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第一鳃弓外胚间充质细胞分离培养及鉴定
目的分离培养小鼠第一鳃弓外胚间充质细胞.方法显微解剖E9.5胎鼠第一鳃弓,采用组织块法对其进行原代培养,通过细胞形态观察、细胞生长曲线描记、计算细胞倍增时间和特异性标记物检测对其细胞生物学特性进行研究.结果组织块法原代培养细胞的时间约7～10天,上皮细胞成分较多,特异性标记物CD57/HNK1、波形丝蛋白免疫细胞化学染色呈均一表达.结论采用组织块法可以获得数量充足、纯度较高的满足实验要求的细胞.为进一步研究其牙颌向分化奠定了实验基础.
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干细胞向生殖细胞分化的研究进展
干细胞(SCs)具有在体外分化为生殖细胞的潜能,为研究生殖细胞(GCs)早期发育提供了良好的模型,并将为干细胞移植修复生殖功能提供细胞资源.本文综述了胚胎干细胞/诱导多能干细胞(ESCs/iPSCs)、新生儿附属物来源干细胞(NDSCs)以及成体干细胞(ASCs)向生殖细胞分化所取得的研究进展,同时总结了各类干细胞向生殖细胞分化时所遇到的障碍及所面临的挑战,为干细胞在生殖医学领域的应用提供理论依据.
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维甲酸增加人胚胎干细胞形成拟胚体中生殖细胞特异基因标记
目的 探讨维甲酸在增加人胚胎干细胞(hESCs)形成拟胚体中生殖细胞特异基因标记中的作用. 方法 hESCs在含有维甲酸或无维甲酸的分化液中悬浮培养形成拟胚体,采用实时荧光定量PCR技术检测未分化因子OCT-4及生殖细胞特异性标记VASA、SCP3、GDF9和TEKT1的表达情况. 结果 在拟胚体形成过程中,未分化因子OCT-4表达下降,但生殖母细胞标记VASA、减数分裂标记SCP3及减数分裂后标记GDF9和TEKT1表达均增加.在含有维甲酸的分化系统中,生殖细胞特异性标记表达均增加.培养5d后,生殖细胞特异性标记VASA、SCP3、GDF9和TEKT1分别增加9.3、6.9、7.2和11.8倍. 结论 hESCs具有分化为原始生殖细胞(PGCs)和早期配子的能力.维甲酸能增加hESCs形成拟胚体中生殖细胞特异性标记的表达.
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小鼠雌性生殖干细胞体内分化鉴定方法
目的 建立一种小鼠卵巢雌性生殖干细胞(FGSCs)体内分化鉴定方法. 方法 从6周龄C57BL/6小鼠卵巢利用Fragilis抗体基于免疫磁珠分选(MACS)分离FGSCs细胞,并置于STO饲养层细胞上扩增培养,采用RT-PCR法检测生殖干性基因包括Fragilis、MVH、Prdm1和Tert,细胞免疫荧光法检测Fragilis和MVH蛋白表达,利用绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体荧光标记FGSCs后将其植入受体鼠卵巢,在体内环境下促其分化发育为卵母细胞,至少12d后取卵巢置于载玻片上并压上盖玻片,直接置于荧光显微镜下观察. 结果 RT PCR结果显示FGSCs生殖干性基因包括Fragilis、MVH、Prdm1和Tert为阳性表达,而卵母细胞特异表达基因中Nobox为阴性,GDF9和ZP3为弱阳性;细胞免疫荧光结果显示FGSCs的MVH和Fragilis蛋白表达阳性,而且呈明显的膜表达.GFP-FGSCs植入6周龄雌性C57BL/6的卵巢中,至少12d以后将卵巢取出,压片后置于荧光显微镜下观测,结果显示有荧光阳性的卵母细胞. 结论 该鉴定方法简单直观,可作为FGSCs体内分化鉴定的可选方法.
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干扰素-γ对大鼠胚胎神经干细胞发育的影响
目的 探讨感染后细胞因子干扰素(IFN)-γ对胎鼠神经系统发育的影响.方法 利用不同浓度IFN-γ(0、20、200、2,000 U/ml)对大鼠体外培养的胚胎16 d的神经干细胞进行刺激,观察神经干细胞生长状态、主要组织相容性复合体(MHC)表达和分化格局的变化.结果 高浓度的IFN-γ(2,000 U/ml)对神经干细胞具有毒性作用.中等浓度的IFN-γ(200 U/ml)能够显著上调神经干细胞MHC-I类和II类分子的表达.同时,中等浓度的IFN-γ能够促进神经干细胞的分化,使得神经干细胞向神经元和少突胶质细胞分化增加,而向星形胶质细胞的分化降低.结论 大剂量IFN-γ可改变神经干细胞的生长和分化状态,IFN-γ除了对胎儿神经系统具有直接毒性外,还可能通过影响MHC的表达引起母体对胎儿的排斥,也许对新生儿智力发育造成不利影响.
关键词： 发育 分化 干扰素-γ 主要组织相容性复合体 神经干细胞 -
体外培养胚胎干细胞分化为心肌细胞特性的初步研究
目的 了解干细胞在实验条件下分化发育为心肌细胞的特征表达与培养时间的关系.方法 收集体外培养条件下第2、4、6、8、10、12、14、16、18和20天的胚胎干细胞,采用RT-PCR方法对其中心肌细胞特异表达基因(α/β-MHC)的表达量进行检测,并通过管家基因(GAPDH)表达量作为内对照;另外收集第0、3、5、10天培养的干细胞,检测3种管家基因(GAPDH、HGPRT、β-tublin)表达的稳定性.结果 胚胎干细胞在体外特定培养条件下,第6天起α/βMHC出现,且表达量随培养时间延长逐渐增加,至14天时表达量高,其后随着培养时间延长,表达量保持稳定;不同管家基因表达量随培养时间的变化,稳定性相差较大,其中GAPDH基因表达的波动相对稳定.结论 EST实验体系分化抑制实验的周期设计为10～14天较为合理,GAPDH适合用于作为目的基因表达量检测的内对照.
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碱性橙Ⅱ对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响
目的 探讨碱性橙Ⅱ对13日龄SD大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响.方法 分离13日龄SD大鼠胚胎肢芽细胞进行微团培养,不同浓度的碱性橙Ⅱ(0.0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0和400.0 mg/L)作用于肢芽细胞,采用CCK8试剂盒检测碱性橙Ⅱ对细胞增殖的影响,采用阿利新蓝8GX染色方法检测碱性橙Ⅱ对肢芽细胞分化的影响.结果 随着碱性橙Ⅱ染毒浓度的增加,胚胎肢芽细胞分化为软骨细胞集落数逐渐减少,细胞增殖率下降,均具有较明显的剂量-效应关系(r细胞毒性=0.958,r细胞分化=0.946);碱性橙Ⅱ对肢芽细胞的半数增殖抑制浓度(pID50)和半数分化抑制浓度(dID50)分别为240.6和69.3 mg/L,对细胞分化的抑制作用大于对增殖的抑制作用.结论 碱性橙Ⅱ对胚胎肢芽细胞的增殖和分化有抑制作用,可能对大鼠胚胎具有潜在的发育毒性.
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脂肪酸对成肌细胞增殖和分化的影响
目的 研究不同种类的脂肪酸对成肌细胞增殖和分化的影响.方法 采用不同浓度(200、100、50、25和12.5μmol/L)的棕榈酸(PA)、油酸(OA)和亚麻酸(LA)处理C2C12、L6和3T3-L1细胞,分别于不同时间(2、4、6和8d)MTT法检测细胞增殖；为了考察脂肪酸对成肌细胞分化的影响,分别在C2C12和L6细胞诱导分化前2d,分化第0、2和4d采用25 μmoL/L的PA、OA或LA处理细胞,油红O染色观察细胞转分化,姬姆萨染色和肌酸激酶(CK)测定观察细胞分化.结果 3种脂肪酸对细胞增殖的抑制作用及其时间-效应和剂量-效应随脂肪酸种类和细胞株不同而具有明显的差异.PA和OA比LA具有更显著的细胞增殖抑制作用,且OA对3种细胞的抑制作用没有明显的剂量依赖关系,而LA在100 μmol/L以下时对C2C12和L6成肌细胞的增殖没有明显的时间-效应；与3T3-L1比较,C2C12和L6细胞增殖对脂肪酸的抑制作用更加敏感.在成肌细胞C2C12和L6诱导分化后用脂肪酸处理未观察到显著的作用,但在诱导分化前2d加入脂肪酸能显著影响成肌细胞的分化,LA处理使多核肌管数量和CK含量增加,促进向骨骼肌细胞的分化,而PA和OA处理使细胞内脂滴积累,多核肌管数量和CK含量下降,抑制向骨骼肌的分化而促进向脂肪细胞的转分化.结论 脂肪酸暴露影响体外培养的成肌细胞的增殖和分化,其作用与脂肪酸种类、细胞类型和暴露时期有关.
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采用微团培养技术探讨双酚A的体外发育毒性
采用微团培养观察了不同浓度的双酚A(0～50mg/L)对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响,旨在了解双酚A的体外发育毒性特点及其可能的作用机制.结果显示:双酚A对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞的增殖和分化均有抑制作用,表现为染毒组肢芽细胞集落形成数量减少,细胞毒性试验吸光度值下降,并呈现出明显的剂量-反应关系.双酚A对肢芽细胞的50%增殖抑制浓度(IP50)和50%分化抑制浓度(ID50)分别为38.74mg/L 和27.93mg/L,IP50/ID50=1.39.按照Renault等人推荐的体外致畸分类标准,双酚A属于阳性致畸物,对肢芽细胞的分化和增殖有特异性抑制作用.
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大豆异黄酮和钙对大鼠成骨细胞增殖分化和矿化的作用
为探讨大豆异黄酮和钙对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化和矿化的作用,体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞,然后用噻唑盐(MTT)法测定大豆异黄酮和葡萄糖酸钙对体外培养成骨细胞的增殖作用,氨基安替比林测酚法测成骨细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红染色方法(ARS)研究对成骨细胞矿化的影响.结果单纯补钙组大鼠成骨细胞增殖、分化和矿化无显著促进作用.大豆异黄酮可显著地促进成骨细胞的增殖和分化,并促使成骨细胞形成矿化结节,而补充大豆异黄酮同时补钙可使矿化结节团块增大.大豆异黄酮可以提高成骨细胞的增殖和分化,补大豆异黄酮并补钙更有利成骨细胞的矿化.
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缺锌抑制体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化
为了研究缺锌对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,从大鼠颅骨分离出成骨细胞,并于DMEM培养基中进行传代培养.锌特异性络合剂TPEN络合掉培养基中的锌建立细胞体外培养的缺锌模型.采用3H-TdR掺入法确定成骨细胞在不同时点DNA的合成状况,同时应用流式细胞仪进行细胞周期的分析;采用组织学方法观察细胞骨架的变化、3H-脯氨酸掺入法确定胶原蛋白的合成;采用酶动力学和放免方法分别测定碱性磷酸酶活性和骨钙素含量.结果表明,缺锌组成骨细胞3H-TdR掺入量在各个时点明显低于对照组,细胞被阻滞于细胞周期中G2/M期,这与细胞骨架受损密切相关.缺锌组胶原蛋白合成、骨钙素含量及碱性磷酸酶活性明显低于对照组.但缺锌补锌组的各个指标与对照组相比无统计学差异.因此,缺锌能够抑制体外培养大鼠成骨细胞的增殖和分化.
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3.0 T MR扩散加权成像及表观扩散系数诊断胃癌不同分化程度的临床价值
目的 分析3.0 T MR扩散加权成像(Diffusion Weighted Imaging,DWI)及表观扩散系数(Apparent Diffusion Coefficient,ADC)诊断胃癌不同分化程度的临床价值.方法 选取2015年10月至2017年3月在我院科室诊治54例胃癌患者,根据患者胃癌分化程度分为低、中、高分化3组,采用3.0 T MR获得3组胃癌患者DWI及ADC参数,对3组胃癌患者的ADC值采用单因素方差分析法用t检验,而3组胃癌患者的LAVA强化特点用n(％)表示用χ2检验,分化程度的等级资料组间比较采用秩和检验分析的临床价值.结果 54例胃癌患者病灶处DWI图像均显示高信号影,全部病灶的T2WI图像显示呈高或稍高信号影,T1WI图像显示为低或等信号,LAVA示病灶均有强化;其中,高、中、低分化腺癌强化特点比较,差异有统计学意义(Z=-5.2800,P=0.000);正常胃壁ADC值(3.034±0.211)×10-3 mm2/s明显高于胃癌患者胃壁ADC值(1.121±0.186)×10-3 mm2/s,差异有统计学意义(t=49.978,P=0.000);DWI与LAVA+DWI图像均显示低分化腺癌ADC值明显低于中、高分化腺癌ADC值,比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 DWI及ADC可有效鉴别与诊断不同分化程度胃癌,而辅助LAVA可进一步获得更全面的参数信息,评价其生物学行为,具有较高的临床诊断价值.
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人前列腺间充质干细胞在不同培养条件下体外诱导分化能力的初步研究
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)存在于人体发生、发育过程的许多种组织中,前列腺中也存在MSCs.体外分离培养M SCs所采用的体系一般分为无血清培养体系和有血清培养体系.本研究选取常规无血清M SCs培养液和M EMɑ+10％M SCs金牌血清培养液这两种培养体系同时培养人前列腺间充质干细胞(human prostate-derived mesenchymal stem cells,hPMSCs),观察培养后的人前列腺间充质干细胞诱导分化能力的差异,从而推测有无血清的培养体系对人前列腺间充质干细胞的影响.研究结果表明,与无血清间充质干细胞培养液比较,M EMɑ+10％ 间充质干细胞金牌血清培养液中的人前列腺间充质干细胞体外分化能力完全,符合间充质干细胞分化能力标准.本研究结果为临床和实验室科研选用适宜的培养体系提供了初步的依据.
关键词： 人前列腺间充质干细胞 培养条件 分化 -
口腔种植体周围炎对颌骨成骨细胞增殖分化能力的影响
目的 分析口腔种植体周围炎对颌骨成骨细胞增殖分化能力的影响.方法 将15例松动并拔出种植体的患者作为实验组,并选择15例拔出第三磨牙的身体健康者作为对照组,采集研究对象的颌骨组织给予成骨细胞的分离、培养、纯化,对成骨细胞增殖能力、成骨细胞Ⅰ型胶原mRNA水平和蛋白水平进行测定,分析比较测定结果.结果 第一天和第三天时,对照组和实验组的成骨细胞OD值比较差异无统计学意义(P>0.05);第七天时实验组患者的成骨细胞OD值显著低于对照组(P<0.05);实验组患者培养1周时的成骨细胞Ⅰ型胶原mRNA表达量、蛋白相对表达量均显著低于对照组(P<0.05).结论 口腔种植体周围炎会对颌骨成骨细胞的分化和增殖进行抑制.
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抗苗勒管激素在女性生殖领域的研究进展
抗苗勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)为二聚体糖蛋白,是转化生长因子β(TGF-β)超家族成员之一,人类AMH基因位于19号染色体,主要通过其Ⅱ型受体(AMHRⅡ)发挥生物学效应[1].初发现AMH是由睾丸支持细胞产生的,其生理功能是抑制雄性苗勒管的发育,参与睾丸的分化和发育.在雌性个体的早期卵巢中仅存在微量的AMH mRNA,因此胚胎的苗勒管分化为输卵管、子宫和阴道上段[2].
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女性生殖器官发育异常对婚育的影响
女性生殖器官在分化、形成、发育过程中,受内源性、外源性因素影响,可出现发育异常,其不同部位在不同发育时段受到内外因素干扰,则形成不同类型的发育异常.女性生殖器官发育异常可影响月经、性生活、妊娠及分娩,但也有一部分发育异常无任何自觉症状,仅在体检时才被发现或终身未被发现.
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不同浓度的血清素对体外培养大鼠成骨细胞分化的影响
目的：研究不同浓度的血清素对体外培养大鼠成骨细胞分化的影响。方法：分离培养新生SD大鼠颅骨的成骨细胞，分别向培养液中加入不同浓度的血清素，分为4组：0 mol/L组(空白对照组)、10-9 mol/L组、10-8 mol/L组、10-7 mol/L组，通过RT-PCR检测骨钙素（OCN），碱性磷酸酶( ALP)，Runt相关转录因子-2（Runx 2）和Osterix mRNA相对表达量的变化。结果：不同浓度的血清素均可以抑制骨钙素（OCN），碱性磷酸酶( ALP)，Runt相关转录因子-2（Runx 2）和Osterix mRNA的相对表达量，且这种抑制作用随着血清素浓度的增大而增强。结论：血清素可以剂量依赖性地抑制成骨细胞的分化，这为骨质疏松症的治疗提供了新的思路。
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大鼠血管组织提取物体外控制间质干细胞转向内皮细胞的分化研究
目的 研究大鼠血管组织提取物于体外诱导骨髓间质干细胞(MSCs)向内皮细胞的分化能力.方法 2015年6-9月间使用淋巴细胞专用分离液对15例大鼠MSCs进行分离,以贴壁法行培养扩容,再采用流式细胞法检测MSCs的表层抗原水平,以基础培养液为实验A组,以含热处理的血管组织细胞提取物的培养液为实验B组,以含大鼠血管组织细胞提取物的培养液为实验C组,以含原代血管内皮组织细胞提取物的培养液作为实验D组,将第4代MSCs分别加入四组进行分化培养,分析对比细胞的表达变化,并检测内皮组织细胞于特异性标志物之变化表达.结果 实验C组的MSCs的细胞形态未见显著改变,但细胞内的基因表达可见明显改变,内皮细胞的特异性基因CD144、CD34、CD31以及eNOS(endothelial nitric oxide synthase)出现高表达.结论 血管组织细胞的提取物中含有能够诱导大鼠MSCs向内皮组织细胞分化的成份,提示成体细胞的内组成份对于相邻干细胞之分化结果具有至关重要的控制作用.
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全能干细胞分化的研究进展
对于全能干细胞的分化研究目前已成为当今医学界研究的热点,但其分化的分子机制和定向分化的方法一直是人们需要解决的难点问题,近年来无论在分子机制研究还是在定向诱导分化研究方面都有了长足进展.本文重点将这三种全能干细胞从其分化机制、定向分化潜能等方面结合国内外研究进展进行综述.
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粪便p53基因突变检测在消化道肿瘤中研究进展
p53基因是细胞生长重要的调节因子,它与细胞周期的调控DNA的修复和合成、细胞的分化及凋亡有关,业已证实p53基因突变与消化道肿瘤的发生有着密切关系.近年来有关粪便中检测p53突变对预测及诊断消化肿瘤有诸多文献,并有一定突破,现综述如下.
