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肾安提取液对糖尿病小鼠肾脏TGF-β1表达的影响
目的:探讨肾安提取液对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病小鼠肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法:STZ诱导的糖尿病小鼠模型,随机分为模型组、厄贝沙坦组(厄贝沙坦10mg·kg-1·d-1)、肾安低、中、高剂量组(肾安提取液2.272、4.544、9.088mg·kg-1·d-1),另设正常对照组,疗程4周.检测TGF-β1 mRNA(实时荧光定量PCR法)及蛋白(Western blot分析法)、纤连蛋白(FN)及Smad7蛋白(免疫化学法)表达;透射电镜观察超微结构;并检测血糖、24h尿蛋白定量、肾质量指数、肾小球硬化指数.结果:肾安各组及厄贝沙坦组TGF-β1 mRNA及蛋白表达较模型组明显降低(P＜0.01),肾脏FN及Smad7的表达较模型组明显减少(P＜0.05,P＜0.01);肾脏超微结构改善,肾小球基底膜增厚被明显抑制(P＜0.05,P＜0.01);24h尿蛋白定量、肾质量指数、肾小球硬化指数均较模型组明显改善(P＜0.01);肾安高剂量组及厄贝沙坦组间上述指标无统计学意义;模型组及各药物干预组间血糖差异无统计学意义.结论:肾安提取液可能通过抑制TGF-β1的表达,减轻ECM积聚;并抑制TGF-β1/Smad7信号转导,减少足细胞凋亡,从而对DM肾损害起保护作用.
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槲皮素对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1/Smads信号通路的影响
目的:研究槲皮素在高糖环境下对大鼠肾小球系膜细胞增殖槲皮素对照组及TGF-β1表达的影响.方法:将体外培养的大鼠系膜细胞分为正常组、高耱组、槲皮素对照组及槲皮素低、中、高剂量组6组,MTT法检测槲皮素对肾小球系膜细胞增殖的影响,Western-blot法检测肾小球系膜细胞TGF-β1、P-Smad2、FN的表达.结果:槲皮素能够显著抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1、P-Smad2、FN表达.结论:槲皮素可通过降低TGF-β1水平抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖,并通过抑制Smad2磷酸化部分影响TGF-β1/Smads信号通路的激活,降低FN的表达,对肾脏起到保护作用.
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糖耐康对转化生长因子-β1诱导的HK-2细胞分泌细胞外基质成分的影响
目的观察糖耐康对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)对细胞外基质成分表达的影响,探讨糖耐康治疗肾间质纤维化的作用机制。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养,并分为6组：空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL＋10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL＋5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL＋10%糖耐康药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL＋20%糖耐康药物血清)。药物干预24 h,荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的mRNA表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达显著上升,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。经糖耐康药物血清干预后,其表达逐步下降,与TGF-β1诱导组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。而空白血清无此作用。结论糖耐康在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用。
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止消通脉宁干预转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞表型转化的研究
目的 观察止消通脉宁药物血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)表型转化的影响,并探讨其机制.方法 将HK-2细胞用含10％胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养并分为空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β1 10 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β1 10 ng/mL+ 10％空白血清)、干预1组(TGF-β1 10 ng/mL+ 10％低剂量止消通脉宁药物血清)、干预2组(TGF-β1 10 ng/mL+ 10％中剂量止消通脉宁药物血清)、干预3组(TGF-β1 10 ng/mL+ 10％高剂量止消通脉宁药物血清).药物干预24 h后,免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达.在24、48、72 h应用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)和纤连蛋白(FN)的含量.结果 正常HK-2细胞表达E-cadherin,不表达α-SMA,经TGF-β1刺激后细胞表型发生转变,E-cadherin的表达明显减弱,α-SMA表达明显增强,且Col Ⅰ、ColⅢ和FN的分泌明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).止消通脉宁药物血清干预后α-SMA表达明显减弱,E-cadherin表达明显增强;同时抑制了Col Ⅰ、ColⅢ和FN的分泌,与TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 止消通脉宁在一定程度上能够抑制人肾小管上皮细胞表型转化,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用.
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肾康丸对糖尿病大鼠肾脏保护作用的实验研究
目的:观察肾康丸对糖尿病(DM)大鼠模型的肾功能及基质分泌的影响.方法:用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射法诱导建立大鼠DM模型,模型成功后随机分为3组:模型对照组、开搏通组、肾康丸组,另设正常对照组.治疗8周,观察治疗期间及治疗后大鼠一般状况、血糖、尿糖、24h尿蛋白、24h尿白蛋白、肌酐、尿素氮、肾重、相对肾重,并用RT-PCR法测定肾脏纤连蛋白(FN)mRNA的表达情况.结果:造模3组均出现DM及肾脏损害,同时肾脏FN mRNA的表达也明显增加.肾康丸可以改善大鼠基本状况、肾功能、降低血糖、尿总蛋白及白蛋白排泄,降低肾脏组织FN mRNA的表达.结论:肾康丸具有保护DM大鼠肾脏的作用.
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纤连蛋白(FN)治疗口腔溃疡
目的 观察纤连蛋白(FN)在口腔溃疡治疗中的效果.方法 将150例口腔溃疡患者,随机均分为给予纤连蛋白治疗的观察组和给予冰硼散治疗的对照组,观察临床效果.结果 观察组溃疡面积、充血面积缩小程度明显大于对照组(P＜0.05).观察组自发痛、烧灼痛及激惹痛缓解程度明显大于对照组(P＜0.05).结论 纤连蛋白治疗口腔溃疡疗效显著,可以快速促进溃疡面愈合,而且非常安全,无副作用,值得在临床工作中推广.
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纤连蛋白(FN)国内研究开发及临床应用新进展
纤连蛋白(FN)的研究与应用越来越广泛,其创伤修复分子机制的研究也愈加深入；不仅深入到新兴生物医学领域,如肿瘤、创伤愈合、抑菌及组织工程材料等,也开始应用于美容护肤.本文就纤连蛋白(FN)国内学术研究、产业开发及临床应用的新进展进行简要综述.
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硫酸皮肤素在小鼠脑外伤后的经时表达
目的 探讨硫酸皮肤素(DS)在小鼠脑外伤后的经时表达及其与纤维性瘢痕产生的相关性. 方法 选用10周龄小鼠制备黑质纹状体通路损伤模型,术后1、4、7、14d取脑行冷冻切片.应用GD3A12和LKN1抗体特异性识别硫酸软骨素的一个亚型——DS的表达,同时应用纤连蛋白(FN)抗体探讨纤维性瘢痕的产生过程,应用免疫荧光法探讨两者的相关性. 结果 在正常成年小鼠大脑中,GD3A12和LKN1免疫反应只出现在脑膜及脑表面的血管.在伤后4d的鼠脑,损伤周边的某些细胞中发现DS的表达,其后在损伤部位的纤维性瘢痕中DS表达增加.双重免疫荧光显示,DS与FN共同定位于脑膜细胞迁移而形成的纤维性瘢痕.虽然纤维性瘢痕也有巨噬细胞和反应性星形胶质细胞紧密包绕,但DS未表达在巨噬细胞和星形胶质细胞. 结论 在脑损伤后,DS的定位只限于纤维性瘢痕的纤连蛋白阳性细胞,由此推论DS可能在纤维性瘢痕形成中起着一定的作用.
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IgA肾病患者血清IgA1对人肾小球系膜细胞转化生长因子β1/Smads信号通路的影响
目的 研究IgA肾病(IgAN)患者血清IgA1对人肾小球系膜细胞(HMC)转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸化Smad3(p-Smad3)和纤连蛋白(FN)的刺激作用,探讨IgA1对TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法 体外培养HMC,分5组.即健康对照组、健康人IgA1(NIgA1)刺激组、健康人聚合IgA1(aNIgA1)刺激组、IgAN患者IgA1(PIgA1)刺激组和IgAN患者聚合IgA1(aPIgA1)刺激组.RT-PCR检测各组细胞TGF-β1、p-Smad3和FNmRNA的表达.Western免疫印迹检测HMC p-Smad3蛋白水平.ELISA检测HMC培养上清液中TGF-β1、FN蛋白水平.结果 PIgA1和aPIgA1能显著上调TGF-β1,P-Smad3、FN mRNA和蛋白的表达(P<0.05).aPIgA1上调三者mRNA表达的能力分别为PIgA1的1.5倍、1.3倍和1.5倍(均P<0.05).aPIgA1上调TGF-β1和p-Smad3蛋白表达的能力分别为PIgA1的2.1倍和1.6倍(均P<0.01).在aPIgA1刺激不同时间,TGF-β1和p-Smad3 mRNA表达于12 h达高峰(0.866±0.055和0.891±0.251),于24h回到基线水平.FNmRNA表达于24 h达高峰(0.968±0.031).TGF-β1和p-Smad3蛋白表达逐渐升高,TGF-β1于12 h达高峰[(246.960±1.270)ng/L],p-Smad3于6 h达高峰(0.490±0.046)后开始下降.FN蛋白表达逐渐升高,24 h达高峰[(1.804±0.038)mg/L](均P<0.01).结论 PIgA1和aPIgA1能显著上调HMC TGF-β1、p-smad3、和FNmRNA表达和蛋白水平.且aPIgA1的作用强于PIgA1,提示IgAN患者血清的IgA1,主要是aIgA1可通过TGF-β1/Smads信号通路在IgAN进展中起作用.
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成人慢性髓性白血病细胞β1整合素功能障碍的研究
为了探讨Ph(+)慢性髓性白血病(CML)骨髓细胞是否存在β1整合素活化障碍,我们以10例正常及12例CML骨髓单个核细胞(NBMMNC及CMLBMMNC)为研究对象,用β1整合素活化抗体8A2和粒巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)作活化剂,用流式细胞术测定上述细胞与可溶性纤连蛋白(FN)的结合能力及其β1整合素跨膜区9EG7表位的表达,并观察了ABL激酶抑制剂CGP57148B预处理对上述细胞β1整合素活化的影响.实验结果表明:CMLBMMNC之9EG7表达率及FN结合率与NBMMNC组相比均无显著差别(P＞0.05);8A2对CMLBMMNC 9EG7表达率及FN结合率的增加作用显著低于对NBMMNC的作用(P＜0.05);GM-CSF及G-CSF均可显著增加NBMMNC的9EG7表达率及FN结合率,而不增加CMLBMMNC的上述指标;0.1μmol/LCGP57148B预处理30分钟可明显增加CMLBMMNC β1整合素的活化潜能(可活化性),而对NBMMNC无显著影响.本实验结果提示:Ph(+)CML细胞存在β1整合素活化障碍是其与FN粘附功能缺陷的主要发生机制;ABL激酶抑制剂CGP57148B对β1整合素无直接活化作用,但可增强活化剂的作用.
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干细胞因子促进造血细胞与纤连蛋白的粘附
造血细胞粘附与细胞外基质在造血细胞的存活、增殖、分化及归巢中起重要作用.本研究以细胞因子依赖细胞系Mo7e细胞为靶细胞,观察了干细胞因子(SCF)对造血细胞粘附于纤连蛋白的促进作用.结果表明,Mo7e细胞表达β1,α4和α5整合素及SCF受体c-kit,SCF可明显刺激Mo7e细胞粘附于纤连蛋白并具有量效关系,PI-3激酶通路抑制剂,抗β1,α4和α5整合素抗体可阻断该作用.结论提示,SCF对造血细胞粘附于纤连蛋白的促进作用是通过整合素介导的,并与PI-3激酶通路有关.
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p38 MAPK信号通路与醛糖还原酶对转化生长因子β1诱导人系膜细胞纤连蛋白表达的影响
目的 探讨p38 MAPK信号通路与醛糖还原酶(AR)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人系膜细胞(HMC)细胞外基质成分纤连蛋白(FN)表达的影响.方法 应用醛糖还原酶抑制剂和p38 MAPK信号通路抑制剂、转染及RNA干扰技术分别作用于HMC后,再用TGF-β1刺激,观察刺激前后HMC表达FN的情况.Western blot和免疫荧光检测HMC的FN、AR、p38的变化及real-time聚合酶链反应(PCR)鉴定转染和RNA干扰效果.结果 HMC在TGF-β1作用后,AR和FN蛋白表达升高;单独使用醛糖还原酶抑制剂Sorbinil、Zopolrestat并不能下调FN蛋白的表达;但预先使用Sorbinil或Zopolrestat孵育后,再用TGF-β1刺激,FN蛋白表达下降(P＜0.05);单独使用p38 MAPK信号通路抑制剂后,FN蛋白表达下降;各组细胞预先使用Sorbinil、Zopolrestat、SB203580孵育后,再用TGF-β1刺激,FN蛋白表达下降(P＜0.05);转染pCDNA3-AR后,HMC中AR mRNA及FN蛋白表达增多,再用TGF-β1刺激,FN蛋白表达明显上调(P＜0.05);用AR-siRNA干扰AR基因后,HMC中AR mRNA及FN蛋白表达减少,即使用TGF-β1刺激,FN蛋白表达仍然下降(P＜0.05).结论 AR基因作为TGF-β1反应性基因,参与了HMC中TGF-β1诱导的FN表达的调控,p38 MAPK信号通路在这一过程中起着重要作用.
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PKC信号通路与醛糖还原酶对转化生长因子β1诱导人肾系膜细胞纤连蛋白表达的影响
目的 探讨PKC信号通路与醛糖还原酶在非高糖条件下对转化生长因子(TGF)-β1诱导人肾系膜细胞(HMC)细胞外基质成分纤连蛋白表达的影响.方法 应用醛糖还原酶抑制剂、PKC信号通路抑制剂G(O)6983、转染pcDNA3-醛糖还原酶及siRNA分别作用于人系膜细胞后,再用TGF-β1刺激,观察刺激前后人系膜细胞表达纤连蛋白的情况.Western blot检测系膜细胞内纤连蛋白和醛糖还原酶的变化,即时RT-PCR鉴定转染和干扰效果.结果 系膜细胞在TGF-β1作用后,醛糖还原酶和纤连蛋白表达升高;单独使用醛糖还原酶抑制剂并不能下调纤连蛋白的表达;但预先使用醛糖还原酶抑制剂孵育后,再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达减少为对照组的34%(P<0.05).单独使用PKC信号通路抑制剂并不能下调纤连蛋白的表达;用PKC信号通路抑制剂后,再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达下降为对照组的42%(P<0.05).预先使用醛糖还原酶抑制剂、PKC抑制剂孵育细胞后,再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达下降;转染pcDNA3-醛糖还原酶后,系膜细胞中醛糖还原酶mRNA表达增多超过10倍,纤连蛋白表达增加了2.5倍(P<0.05),再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达增加了3.6倍(P<0.05);转染siRNA后,系膜细胞中醛糖还原酶mRNA表达减少为对照组的20%,纤连蛋白表达减少为对照组的6%(P<0.01),即使再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达仍然下降,为对照组的12%(P<0.01).结论 醛糖还原酶基因参与了系膜细胞中TGF-β1诱导纤连蛋白表达过程的调控,这一过程可能与PKC信号通路的活化有关.
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普通骨肉瘤中CD44、纤连蛋白的表达及意义
CD44是一类特殊的黏附分子,能参与细胞与细胞之间以及细胞与细胞外基质之间的相互作用.纤连蛋白(fibronectin,FN)是细胞外基质的重要组分,参与细胞分化、迁移以及肿瘤浸润等过程.本文将探讨普通骨肉瘤中标准型CD44(CD44s)和FN的表达及意义.
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活性氧及转化生长因子-β1在进行性被动Heymann肾炎发病中的作用
通过建立进行性被动Heymann肾炎(ppHN)模型,用牛磺酸进行抗氧化干预,通过对肾小球中转化生长因子-β1(TGF-β1)及Ⅳ型胶原和纤连蛋白(FN)的表达和血清过氧化物歧化酶(SOD)及MDA水平的检测,探讨活性氧与TGF-β1在ppHN发生发展中的作用.
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整合素β1及纤连蛋白、层粘连蛋白对胶质瘤细胞浸润性的影响
目的 探讨整合素β1和纤连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)对人胶质瘤浸润性的影响和作用机制.方法 以U251人胶质母细胞瘤(U251MG)细胞为研究对象,通过细胞黏附实验、迁移实验和体外侵袭实验,检测整合素β1及LN、FN对人恶性胶质瘤细胞黏附、迁移和转移能力的影响.通过荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜观察和扫描电镜方法,观察细胞微丝数量、分布和细胞表面伪足情况,比较整合素β1及FN、LN对微丝骨架的影响.结果 (1)FN对U251MG细胞黏附能力无明显影响,但抗整合素β1抗体可减少U251MG细胞的黏附数量(P＜0.01);LN增加U251MG细胞黏附能力(P＜0.01),抗整合素β1抗体对此作用影响较小.(2)抗整合素β1抗体减弱U251MG细胞在FN的运动、迁移能力(P＜0.05).(3)U251MG细胞内可见清晰的微丝结构,FN、LN使细胞内纤维型肌动蛋白(F-actin)形成束状纤维,粗壮而密集;抗整合素β1抗体处理的细胞内,难以见到清晰的细胞微丝骨架,并常见大量絮团状的F-actin.(4)扫描电镜观察显示,FN、LN使细胞表面的伪足数量明显增加,而抗整合素β1抗体使细胞伪足数量明显减少,甚至消失.(5)FN和抗整合素β1抗体对U251MG细胞的体外侵袭能力无明显影响;LN可促进U251MG细胞的体外侵袭能力,抗整合素β1抗体可抑制这种作用(P＜0.01).结论 (1)U251MG细胞通过整合素β1和FN相互作用,改变细胞微丝骨架、伪足结构和数量而促进U251MG细胞的运动、迁移能力.(2)整合素β1参与了LN介导的U251MG细胞体外侵袭作用.
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压力负荷下血管紧张素Ⅱ对心肌基质金属蛋白酶和纤连蛋白的影响
目的探讨压力负荷下心肌组织基质金属蛋白酶家族(MMPs)MMP-2、3、9与其抑制物-1(TIMP-1)的变化,及血管紧张素受体拮抗剂对MMP-2、3、9、TIMP-1及细胞外基质纤连蛋白(fibronectin,FN)的影响.方法腹主动脉缩窄法建立大鼠超压力负荷模型,实验动物分为手术组(n=8);缬沙坦(valsartan)组(n=8):手术组+缬沙坦(1 mg/kg·d);PD123319组(n=8):手术+PD123319(30 mg/kg·d)组;假手术组(n=8).免疫沉淀法检测心肌组织MMP-2、3、9及TIMP-1,免疫荧光检测FN分布.结果大鼠术后14 d,缬沙坦组血浆AngⅡ浓度显著高于假手术组及PD123319组(P＜0.05),缬沙坦组心肌AngⅡ浓度则低于假手术组及PD123319组(P＜0.05).手术组MMP-2、3、9蛋白表达显著高于假手术组(P＜0.01),手术组TIMP-1、FN蛋白表达显著低于假手术组(P＜0.01);缬沙坦组MMP-2、3、9显著低于手术组及PD123319组(P＜0.05),缬沙坦组TIMP-1、FN显著高于手术组及PD123319组(P＜0.05).MMP-2、3、9、TIMP-1及FN蛋白表达在手术组与PD123319组间差异没有显著性(P＞0.05).结论超压力负荷下,心肌组织MMP-2、3、9表达量的增高,细胞外基质FN,参与心肌重构的病理过程,主要通过AT1起作用.
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利用CRISPR /CAS9基因敲除技术研究FBLN7对小鼠心脏发育过程的影响
目的 研究纤连蛋白7(fibulin7,fbln7)在小鼠心脏发育中的作用机制.方法 使用crispr/cas9基因敲除技术构建fbln7系统敲除小鼠,通过HE染色对E14.5天的敲除小鼠与野生小鼠进行形态学分析,监测出生后存活状况,并采用qPCR检测敲除小鼠与野生小鼠若干目的基因的表达差异.结果 fbln7敲除小鼠未表现出心脏发育及个体发育的异常表型,后代的出生率及生存曲线无异常并且fbln家族其他基因表达水平也没有显著变化.结论 fbln7对于小鼠心脏发育的作用可能是冗余的或者有其他基因能够替代其在发育过程中的作用.
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氯沙坦对转化生长因子β受体在糖尿病鼠血管平滑肌细胞表达的影响
转化生长因子β(TGF-β)不仅促进细胞增殖、肥大,更重要的是促进细胞外基质(ECM)的积聚和成分改变,这些是糖尿病血管病变的主要病理特征.TGF-β的作用由特异性受体(TβR) 介导[1].有研究证实,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体AT1拮抗剂氯沙坦可使糖尿病鼠微血管基膜增厚减轻、间质胶原减少,对其确切的作用机制报道很少[2].为此,我们用糖尿病鼠模型观察了氯沙坦对TβR和纤连蛋白(FN)mRNA表达的影响,以探讨其防治糖尿病血管病变的作用机理.
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肝素对糖尿病大鼠肾小球转化生长因子β1及胞外基质表达的影响
糖尿病性肾小球硬化的实质是肾小球细胞外基质(ECM)的过度聚积.转化生长因子β(TGF-β)对ECM代谢起着重要的调节作用.有研究表明,肝素能抑制ECM的生成[1].为此我们运用免疫组化方法观察了糖尿病大鼠肾小球两种ECM成分,层粘蛋白(LN)、纤连蛋白(FN)的表达与TGF-β1的关系,以及肝素对其表达的调控,以进一步了解糖尿病肾病的发生机制及肝素是否对糖尿病肾病具有一定的防治作用.
