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稀土氧化钕粉尘染毒大鼠不同时间点Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量及IL-12表达的研究
目的 探讨稀土氧化钕粉尘暴露对大鼠不同时间点肺组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素-12(IL-12)表达的变化.方法 选用125只SPF级成年SD雄性大鼠,体重(200±16)g,随机分为染尘组和对照组,采用气管非暴露插管灌注法建立模型,分别用稀土氧化钕粉尘悬液0.8 mL(50 mg/mL)和0.9％生理盐水0.8mL进行一次性染尘.分别于染尘后第3、7、14、21和28 d各处死15只染尘组和10只对照组大鼠,收集BALF;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别测定染尘组和对照组大鼠BALF上清液中IL-12含量,肺组织分别进行HE染色、天狼猩红染色,运用Image-Pro Plus Version 4.5for Windows TM图象分析系统对肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量进行定量分析.结果 稀土氧化钕粉尘致实验大鼠肺组织纤维化过程中可见Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的大量增生,染尘后早期主要以Ⅰ型胶原纤维增生为主.其中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的表达量明显增加,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).肺组织病理学观察证实,染尘大鼠早期肺组织以炎症反应为主,且随染尘时间的延长炎症反应程度呈现加重的趋势.染尘后不同时间点大鼠BALF上清液中IL-12出现先减少后增加,在第7d达到低值后又呈现增加趋势,但均高于对照组(P＜0.05).结论 稀土氧化钕粉尘诱导大鼠肺纤维化过程中Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量增多,且分布范围扩大.同时BALF上清液中IL-12出现高表达,表明IL-12的含量变化与稀土氧化钕粉尘致大鼠肺纤维化发生发展密切相关.
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真皮支架在烧伤创面修复中的影响研究
目的:探讨负载血管内皮生长因子(VEGF)DNA质粒对胶原-磺化羧甲基壳聚糖真皮支架在修复III度烧伤创面中支架血管化及瘢痕形成的影响,并明确与无支架植入的烧伤创面修复的区别.方法:将负载及不负载VEGF DNA质粒的两种不同胶原-磺化羧甲基壳聚糖真皮支架各移植于6头猪(共12头猪,分别为B和A组)III度烧伤清创后创面,对植入支架1、2、3周后的创面及植入支架1、2、3周创面加植表皮后2周的创面修复(4周)进行观察.同时,通过采用免疫组织化学方法,对不同时间的创面中表达I型胶原和TGF-β1细胞数进行检测和观察.实验以不植入支架的烧伤创面作为对照(C组).结果:①负载VEGF DNA质粒的胶原-磺化羧甲基壳聚糖真皮支架植入后支架(B组)血管化比胶原-磺化羧甲基壳聚糖真皮支架(A组)要好.②I型胶原表达结果:A、B、C三组I型胶原合成1-3周逐渐增多,4周时A、B组减少,C组增多；1-2周B组多,C组少；3周A、B组无显著性差异,C组较少.4周C组多,B组少.③TGF-β1表达结果:A、B两组1-2周逐渐增多,至3-4周逐渐下降；C组TGF-β1表达1-3周持续上升,4周时表达减少；1-2周,表达B组多,C组少；3-4周,C组表达多,B组少.结论:外源性pDNA-VEGF导人人工真皮支架可促进人工真皮更快地血管化的同时,可更好地修复创面和抑制瘢痕增生.
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体外培养HSC作为筛选抗纤药物细胞模型的初步研究
目的:对比观察胆管阻塞性大鼠肝纤维化模型和肝星状细胞Ⅰ型胶原(Co1-I)和金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPl)mRNA表达的改变以及复方861的作用,探讨建立体外培养HSC作为筛选抗纤药物细胞模型的可能性.方法:给雌性Wistar在鼠胆管内逆行性注入硬化剂加胆管结扎,制备胆管阻塞性肝纤维化模型.于术后7天给予复方861灌胃(3g/kg),共49天.以含0.25mg/ml复方861的培养液,培养大鼠肝星状细胞系HSC-T6细胞48h.以RT-PCR法观察大鼠肝组织和HSC-T6细胞Col-I和TIMP1 mRNA表达水平及复方861的影响.结果:胆管阻塞性肝纤维化模型组大鼠肝组织Col-I和TIMPl分别为0.616±0.100、1.691±0.646,明显高于假手术组(分别为0.144±0.071和0.720±0.301,P＜0.05);复方861组Col-I和TIMPI mRNA较模型对照组分别下降61%和49%(P＜0.05).HSC-T6细胞Col-I和TIMP mRNA分别为0.579±0.056、2.0292±0.671,以复方861培养48h后Col-I和TIMPl mRNA分别下降78%和50%(P＜0.05).结论:复方861可抑制胆管阻塞肝纤维化模型和肝星状细胞Col-I和TIMPl mRNA表达,体内外结果具有良好的一致性,提示体外培养HSC可作为筛选抗纤药物的细胞模型.
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瑰及乳膏祛腐生肌作用机理的实验研究
目的 用现代医学方法 探讨瑰及乳膏祛腐生肌作用的机理.方法 以90只大鼠皮肤全层缺损创面为模型,采用免疫组化与图像分析相结合的方法 ,观察瑰及乳膏对创面修复不同时期肉芽组织中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和Ⅰ型胶原变化的影响.结果 瑰及乳膏在治疗的第3、7天可提高创面MMP-1、MMP-3,促进创面Ⅰ型胶原分泌.结论 瑰及乳膏祛腐生肌作用机理是在创面愈合的过程中,通过抑制MMP-1的分泌,从而使创面Ⅰ型胶原的分泌增加,起到促进创面愈合的作用.
关键词： 祛腐生肌 "瑰及"润肤防裂乳膏 基质金属蛋白酶 Ⅰ型胶原 -
雄芍汤含药血清对人肝星状细胞增殖和活化的影响
目的:观察雄芍汤对肝星状细胞增殖和活化的影响.方法:实验设4组:空白组、空白血清组、扶王化瘀胶囊血清组、雄芍汤血清组.采用MTT比色法测定雄芍汤含药血清对体外培养的人肝星状细胞LX-2增殖的影响；免疫组织化学染色法检测LX-2中α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的含量.结果:20％和10％扶正组和雄芍组对LX-2抑制率均高于相应浓度的空白血清组(P＜0.01),5％扶正组、雄芍组和空白血清组差异不显著；雄芍各个浓度组对LX-2抑制率显著高于相应浓度的扶正组(P＜0.05或P＜0.01).雄芍各组中,20％组和10％组对LX-2的抑制率差异不显著,但均显著高于5％组(P＜0.01).雄芍组和扶正组LX-2中α-SMA的含量显著低于空白血清组(P＜0.01),扶正组α-SMA含量显著低于雄芍组(P＜0.05).雄芍血清组和扶正血清组LX-2中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原含量显著低于空白血清组(P＜0.01),雄芍血清组和扶正血清组Ⅰ型胶原差别不显著,扶正血清组Ⅲ型胶原含量显著低于雄芍血清组(P＜0.05).结论:雄芍汤能够抑制HSC的增殖和活化以及HSC中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的分泌.
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新血府逐瘀汤影响高血压大鼠心肌纤维化的机制研究
目的 通过观察新血府逐瘀汤对高血压大鼠内皮功能及心肌Ⅰ型、Ⅲ型胶原的影响,阐明活血化瘀中药干预高血压大鼠心肌纤维化的一种内在机制.方法 建立腹主动脉缩窄致肾性高血压大鼠模型成功后,将40只大鼠分为五组,其中中药组、卡托普利组应用药物干预,模型组、假手术组、空白组不干预.10周后大鼠称重,腹主动脉抽血,测量左心室重量指数(LVWI)、血管性血友病因子(vWF)、内皮素(ET)、D-二聚体(D-D),免疫组织化学染色观察心肌Ⅲ型胶原和Ⅰ型胶原心肌组织胶原容积分数(CVF)、心肌血管周围胶原面积(PVCA)的改变.结果 用药10周后,中药组大鼠血浆vWF、ET、D-D、血压以及LVMI与模型组比较,均明显下降(P＜0.05或P＜0.01).卡托普利组和中药组的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原CVF和PVCA较模型组下降(P＜0.05).结论 新血府逐瘀汤可改善高血压大鼠血管内皮功能及高血压血栓前状态,减少心肌Ⅰ型、Ⅲ型胶原的形成,这可能是其防止高血压大鼠心肌纤维化的内在机制之一.
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肛愈宁软膏对肛门病术后模型创面Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响
目的：观察肛愈宁软膏对肛门病术后模型创面肉芽组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响。方法54只 Wistar 大鼠，随机分为创面对照组、模型组和肛愈宁组。制备肛门病术后创面的大鼠模型，肛愈宁组给予肛愈宁软膏纱布外敷，创面对照组、模型组给予生理盐水纱布外敷。分别于造模后第4天和第11天分批处死大鼠，采用免疫组织化学技术观察各组创面中Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量的变化。结果在造模后第4天，肛愈宁组创面Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的含量明显高于模型组（ P <0.05）。在造模后第11天，肛愈宁组创面Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达含量与Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达量之比，均明显高于模型组（P <0.05）。结论肛愈宁软膏通过促进肛门病术后模型创面中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的增殖，且增加Ⅲ型胶原的比例，起到促进创面愈合、减少瘢痕形成的作用。
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平纤宁肺颗粒剂对肺纤维化大鼠肺组织中转化生长因子β1和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响
目的:观察平纤宁肺颗粒剂对盐酸博莱霉素所致大鼠肺纤维化的保护作用.方法:60只SD大鼠,雄性,按体质量随机分为正常对照组、模型组、平纤宁肺颗粒剂高剂量组、低剂量组,每组15只.盐酸博莱霉素气管内注射诱发肺纤维化,造模后给药,分别在给药7、14、28 d每组处死5只,取肺脏做组织病理学检测,同时免疫组化法检测肺组织内转化生长因子β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原.结果:模型组大鼠肺组织出现明显的炎细胞浸润,纤维结缔组织增生,平纤宁肺颗粒剂高、低剂量组大鼠在第14、28天的病理变化均较同期模型组减轻.模型组大鼠肺组织TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原表达在第7、14、28天均明显高于同期正常对照组,与正常对照组比较有统计学意义(P<0.01).平纤宁肺颗粒剂高、低剂量组TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶表达与同期模型组比较明显降低,有统计学意义(P<0.05,0.01).结论:平纤宁肺颗粒剂可以有效减轻肺纤维化,抑制肺组织中TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达.
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夏枯草硫酸多糖对CCl4致大鼠肝纤维化及TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞活化的影响
目的:观察夏枯草硫酸多糖(PSSP)对四氯化碳(CCl4)所致的大鼠肝纤维化及转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导活化大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6)的影响,从而初步探讨PSSP抗纤维化的机制.方法:采用CCl4-橄榄油溶液腹腔注射诱导大鼠肝纤维化造模,随机分为5组,分别为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.25 mg·kg-1),PSSP高剂量组(300 mg· kg-1)和PSSP低剂量组(100 mg· kg-1).分别测定各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),层粘连蛋白(LN),透明质酸(HA),Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ胶原(C-Ⅳ)的含量;采用苏木素-伊红(HE)及天狼猩红染色观察大鼠肝组织病理学改变;体外培养HSC-T6细胞;采用细胞增殖与活性法(CCK-8)测定PSSP对TGF-β1诱导的HSC-T6细胞增殖的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HSC-T6细胞中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA和蛋白的表达.结果:与模型组比较,PSSP可明显降低大鼠ALT,AST,HA,LN,PC-Ⅲ和C-Ⅳ的含量,并减轻大鼠肝纤维化程度(P＜0.01);PSSP可抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞的增殖,减少HSC-T6细胞Col-Ⅰ,α-SMA mRNA和蛋白的相对表达量(P＜0.01).结论:PSSP具有很好的抗纤维化作用,其机制可能与抑制肝星状细胞活化及抑制胶原合成与沉积,减少细胞外基质(ECM)的生成并促进其降解有关.
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抗纤灵方对5/6肾切除小鼠肾组织纤维化作用机制研究
目的:研究抗纤灵方对5/6肾切除小鼠肾纤维化的作用及机制研究.方法:将60只C57小鼠,随机分为假手术组10只和手术组50只,手术组行5/6肾切除术.术后2周,手术组随机分为模型组、抗纤灵低、中、高剂量组(0.1,0.2,0.4 mg·kg-1)及雷帕霉素组(0.16 μg·kg-1),各组10只.各组于术后2周分别给予0.5 mL生理盐水、雷帕霉素及抗纤灵煎剂灌胃.治疗8周后处死小鼠,在处死小鼠前1d收集24 h小便测24 h尿蛋白(UPRO)定量,眼眶采血测血肌酐(SCr),尿素氮(BUN);取残肾应用免疫荧光法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;系用Western blot法检测肾组织Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白表达.结果:与假手术组比较,模型组24 h UPRO定量,SCr,BUN,α-SMA,Ⅰ型及Ⅲ型胶原表达显著升高(P＜0.01);与模型组比较,各治疗组24 h UPRO定量,SCr,BUN,α-SMA,Ⅰ型及Ⅲ型胶原表达均有所下降(P＜0.05).结论:抗纤灵方能降低小鼠24 h UPRO定量,改善肾功能,延缓肾纤维化发生,其机制可能与下调α-SMA表达,抑制肾脏Ⅰ型及Ⅲ型胶原表达相关.
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二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病细支气管壁细胞外基质重塑的影响
目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠细支气管结构重塑的作用及其机制.方法:50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、二陈汤加味低、中、高剂量组(5,10,20 g·kg-1),共5组,每组10只.以香烟烟熏加内毒素脂多糖(LPS)制备大鼠COPD模型.造模成功后,各观察组灌胃给药,检测肺功能,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织中基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinases,MMP-1),MMP-9及金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissueinhibitor of metalloproteinase,TIMP-1) mRNA表达,免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测MMP-1,MMP-9,TIMP-1以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原在细支气管中的表达.结果:与正常组比较,模型组肺组织匀浆MMP-1,MMP-9,TIMP-1 mRNA表达均显著增强(P＜0.01),细支气管壁MMP-1,MMP-9,TIMP-1,Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白的表达均显著增强(P＜0.05).与模型组比较,中、高剂量组肺组织匀浆MMP-1,MMP-9,TIMP-1 mRNA表达显著减弱(P＜0.01),细支气管壁中、高剂量组Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达明显减弱(P＜0.05).结论:二陈汤加味对细支气管管壁细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中的胶原有抑制作用.其机制可能与抑制MMP-1,MMP-9,并协调性抑制TIMP-1的表达,阻止细支气管ECM胶原的沉积有关.
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丹酚酸B,C分子药对配伍对UUO大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制
目的:研究丹酚酸B,C分子药对配伍对单侧输尿管梗阻(UUO)所致的肾间质纤维化大鼠的保护作用和机制.方法:采用50只健康雄性SD大鼠随机分为5组,即正常组、模型组、丹酚酸B组(12.5 mg·kg-1)、丹酚酸C组(12.5 mg·kg-1)、丹酚酸B,C按1:1配伍组(简称:丹酚酸B+C组,其中B和C各6.25 mg· kg-).除正常组外,其余大鼠均造成UUO模型.造模后第2天各组开始ig给予相应药物治疗14 d.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测尿β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG),N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG)的含量,免疫组化法检测肾组织内Ⅰ型胶原(Col Ⅰ),Ⅲ型胶原(ColⅢ),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果:①各组大鼠肾小管功能测定结果,与正常组比较,模型组尿β2-MG,NAG蛋白水平显著升高(P＜0.05);与模型组比较,各治疗组尿β2-MG,NAG水平显著降低(P＜0.05).②免疫组化检测结果,与正常组比较,模型组Col Ⅰ,ColⅢ,α-SMA平均吸光度A显著升高(P＜0.05);与模型组比较,丹酚酸B,B+C组Col Ⅰ,ColⅢ及各治疗组α-SMA平均吸光度A显著降低(P＜0.05);各治疗组比较,丹酚酸B,B+C组Col Ⅰ的A显著低于丹酚酸C组(P＜0.05),丹酚酸B+C组ColⅢ,α-SMA A显著低于丹酚酸C组(P＜0.05).结论:丹酚酸B,C分子药对配伍对肾间质纤维化大鼠肾脏具有保护作用,可一定程度的改善肾小管功能,降低尿β2-MG,NAG,并在一定程度上减少Col Ⅰ,ColⅢ和α-SMA的表达,从而延缓慢性肾脏病的进展.
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壮骨伸筋胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗及其作用机制
目的:研究壮骨伸筋胶囊(Zhuanggu Shenjin capsule,ZGSJC)对去卵巢骨质疏松大鼠的治疗作用,探讨ZGSJC治疗绝经后骨质疏松的机制.方法:将去卵巢大鼠随即分为模型组,阳性药结合雌激素组,ZGSJC高、中、低剂量组(生药5.42,2.71,1.36 g·kg-1),另设假手术组,每组12只.实验结束,取右侧胫骨制作不脱钙骨切片,用于骨形态计量学考察;左侧胫骨提取蛋白后用蛋白免疫印迹法测定Ⅰ型胶原蛋白表达.结果:与假手术比,模型组大鼠骨小梁体积百分率(TBV)显著降低(P＜0.01),骨小梁吸收表面百分率(TRS),骨小梁形成表面百分率(TFS),骨小梁矿化率(MAR),类骨质平均宽度(OSw),骨皮质矿化率(mAR)显著增高(P＜0.01),Ⅰ型胶原蛋白表达显著降低(P＜0.01);与模型组比,ZGSJC能够显著抑制TBV％的降低(P＜0.01),抑制TRS,TFS,MAR,mAR的升高(P＜0.01,P＜0.05),提高Ⅰ型胶原蛋白表达(P＜0.01),对OSW则无明显作用.结论:壮骨伸筋胶囊对卵巢切除所致大鼠骨质疏松具有一定的治疗作用,具体体现在调节去卵巢所致的骨代谢高转换状态,能提高Ⅰ型胶原蛋白表达含量.
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左、右归丸对大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化中TGF-β1mRNA的影响
目的:研究左、右归丸含药血清对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用.方法:将28只大鼠随机分为4组,分别以左归丸(ZGW)、右归丸(YGW)、阳性对照药戊酸雌二醇片(estradiol valerate tablets,EVT)和蒸馏水给大鼠灌胃,各组灌胃剂量分别为18.9,20.52 g·kg-1,0.36 mg· kg-,1.0 mL·kg-1,日2次,于第4天给药2h后,腹主动脉取血,离心,56℃水浴灭活30 min后,大鼠含药血清制备完成.再配制10％各组含药血清的α-MEM分别加入诱导剂(YDJ)(10-7mol· L-1地塞米松、50μmol· L-维生素C、10 mmol·L-1β-甘油磷酸钠)与单纯诱导剂组共5组对BMSCs(1×105/L)进行干预9d,用Westernblot法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅰ型胶原(type Ⅰ collagen,COL Ⅰ)蛋白表达,用RT-PCR法检测转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-1)mRNA表达.结果:Control组比较:ZGW+ YDJ组、YGW+ YDJ组、EVT+ YDJ组均可促进BMSCs的ALP,COLⅠ蛋白的表达,上调BMSCs TGF-β1 mRNA表达(P＜0.05)；与YDJ组比较:ZGW+ YDJ组、YGW+ YDJ组可促进BMSCs的ALP,COL Ⅰ蛋白的表达,上调BMSCs TGF-β1mRNA表达(P＜0.05)；且ZGW+ YDJ组优于YGW+ YDJ组(P＜0.05).结论:左、右归丸含药血清能协同诱导剂促进BMSCs成骨分化,且左归丸组更为有效,表明中医“滋肾阴”对BMSCs的成骨诱导更为有效.
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柴黄益肾颗粒对糖尿病肾病大鼠肝损伤保护作用的实验研究
目的:探讨柴黄益肾颗粒对实验性糖尿病肾病大鼠肝损伤的保护作用.方法:健康雄性Wistar大鼠112只,顺应性喂养3d后,随机分为假手术对照组12只,单侧肾切除组100只,造模成功后随机分为:模型组、柴黄益肾大、中、小剂量组、蒙诺组.观察柴黄益肾颗粒对大鼠肝重指数、血糖、血脂、24小时尿蛋白定量、肝组织糖原蓄积程度、肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原及肝组织病理的影响.结果:与模型组比较,柴黄益肾颗粒能够显著减低大鼠肝重指数(P＜0.05),降低血清总胆固醇、甘油三酯以及尿液中24h尿蛋白定量(P＜0.05)；与蒙诺组比较,柴黄益肾颗粒能够显著减轻大鼠肝组织糖原蓄积程度、炎症活动度,同时柴黄益肾颗粒抑制了Ⅰ、Ⅲ型胶原在肝组织中的表达.结论:柴黄益肾颗粒对糖尿病肾病大鼠肝损伤具良好的保护作用.
关键词： 柴黄益肾颗粒(CHYS) 糖尿病肾病 肝损伤 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原 -
两种补肾法治疗绝经后骨质疏松症的分子机制差异
目的:观察两种补肾法对去势大鼠骨代谢和Ⅰ型胶原合成、交联及基质矿化相关基因表达的影响.方法:建立SD大鼠去势模型,给予补肾阳法和补肾阴法干预,观察骨组织形态学,检测骨密度及血清骨组织特异性碱性磷酸酶(B-ALP)、Ⅰ型前胶原氨基末端前肽(PINP)、Ⅰ型胶原氨基末端肽(NTX)和Ⅰ型胶原羧基末端肽(CTX),测定Ⅰ型胶原合成、交联与基质矿化相关调控基因COLIA-1、COLIA-2、Lhx9、Bglap、Ibsp、Runx-2和Smad3的表达.结果:补肾阳法和补肾阴法均可明显提高大鼠骨密度并改善骨组织微观结构,同时通过不同的方式影响骨代谢和Ⅰ型胶原合成、交联及基质矿化相关基因的表达.结论:补肾阴法和补肾阳法均可有效治疗大鼠绝经后骨质疏松症,但二者的作用机制存在明显差异.
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左归丸通过p38 MAPK信号通路刺激MC3T3细胞核结合因子表达
目的:探讨左归丸防治骨质疏松症的作用机制.方法:用含或不含p38 MAPK特异性阻滞剂(SB203580)的孵育液预处理细胞60min,加入左归丸含药血清孵育48h后,采用MTT基检测细胞活力;采用蛋白质印迹分析方法测定p38活性和Runx2蛋白表达水平;采用实时定量PCR方法测定Runx2和Col Ⅰ mRNA表达水平.结果:左归丸含药血清能够显著增加细胞活力和磷酸化p38蛋白表达水平,诱导Runx2和Col Ⅰ表达(P＜0.01).SB203580抑制了左归丸含药血清诱导的细胞活力和p38蛋白磷酸化水平,同时下调了左归丸含药血清诱导的Runx2和Col Ⅰ表达(P＜0.01).结论:左归丸含药血清可能部分通过活化p38 MAPK信号通路,上调Runx2表达,刺激Col表达,促进骨形成.
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桂枝汤对自发性糖尿病大鼠心肌胶原重构的影响
目的:进一步桂枝汤对自发性糖尿病(CK)大鼠心肌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、血管紧张素Ⅱ的影响,为糖尿病心肌病变防治提供新治法新思路.方法:GK大鼠40只,随机分为GK对照组、二甲双胍组、桂枝汤组、黄连解毒汤组,分别灌胃12周,测定各组血糖、酶免法测定Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原,计算胶原Ⅰ/Ⅲ比值,放免法测定血管紧张素Ⅱ.结果:黄连解毒汤组、二甲双胍组血糖下降;桂枝汤组与GK对照组、二甲双胍比较,胶原Ⅰ明显下降,胶原Ⅲ明显升高,胶原Ⅰ/Ⅲ比值明显下降;桂枝汤组、黄连解毒汤与GK对照组、二甲双胍比较,心肌匀浆AT-Ⅱ含量均有下降.结论:桂枝汤能降低GK大鼠心肌匀浆胶原Ⅰ、AT-Ⅱ含量、升高胶原Ⅲ含量,降低胶原Ⅰ/Ⅲ比值,可明显防治GK大鼠心肌胶原重构和心肌纤维化.黄连解毒汤可降低AT-Ⅱ含量、对胶原Ⅰ、胶原Ⅰ/Ⅲ比值有降低趋势,对心肌胶原重构有一定改善作用.调和营卫是防治糖尿病心肌病的新治法、新思路.
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抗纤灵方对Ang Ⅱ诱导肾纤维化小鼠肾组织α-SMA和Ⅰ型胶原的影响
目的:观察抗纤灵方对该模型小鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)的作用,探讨其作用机制.方法:将测得血压＜120mmHg的小鼠随机分为5组,每组12只,其中模型组、蒙诺组、抗纤灵组行单侧肾切除及微渗泵灌注血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ),正常组不做处理,生理盐水对照组行单侧肾切除及微渗泵灌注0.9％氯化钠溶液.各组均自由进食,抗纤灵组抗纤灵方2.3g/100g灌胃,蒙诺对照组蒙诺0.03g/100g灌胃,其余各组自来水灌胃,均为每日1次.上述治疗,4周后检测处死小鼠.将取出的肾组织,免疫组化法观察石蜡切片和冰冻切片α-SMA、Collagen Ⅰ在各组小鼠的表达.用Western blot比较α-SMA、Collagen Ⅰ在各组小鼠的表达.结果:免疫组化检测法显示,与正常组比较,模型组的α-SMA、Collagen Ⅰ的阳性率显著上升(P＜0.01);与模型组比较,抗纤灵组、蒙诺组的α-SMA、Collagen Ⅰ阳性率显著下降(P＜0.05,P＜0.01).Western blot检测法显示,与正常组比较,模型组的α-SMA、Collagen Ⅰ的灰度值显著上升(P＜0.01);与模型组比较,抗纤灵组、蒙诺组的α-SMA、Collagen Ⅰ的灰度值显著下降(P＜0.05,P＜0.01).结论:抗纤灵方能抑制α-SMA的表达,并减少Collagen Ⅰ的生成,降低肾纤维化发生发展,进而减缓高血压肾损伤后的肾纤维化进程.
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从骨骼与骨骼肌Ⅰ型胶原mRNA表达探讨骨痿“骨肉不相亲”病机
目的:观察骨质疏松症大鼠骨骼、骨骼肌Ⅰ型胶原mRNA表达变化影响.方法:将120只雌雄各半的大鼠随机分为正常组、模型组、补肾组、健脾组、活血组和骨疏康组6个组.测定大鼠骨骼、骨骼肌Ⅰ型胶原mRNA表达.结果:①与正常组相比,模型组大鼠骨组织Ⅰ型胶原mRNA表达水平明显下降(P＜0.05),与模型组相比,补肾组升高趋势为显著(P＜0.01),其次为健脾组(P＜0.05).②与正常组相比,模型组大鼠骨骼肌Ⅰ型胶原mRNA表达水平明显下降(P＜0.01),与模型组相比,补肾组、健脾组升高趋势为显著(P＜0.01).结论:①骨质疏松症的形成,可能与骨骼、骨骼肌Ⅰ型胶原表达的异常变化有关,印证了中医学骨痿“骨肉不相亲”的病机.②补肾、健脾方法通过调控骨质疏松症大鼠的骨骼、骨骼肌Ⅰ型胶原mRNA表达,对骨质疏松症具有一定的防治作用.
