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桑黄提取物对C3H10t1/2细胞增殖与成脂分化的影响
目的 探讨桑黄提取物对C3H10t1/2细胞体外增殖及成脂分化的影响.方法 采用95％乙醇回流提取,RP18柱色谱乙醇梯度洗脱制备桑黄提取物,水提醇沉制备多糖,通过MTS法分析各洗脱组分和多糖对C3H10t1/2细胞增殖影响,油红0染色法检测其对C3H10t1/2细胞成脂分化影响.结果 桑黄各组分对C3H10t1/2均无明显生长抑制作用;桑黄多糖对C3H10t1/2成脂分化无明显抑制作用,但95％乙醇提取物抑制作用明显,50 μg/ml抑制率可达81.36％,而其有效成分主要集中于RP18柱色谱95％乙醇洗脱部位,其30 μg/ml对C3H10t1/2成脂抑制率可达85.70％.结论 桑黄提取物对C3H10t1/2毒性较低,但95％乙醇提取物具有显著成脂抑制活性,主要成分为极性较小的脂溶性成分.
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人脐带血来源间充质干细胞的成脂分化
目的 本文利用Ficoll-Hypague法自人脐带血中分离、培养及扩增出人脐带血来源间充质干细胞(human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells,hUCBMSCs);并对其成脂分化能力进行鉴定.方法 显微镜下观察各代hUCBMSCs的形态学特点;利用流式细胞术检测各代hUCBMSCs免疫学表型;取P3代细胞进行成脂肪分化,镜下观察细胞形态及是否出现脂滴.结果 体外分离、培养出形态均一的hUCBMSCs;流式结果显示hUCBMSCs具有间充质干细胞的免疫学特征,即CD44、CD73、CD105阳性;成脂诱导后4天细胞形态发生变化,分别于诱导后1周、2周胞浆中出现明显脂滴.结论 成功的从人脐带血中分离培养出了人脐带血来源间充质干细胞,其具有高效的成脂分化能力,未来在整形医学领域种子细胞的研究中将具有重要的意义.
关键词： 人脐带血来源间充质干细胞 成脂分化 -
小豆蔻明对C3H10T1/2细胞成脂分化影响的作用机制
目的:探讨小豆蔻明抑制C3H10T1/2细胞成脂分化的作用机制.方法:观察C3H10T1/2细胞成脂过程形态学变化,采用MTS法、油红O染色法、GAP-PAP酶法检测小豆蔻明对C3H10T1/2细胞增殖、成脂分化以及胞内甘油三酯含量的影响,采用RT-PCR与Western Blot技术检测小豆蔻明对C3H10T1/2细胞PPARγ、C/EBPα和FABP4 mRNA以及蛋白表达的影响.结果:60、80、100μmol/L小豆蔻明能够显著抑制C3H10T1/2细胞存活率(P<0.01);5、10、30μmol/L小豆蔻明能够抑制C3H10T1/2细胞脂滴的形成,从而抑制成脂分化;5、10、30μmol/L小豆蔻明能够显著降低细胞中甘油三酯的含量(P<0.05,P<0.01);10、30μmol/L小豆蔻明能够显著下调PPARγ、C/EBPα和FABP4 mRNA的表达(P<0.05,P<0.01);5、10、30μmol/L小豆蔻明能够显著降低成脂关键转录因子PPARγ、C/EBPα和成脂分化标志因子FABP4蛋白的表达(P<0.05,P<0.01).结论:小豆蔻明通过下调PPARγ、C/EBPα、FABP4 mRNA以及蛋白表达抑制细胞成脂分化并降低胞内甘油三酯含量.
关键词： C3H10t1/2细胞 成脂分化 小豆蔻明 -
右归丸含药血清对骨髓间充质干细胞成骨及成脂分化的影响
目的:通过观察右归丸含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨与成脂分化的影响,为阐明中医肾主骨理论的科学内涵奠定基础.方法:体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞,传二代后分为对照组、成骨诱导组、右归丸1组;对照组、成脂诱导组和右归丸2组.显微镜下观察细胞形态变化,碱性磷酸酶(ALP)染色及油红0染色,RT-PCR法测定成骨各组及对照组Runx2、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达,成脂各组及对照组过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPARγ)、C/EBP α及脂肪酸结合蛋白(aP2)的表达.Western blot法测定成骨与成脂相关蛋白的表达.结果:成骨诱导组和右归丸1组在加入诱导培养液3-4d后ALP活性明显增强.14d后,与对照组比较,Runx2、BMP-2、Col Ⅰ mRNA及蛋白表达显著上调(P＜0.05),成脂诱导组和右归丸2组PPAR γ、C/EBP α及aP2 mRNA及蛋白表达显著下调(P＜0.05),且右归丸组比单纯诱导组更明显.结论:右归丸含药血清可以诱导成骨并显著增强成骨诱导剂诱导BMSCs向成骨细胞分化,并促进成骨细胞成熟作用,同时可以抑制成脂分化.
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球松素查尔酮对C3H10T1/2细胞成脂分化的影响
查尔酮类化合物是一种广泛存在于多种药用植物中的黄酮类化合物,具有抑制细胞成脂分化的作用.为研究山核桃叶中提取分离得到的球松素查尔酮对小鼠胚胎间充质干细胞(C3H10T1/2)成脂分化的影响,该实验利用MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,内盐]法检测细胞增殖情况;油红O染色和异丙醇萃取法检测细胞成脂分化情况;GAP-PAP酶法检测细胞中甘油三酯含量;分别采用荧光RT-PCR和Western blot检测成脂分化关键转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ),CCAAT增强子结合蛋白α (C/EBPα)和分化标志物脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4) mRNA和蛋白表达.结果显示当球松素查尔酮浓度小于等于50 μmol·L-1,对C3H10T1/2细胞的增殖活性无影响;油红O染色和异丙醇萃取法及GAP-PAP酶法检测结果表明球松素查尔酮能明显减少C3H10T1/2细胞成脂分化和甘油三酯含量;荧光RT-PCR和Western blot检测表明球松素查尔酮能下调FABP4,PPARγ和C/EBPα mRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01).结果提示,球松素查尔酮能够明显抑制C3H10T1/2细胞成脂分化.
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白杨素抑制小鼠胚胎成纤维细胞成脂分化的作用研究
白杨素(chrysin)是一种广泛存在于多种中药中的活性黄酮类化合物,具有降脂的功效.为研究白杨素对小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)成脂分化能力的影响,该实验利用噻唑蓝(MTT)和结晶紫检测白杨素对永生化小鼠胚胎成纤维细胞(iMEFs)的细胞毒作用;碘化乙啶(PI)染色结合流式细胞术(FCM)检测不同浓度白杨素对iMEFs细胞周期的影响;油红0染色分析白杨素对iMEFs成脂分化能力的影响;半定量PCR法检测白杨素对成脂分化标志物围脂素2(perilipin 2)、脂联素(adipoq)、脂肪酸结合蛋白4(fabp 4)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、脂蛋白脂酶基因(LPL)以及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(PPAR-γ2)mRNA转录水平的影响.结果显示,白杨素对iMEFs具有一定的细胞毒作用,浓度越高细胞存活率降低,IC50约为30 μmol·L-1;FCM检测结果表明白杨素能影响iMEFs的细胞周期分布,使处于G1期的细胞比例增加;成脂分化诱导实验表明30 μmol·L-1白杨素明显减少胰岛素和地塞米松诱导的iMEFs脂滴的形成;同时白杨素能降低LPL,PPAR-γ2的mRNA 转录水平,并影响fabp 4,MCP-1,adipoq的mRNA水平.结果提示,白杨素能抑制小鼠间充质干细胞向脂肪细胞分化.
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人骨髓间充质干细胞体外成骨与成脂分化过程中FGF1及其受体表达的变化
目的 研究人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨与成脂分化过程中成纤维细胞生长因子1(FGF1)及其受体(FGFRs)的动态表达,探讨FGF1在hBMSCs成骨与成脂分化过程中的作用.方法 密度梯度离心法分离hBMSCs,取第3代细胞分别进行成骨和成脂诱导分化并染色鉴定.通过real-time PCR方法检测成骨和成脂标志基因以及FGF1/FGFRs的表达,免疫荧光染色法检测诱导分化前后FGF1的表达.Real-time PCR及油红O染色鉴定外源性FGF1对hBMSCs成骨与成脂分化的影响.结果 体外诱导hBMSCs成骨和成脂分化后茜素红和油红O染色结果呈阳性；FGF1和FGFRs在诱导过程中呈动态表达；免疫荧光染色结果表明FGF1主要在细胞质中分布,成骨诱导3d后在细胞核中的表达增加；相比对照组,加入外源的FGF1组7d后脂滴数量明显减少,成脂标志基因表达受到抑制(P＜0.01),而加入外源的FGF1 3 d骨桥蛋白(OPN)表达升高(P＜0.05).结论 FGF1能够抑制hBMSCs的成脂分化,并且可能通过促进骨桥蛋白表达而提前hBMSCs的成骨矿化.
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Ghrelin抑制小鼠骨髓基质细胞成脂分化
目的 观察胃促生长素ghrelin对原代培养小鼠骨髓基质细胞成脂分化的影响.方法 体外培养小鼠骨髓基质细胞,MDI诱导剂诱导细胞成脂分化,显微镜观察细胞形态变化;油红O染色法检测细胞甘油三酯含量,化学比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;MTT法检测细胞克隆化扩增活动,RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)和丝氨酸蛋白酶脂肪因子adipsin mRNA表达,Western blot 检测PPARγ2蛋白表达.结果 Ghrelin能够剂量依赖性(10-9、10-8、10-7mol/L)地抑制骨髓基质细胞成脂分化,升高ALP活性(P＜0.05或P＜0.01).Ghrelin能够降低PPARγ2和adipsin mRNA以及PPARγ2蛋白表达(P＜0.05).Ghrelin对细胞成脂分化早期的克隆化扩增没有显著影响.结论 Ghrelin能够显著抑制体外培养小鼠骨髓基质细胞成脂分化,该作用可能与抑制PPARγ2表达有关.
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乙醇诱导小鼠导致骨髓多能干细胞成脂分化
实验证明乙醇可引起股骨头内脂肪积聚,导致骨坏死[1],其作用机制尚不清楚.本研究旨在观察乙醇对骨髓多能干细胞(D1细胞)[2]的直接作用,进一步阐明乙醇性骨坏死的发病机制.
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miR-424负向调节人脂肪源间充质干细胞向成脂细胞分化
目的 研究miR-424对人脂肪源间充质干细胞(hAMSCs)向成脂分化的影响.方法 用real-time PCR检测hAMSCs成脂分化前后细胞内miR-424水平的变化.在脂质体介导下,用人工合成的miR-424模拟物转染hAMSCs提高细胞内miR-424的含量,随后对其进行成脂诱导.用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,用real-time PCR和Western blot检测成脂关键转录因子PPARγ及相关标记物mRNA的表达.结果 hAMSCs成脂分化后,miR-424表达下调.与对照组细胞相比,转染miR-424模拟物的实验组细胞中miR-424含量明显升高.成脂诱导第8天油红O染色结果显示,实验组脂滴形成显著少于对照组.PPARγ和成脂相关标记物的表达量也出现下调.结论 miR-424可负向调节hAMSCs向脂肪细胞分化.
关键词： miR-424 人脂肪源间充质干细胞 成脂分化 -
姜黄素对猪脂肪间充质干细胞成脂分化及Krüppel样因子2表达的影响
目的 探讨姜黄素对猪脂肪间充质干细胞(AMSCs)成脂分化的影响,及姜黄素调控成脂分化的机制.方法 用不同浓度姜黄素处理猪AMSCs,用MTT比色法检测姜黄素对猪AMSCs增殖的影响,用油红O染色提取法检测对成脂分化的程度,用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测对Krüppel样因子(KLF2)和过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)2 mRNA表达的影响.结果 当姜黄素浓度为1、5、10lμmol/L用于猪AMSCs时对,AMSCs增殖无明显影响,但高于15.μmol/L时,则具有显著的抑制作用(P＜0.05);当姜黄素用于猪AMSCs的成脂诱导分化时,1 ～ 30μmol/L的浓度即能显著抑制成脂分化(P＜0.05),其中25 μmol/L浓度获得68.19％的高抑制率;当25 μmol/L姜黄素用于检测KLF2和PPARy2 mRNA的表达,诱导分化2、8和16d的KLF2 mRNA的表达上调率分别达到48.37％、20.56％和9.64％,而PPARγ2 mRNA的表达下调率分别达到16.01％、35.93％和27.27％.结论 姜黄素具有抑制猪AMSCs增殖和成脂分化作用,该抑制作用与姜黄素促进KLF2 mRNA的表达和抑制PPARγ2 mRNA的表达相关.
关键词： 姜黄素 Krüppel样因子2 脂肪间充质干细胞 成脂分化 实时定量聚合酶链反应 猪 -
Krüppel样因子4在猪脂肪间充质干细胞成脂分化过程中的表达模式
目的 探讨猪脂肪间充质干细胞(AMSCs)成脂分化过程中Krüppel样因子4(KLF4)的表达模式.方法 采用F3代以上猪AMSCs进行成脂诱导分化,用油红O染色提取法检测成脂分化程度,用RT-PCR和Real-time PCR检测KLF4的表达模式.结果 猪AMSCs成脂诱导分化,诱导3d开始出现脂肪滴,诱导10 d时成脂分化率达60％;RT-PCR检测,在诱导分化2、4、8、12和16d时都能检测出KLF4的表达;经Real-time PCR检测,上述各诱导分化时间点的表达量分别为对照组的1.6657±0.2269、2.6790±0.0524、2.6293±0.0280、2.3633±0.1568和2.6146±0.1575倍.这些结果表明,KLF4的表达在猪AMSCs成脂诱导分化的第2天就有显著上调,表达高峰出现在成脂分化的第4天,此后持续高表达.结论 在猪AMSCs成脂分化过程中,从早期到晚期,KLF4发挥持续性的调控作用.
关键词： 脂肪间充质干细胞 成脂分化 Krüppel样因子4 实时定量聚合酶链反应 猪 -
姜黄素对猪骨髓间充质干细胞增殖和成脂分化的影响
目的 探讨姜黄素(curcumin)对猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成脂分化的影响及机制.方法 用含不同浓度姜黄素的细胞培养液和诱导分化液,培养和诱导分化猪BMSCs,用MTT比色法检测对BMSCs增殖的影响,用形态学和油红O染色提取法检测对成脂分化的影响,用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测对成脂分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ2)和脂蛋白脂肪酶(LPL) mRNA表达的影响.结果 当姜黄素用于猪BMSCs的培养,1μmol/L浓度在培养第3天、第5天和l0μmol/L浓度在培养第5天开始能够显著促进细胞增殖(P＜0.05),但高于15μmol/L则具有显著的抑制作用(P＜0.05);当姜黄素用于猪BMSCs的成脂诱导分化,所用不同浓度的姜黄素都能显著抑制成脂分化(P＜0.05),用0.5 μmol/L获得28.3％的抑制率,而用20μmol/L获得71.24％的高抑制率;当用20μmol/L姜黄素处理和分别诱导分化5、10和15d,PPARγ2 mRNA表达的抑制率分别达到19.11％、49.52％和76.76％,LPL mRNA表达的抑制率分别达到37.58％、49.32％和74.70％.结论 适当浓度姜黄素具有促进猪BMSCs增殖和抑制猪BMSCs向脂肪细胞分化的作用,对脂肪细胞的分化发挥了重要调控作用.
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MicroRNA-146a对人骨髓间充质干细胞分化能力的影响
目的:探讨MicroRNA-146a(miR-146a)对人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)分化能力的影响.方法:从健康志愿者骨髓中分离培养BM-MSC,用miR-146a抑制剂或类似物转染细胞,实时定量PCR检测转染后细胞miR-146a表达量.应用分化实验方法比较转染后各组细胞成脂及成骨分化能力的改变情况,了解miR-146a对BM-MSC分化能力的影响.结果:BM-MSC能够诱导分化成脂肪及成骨细胞.用miR-146a抑制剂或类似物转染细胞后,细胞miR-146a表达量出现相应的下调或上调,与对照组相比,转染miR-146a抑制剂后细胞miR-146a表达下调(P＜0.01),转染miR-146a类似物后细胞miR-146a表达显著上调(P＜0.01).在成脂分化实验中,转染miR-146a抑制剂可抑制BM-MSC向脂肪细胞分化(P＜0.01),转染miR-146a类似物可促进BM-MSC向脂肪细胞分化(P＜0.01);在成骨分化实验中,转染miR-146a抑制剂或类似物对BM-MSC成骨分化均无明显影响(P＞0.05).结论:BM-MSC具有成脂及成骨分化潜能,miR-146a可促进BM-MSC向脂肪细胞分化.
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MicroRNA-146b-5p对小鼠骨片来源的间充质干细胞成脂分化能力的影响
目的:探讨MicroRNA-146b-5p(miR-146b-5p)对小鼠骨片来源间充质干细胞(MSC)成脂分化能力的影响.方法:从C57BL/6小鼠骨片中分离培养MSC,应用q-PCR检测成脂诱导过程中miR-146b-5p表达量的变化.将miR-146b-5p mimic或inhibitor及其阴性对照转染细胞,应用q-PCR检测转染后细胞中miR-146b-5p的表达量及转染效率;并于转柒培养14 d后进行油红染色,应用q-PCR检测成脂分化因子C/EBPα和PPARγ的表达量,West-ern blot检测PPARγ的表达量.结果:成功分离出小鼠骨片来源的MSC,miR-146b-5p在成脂诱导过程中随诱导天数的增加呈现上升趋势.转染miR-146b-5p mimic可上调miR-146b-5p表达(P＜0.001),而转染miR-146b-5p in-hibitor可显著下调miR-146b-5p表达(P＜0.01).培养14 d后油红染色结果表明,转染miR-146b-5p inhibitor可以抑制成脂分化,而转染miR-146b-5p mimic可促进成脂分化.诱导14 d后,与对照组相比,mimic组高表达PPARγ、C/EBPα(P ＜0.01);与诱导组相比,inhibitor组低表达PPARγ、C/EBPcα(P＜0.05).mimic组PPARγ的表达量升高,而Inhibitor组则相反.结论:miR-146b-5p在小鼠MSC成脂肪分化过程中高表达,并可促进小鼠骨片来源的MSC向脂肪细胞分化.
关键词： miR-146b-5p 间充质干细胞 成脂分化 -
miR-99a-5p对人骨髓间充质干细胞分化能力的影响
目的:探讨microRNA-99a-5p (miR-99a-5p)对人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)分化能力的影响.方法:贴壁培养BM-MSC,用miR-99a-5p类似物或抑制物转染细胞,实时定量PCR检测转染效率.通过分化实验检测miR-99a-5p对BM-MSC成脂和成骨分化能力的影响.结果:与对照组相比,转染miR-99a-5p类似物能显著上调miR-99a-5p表达水平(P＜0.001),反之转染miR-99a-5p抑制物则下调其表达水平(P ＜0.001).在成骨分化实验中,茜素红染色后镜下观察显示:过表达miR-99a-5p能促进成骨分化,下调miR-99a-5p的表达则抑制其成骨分化.分光光度计半定量检测也得到相同的结果.在成脂分化试验中,转染miR-99a-5p类似物或抑制物对BM-MSC成脂分化无明显影响.结论:过表达miR-99a-5p可促进BM-MSC成骨分化,但对其成脂分化无明显影响.
关键词： 骨髓间充质干细胞 miR-99a-5p 成骨分化 成脂分化 -
mTOR信号调控PPARγ对再生障碍性贫血BM-MSC成脂分化的作用
目的:研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通过调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达对再生障碍性贫血(AA)患者骨髓间充质干细胞(BM-MSC)成脂分化的影响.方法:采用激光共聚焦、Western blot和油红O染色等,观察AA组和对照组BM-MSC中mTOR信号、PPARγ蛋白表达和体外诱导成脂分化能力;通过雷帕霉素体外干预,分析mTOR信号和PPARγ在AA患者BM-MSC体外诱导成脂分化中的作用.结果:随着成脂诱导时间的延长,2组脂肪细胞转化率和FABP4表达均增高,在同一时间点,在AA组均高于对照组(P＜0.01).2组BM-MSC的胞质及胞核均有p-mTOR和PPARγ的分布,而且AA组p-mTOR和PPARγ蛋白的荧光强度均显著高于对照组(P＜0.01).随诱导时间的延长,2组PPARγ表达均呈逐渐增高的趋势;在同一时间点,AA组PPARγ表达明显高于对照组(P＜0.01).雷帕霉素早、中和晚期干预组脂肪转化率和FABP4表达均较未干预组明显下降(P＜0.001).雷帕霉素早、中和晚期干预组的PPARγ蛋白和mRNA表达均较未干预组均明显下降(P ＜0.001).结论:mTOR信号可能通过调控PPARγ表达在AA患者BM-MSC体外成脂分化中发挥重要的作用.
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MicroRNA-3963促进小鼠间充质干细胞成脂分化
目的:探讨MicroRNA-3963调控小鼠骨实质来源间充质干细胞(MSC)的成脂分化能力.方法:从C57BL/6小鼠骨片中分离培养MSC,将miR-3963 mimic或inhibitor及其阴性对照分别转染MSC细胞,应用q-PCR检测转染后细胞中miR-3963的表达量及转染效率,并于转染后进行成脂诱导分化培养14 d后应用油红染色检测脂滴形成情况,应用q-PCR和Western blot方法从转录水平和蛋白水平检测成脂分化因子C/EBPα和PPARγ的表达.结果:q-PCR检测结果表明,转染miR-3963 mimic可显著上调miR-3963表达(P＜0.001),而转染miR-3963inhibitor可显著下调miR-3963表达(P＜0.001).油红染色结果表明,过表达的或敲减miR-3963表达的MSC进行成脂诱导分化培养14 d后,转染miR-3963 mimic可明显促进MSC的脂滴形成.q-PCR和Western blot检测结果显示,转染miR-3963 mimic可显著促进成脂基因C/EBPα和PPARγ的表达;而转染miR-3963 inhibitor则其成脂分化能力较对照组显著降低.结论:miR-3963可调控小鼠骨实质来源的MSC的成脂分化能力,且可促进小鼠MSC的成脂分化.
关键词： MicroRNA-3963 间充质干细胞 成脂分化 -
3T3-L1细胞与人骨髓间充质干细胞体外成脂及脂肪细胞功能的比较研究
目的:探讨3T3-L1细胞与人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外成脂及脂肪细胞功能的差异.方法:用密度梯度离心和贴壁培养的方法分离纯化人骨髓MSC,在倒置显微镜下观察细胞形态,体外向脂肪方向诱导分化,并通过油红O染色和吸光度值(OD值)检测其分化程度;qRT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂肪酸结合蛋白(FABP4)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα) mRNA表达水平;通过诱导的脂肪细胞与THP-1细胞共培养,加入1μg/ml的阿糖胞苷,在48 h测定其对肿瘤细胞的化疗抵抗作用.结果:通过油红O染色和测定吸光度值发现,3T3-L1细胞组脂质聚集量多于MSC组,且OD值大于MSC组(P＜0.05);qRT-PCR结果显示,3T3-L1来源的脂肪细胞的成脂基因PPARγ、FABP4和C/EBPα mRNA的相对表达量高于人骨髓MSC的脂肪细胞(P＜0.05);共培养实验结果表明,含脂肪细胞组THP-1细胞存活数较对照组多(P＜0.05),且3T3-L1细胞组与MSC组之间具有统计学差异(P＜0.05).结论:3T3-L1细胞的体外成脂能力比人骨髓MSC强;脂肪细胞具有促使THP-1细胞耐受化疗的作用,且在3T3-L1细胞组的作用大于人骨髓MSC组.
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再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞转化生长因子β1及Smad3表达下调的发病学意义
目的 研究骨髓间充质干细胞(MSC)中转化生长因子β1(TGF-β1)与Smad3的表达下调与再生障碍性贫血(再障)发生的可能关系.方法 取20例重型再障患者骨髓MSC,分离制备出Flk1+CD34-MSC后进行以下试验:①体外定向诱导MSC向脂肪细胞分化,倒置显微镜观察成脂分化情况,油红O染色法鉴定脂肪细胞,用实时荧光定量PCR检测分化过程中脂蛋白酯酶(LPL)基因的表达;②用蛋白质印迹法检测MSC中TGF-β1及Smad3的表达,用ELISA检测MSC分泌TGF-β1的能力;③观察不同剂量(0、5、10、15、20 ng/ml)TGF-β1对再障患者骨髓MSC成脂分化和增殖的影响.以7名健康成人的骨髓MSC相应检测为对照.结果 再障患者骨髓MSC经4 d培养后即分化为脂肪细胞,而健康成人骨髓MSC中仅见少量细胞出现脂肪滴.再障患者MSC培养4和8 d时LPL基因表达水平分别为0.091±0.028、0.142±0.033,均高于健康成人骨髓MSC(分别为0.021±0.011及0.049±0.010,均P＜0.01);而TGF-β1及Smad3表达水平明显低于健康成人骨髓MSC,TGF-β1分泌水平(3.4 μg/L±0.9 μg/L)也明显低于健康成人骨髓MSC(11.6 μg/L±1.2 μg/L,P＜0.01).在向脂肪细胞分化过程中,仅加入5 ng/ml的TGF-β1即可明显抑制再障患者骨髓MSC向脂肪细胞定向诱导分化,同时促进其增殖.结论 再障患者骨髓MSC中TGF-β1及Smad3表达水平的显著下调可能参与了再障的部分发病环节.
