显示:蓝藻已经成为上述三大湖泊的优势藻种.发生水华的同一湖泊中,10月份水中的微囊藻毒素(MC)含量,显著高于7月份水中MC含量(P<0.05).淀山湖水中MC含量,显著高于鄱阳湖水中的MC含量(P<0.05),后者又显著高于东湖水中的MC含量(P<0.05).东湖鱼体中的MC含量,显著低于鄱阳湖和淀山湖鱼体中的MC含量(P<0.05).鱼样肌肉中MC含量,均显著低于肝脏中MC含量(P<0.05).本研究为制定水及水产品中微囊藻毒素的安全限量标准,提供了科学依据.
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抗黄曲霉毒素B1单抗独特型抗体的制备
目的 研制黄曲霉毒素B1标准品的替代品并应用于酶联免疫吸附试验(ELISA).方法 在研制了抗黄曲霉毒素B1单抗的基础上,将抗体用无花果蛋白酶进行酶切,制备出抗黄曲霉毒素B1单抗F(ab')2片段,并以F(ab')2片段作为免疫原免疫日本大耳白兔,制备出抗黄曲霉毒素B1单抗独特型抗体,并对该独特型抗体进行鉴定.结果 该独特型抗体是Ab2β型,与黄曲霉毒素B1存在内影像关系.结论 该抗体可以替代黄曲霉毒素B1标准品应用于ELISA检测.
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总黄曲霉毒素ELISA定量检测方法的研制
为敏感、特异和快速地检测食品中总黄曲霉毒素的污染水平,在抗总黄曲霉毒素单克隆抗体的基础上,研制了间接竞争ELISA检测方法,包被抗原为AFB1-BSA,包被量为0.0625μg/ml,抗体工作浓度为1:1.6×106.该方法对黄曲霉毒素B+G标准品的低检出浓度为0.13 ng/ml,对样品的低检出量为1.50μg/kg.校正曲线的线性范围为0.26～20.00ng/ml,线性方程y=-0.4463x+0.353 2(R2=0.9915);对黄曲霉毒素B+G 50%的抑制浓度为2.08 ng/ml;对玉米2个加标水平的平均回收率分别为94.56%和112.05%,对花生2个加标水平的平均回收率分别为87.50%和85.60%.该方法所用抗总黄曲霉毒素单克隆抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的交叉反应率分别为100%、57.5%、104%和19%,与其它真菌毒素无交叉反应.
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(鱼屯)毒鱼类中河(鱼屯)毒素直接竞争抑制性酶联免疫吸附试验测定方法的研究
为检测(鱼屯)毒鱼类中的河(鱼屯)毒素,建立了用抗河(鱼屯)毒素单克隆抗体检测河(鱼屯)样品中河(鱼屯)毒素的直接竞争抑制性酶联免疫吸附试验(ELISA)方法.结果表明,直接ELISA法较间接ELISA法灵敏,低检出浓度为0.1 ng/mL(每检测孔0.01 ng),线性范围为5～500 ng/mL,方法的加标回收率为73.0%～118.0%.本法与传统的小鼠生物试验相比,两种方法的测定结果之间在统计学上差异无显著性(配对t检验,P>0.1),并具有良好的相关性(r=0.944).对来自江苏省东海和长江水域的河(鱼屯)样品的毒力进行了测定,结果表明本方法简单、快速、灵敏,完全可以满足实际工作的需要.
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对硫磷快速ELISA检测方法的建立
由于对硫磷的残留问题及其危害,迫切需要建立一种快速有效的农药检测方法.将对硫磷苯环上的硝基还原为氨基,得到了具有氨基活性的半抗原化合物--氨基对硫磷,然后采用重氮法将氨基-对硫磷与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)相偶联,分别合成了免疫原和包被抗原:氨基对硫磷-BSA、氨基对硫磷-OVA.对合成的抗原进行紫外可见扫描,确证偶联成功.用合成的免疫抗原免疫实验用大白兔,制备对硫磷的多克隆抗血清,效价达到1∶1×106以上.对硫磷抗体除了与甲基对硫磷具有极其微弱的交叉反应以外,与甲胺磷和毒死蜱交叉反应低于0.1%,低检测限2.0 ng/g,回收率为93.3%.该方法简便、快速、灵敏,适用性强.
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间接竞争酶联免疫吸附法测定黄原胶
目的 建立间接竞争酶联免疫吸附法测定食品中的黄原胶.方法应用黄原胶抗原免疫的绵羊多克隆抗体,采用间接竞争酶联免疫吸附方法,对黄原胶进行检测分析.结果黄原胶的检测限为0.1 ns/ml,有效检测区间为0.1～1×103ng/ml.组间及组内差异均小于10%.烧烤酱和凯撒沙拉酱中的黄原胶检测限为50 ns/ml,有效检测区间为50～5×103ng/ml.烧烤酱和凯撒沙拉酱中黄原胶回收率分别为72.0%～89.8%和102.6%～119.0%.结论本方法简单、快速、成本低,重现性好,适合检测食品中的黄原胶.
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ELISA法检测食醋中黄曲霉毒素B1方法的改进
目的 优化试样提取条件,建立测定食醋中黄曲霉毒素B1(AFB1)的新的前处理方法 .方法 将适量试样调酸后用甲醇+水直接定容,振荡、离心作为食醋试样的前处理方法 ,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定.结果 改进后方法 灵敏度达0.1μg/kg,平均回收率在79.1%～95.5%,相对标准偏差小于6.4%.结论 研究建立的新的前处理方法 ,简化了提取过程,并获得了优化的实验参数,可满足国标对食醋中的AFB1规定的安全限量的检测要求.
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血管内皮生长因子与颅内动脉狭窄程度的相关性研究
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)与颅内动脉狭窄程度的相关性研究.方法 选择吉林市中心医院及北华大学附属医院神经外科2015年1月-2016年5月期间收治的颅内动脉粥样硬化性狭窄患者35例.其中,男性19例,女性16例,年龄62~79岁,平均年龄(70.5±9.4)岁.病人分组及入选标准:经药物治疗无效、反复短暂性脑缺血发作(TIA)或明显脑缺血的颅内动脉粥样硬化性狭窄患者(SIAS组).对照组选择20名健康人,其中男性11名,女性9名,年龄60~78岁,平均年龄(69±8.9)岁.采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法测定SIAS组及对照组血清血管内皮生长因子(VEGF)水平.将35例颅内动脉狭窄患者根据颅内动脉狭窄程度分为3组:轻度组10例(狭窄率30%~49%),中度组16例(狭窄率50%~69%),重度组19例(狭窄率≥70%).结果 SIAS组手术前和对照组血清VEGF值分别为(103.35±16.40)pg/mL、(53.23±8.43)pg/mL,SIAS组手术前血清VEGF明显高于对照组,差异具有统计学意义.血清VEGF水平重度组(113.15±9.65)pg/mL,中度组(96.32±6.56)pg/mL,轻度组(78.17±4.34)pg/mL,均明显高于对照组(54.16±7.43)pg/mL(P<0.01).结论 VEGF与颅内动脉狭窄程度呈显著正相关,VEGF的水平程度可能是SIAS的发生发展为缺血性脑卒中的危险和预测因素之一.
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类风湿性关节炎患者血清可溶性HLA-G的表达水平
目的:探讨血清可溶性HLA-G(SHLA-G)在类风湿关节炎(RA)患者血清中水平.方法:用ELISA法检测27例RA患者与50例健康人血清SHLA-G水平.结果:RA患者血清SHLA-G水平(16±11.3)ng/ml显著低于健康人对照组(35±33.2)ng/ml,P＜0.01;血清SHLA-G水平与抗角蛋白抗体(AKA)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、类风湿因子(RF)、CRP和ESR无显著相关性(P＞0.05).结论:RA患者血清中SHLA-G水平降低,SHLA-G在RA疾病发生、发展中可能发挥了一定作用.
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血清TNF-α与早期自然流产关系的研究
目的:研究早期自然流产(early spontaneous abortion,SA)妇女血清中TNF-α的表达水平,探讨其与自然流产的关系.方法:应用双抗夹ELISA法检测孕3月内20例正常妊娠、30例自然流产妇女血清中TNF-α的水平.结果:早期自然流产组与正常妊娠组比较,血清中TNF-α水平明显升高(P＜0.05).结论:TNF-α与早期自然流产的发生有关,其水平的升高与早期自然流产关系密切.
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间接酶联免疫定量检测风疹IgG的方法学研究
目的建立检测血清风疹IgG(RV-IgG)抗体的间接酶联免疫测定(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)方法. 方法采用RV-GOS株感染单层Vero细胞方法制备RV抗原,并采用血凝素方法提纯抗原,建立定量间接ELISA方法,进行了实验条件的选择.然后用优化的ELISA法对检测RV-IgG的敏感性、特异性和重复性进行鉴定,并与美国食品与药品监督局认证的ELISA方法进行比较. 结果间接定量ELISA方法的敏感度为3 IU/ml,以Diasorin公司生产的RV-IgG试剂盒检测结果为标准,其敏感性、特异性和准确性分别为97.79 %(221/226)、95.45 %(42/44)、97.41 %(263/270);2种方法相关系数为0.92,P＜0.05,呈显著相关; 结论该ELISA方法敏感性高、特异性强,且简便、快速,重复性好,具有实际应用价值.
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端粒酶活性检测在肺癌诊断中的价值研究
目的 探讨端粒酶活性检测在肺癌诊断中的应用价值.方法 采用PRAP-PcR-ELISA和PAGE-银染色法对48例肺癌患者和48例肺部良性疾病患者的肺刷落细胞端粒酶活性进行定量和定性分析.结果 小细胞肺癌饲肺刷落细胞端粒酶阳性率为100%,非小细胞肺癌饲肺刷落细胞端拉酶阳性率为79.4%,均明显高于肺癌对侧肺和肺部良性疾病的检侧结果.组间比较有显著性差异(P<0.001).结论 肺刷落细胞端粒酶活性的检侧可为肺部肿瘤的早期诊断提供可靠的依据.
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囊尾蚴感染对宿主Th1/Th2相关细胞因子的影响研究
目的探讨细胞因子在脑囊虫病发病中的意义.方法药物治疗脑囊虫病患者30例,同时用双单克隆抗体夹心法检测疗前、疗后该病患者血清中与Th1/Th2相关五种细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10的水平变化.结果疗前IFN-γ较疗后及正常对照组明显降低(P＜0.01),而IL-4、IL-5、IL-6、IL-10较疗后及正常对照组则明显升高(P＜0.01),且疗后五种细胞因子均趋于正常(P＞0.05).结论囊尾蚴感染病人细胞免疫功能低下,而体液免疫功能升高.说明囊尾蚴感染可导致宿主免疫功能紊乱.
