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小鼠脂肪源和骨髓源间充质干细胞表面标记表达的比较
目的 探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)和骨髓源间充质干细胞(BMSCs)表面标记表达的差异.方法 分别对小鼠脂肪源和骨髓源间充质干细胞进行成骨、成脂、成心肌分化诱导、鉴定;流式细胞术与细胞免疫荧光法检测CD29、CD44、CD45和CD73的表达并进行比较.结果 BMSCs形态均一,呈长梭形;ADMSCs形态多样,呈梭形、星形、多角形等,胞体较大,表面分泌物较多;两者均可诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞和心肌样细胞.流式细胞术检测显示,BMSCs表面分子CD29、CD44和CD73表达率分别为(83.43±1.97)％、(90.33±0.81)％、(2.63±0.42)％;ADMSCs表面分子CD29和CD44的表达率分别为(53.1±1.05)％、(34.8±2.1)％,CD73表达不稳定,在1.8％～19.7％之间波动.两种细胞均不表达造血干细胞标记物CD45.免疫荧光显示,CD73分子与部分CD29、CD44阳性细胞共表达.结论 小鼠BMSCs和ADMSCs均具有成脂、成骨、成心肌分化能力,但是在形态上和分子表达上均存在差异.BMSCs的CD44和CD29表达高于ADMSCs;而CD73的表达则相反,CD73在两种细胞的表达均较低,在ADMSCs的表达不稳定.
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整合素β1及纤连蛋白、层粘连蛋白对胶质瘤细胞浸润性的影响
目的 探讨整合素β1和纤连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)对人胶质瘤浸润性的影响和作用机制.方法 以U251人胶质母细胞瘤(U251MG)细胞为研究对象,通过细胞黏附实验、迁移实验和体外侵袭实验,检测整合素β1及LN、FN对人恶性胶质瘤细胞黏附、迁移和转移能力的影响.通过荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜观察和扫描电镜方法,观察细胞微丝数量、分布和细胞表面伪足情况,比较整合素β1及FN、LN对微丝骨架的影响.结果 (1)FN对U251MG细胞黏附能力无明显影响,但抗整合素β1抗体可减少U251MG细胞的黏附数量(P＜0.01);LN增加U251MG细胞黏附能力(P＜0.01),抗整合素β1抗体对此作用影响较小.(2)抗整合素β1抗体减弱U251MG细胞在FN的运动、迁移能力(P＜0.05).(3)U251MG细胞内可见清晰的微丝结构,FN、LN使细胞内纤维型肌动蛋白(F-actin)形成束状纤维,粗壮而密集;抗整合素β1抗体处理的细胞内,难以见到清晰的细胞微丝骨架,并常见大量絮团状的F-actin.(4)扫描电镜观察显示,FN、LN使细胞表面的伪足数量明显增加,而抗整合素β1抗体使细胞伪足数量明显减少,甚至消失.(5)FN和抗整合素β1抗体对U251MG细胞的体外侵袭能力无明显影响;LN可促进U251MG细胞的体外侵袭能力,抗整合素β1抗体可抑制这种作用(P＜0.01).结论 (1)U251MG细胞通过整合素β1和FN相互作用,改变细胞微丝骨架、伪足结构和数量而促进U251MG细胞的运动、迁移能力.(2)整合素β1参与了LN介导的U251MG细胞体外侵袭作用.
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整合素β1在心房颤动心房结构重构中的作用
目的 探讨整合素β1在慢性心房颤动(房颤)心房结构重构中的作用.方法 选择30例经心外科手术患者的右心耳肌组织,按有无房颠病史分为房颤组(15例)和无房颤组(15例).Masson染色测定两组心房组织胶原客积分数(CVF);RT-PCR方法检测整合素β1 mRNA的表达;Western blot检测整合素β1蛋白的表达.结果 与无房颤组比较,房颤组患者左心房直径增大[(4.96±0.50)mm vs (4.15±1.04)mm,P<0.05];房颤组患者CVF较无房颤组明显升高(42.38±9.79 vs 11.67±3.35,P<0.01);与无房颤组比较,房颤组患者整合素β1 mRNA及蛋白表达上调(0.43±0.03 vs 0.36±0.02,P<0.05;1 724.33±91.07 vs 853.13±30.34,P<0.01).整合素β1蛋白与左心房直径(r=0.879,P<0.01)、房颤持续时间(r=0.830,P<0.01)及CVF(r=0.770,P<0.05)呈正相关.结论 慢性房颤时,整合素β1基因及蛋白表达上调;整合素β1可能参与房颤时心房的结构重构.
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表皮生长因子信号通路对前列腺癌细胞DU145表面整合素α5、β1的调控
目的探讨表皮生长因子(EGF)信号通路对雄激素非依赖型前列腺癌细胞系DU145表面整合素α5、β1的调控.方法应用流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western蛋白印迹(Western blot)法测定EGF、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路抑制剂PD98059对DU145细胞整合素α5和β1表达的影响;采用细胞粘附能力测定和Transwell小室法检测EGF及PD98059对DU145细胞粘附能力和迁移能力的影响.结果EGF上调DU145细胞表面整合素β1亚基的蛋白和mRNA的表达,分别为对照组的231%和248%(方差值为9.0和24.6,P均＜0.01),并可促进DU145细胞对纤维连接蛋白(Fn)的粘附和迁移能力.而PD98059则具有相反的作用,下调DU145细胞表面整合素β1亚基的蛋白和mRNA的表达,分别为对照组的60%和63%(方差值为6.3和15.3,P均＜0.01),并可抑制DU145细胞对Fn的粘附和迁移能力.EGF和PD98059对整合素α1的表达无明显影响.结论EGF可能通过MAPK信号通路上调前列腺癌DU145细胞表面整合素β1亚基的表达,从而促进DU145细胞对Fn的粘附能力和迁移能力;此调节作用主要发生在mRNA转录水平.
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组织工程心脏瓣膜内皮细胞的整合素β1表达
目的 体外构建组织工程心脏瓣膜(TEHV),初步探讨内皮细胞黏附生长的分子机制.方法 猪主动脉瓣膜经胰酶-EDTA、表面活性剂、核酸酶处理,去除猪主动脉瓣叶的细胞成分,测定瓣叶脱细胞后的生物力学特性;将扩增的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)种植在瓣叶上,体外静态构建TEHV,观察内皮细胞的生长状态.消化瓣膜内皮细胞,半定量RT-PCR检测内皮细胞整合素β1 mRNA的表达,Western-Blot检测内皮细胞膜上整合素β1蛋白的表达.结果 猪主动脉瓣膜中的细胞成分能完全去除,脱细胞瓣叶的生物力学特性同新鲜瓣叶相比无明显变化;种植的HUVECs在瓣叶表面生长状态良好,长成一层连续的细胞层.瓣膜内皮细胞可检测到整合素β1 mRNA和蛋白的表达.结论 脱细胞猪主动脉瓣膜作为支架,HUVECs做种子细胞可以成功构建TEHV,瓣膜内皮细胞可以表达整合素β1.
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妊娠高血压综合征患者胎盘整合素α1、β1的表达与细胞凋亡
目的通过观察妊娠高血压综合征(妊高征)患者胎盘整合素α1、β1的表达,探讨整合素在细胞凋亡中的作用及二者对妊娠结局的影响;了解不同程度及不同民族妊高征胎盘α1、β1的表达情况.方法采用免疫组织化学法测定40例妊高征患者胎盘组织中的整合素α1、β1,以43例正常妊娠晚期妇女胎盘组织作对照;采用DNA缺口原位标记Tunel技术,测定12例妊高征患者胎盘不同细胞凋亡指数,以24例正常妊娠妇女胎盘作对照.结果(1)妊高征组胎盘细胞滋养细胞、合体滋养细胞、蜕膜细胞凋亡指数分别为(11.04±3.46)%、(12.20±3.67)%、(13.03±4.38)%,明显高于对照组的(3.91±1.65)%、(5.39±1.76)%、(4.08±1.97)%,差异均有显著性(P＜0.05);(2)妊高征组整合素α1、β1在胎盘组织中的表达均低于对照组,差异有显著性(α1:T=1442,P＜0.05;β1:T=1247,P＜0.01);(3)中度与重度妊高征患者胎盘整合素α1的表达也有差异(T=56,P＜0.01),而整合素β1的表达无明显统计学差异;(4)汉族与维吾尔族之间胎盘整合素α1的表达无明显统计学差异.结论(1)妊高征的不良妊娠结局与细胞凋亡有密切关系.(2)整合素a1、β1的低表达是胎盘细胞凋亡的重要因素,可能与胎盘功能下降有直接关系.
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食管鳞状细胞癌组织中整合素β1和上皮钙粘附素表达与侵袭和转移的关系
目的:探讨食管鳞状细胞癌组织中整合素β1(integrinβ1,INTβ1)和E-cd表达与侵袭和转移的关系.方法:应用免疫组化SP法检测54例食管鳞状细胞癌及8例正常食管黏膜组织中INTβ1和上皮钙粘附素(epithelial cadherin,E-cd)的表达,分析其与临床病理特征的关系.结果:54例食管鳞状细胞癌组织中INTβ1正常表达率为18.5%(10/54),E-cd为25.9%(14/54);8例正常食管上皮组织中INTβ1正常表达率为5/8,E-cd为7/8,差异均有统计学意义,P＜0.05.食管鳞状细胞癌组织中INTβ1(rs=-0.313,P=0.021)和E-cd(rs=-0.342,P=0.011)表达程度与组织学分级呈负相关;E-cd与淋巴结转移呈负相关,rs=-0.289,P=0.034.结论:食管鳞状细胞癌组织中INTβ1和E-cd蛋白表达降低,影响肿瘤细胞分化、生长、侵袭和转移.
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鼓膜上皮干细胞的分布和培养
目的确定上皮干细胞在鼓膜上的分布,鼓膜穿孔后干细胞的变化,鼓膜上皮不同部位的体外培养生长特点,建立鼓膜干细胞体外培养和增殖的方法.方法 4只幼年Sprague-Dawley (SD)大鼠和4只成年SD大鼠,均为雌性,作正常鼓膜观察,28只成年雌性大鼠作鼓膜紧张部中央 2 mm穿孔.于穿孔后不同时间取鼓膜冰冻切片,进行β1整合素和角蛋白19免疫组化检测.15只成年雌性SD大鼠30个鼓膜,体外用丝裂霉素C损伤黏膜面,分成鼓环上皮和紧张部中央上皮两部分,比较鼓环和紧张部细胞倍增时间.以1 h为标准,把鼓环细胞按贴壁时间分类.结果角蛋白19 和β1整合素阳性细胞在紧张部分布于鼓环和锤骨柄区域,在松弛部散在分布,在紧张部中央无阳性细胞.幼年鼠和成年鼠无差别.紧张部急性穿孔后鼓环和锤骨柄阳性细胞数量增加,穿孔边缘无阳性染色.体外培养鼓环上皮细胞倍增时间(51.1±0.73)h明显短于紧张部中央上皮(92.87±5.65)h. 1 h内贴壁的细胞,生长活跃,产生较大的集落,富含上皮干细胞.结论上皮干细胞在鼓膜紧张部分布于鼓环和锤骨柄区域,在紧张部的中央没有干细胞.在适当的培养液中,干细胞增殖良好,并可以通过贴壁时间进行初步的纯化.
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AG490阻断Stat3信号蛋白活性对巩膜成纤维细胞MMP-2和Integrinβ1表达的影响
目的 研究AG490阻断Stat3信号转导通路激活对豚鼠巩膜成纤维细胞MMP-2和Integrinβ1表达的影响.方法 实验研究.选用传3代处于对数生长期豚鼠巩膜成纤维细胞.实验共分4个组,分别为A组(空白对照组):不加胰岛素生长因子1(IGF-1)的DMEM培养液、B组(单纯IGF-1组)、C组(IGF-1+PBS组)、D组(IGF-1+25 μm0l/L AG490组).置入37 ℃ CO2细胞培养箱中培养48 h后终止培养.采用RT-PCR和免疫印迹检测4组中Stat3、MMP-2、Integrinβ1mRNA水平和Stat3、p-Stat3(结合位点Tyr-705)、MMP-2、Integrinβ1的蛋白含量变化.用配对t检验和one-wayANOVA方法对测得的数据作处理分析.结果 A、B、C、D组Stat3蛋白表达量分别为0.0637±0.0024、0.6167±0.0276、0.6141±0.0271、0.0674±0.0044,mRNA表达量分别为0.3600±0.0148、0.6315±0.0003、0.6311±0.0001、0.3702±0.0142;p-Stat3蛋白表达量分别为0.0031±0.0000、0.4252±0.0107、0.4274±0.0040、0.0032±0.0000,MMP2蛋白表达量分别为0.0044±0.0002、0.5252±0.0083、0.5251±0.0076、0.0053±0.0003,mRNA表达量分别为0.3067±0.0196、0.5894±0.0122、0.5858±0.0083、0.3107±0.0082.与A、D组比较,B、C组的Stat3、p-Stat3、MMP-2蛋白和基因转录水平明显上调(tpr=-32.324,-26.284,-32.876,-26.345,-68.668,-58.724,-187.481,-58.842,-110.264,-120.256,-121.345,-120.286;tmRNA=-31.554,-31.178,-31.286,-31.198,-12.076,-14.969,-11.896,-14.546;均P＜0.05),但B、C组间比较差异无统计学意义(tp=-32.720,-32.816,-68.668,-187.481,-110.264,-121.345;tmRNA=-0.692,-0.579;均P＞0.05);而Integrinβ1在4个组中无明显改变(Fpr=0.214;FmRNA=0.045,均P＞0.05).结论 AG490阻断Stat3信号通路激活可下调豚鼠巩膜成纤维细胞MMP-2的表达,AG490可以阻断Stat3信号通路激活,是否可作为预防近视的靶点候选药物有待进一步研究.
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口腔白斑癌变过程中整合素β1的表达及其与细胞增殖的关系
目的 探讨整合素β1在口腔白斑癌变发生、发展中的可能作用及其与细胞增殖的关系.方法 免疫组化SP法研究整合素β1及Ki-67在12例正常口腔黏膜、10例单纯增生白斑、24例异常增生白斑、14例早期浸润癌组织中的表达情况及关系.结果 在正常黏膜及单纯增生白斑中整合素β1表达于基底及副基底层细胞的胞膜;Ki-67在基底及副基底层的胞核中表达.在异常增生白斑及早期浸润癌中可见整合素β1表达于基底层、增生的棘层细胞及癌细胞胞膜;Ki-67表达于基底层、增生的棘层细胞及癌细胞的胞核.整合素β1在异常增生及早期浸润癌中的强阳性表达率分别为29%(7/24)、57%(8/14);Ki-67在异常增生及早期浸润癌中的强阳性表达率分别为42%(10/24)、57%(8/14).整合素β1、Ki-67在4组病变之间的阳性分级差异有统计学意义(χ2=10.651,P=0.014;χ2=14.831,P=0.002);整合素β1在正常黏膜、单纯增生组与早期浸润癌组之间的差异有统计学意义(P=0.008,P=0.013).Ki-67在正常黏膜组与异常增生组、早期浸润癌组之间差异有统计学意义(P=0.026,P=0.001),单纯增生组与早期浸润癌组之间差异有统计学意义(P=0.005).整合素β1与Ki-67的表达显著相关(R=0.442,P＜0.01).结论 整合素β1在口腔白斑异常增生及早期浸润癌中表达增强,可能与促进细胞增殖有关.
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一种表皮干细胞检测方法的建立
1975年以来,表皮细胞膜片应用于封闭深度烧伤创面取得了一定的效果 ,但所得到的细胞膜片中大部分细胞为终末分化细胞,已失去进一步增殖的能力.因此如何保持表皮细胞较强的分裂增殖能力或者说干细胞特性,是提高表皮细胞膜片移植存活率及在体外获得工程化皮肤的技术关键之一.表皮干细胞是组织工程化皮肤的种子细胞之一,但由于缺乏单一的、特异性的鉴别标志,使得其分离和获得十分困难.本研究试图利用流式细胞仪检测表皮干细胞表面整合素β1(CD29)和细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的荧光标记强度,建立简便易行的表皮干细胞检测方法,为组织工程化皮肤种子细胞的研究提供理论依据.
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白藜芦醇对组织工程化软骨的保护作用及其机制的实验研究
目的 研究白藜芦醇对骨髓间充质干细胞组织工程化软骨的保护作用并探讨其机制.方法 首先将体外单层扩增的大鼠骨髓间充质干细胞在藻酸钠微球中行三维立体软骨细胞定向培养,其定向分化程度通过甲苯胺蓝染色、免疫组织化学等方法鉴定.然后将从微球释放的分化软骨细胞接种于壳聚糖-明胶复合支架,培养3周后制备组织工程化软骨,其内部软骨细胞以及支架形态用扫描电镜和激光共聚焦显微镜观察.将白细胞介素(IL)-1β作用于该细胞-支架材料上,并用白藜芦醇和(或)特异性的抗整合素β1亚单位抗体进一步干预,蛋白印迹法检测Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶(MMP)-13以及核因子-κB的表达,扫描蛋白印迹条带灰度并进行半定量计算,采用方差分析进行统计学处理.结果 在定向培养过程中,藻酸盐微球中的软骨细胞在细胞周围可形成明显的细胞外基质,促进分化,软骨细胞特异性Ⅱ型胶原和蛋白聚糖表达显著增高.定向分化后的软骨细胞在壳聚糖-明胶复合支架材料上能良好地贴壁、增殖和迁徙,形成组织工程化的软骨.蛋白印迹半定量分析:软骨Ⅱ型胶原对照组表达量0.484±0.006;白藜芦醇干预后表达量0.474±0.014,两者差异无统计学意义(P＞0.05)；IL-1β干预后,表达量下降至0.155±0.009,差异有统计学意义(P＜0.05)；而白藜芦醇能阻断IL-1β的负面效应,使Ⅱ型胶原表达量恢复至0.468±0.014,差异有统计学意义(P＜0.05),同对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；而抗β1整合素能阻断白藜芦醇对IL-1β的拮抗作用,使胶原表达量下降至0.169±0.011,差异有统计学意义(P＜0.05),与IL-1β单独作用比较差异无统计学意义(P＞0.05).蛋白聚糖半定量统计和Ⅱ型胶原的表达趋势相同,同时伴随MMP-13、核因子-κB的反向表达.结论 白藜芦醇可能通过调节细胞膜黏附分子——整合素的活性,抑制核因子-κB在胞内的核转位,起到保护组织工程化软骨的作用.
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β1整合素启动子荧光素酶报告基因载体的构建与鉴定
目的 克隆β1整合素(CD29)启动子区基因全长序列,构建并鉴定β1整合素启动子全长序列荧光素酶报告基因载体pGL3-β1.方法 以含β1整合素启动子基因全长序列的基因片段(2 735 bp)的重组pGEM-T easy载体为模板,用含有酶切位点的特异性引物扩增出整合素β1启动子基因全长序列1 756 bp,克隆至荧光素酶表达载体pGL3-basic,构建含正确目的 基因的表达载体pGL3-β1,并NheⅠ、XhoⅠ酶切、PCR及测序鉴定;并以该质粒转染人表皮细胞株HaCaT进行活性检测.结果 酶切、PCR及序列测定表明,克隆获得的1 756bp与GenBank DNA序列数据库对比分析序列一致,插入方向正确;且pGL3-β1启动子在人表皮细胞株HaCaT中有明显转录活性.结论 成功构建了β1整合素启动子基因全长序列荧光素酶报告基因载体,为下一步研究人β1整合素启动子的活性分析、基因表达调控机制及其信号转导通路等研究奠定基础.
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慢性粒细胞白血病患者骨髓来源Flk1+CD31-CD34-间充质干细胞中BCR/ABL融合基因的检测
背景:免疫表型为Flk1+CD31-CD34-的间充质干细胞体内外实验研究均证实在单细胞水平可以向造血及内皮细胞分化.目的:观察慢性粒细胞白血病患者骨髓BCR/ABL融合基因的表达情况.方法:体外培养扩增慢性粒细胞白血病患者骨髓来源原始间充质干细胞,测定其生长曲线,分析其细胞周期及免疫表型,使用RT-PCR和FISH的方法检测其BCR/ABL融合基因的表达情况.结果与结论:慢性粒细胞白血病患者骨髓来源的原始间充质干细胞呈成纤维样生长,大部分细胞处于G0/G1期,并且高表达Flk1,CD13,CD29,CD44,用RT-PCR和FISH的方法能够检测出BCR/ABL融合基因的表达.提出慢性粒细胞白血病的白血病基因转化可能发生在比造血干细胞更高的血液血管干细胞水平上.
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胃癌肿瘤干细胞的分离与成脂分化
背景:肿瘤干细胞是否存在于所有肿瘤中仍有争议.目的:从人胃癌细胞中分离并鉴定类肿瘤干细胞,对胃癌的发生机制进行探讨.方法:原代培养胃癌细胞,并通过流式细胞术检测CD44和CD29等细胞因子的阳性表达率,分选阳性细胞进行成脂诱导.结果与结论:胃癌细胞中CD44、CD29的阳性百分率分别为5.67%和5.53%,CD44和CD29阳性细胞具有成脂能力,证明胃癌肿瘤细胞中存在具有分化能力的类肿瘤干细胞.
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前列腺素E1对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响
背景:目前还缺乏前列腺素E1对骨髓间充质干细胞增殖影响的研究.目的:观察前列腺素E1与骨髓间充质干细胞共培养对细胞增殖作用的影响.方法:体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞.取第3代细胞利用流式细胞仪鉴定细胞表面表型.以每孔1×104数量接种于96孔板,将前列腺素E1分别以0(对照组),1,2,5,10,20,40,100 μg/L的浓度作用骨髓间充质干细胞72 h,以CCK-8法检测细胞增殖情况,观察佳增殖浓度10％的前列腺素E1在不同时间(24,48,72 h)对骨髓间充质干细胞增殖的影响.结果与结论:P3代骨髓间充质干细胞表面阳性率CD11 b/c为4.93％,CD29为99.93％,CD45为0.1％,CD90为99.58％,符合骨髓间充质干细胞特征.质量浓度为1,2,5,10,20,40,100 μg/L的前列腺素E1均可以促进骨髓间充质干细胞在体外的增殖,以10 μg/L的作用强.10 μg/L前列腺素E1在作用48 h后能显著促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖(P＜0.05),其作用呈一定程度的时间依赖性,72 h达高.
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成人脂肪基质细胞体外扩增生长和超微结构
背景:脂肪基质细胞在体外能诱导分化为多种细胞,但脂肪基质细胞开始诱导反应的佳时间尚未明确.目的:通过成人脂肪基质细胞的体外扩增生长曲线和超微结构特征推测诱导分化反应的佳时期.方法:将取自吸脂术的脂肪组织消化、离心、提取细胞,并体外培养、传代.倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化；细胞计数法测定脂肪基质细胞生长曲线；免疫组化和免疫荧光法检测CD44、CD29、CD34的表达；透射电镜观察脂肪基质细胞的超微结构.结果与结论:脂肪基质细胞生长迅速,传代到第3代5-7 d呈对数生长,第8天细胞呈长梭形,数量达(5.32±0.03)x 107 L-1并趋于稳定；脂肪基质细胞的CD44、CD29阳性表达率为(84.35±9.73)％,(86.37±8.45)％,CD34为阴性表达；透射电镜观察到处于幼稚状态的细胞器等超微结构.脂肪基质细胞作为一种多能干细胞,传至第3-6代8-12 d时的细胞数量多且形态稳定,具有细胞分化和合成所需蛋白的超微结构,此时是开始诱导分化反应的佳时期.
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CK15、CD29阳性细胞在不同类型皮肤的分布
目的 研究皮肤干细胞相对特异性标记物CK15、CD29阳性细胞在人体不同类型皮肤的分布特点及干细胞的分布规律,探讨其临床意义.方法 收集人体正常的头皮、包皮及躯体、脚掌的皮肤标本各6例,依次设为A、B、C、D四组.分别行石蜡切片后做HE染色和CK15、CD29免疫组化染色观察,统计CK15、CD29染色阳性细胞的PU值并行统计学处理.结果 CK15、CD29阳性细胞的含量:头皮的毛囊隆突部和包皮的表皮基底层含量多,躯体皮肤的表皮基底层其次,脚掌的表皮基底层几乎没有;D组与A、B、C组比较,其差异有统计学意义(P<0.01).CK15、CD29阳性细胞的分布特点:在头皮主要位于毛囊隆突部,在包皮和脚掌皮肤主要位于表皮基底层,在躯体皮肤主要位于表皮基底层钉突部.结论 CK15、CD29标记的皮肤干细胞在不同类型皮肤的分布和数量均明显不同.此分布特点可能为临床上治疗创面愈合提供实验依据.
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骨桥蛋白及其受体在人黄韧带骨化标本中的表达及意义
目的 探讨骨桥蛋白(OPN)及其受体CD44、整合素在人黄韧带骨化(OLF)标本中的表达及意义.方法 2014年6月—2016年6月,收集8例在本院接受胸椎后路椎板切除的OLF患者的骨化黄韧带标本以及8例非黄韧带骨化患者的正常黄韧带标本.对所得标本进行脱钙、切片、免疫组织化学染色以及细胞体外培养和蛋白质印迹检测,观察黄韧带标本中OPN及其受体CD44、整合素的表达变化.结果 OLF标本中的弹性纤维排列杂乱无章,同时在骨化层可见大量软骨细胞;正常黄韧带标本中则无上述表现.OLF标本中OPN及其受体CD44呈高表达,且多在骨化区域的软骨细胞周围,而整合素 β1的表达较弱;正常黄韧带标本中OPN及其受体呈低表达或不表达状态.通过对体外培养的细胞进行蛋白质印迹检测发现骨化黄韧带细胞OPN的表达较正常黄韧带细胞增加.免疫细胞化学染色发现骨化黄韧带细胞整合素 β3染色呈阳性,而正常黄韧带细胞整合素 β3的表达呈阴性或弱阳性;蛋白质印迹检测发现骨化黄韧带细胞整合素β3的表达明显高于正常黄韧带细胞.结论 OPN及其受体可能在OLF的发生过程中起关键作用.
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肺腺癌细胞微环境及转移与黏附分子表达的关系
目的研究肺腺癌细胞生长环境及转移性与黏附分子CD44v6和CD29的表达关系.方法将起源相同、转移性不同的两个肺腺癌细胞系AGZY和Anip分别用简便肿瘤多细胞球体(MTs)培养法培养,并设常规单层贴壁细胞培养对照.通过倒置显微镜、扫描及透射电镜观察MTS形成情况,并用免疫组化法分别对MTS及贴壁细胞上CD44v6和CD29表达进行检测.结果MTS培养成功,贴壁细胞与MTS在细胞结构及细胞连接结构上相似,两种MTS在形态及结构上差异无显著性.免疫组化结果显示,CD29在高转移性的Anip细胞及其MTS上呈阳性表达;在低转移性的AGZY细胞及其MTS上阴性表达.CD44v6在Anip和AGZY细胞及MTS上均呈阳性表达,差异无显著性.贴壁细胞与MTS上两种黏附分子表达均无差异.结论成功建立了一种简易制备MTS的方法.细胞生长方式(单层贴壁与MTS)可能不影响CD44v6和CD29的表达.CD29表达可能与肺腺癌转移性相关;CD44v6表达可能与肺腺癌转移无关.
