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美容医学在抗衰老中的应用和发展
衰老是指随着时间的推移,机体所发生的组织结构、生理功能和心理行为方面的退行性变,是一种起始于细胞的过程,根据是否伴有加速衰老的病理情况可以分为生理性衰老和病理性衰老.人体各器官在不同的年龄依次进入衰老状态,外貌和形体的变化是衰老状态为直观的体现.随着年龄的增长,人体皮肤变得粗糙、松弛、色泽黯淡,须发变得灰白,各类皱纹和色斑相继出现并逐渐加深;肌肉开始萎缩,关节日益磨损,韧带逐渐失去弹性,行动变得迟缓,脊柱出现退行性改变,身姿从挺拔逐渐变得驼背佝偻[1].
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脂肪干细胞在口腔组织修复中的应用及研究进展
脂肪干细胞(ADSCs)是来源于脂肪组织的多能干细胞,其本身具有多方向分化的潜能.近年来,脂肪干细胞在组织工程领域的研究成果令人振奋.本文就脂肪干细胞生物学特性、在口腔组织修复中功能等方面进行论述.
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莫信干细胞“神话”
干细胞研究是近年来医学前沿的重点发展领域.追随干细胞研究的热潮,许多与干细胞相关的抗衰老等内容充斥各类商家和媒体,给予人们无尽的想象空间.然而,在这些动听的“神话”故事中,虚妄常常多过真实.研究报道,干细胞是一类具有多向分化潜能的细胞,具有分化并再生各种组织、器官的潜在能力,就像树干能不断生长出新的枝叶一样.无论心肝脾肺肾,还是神经、血液,理论上都能由干细胞分化生成.干细胞有着一个大家族,其中胚胎干细胞具有分化成各种细胞组织的能力;成体干细胞则只能分化成特定的几种组织细胞,如脂肪干细胞可以分化为脂肪、骨和软骨,神经干细胞可生成神经细胞.换而言之,并非每一种干细胞都是“万能”的.
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脂肪干细胞在整形外科中的应用浅析
随着时代的发展我国整形事业呈现出良好的发展趋势,脂肪干细胞取材方便、组织来源丰富、增值能力强、创伤较小,在整形外科得到了有效应用,是解决各种医学难题的理想材料.本文将对脂肪干细胞在整形外科中的实际应用进行分析研究.
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大鼠脂肪源性干细胞体外培养的实验研究
目的:分离培养大鼠脂肪干细胞、观察其生长规律并鉴定其干细胞特性.方法:自大鼠腹股沟处获取皮下脂肪组织,用Ⅰ型胶原酶消化分离脂肪干细胞,观察其体外的分裂增殖能力,通过成骨和成脂诱导分化实验检测分离细胞的干细胞特性.结果:分离的脂肪干细胞具有很强的体外扩增能力,其生长曲线呈"S"形;第3代脂肪干细胞成骨诱导后能向成骨细胞分化,形成钙化结节;成脂诱导后能向脂肪细胞分化,形成胞内脂滴.结论:本方法分离获取的脂肪干细胞,增殖速度快且有多向分化潜能,是一种组织工程的理想种子细胞.
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骨髓间充质干细胞及脂肪干细胞在勃起功能障碍中的研究进展
干细胞被定义为具有自我更新和定向分化的能力的细胞，因此，他们在医学界中代表了的巨大潜力。从历史上看，干细胞已被分为胚胎干细胞(ESC)和成体干细胞(ASC)。以前只认为ESC具有保持分化成任何细胞类型的能力，而ASC只是具有一定胚胎细胞的能力。然而，大量的研究表明，成体干细胞分化成的细胞类型的能力超出其组织起源。在本文中，我们列举了利用骨髓间充质干细胞及脂肪干细胞治疗勃起功能障碍的临床试验，对其进行一一综述。
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MRI活体监测脂肪干细胞治疗大鼠脑梗死
目的:使用7.0T磁共振监测SPIO标记的脂肪干细胞(ADSCs)原位移植入大鼠脑梗塞模型的治疗效果.方法:从2周龄大鼠的腹股沟脂肪组织中分离脂肪干细胞传代培养,使用脂多糖聚乙烯亚胺(PEI)/SPIO纳米复合材料标记后原位移植入MCAO模型大鼠(n=8),对照组注射不含细胞的培养基.使用MRI在造模后的2小时,1天,3天及7天对大鼠头部进行扫描,成像序列包括:RARET2,DWI and DTI.实验终点安乐死大鼠,脑组织切片进行普鲁士蓝染色.结果:ADSCs细胞爬片普鲁士蓝染色结果显示标记率达95％以上(Fe:7μg/mL).统计学分析显示造模后7天细胞治疗组的平均梗死体积(36.61±2.46)较对照组平均梗死体积(39.62±1.31)减小,两组存在显著的统计学差异(P<0.05).Eigenvector maps上也显示治疗组与对照组相比,梗死区有方向性的纤维明显增加.脑组织切片的普鲁士蓝染色显示,蓝染颗粒主要分布于梗死区周围的细胞内,另外一部分分布于血管内皮细胞内.结论:本研究提供了ADSCs对脑梗死有效性的一些证据,ADSCs或许可作为脑梗死细胞治疗的重要细胞来源.
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左归丸、右归丸含药血清对大鼠脂肪干细胞成骨分化的影响
目的 比较左归丸、右归丸对大鼠脂肪干细胞成骨性分化的影响并探讨相关机制.方法 将30只SD大鼠随机分为左归丸组、右归丸组和对照组各10只,左归丸组、右归丸组灌胃相应药物的浓度均为7.55 g/(kg·d),对照组灌胃等量生理盐水,连续灌胃3天后制备左归丸、右归丸和对照含药血清.分离大鼠脂肪间充质干细胞,分为左归丸组、右归丸组和对照组,加入相应的体积分数10％的含药血清诱导培养7天后进行碱性磷酸酶(ALP)染色,诱导28天后进行茜素红染色,诱导培养10天检测各组细胞Wnt3a、Lef-1、p-catenin蛋白表达. 结果 各组细胞ALP染色均为阳性,右归丸组细胞大面积深染,明显强于左归丸组及对照组.各组细胞茜素红染色均为阳性,右归丸组的矿化结节在数量和大小上优于左归丸组及对照组.左归丸组及右归丸组β-catenin、Le-1蛋白表达均较对照组升高(P＜0.05),右归丸组Wnt3a蛋白表达亦较对照组升高(P＜0.05);并且右归丸组β-catenin、Lef-1、Wnt3a蛋白表达均高于左归丸组(P＜0.05).结论 右归丸及左归丸均促进大鼠脂肪干细胞成骨性分化,且右归丸作用更为显著,其机制可能与上调β-catenin、Lef-1及Wnt3a蛋白,激活经典Wnt通路有关.
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脂肪干细胞的生物学特性及其在骨组织工程中的研究进展
组织和器官的修复与重建，是生物学和临床医学面临的重大难题之一，而干细胞治疗为再生医学提供了新思路。脂肪干细胞是一类存在于脂肪组织中，具有与骨髓间充质干细胞类似的自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，并逐渐成为组织工程的种子细胞。本文对脂肪干细胞的生物学特性进行了综述，阐述了脂肪干细胞的表型、多向分化潜能、培养扩增方法及多种疾病的临床前实验成果，分析了脂肪干细胞作为干细胞来源的可行性，并且总结了脂肪干细胞在骨组织工程中的研究现状和发展前景。
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大鼠脂肪干细胞体外诱导为光感受器细胞和视网膜色素上皮细胞
目的 探讨大鼠的脂肪干细胞(ADSCs)体外诱导为光感受器细胞和视网膜色素上皮(RPE)细胞的方法.方法 经贴壁筛选法连续传代纯化细胞,流式细胞仪检测CD45、CD90、CD49d、CD106鉴定ADSCs.用EGF、激活素A、牛磺酸、视黄酸和视网膜细胞提取液单独诱导ADSCs;用EGF+牛磺酸、EGF+视黄酸、牛磺酸+视黄酸、EGF+牛磺酸+视黄酸联合诱导,免疫荧光法和流式细胞仪检测细胞的视紫红质、CK和S-100的表达.结果 原代ADSCs,CD45阳性率是1.6%,CD90是71.3%,CD49d是7.8%,CD106是3.5%.从传1～5代,CD45阳性率是0.8%～9.3%,CD90是84.7%～94.8%,CD49d是16.8%～31.0%,CDl06是8.3%～22.2%.各代ADSCs中,CD49d的阳性率均高于CD106.ADSCs的视紫红质的诱导效应是17.5%～46.O%,CK的诱导效应是19.7%～79.3%,S-100的诱导效应是27.3%～50.7%.结论 ADSCs具有向光感受器细胞和RPE细胞分化的潜能.
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Exendin-4诱导脂肪干细胞向成骨细胞分化修复骨缺损
目的 探讨Exendin-4能否促进脂肪干细胞(ADSCs)向成骨细胞分化,促进骨形成,修复骨缺损.方法 体外培养脂肪干细胞,将细胞分为成脂诱导组,成脂诱导+Exendin-4(0.1、1和10μmol//L);成骨诱导组,成骨诱导+Exendin-4(0.1、1和10μmol//L),通过油红O染色和茜素红染色分别鉴定脂肪干细胞的多向分化能力.将小鼠分为对照组、骨缺损组、骨缺损+ADSCs组和骨缺损+ADSCs+Exendin-4组.将脂肪干细胞与藻酸盐凝胶混合,注入损缺的骨组织内,连续给药1个月,观察骨修复效果.结果 脂肪干细胞纯度达95.5％,Exendin-4以依赖于浓度和时间的方式促进ADSCs增殖(P<0.05).不仅如此,Exendin-4促进ADSCs向成骨细胞分化抑制向脂肪细胞分化.此外Exendin-4可以显著地提高骨体积/总体积(BV/TV)、骨小梁数量和厚度(P<0.05),促进骨愈合.结论Exendin-4能够促进ADSCs向成骨细胞分化,抑制向脂肪细胞分化,改善骨缺损,促进骨形成.
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去细胞神经复合脂肪干细胞修复神经缺损的实验研究
目的：探讨去细胞同种异体神经复合脂肪干细胞（ADSC）诱导分化的类许旺细胞在修复大鼠坐骨神经缺损中的效果。方法健康F344近交系大鼠30只，随机分为2组，每组15只，分别用不同的移植物桥接10 mm坐骨神经缺损，A组用单纯去细胞同种异体神经（SD大鼠去细胞神经支架）桥接，B组用脂肪干细胞诱导分化的类许旺细胞复合去细胞同种异体神经桥接。比较两组术后6、12周坐骨神经功能指数恢复率（SFI%）、神经电生理（NEP）包括坐骨神经传导速度（MNCV）恢复率和小腿腓肠肌复合动作电位（CAMP）恢复率、再生有髓神经纤维计数恢复率、神经纤维直径恢复率、髓鞘厚度恢复率的测定、组织学光镜和透射电镜观察髓鞘再生情况等指标的变化，评价实验效果。结果术后6、12周，B组SFI%（6周时52.38±7.12，12周时79.99±10.33）、MNCV恢复率（6周时51.12±8.15，12周时75.93±5.95）、CAMP恢复率（6周时45.38±4.12，12周时75.98±10.99）、再生有髓神经纤维计数恢复率（6周时44.29±7.52，12周时77.06±11.54）、神经纤维直径恢复率（6周时43.58±4.87，12周时83.23±6.32）、髓鞘厚度恢复率（6周时46.41±4.35，12周时83.96±8.31）等指标均优于A组SFI%（6周时46.32±5.13，12周时72.73±8.06）、MNCV恢复率（6周时42.54±6.33，12周时69.34±9.13）、CAMP恢复率（6周时40.52±4.15，12周时68.24±9.45）、再生有髓神经纤维计数恢复率（6周时38.45±6.28，12周时67.89±11.87）、神经纤维直径恢复率（6周时40.11±4.32，12周时76.37±9.38）、髓鞘厚度恢复率（6周时41.33±4.58，12周时77.62±7.98）（均P<0.05）。B组神经组织学光镜观察可见神经纤维直径、数量及髓鞘厚度优于A组，透射电镜观察可见B组神经组织较A组髓鞘排列致密，髓鞘较厚。结论脂肪干细胞诱导分化的类许旺细胞复合去细胞同种异体神经构建的组织工程化神经能有效地修复大鼠坐骨神经缺损。
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自体脂肪干细胞复合胶原海绵多孔支架构建大鼠乳腺脂肪组织的初步研究
目的 探讨自体脂肪干细胞复合胶原海绵多孔支架构建大鼠乳腺脂肪组织的可行性.方法 采用胶原酶消化、离心方法分离并培养6只雌性SD大鼠的脂肪干细胞.对脂肪干细胞进行成骨、成脂诱导及鉴定.将自体脂肪干细胞复合Ⅰ型胶原海绵多孔支架进行体外培养.将自体脂肪干细胞复合Ⅰ型胶原海绵多孔支架移植到大鼠右上侧乳腺(实验组),将Ⅰ型胶原海绵多孔支架移植到大鼠左上侧乳腺(对照组),共移植6例.12周后观测有无新生脂肪形成；测量新生脂肪组织湿质量；组织切片行HE及油红0染色.结果 SD大鼠脂肪干细胞增殖能力强；具有成骨及成脂分化能力；体外培养2周,胶原支架内可见ASC生长.实验组可见乳腺与胸肌之间有脂肪样新生组织形成,平均湿质量为(121±9) mg.对照组见乳腺与胸肌之间有胶原海绵样组织形成,平均湿质量为(77±6) mg,两组间湿质量存在统计学差异,P＜0.05.HE及油红O染色证实,实验组新生组织主要为成熟脂肪组织；而对照组主要为胶原纤维.结论 自体脂肪干细胞复合Ⅰ型胶原海绵多孔支架可在大鼠乳腺区域形成脂肪组织.
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利用电纺生物膜进行多细胞片层制备的方法研究
目的机体损伤和病变造成的组织缺损通常可以组织工程的方式来进行修复。方法本研究结合细胞片层技术和静电纺丝技术,利用脂肪干细胞制备多细胞片层，并对各种电纺生物膜结构形貌、亲水性能、力学性能、以及与脂肪干细胞相容性等进行较为深入的比较研究。结果表明制备的仿细胞外基质(ECM)结构的多孔网状电纺生物膜在形态上模拟ECM，而且具有孔隙率高,贯通性好,比表面积高,利于细胞的生长和粘附的特点。结论本研究利用电纺生物膜作为支撑膜，增加了细胞的增殖空间和营养物质的流通，又保证了细胞片层在转移过程中的完整性，从而给临床多细胞片层移植治疗提供了一个简便易行的操作方法。
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兔脂肪干细胞与软骨细胞微球共培养成软骨分化适诱导比例的实验研究
通过间接共培养ADSC与软骨细胞微球,得出使ADSC发生软骨向分化的佳比例.体外分离培养新西兰大白兔ADSC和软骨细胞,制成微球分置于Tranwell上下室,实验分为阳性对照组,阴性对照组,生长因子对照组及不同比例(0.5∶1;1∶1;1∶2;1∶3;1∶5;1∶7)的ADSC和软骨细胞共培养组,培养28天后分别行组织形态学观察,GAG、COL-Ⅱ和COL-X的定性定量检测.阿利新蓝-核固红染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色显示比例为0.5∶1和1∶1的阳性较弱,而X型胶原在生长因子对照组的表达为强烈.DMMB法显示总GAG含量在共培养组较阴性对照组均有所增加(P＜0.05),且增加量与软骨细胞的比例呈正相关,但是在ADSC∶AC比例达到1∶5之后有所下降.OHP检测总胶原蛋白的变化同上,且1∶5组中沉积的胶原量比阴性对照组高出7.3倍.能够使ADSCs大程度的表达软骨特异性细胞外基质,同时使COL-X等软骨肥大标志无明显上调的ADSC与软骨细胞的比例为1∶5,共培养诱导较生长因子能够抑制ADSC软骨向分化后的肥大问题.
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重力矢量及趋化诱导对脂肪干细胞在PLGA电纺膜上早期增殖的影响
观察研究重力矢量方向及血小板衍生生长因子(PDGF)趋化诱导,在体外环境对人脂肪于细胞(ASCs)在PLGA电纺膜表面黏附和增殖活动的影响.体外原代培养从人颊脂垫提取的ASCs,根据不同重力矢量条件以及有无趋化因子PDGF将实验分为4个组.A组:PDGF/重力矢量(+),含PDGF的PLGA电纺膜置于ASCs悬液底部;B组:PBS/重力矢量(+),空白(PBS)电纺膜置于ASCs悬液底部;C组:PDGF/重力矢量(-),含PDGF的PLGA电纺膜覆于ASCs悬液表面;D组:PBS/重力矢量(-),空白(PBS)电纺膜覆于ASCs悬液表面.分别于0、1、3、5、8、11d加入Alamar Blue继续孵化24 h后测OD值,对照标准曲线,计算各组Alamar Blue的下降百分比,评估ASCs的黏附增殖活动.结果显示:在重力矢量(+)组的早期(第1～4 d),无论趋化因子PDGF存在与否,Alamar Blue的下降百分比都能达到30％左右,不影响细胞的定植、黏附与增殖.但是在重力矢量(-)组,缺少趋化因子PDGF的Alamar Blue的下降百分比为25％左右,细胞将无法正常的定植与黏附.PDGF具有明显诱导ASCs趋化聚集作用,能减轻不利重力因素的影响,显著改善ASCs黏附与增殖.
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脂肪干细胞在软骨组织工程中的研究进展
近年来脂肪干细胞(ADSC)的成软骨潜能备受瞩目,其作为种子细胞在软骨组织工程应用方面前景广阔,然而目前并没有一种高效的诱导方法被世界公认.外源性生长因子、基因修饰、共培养、生长因子与共培养联合、支架材料等多种手段均可诱导ADSC向软骨细胞方向分化,但各方法的优劣,诱导分化时的信号通路及新生软骨的性状并未见详细的分析和讨论.文中介绍了以上多种诱导方法的研究现状及问题,并讨论了化学因素、供体年龄、组织获取部位等对其的影响,以期为ADSC的临床应用提供一定的理论参考.
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脂肪干细胞复合真皮脱细胞基质修复兔关节软骨缺损的实验研究
目的 探讨脂肪间充质干细胞(ADSCs)复合小牛真皮脱细胞基质(ADM)参与修复兔膝关节软骨缺损的可行性.方法 取自体新西兰兔的脂肪组织,采用酶消化分离培养ADSCs并传代,倒置相差显微镜观察细胞形态,FACS检测细胞表面特异性表达以鉴定细胞,行成脂和成骨诱导鉴定.小牛真皮通过脱细胞、交联和冻干制备小牛ADM,ADSCs达到一定数量后接种于ADM得到细胞支架复合物.24只新西兰大白兔随机分A、B、C共三组,A组关节软骨缺损处外科缝合细胞支架复合物,B组软骨缺损处外科缝合ADM,C组软骨缺损不做任何处理.分别于术后第12周处死动物,修复处行大体、组织学检测. 结果 成功分离鉴定新西兰兔的脂肪干细胞.经重塑后真皮脱细胞基质支架材料表面光滑、孔隙均匀.ADSCs与ADM复合后,缺损处类软骨组织填充,修复区表面光滑;II型胶原免疫组化显示,复合支架已被吸收,再生的软骨是阳性.结论新型小牛ADM支架材料与ADSCs生物相容性好,ADSCs与ADM复合向软骨诱导后可良好地修复关节软骨缺损,具有替代正常软骨的潜力.
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采用康宁 HYPERFlask?细胞培养瓶快速扩增人体脂肪干细胞
人脂肪干细胞（hASCs）是一种丰富、易得的多能成体干细胞[1]。尽管我们可获取大量吸脂术后的脂肪，但是细胞治疗所需的大量未分化存活细胞仍需要通过高效的体外扩增方法才能得到。例如，在一项旨在改善肌肉萎缩症，并以小鼠为模型的治疗实验中，我们在每月一次注射106个细胞时得到了阳性结果[2]。如果我们将其应用于人体，一个体重60 kg的人每月大约需要3×109个干细胞。我们试验了多种体外扩增方案，采用康宁 HYPERFlask?细胞培养瓶，我们能够生产大量用于研究的间充质干细胞，并开发出面向未来的细胞治疗手段。
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脂肪干细胞在脂多糖诱导急性肺损伤大鼠肺部的定植及对TNF-α、IL-4表达的影响
目的 探讨5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)标记的脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)在脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤大鼠肺部的定植情况及对TNF-α、IL-4表达的影响.方法 雄性SD大鼠30只,随机数字表法分为对照组、LPS组和LPS+ADSCs组(均n=10).腹腔注射LPS 8 mg/kg制备大鼠ALI模型,对照组腹腔注射生理盐水4 mL/kg,LPS+ADSCs组于制模30 min后尾静脉注射300μL ADSCs进行干预,对照组及LPS组30 min后尾静脉注射300μL生理盐水.观察大鼠的死亡时间,24 h后取肺组织标本及左心室血,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-4(IL-4)水平.开胸取肺组织,检测肺湿/干质量(W/D)比值,光镜下观察肺组织病理学改变,免疫荧光显微镜观察脂肪干细胞在肺部的定植情况.组间两两比较采用LSD-t检验.结果 LPS组与LPS+ADSCs组比较,病死率差异无统计学意义(50％vs.70％,P>0.05);EdU标记的ADSCs通过大鼠尾静脉注入后24 h在肺部广泛定植;与对照组比较,LPS组肺组织损伤较重,肺W/D比值、血TNF-α 水平均显著增加(均P<0.01),IL-4水平显著降低(P<0.01).与LPS组比较,LPS+ADSCs组肺组织损伤程度明显减轻,肺W/D比值(5.57±0.27 vs.5.98±0.28)及血TNF-α 水平均显著降低[(41.51±4.14)ng/L vs.(45.52±3.74)ng/L],均P<0.05,IL-4水平显著升高[(7.01±1.11)pg/mL vs.(3.27±0.54)pg/mL,P<0.05].结论 ADSCs可定植在LPS诱导ALI大鼠的肺部并能有效减轻TNF-α 的炎症反应,提高抗炎因子IL-4水平.
