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  • 脐带血血清培养体系扩增脐带间充质干细胞及其生物学特征的实验研究

    作者:葛殿华;马红梅;周学武;呼晓;冯丽艳;雷娟;杨淑梅;毛慧玲;宁彬

    目的:通过观察以人脐带血血清为主体的培养体系对脐带间充质干细胞(Mesncllymal stem Ce]ls,MSCs)体外培养扩增的影响,探讨人脐带血血清替代动物血清用于培养临床组织工程用干细胞的可行性.建立从足月脐带分离间充质干细胞和体外传代培养技术,并对其生物学特性进行研究.方法:采用双酶法分离脐带间充质干细胞.并通过传代进行纯化和扩增培养.绘制生长曲线:用流式细胞仪检测脐带表面抗原及细胞周期.结果:成功建立了以人脐带血血清为主体的培养体系的脐带间充质干细胞培养扩增的方法:流式细胞仪检测结果显示,贴壁细胞均表CD44、CD29,低表达CD106,不表达追血细胞表型CD14、CD34、CD45和内皮细胞表型CD31,也不表达HLADR:细胞倍增时间为30h,细胞周期分析表明,G0-G1期和+C2+M期所占比例分别为78.84%和11.16%.结论:应用灭活脐带血清培养体系可成功扩增人脐带间充质干细胞.培养的细胞具有阃充质干细胞的基本特性.为建立间充质干细胞库和临床应用提供了理论依据.

  • 间充质干细胞在炎症性肠病治疗中的机制

    作者:周颖婷;刘文

    炎症性肠病(IBD)是一种慢性炎症性疾病,发病原因尚不清楚.间质干细胞(MSCs)移植是炎症性肠病治疗的新途径,但作用机制尚未完全明确,相关研究结果主要包括MSCs 分化,修复,分泌细胞因子三个方面.本文就相关研究进展作一综述.

  • 间充质干细胞在宫腔粘连及其他子宫内膜损伤治疗方面的研究进展

    作者:林慧隆;沈来恩;林琪;边晓丽;吴雪清

    宫腔粘连(IUA)多继发于反复刮宫或者宫腔内感染.主要表现为月经不规则、不孕、反复流产等.目前仍以宫腔镜下粘连分解术(TCRA)并辅以雌激素治疗为主要手段,术后可放置球囊支架、宫内节育器、透明质酸等.但重度宫腔粘连患者术后复发率高、生育功能经常规方法治疗后难以恢复.以往的研究已经证明干细胞能通过促进子宫内膜再生和修复来治疗宫腔粘连,但由于移植成活率低、定向诱导分化困难和干细胞成瘤性等问题,无法广泛应用于临床.本文就近年来利用间充质干细胞治疗子宫内膜损伤及宫腔粘连的文章作一综述,为宫腔粘连的治疗提供新的思路.

  • 间充质干细胞来源微囊泡对卵巢颗粒细胞的作用

    作者:李攀;殷慧群;陈京京;刘迎春;姜宏

    目的 探讨间充质干细胞来源微囊泡(MVs)对卵巢颗粒细胞的作用. 方法 取传代第8代(P8)前的人脐带间充质干细胞进行无血清培养,超速离心结合蔗糖密度梯度离心法从培养液上清中分离纯化MVs,透射电镜形态学观察,Bradford法蛋白定量.将PKH26标记的不同浓度MVs(0、10、15、20、25μg/ml)与3周龄雌性SD大鼠卵巢颗粒细胞共培养,3h后荧光显微镜观察颗粒细胞对MVs的内化作用;48 h检测培养细胞周期各时相的变化及培养液上清中E2浓度. 结果 随培养时间的延长,MVs释放量显著增加,8×105个细胞大约释放10 μg左右的MVs,电镜下MVs呈圆形或椭圆形,直径介于30~1 000 nm之间,中间为低电子密度区.与MVs共培养3h后,颗粒细胞胞浆中可见呈红色荧光信号的MVs;不同浓度的MVs均可显著增加颗粒细胞的增殖指数(PI)、S期细胞比率(SPF)及E2水平,且呈先上升后下降趋势(P<0.05). 结论 MVs能够被颗粒细胞摄取;人脐带间充质干细胞来源的MVs能够促进颗粒细胞增殖及分泌E2功能.

  • 骨髓间充质干细胞联合可降解支架构建组织工程带瓣静脉的实验研究

    作者:刘池拽;魏见娣;吕伟明;师天雄;王深明

    目的 通过体内动物实验评价组织工程带瓣静脉细胞支架复合物的性能,探讨制备组织工程带瓣静脉的可行性.方法 在体外将犬骨髓间充质干细胞(BMSC)种植在组织工程带瓣静脉支架的内腔构建组织工程带瓣静脉,在体外培养2周后,将组织工程带瓣静脉细胞支架复合物移植至犬的颈外静脉,术后运用彩色多普勒超声进行检测,取出移植物后行组织学检查和扫描电镜检查.结果 组织工程带瓣静脉细胞支架复合物移植至体内后,术后1、2周通畅率分别为6/6及4/6,苏木精-伊红染色显示在支架内腔表面细胞层较术前增厚,但细胞层仍平滑规整,支架内部细胞增多,瓣膜窦处可见血栓形成,血管壁内未见血栓机化.Masson染色可见支架边缘和内部少量胶原纤维沉积.扫描电镜观察显示支架内腔光滑、平整,支架内部可见细胞和基质沉积.结论 BMSC和组织工程带瓣静脉支架构建组织工程带瓣静脉的方法可行的,但仍需进一步研究.

  • 间充质干细胞的命名与免疫应用

    作者:刘禹杉

    间充质干细胞(mesenchymalstemcels,MSCs)长期以来被认为是一类具有一定的自我更新和向多个谱系分化潜能的干细胞类型,MSC在某些诱导条件下或在体内能够分化成为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、基质细胞、成纤维细胞、肌腱细胞、胰岛细胞和神经细胞等细胞的能力.MSC初在骨髓中分离得到.据实验证明MSC具有免疫调节、参与组织损伤修复、抑制炎症反应、做靶向治疗载体等作用,但在命名及应用方面仍具有争议.本文就MSC的研究历程与特点,深入讨论其命名争议,并对MSC主要的临床应用探讨机理.

  • 釉基质衍生物对口腔相关细胞作用的研究进展

    作者:李英;董强

    釉基质衍生物(enamel matrix derivative,EMD)已被广泛应用于口腔软硬组织的重建治疗,在促进组织再生方面发挥着重要的作用,日益成为组织工程和再生医学研究的热点.本文将釉基质衍生物对常见口腔相关细胞的研究背景、研究现状等进行综述,并对未来应用前景进行展望.

  • 超声辅助VEGF165转染骨髓间充质干细胞的实验研究

    作者:周文;汪涛

    目的探讨骨髓间充质干细胞定向分化血管内皮细胞的可行性研究.方法VEGF165基因的质粒PEGFP-C1,采用超声辅助电穿法转染骨髓间充质干细胞,转染后于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况.结果超声辅助转染后5h可见细胞内有GFP表达,10h后可达高锋,持续3天左右,其后有些细胞荧光开始减退.结论VEGF基因转染骨髓间充质干细胞后,骨髓间充质干细胞内有GFP表达,提示细胞转染成功,骨髓间充质干细胞定向分化为血管内皮细胞具有可行性.

  • 人羊膜间充质干细胞分离培养的研究进展

    作者:温凯棋;张跃蓉

    人羊膜间充质于细胞(hAMSCs)是羊膜基质中具有多分化潜能的干细胞.hAMSCs来源广泛,取材方便,不涉及伦理限制,对供体无任何损伤,具有低免疫原性且增殖能力强等优势,被认为是目前间充质干细胞的佳来源,备受再生医学研究者的青睐.本文就hAMSCs的采集,分离纯化,培养,分化潜能等做一综述.

  • 低氧环境下SDF-1对间充质干细胞迁移影响的初探

    作者:姜杨;李永涛;徐桂清;郭林娜;张彧婷;沈雷;姚立杰;王玉

    目的 探讨低氧环境下基质细胞衍生因子(SDF-1)促进间充质干细胞的迁移影响.方法 2017年3月—2018年3月期间利用三气培养箱建立低氧微环境,加入120 ng/mL浓度SDF-1间充质干细胞为实验组,在低氧环境下培养的间充质干细胞为低氧对照组,在正常环境下培养的间充质干细胞为正常对照组;利用Transwell细胞迁移实验检测各组细胞迁移;利用MTT实验检测每组间充质干细胞的增殖抑制率.结果 Transwell细胞迁移实验表明细胞迁移率实验组(43.5±8.4)×103与正常对照组(26.7±5.6)×103比较差异有统计学意义(P<0.01),低氧对照组(37.5±7.2)×103与正常对照组(26.7±5.6)×103相比较差异有统计学意义(P<0.05);在低氧环境下,与低氧对照组相比较,实验组间充质干细胞的细胞活性明显升高(P<0.01);同时低氧对照组与正常对照组相比间充质干细胞的细胞活性也明显升高(P<0.01).结论 在低氧环境下加入趋化因子SDF-1可有效的趋化间充质干细胞,在低氧环境下加入趋化因子度SDF-1因子对间充质干细胞活性增强.

  • 高血压病脑出血的微创手术治疗方法与效果

    作者:徐四军

    目的 观察高血压病脑出血的微创手术治疗方法与效果.方法 将80例高血压脑出血患者随机分为两组治疗组和对照组各40例;两组均行手术治疗,两组均行手术治疗,其中对照组采用传统开颅手术,治疗组采用小窗口颅内血肿微创穿刺引流术.结果 治疗1个月后,治疗组的优良率明显高于对照组(P<0.05).治疗6个月后,治疗组的有效率明显高于对照组(P<0.05).结论 高血压病脑出血的微创手术治疗能提高近远期疗效,值得推广应用.

  • 钙粘蛋白多肽修饰的透明质酸水凝胶诱导牙本质-牙髓再生的研究

    作者:黄健萍;王君;林思恩

    该研究利用牙髓间充质干细胞具有往牙本质-牙髓组织分化的潜能,结合新型生物材料拟钙粘蛋白多肽修饰的透明质酸优越的生物学活性,综合运用细胞生物学和动物实验手段,探讨了此支架材料对人牙髓干细胞诱导为牙本质-牙髓组织的能力的影响.

  • 骨髓间充质干细胞自体移植及丹参注射液对大鼠冷冻伤脑水肿模型的长期疗效观察

    作者:刘洋;薛洪利;潘冬生;吕占举;孙晓宇

    目的:观察骨髓间充质干细胞自体移植及丹参注射液对大鼠冷冻伤脑水肿模型神经功能改善的长期影响。方法将Wistar大鼠自体骨髓 MSCs在体外扩增并经Brdu标记后,通过颈内动脉注射将其植入Wsitar大鼠冷冻伤脑水肿模型体内,同时使用丹参注射液腹腔注射进行治疗,进行为期一年的疗效观察。结果经颈内动脉注射的大鼠 MSCs细胞,结合丹参注射液的治疗作用,B组Brdu阳性细胞的数量和神经功能恢复的程度高于 A组,且有明显统计学差异(P<0.05)。但阳性细胞的数量随时间推移较移植初期有明显下降,大鼠神经功能评分随时间推移无明显变化。结论骨髓MSCs自体移植结合丹参注射液治疗对大鼠冷冻伤脑水肿模型可发挥长期治疗作用,疗效稳定。

  • 针刺联合间充质干细胞移植的实验研究进展

    作者:李天然;叶阳;王雪蕊;姬彩硕;王宇;刘存志

    间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是机体的起源细胞,是形成人体各种组织器官的始祖细胞.因其具有自我复制和多向分化的能力,可在特定条件下转变成为多种构成人体组织或器官的细胞.针刺联合MSCs移植的研究已取得了一定的进展,显示出潜在的应用前景.本文整理、总结了近10年来针刺联合MSCs移植疗法的实验研究文献,以治疗不同种类疾病为切入点,综述目前针刺联合MSCs移植疗法的基础实验研究进展.针刺联合MSCs移植的生物学机制可能与针刺能增加MSCs的存活率、诱导MSCs定向分化有关.但是,针刺联合MSCs移植要作为一项常规技术应用于临床实践,其内在机制尚需进一步研究阐明.

  • 调肝益气通络方药物血清诱导骨髓间充质干细胞转化为肝细胞的研究

    作者:韩海啸;李军祥;孟捷;杨晋翔

    目的 探讨调肝益气通络方诱导大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSC)向肝细胞定向分化的能力.方法 分离、纯化并鉴定大鼠骨髓MSC,制备肝纤维化大鼠模型,灌胃调肝益气通络方后提取药物血清,用含药血清,对照肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)诱导MSC向肝细胞的分化若干天后;进行相关指标检测.结果 1.各浓度含药血清在加入1、7、14 d后,其细胞数量均显著多于常规培养组.2.含药血清诱导MSC分化7d后,高剂量组甲胎蛋白(Alpha Fetoprotein,AFP)与白蛋白(Albumin,ALB)的阳性细胞率均显著高于HGF组,角蛋白18(Cytokeratin 18,CK18)的阳性细胞率与HGF组差异无统计学意义.诱导MSC分化14 d后,高剂量组AFP、ALB、CK18的阳性细胞率显著高于HGF组.结论 调肝益气通络方具有诱导MSC分化为肝细胞的能力.

  • 聚乙二醇化骨形态发生蛋白-2基因转染兔骨髓间充质干细胞及其表达测定

    作者:丁立峰;郑刚;杨军;周振东;李建军

    目的:聚乙二醇化骨形态发生蛋白-2基因(PEG/BMP-2)纳米颗粒转染兔骨髓间充质干细胞(rBMSCs),检测骨形态发生蛋白-2(BMP-2)在靶细胞中的表达.方法:原代分离培养rBMSCs,分别采用PEG/BMP-2、脂质体/BMP-2转染细胞,采用流式细胞仪检测转染效率,采用Western Blot和real time RT-PCR方法检测BMP-2表达.结果:成功制备出PEG/BMP-2纳米颗粒并将PEG/BMP-2转染至rBMSCs,转染细胞中BMP-2呈高表达,且与脂质体转染法相比,具有更高的转染效率.结论:PEG/BMP-2纳米颗粒转染rBMSCs可高表达BMP-2,为骨缺损治疗修复提供新的治疗方法.

  • 体外负压培养对骨髓间充质干细胞成骨活性的影响

    作者:杨治;朱养均;程延;尚保生;常瑞;何鹏;张银刚

    目的:探讨体外负压培养对骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived stroma cells,BMSCs)成骨活性的影响.方法:取第3代BMSCs分为实验组和对照组,实验组进行间歇性负压培养,设置压力为17 kPa,每次30 min,每日4次,干预2周;对照组于普通CO2培养箱中常规培养.倒置显微镜下观察细胞形态,检测ALP活性,免疫组织化学检测Ⅰ型胶原的表达,RT-PCR检测2周后以及终止负压后l、2、3d骨保护素(osteoprotegerin,OPG) mRNA和骨保护素配体(osteoprotegerin ligand,OPGL) mRNA表达水平.结果:诱导2周后,BMSCs呈现出显著的成骨细胞特性,与对照组比较,ALP活性显著增加,Ⅰ型胶原表达阳性,实验组细胞OPG mRNA表达水平显著提高,OPGL mRNA表达水平显著降低,且差异均有统计学意义(P<0.05).负压终止后3d,两组细胞OPG mRNA和OPGLmRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05).结论:体外负压培养可以提高BMSCs成骨活性.

  • 骨髓间质干细胞体外定向诱导分化为软骨细胞的实验研究

    作者:同志超;杨镇;同志勤;王坤正;杨团民;石宗利;李毅;郭雄

    目的:探讨分离骨髓间充质干细胞(MSCs)并诱导其向软骨细胞转化的体外培养方法,为软骨组织工程的种子细胞来源提供实验依据.方法:抽取兔髂骨骨髓液,经梯度离心法和贴壁法进行体外培养,贴壁细胞传代,取第3代细胞在培养基中添加软骨分化诱导剂[转化生长因子(TGF-β2)10ng/ml、地塞米松10-7mol/L、维生素C 50μmol/L],经7、14、21 d诱导培养后,倒置显微镜观察细胞形态,免疫组织化学染色检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达.将诱导细胞与软骨支架材料--聚磷酸钙纤维/左旋聚乳酸(CPP/PLLA)复合,1周后终止培养,扫描电镜观察细胞黏附情况.结果:诱导后细胞体外扩增能力显著降低,细胞形态由成纤维样梭形向多角形、多边形或类圆形转变,诱导21 d后细胞形态变化为显著,Ⅱ型胶原免疫组化染色深而均匀.诱导后的MSCs可在支架材料内良好黏附生长.结论:体外培养的MSCs可定向诱导分化为软骨细胞,分泌软骨细胞特异性基质,可用作软骨组织工程的种子细胞.

  • 兔骨髓间充质干细胞的分离培养及其生物学性状的研究

    作者:杨自权;卫小春;郝一勇;焦强;丁娟;李鹏翠;陈崇伟

    目的:分离培养兔骨髓间充质干细胞,对其生物学性状进行观察.方法:用密度梯度离心法与贴壁培养法相结合,分离兔骨髓间充质干细胞,进行体外培养扩增,绘制其生长曲线,用倒置显微镜、细胞爬片、扫描电镜、透射电镜观察细胞的生物学性状.结果:密度梯度离心后,活细胞比例在95%以上,贴壁培养的细胞呈纺锤形,细胞增殖力强,平均倍增时间为32 h,细胞的增殖能力随传代次数的增加而有所下降.结论:密度梯度离心与贴壁培养相结合可以提高细胞分离效率.体外培养的兔骨髓间充质干细胞生长稳定,增殖力强,可以作为组织工程的种子细胞.

  • 补阳还五汤干预缺氧预适应成纤维细胞促间充质干细胞迁移的机制

    作者:王一婧;袁晓捧;吴旦斌;孙英新;范英昌;姜希娟;李虎虎

    目的:探讨补阳还五汤干预缺氧预适应心脏成纤维细胞促间充质干细胞迁移的相关机制.方法:以6.5,13,26 g·kg-1补阳还五汤和等量蒸馏水连续灌胃SD大鼠7d后,制备补阳还五汤含药血清及空白血清.0.56,1.12,2.25 g·mL-1含药血清干预缺氧预适应的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs) 24 h后,酶联免疫吸附测定(ELISA),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CFs培养液中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α),单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)及肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的含量,mRNA及蛋白表达情况,并将补阳还五汤干预缺氧预适应CFs的培养液干预间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)后,检测MSC的细胞迁移能力.结果:与常氧组比较,缺氧可以显著促进CFs分泌HIF-1α,MCP-1及HGF(P <0.01),同时给予缺氧预处理的CFs培养液干预MSC后,HIF-1α,MCP-1及HGF的水平亦显著升高(P<0.01),当给予不同剂量的补阳还五汤含药血清干预后,与缺氧组比较,它们的表达进一步升高(P<0.05,P<0.01);而给予HIF-1α抑制剂YC-1处理后,补阳还五汤各组可升高MCP-1,HGF的表达(P<0.05).结论:补阳还五汤协同缺氧预适应CFs旁分泌效应能够促进MSC迁移,其可能机制是通过上调HIF-1α的表达,提高迁移因子MCP-1,HGF的表达而实现的.

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