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JAK2抑制剂对食管癌细胞增殖、凋亡及COX-2表达的影响
目的 研究食管癌细胞Eca-109增殖、凋亡及COX-2表达与信号转导子和激活子3(STAT3)信号传导通路的关系,明确以JAK2/STAT3为靶向的信号转导在Eca-109细胞中的分子调控机制.方法 将JAK2抑制剂AG490作用于Eca-109细胞,用MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪、DNA琼脂糖电泳法及透射电子显微镜检测细胞凋亡;Westernblot法检测细胞中JAK2、p-JAK2、P-Stat3及COX-2的蛋白表达变化;RT-PCR检测COX-2 mRNA的变化.结果 AG490呈时间、剂量依赖性的抑制Eca-109细胞增殖并诱导凋亡,抑制JAK2/STAT3通路蛋白的表达,呈浓度依赖性地下调p-JAK2及p-Stat3蛋白的表达(P<0.05),并下调COX-2 mRNA及蛋白的表达(P<0.05).结论 JAK2/STAT3信号传导通路调控AG490对Eca-109细胞作用的细胞内信号传导机制,终通过下调COX-2表达影响Eca-109细胞的增殖并诱导凋亡.
关键词： Eca-109细胞 JAK2/STAT3 增殖 凋亡 COX-2 -
环氧化酶-2选择性抑制剂抑制人食管癌细胞的生长及其诱导凋亡
目的:探讨NS-398对食管癌细胞的生物学效应及可能的作用机制.方法:常规方法培养食管癌Eca-109和TE-13细胞,以不同浓度NS-398(5,10,20,40,80 μmol/L)处理24,48,72 h.采用四甲基唑蓝法(MTT)检测NS-398对Eca-109和TE-13细胞生长的抑制作用;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡及COX-2,Bcl-2,Bax蛋白的表达;TUNEL法检测2种细胞凋亡情况;用放射免疫分析(RIA)检测培养液上清中前列腺素E2(PGE2)含量.结果:NS-398可抑制2种细胞的生长,并随药物浓度的增高及作用时间的延长抑制率逐渐增高,并使2种细胞产生的PGE2明显降低.NS-398使2种细胞G0/G1期细胞显著增多,S期细胞显著减少(Eca-109:F=22.39,P＜0.01;TE-13:F=46.99,P＜0.01),并引起了明显的细胞凋亡.NS-398使2种细胞COX-2和Bcl-2表达显著减少,而Bax表达显著增高.COX-2和Bcl-2的表达呈显著正相关(Eca-109:r=0.925,P＜0.01;TE-13:r=0.925,P＜0.01),COX-2和Bax表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.937,P＜0.01;TE-13:r=-0.703,P＜0.01)、Bax和bcl-2表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.926,P＜0.01;TE-13:r=-0.753,P＜0.01).结论:NS-398可抑制食管癌细胞的增殖并可诱导其凋亡,应用COX-2选择性抑制剂对食管癌进行化学预防或辅助治疗具有可能性.
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昼夜节律基因hPerl和hPer2对食管癌细胞株Eca-109放射敏感性的影响
目的 探讨昼夜节律基因hPerl和hPer2对食管癌细胞株(Eca-109)放射敏感性的影响.方法 体外培养食管癌Eca-109细胞株,通过避光和乙酰肉豆蔻佛波酯(PMA)分别诱导昼夜节律基因hPerl和hPer2节律性的表达,用RT-PCR检测出表达高峰和低谷.在hPerl和hPer2表达的高峰和低谷时,分别用6mV-X射线给予照射,通过Tunel及流式细胞术,检测肿瘤细胞的凋亡.结果 昼夜节律基因表达高峰时照射与低谷时照射比较,肿瘤细胞凋亡率减少(P <0.05).结论 昼夜节律基因hPerl和hPer2高表达,能够降低食管癌细胞的放射敏感性.
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豆根管食通口服液对人食管癌细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响
目的:观察中药复方制剂--豆根管食通口服液对体外培养的食管癌Eca-109细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及对凋亡相关基因蛋白表达的影响.方法:随机取Eca-109细胞分为三组:实验组、阳性对照组和空白对照组,采用MTT分析法测定不同浓度的豆根管食通口服液对Eca-109细胞增殖的抑制作用;通过倒置显微镜、HE染色观察凋亡细胞;采用免疫组织化学法测定Eca-109细胞内Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:MTT结果显示,豆根管食通口服液对Eca-109细胞的增殖有明显的抑制作用.倒置显微镜、光学显微镜下可发现药物作用组出现细胞核固缩、核碎裂等.免疫组织化学结果显示药物作用组bcl-2蛋白表达降低,bax蛋白表达增高(P＜0.01).结论:豆根管食通口服液对人食管癌Eca-109细胞系有抗增殖及诱导凋亡作用,其分子机制可能是下调bcl-2基因表达,上调bax基因表达.
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人参皂苷Rh2对人食管癌Eca-109细胞TFPI-2表达的影响
目的 探讨人参皂苷Rh2对人食管癌Eca-109细胞组织因子途径抑制物2(TFPI-2)表达的影响.方法 按人参皂苷Rh2不同浓度设置3个实验组(10,40,80mg/L)和1个对照组,分别采用RT-PCR法检测细胞TFPI-2 mRNA表达水平、Western blot法检测TFPI-2蛋白表达水平以及Transwell小室法检测细胞的侵袭能力等.结果 10,40,80mg/L人参皂苷Rh2均可抑制人食管癌细胞Eca-109的侵袭力并能上调TFPI-2 mRNA及蛋白的表达,且40,80mg/L与对照组比较有显著性差异(P均<0.05).结论 人参皂苷Rh2具有上调人食管癌Eca-109细胞TFPI-2基因表达和抑制其侵袭力的作用.
关键词： 人参皂苷rh2 食管癌 Eca-109细胞 组织因子途径抑制物2 -
钼对食管癌细胞ECA-109化疗增敏及食管癌干细胞p75NTR的抑制
背景：食管癌化疗过程中很容易出现耐受性，无法达到令人满意的治疗效果，通过使用适当的敏感剂可以有效抑制肿瘤细胞以及肿瘤干细胞的增殖。
目的：探讨钼对食管癌细胞ECA-109化疗敏感性的影响及对食管癌干细胞p75NTR的抑制作用。
方法：取对数期食管癌细胞 ECA-109随机分为空白组、单纯顺铂组、单纯加钼组、顺铂加钼组，后3组采用不同的质量浓度进行实验。利用MTT法检测各组食管癌细胞ECA-109生长增殖情况，流式细胞仪检测各组食管癌干细胞p75NTR比例。
结果与结论：不同质量浓度顺铂对食管癌细胞ECA-109增殖有一定的抑制作用，且对食管癌干细胞具有较强的杀伤作用，随着给药质量浓度和时间的增加均呈增强趋势；单纯钼对食管癌细胞ECA-109的增殖抑制作用和对食管癌干细胞的杀伤作用均不明显；顺铂和钼联用对食管癌细胞ECA-109的抑制作用和对食管癌干细胞的杀伤作用增强，与单纯同质量浓度顺铂组及空白对照组比较差异有显著性意义(P <0.05)，且呈一定的浓度、时间依赖性。结果表明，钼可以提高顺铂的化疗敏感性，促进顺铂对食管癌细胞ECA-109以及食管癌干细胞p75NTR抑制作用的增强，可以作为一种重要的化疗增敏剂。 -
RNA干扰抑制cyclin E表达对食道癌细胞Eca-109增殖的影响
目的 探讨利用RNAi技术抑制cyclin E的表达,研究cyclin E在食道癌细胞Eca-109生长、增殖过程中的作用.方法 设计针对cyclin E基因的siRNA序列,合成并克隆入pGFU6/neo质粒中,用脂质体转染法将重组质粒转染Eca-109细胞.采用RT-PCR和免疫印迹试验检测稳定转染的Eca-109细胞中cyclin E的表达水平.台盼蓝排斥法、MTT法、3H-TdR掺人试验、平板克隆形成试验检测干扰cyclin E后对细胞活力以及增殖能力的影响,流式细胞仪测定细胞周期时相分布.Westem印迹检测细胞增殖有关蛋白PCNA、p21、bax和bcl-2表达变化.结果 台盼蓝排斥法、MTT法、3H-TdR掺入试验和平板克隆形成试验显示转染组细胞活力及增殖受到抑制；阻滞在G0/G1期细胞比例增加.Western印迹表明PCNA和bcl-2蛋白表达量下降；而p21蛋白和Bax蛋白表达量上升.结论 沉默cyclin E基因能明显抑制食道癌细胞Eca-109的活力及增殖能力,并且细胞周期被阻滞,机制可能与下调肿瘤细胞内PCNA以及上调p21的表达有关.
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环氧合酶抑制剂NS-398抑制食管癌干细胞增强放射敏感性的研究
放射治疗是目前食管癌的主要治疗手段,但疗效欠佳,放射增敏成为肿瘤研究的热点.有研究发现食管癌的放射治疗效果不理想与食管癌干细胞的放射治疗抵抗性、高侵袭转移性有关.到目前为止,尚未发现食管癌干细胞的特异性标志物.本实验选择目前较为常用的侧群( side puplation,SP)细胞分析法[1 ]来研究食管癌干细胞,并检测食管癌Eca-109细胞的存活和生长情况,以明确环氧合酶(COX)抑制剂NS-398对食管癌细胞的放射增敏机制.
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Ezrin增强子敲除可抑制人食管癌Eca-109细胞的增殖和迁移
目的:探讨ezrin增强子敲除对食管癌Eca-109细胞ezrin基因表达、细胞增殖和迁移的影响.方法:将靶向ezrin增强子上、下游的CRISPR/Cas9重组质粒共转染食管癌Eca-109细胞,经嘌呤霉素筛选,获得敲除ezrin增强子的细胞株Eca-C2.用qPCR和Western blotting分别检测敲除ezrin增强子的Eca-C2细胞中ezrin mRNA和蛋白的表达,用蛋白芯片技术检测MAPK通路相关蛋白的表达,用WST-1法和细胞划痕愈合实验分别检测ezrin增强子敲除对Eca-C2细胞增殖和迁移能力的影响.结果:成功构建稳定敲除ezrin增强子的食管癌细胞株Eca-C2;与对照细胞相比,ezrin增强子敲除细胞ezrin mRNA和蛋白的表达水平均明显降低(均P＜0.05).Eca-C2细胞中17种被检测的MAPK通路相关蛋白中有9种(AKT、CREB、GSK3b、MKK6、mTOR、P38、P53、P70S6K和RSK1)表达下调,ezrin增强子敲除后细胞的增殖和迁移能力受到明显抑制(均P＜O.05).结论:在人食管癌Eca-109细胞中,敲除ezrin增强子可明显抑制细胞的增殖和迁移.
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COX-2抑制剂(阿司匹林)体外抑制人食管癌细胞的生长及诱导凋亡
目的:探讨COX-2抑制剂阿司匹林对食管癌细胞作用的生物学效应及可能的作用机制.方法:采用MTT法检测阿司匹林对Eca-109和TE-13细胞生长的抑制作用;FCM法检测细胞凋亡及COX-2、bcl-2,Bax基因蛋白的表达;用RIA法检测培养上清中PGE2的含量.结果:阿司匹林可抑制2种细胞的生长,并随药物浓度升高及作用时间延长抑制率逐渐增高,而使这2株细胞产生的PGE2量明显降低.阿司匹林还能使2株细胞的G0/G1期细胞显著增多,S期细胞显著减少(P＜0.01),并引起了明显的细胞凋亡.2株细胞随阿司匹林作用时间的增加,COX-2和bcl-2表达显著减少,而Bax表达显著增高,COX-2、bcl-2和Bax的表达呈显著相关性(P＜0.01).结论:阿司匹林能抑制食管癌细胞的增殖并可诱导其凋亡,对食管癌进行化学预防或辅助治疗具有可能性.
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尼美舒利对食管癌Eca-109细胞生长的影响及其可能机制
目的:探讨尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞生长和凋亡的影响及其作用机制.方法:应用MTT比色法检测尼美舒利对Eca-109细胞体外生长的抑制作用;流式细胞仪测定细胞周期和凋亡,琼脂糖凝胶电泳法进一步观察细胞凋亡;RTPCR法检测COX-2、PPARγmRNA表达变化,Western blot检测PPAR γ蛋白表达变化.结果:尼美舒利(50～400 μmol/L)对Eca-109细胞生长有抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量-时间效应关系;可使Eca-109细胞G0/G1期比例增高,S期细胞减少,凋亡细胞增多并出现典型的凋亡细胞DNA ladder.此外,尼美舒利可下调COX-2表达并上调PPAR γ表达.结论:尼美舒利能抑制Eca-109细胞的生长,其机制可能是通过抑制Eca-109细胞增殖、诱导细胞周期G0/G1期阻滞、细胞凋亡、下调COX-2表达、上调PPARγ表达而实现的.
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奈达铂与顺铂联合应用对人食管癌Eca-109细胞增殖与凋亡的影响
目的:研究奈达铂(NDP)联合顺铂(DDP)对人食管癌细胞株Eca-109的增殖及凋亡的影响,并探讨其机制.方法:采用MTT法对Eca-109细胞的增殖抑制率进行检测,中效原理法对联合用药的相互作用进行分析判断;采用流式细胞术分析早期凋亡细胞比例;采用RT-PCR和免疫细胞化学分析Ki-67及Bax、Bcl-2表达的变化.结果:NDP、DDP均明显抑制Eca-109细胞的生长,且呈剂量依赖性;两者联合使用时,低浓度时呈拮抗效应,高浓度时呈协同效应; IC50浓度的NDP、DDP和1/2 IC50(NDP)+1/2 IC50(DDP)对Eca-109细胞的抑制率分别为(41.85±4.1)%,(47.38±2.9)%和(52.45±0.9)%;流式细胞术结果表明正常对照组、NDP组、DDP组、联合用药组细胞早期凋亡率依次增加,单独用药组与联合用药组相比有差异;与单独用药组比较,联合用药组Ki-67、Bcl-2表达率显著降低,而Bax表达显著增高.结论:与两药高浓度单独应用相比,低浓度NDP和DDP联合应用对Eca-109细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡能力均有明显增强.
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乳源免疫调节肽诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的研究
目的 研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对人食管癌Eca-109细胞生长和凋亡的影响.方法 采用MTT 法测定PGPIPN对人食管癌Eca-109 细胞的作用,用流式细胞仪(FCM)、琼脂糖凝胶电泳检测PGPIPN诱导Eca-109 细胞凋亡,用免疫组化SP法检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡过程中survivin、caspase-3蛋白的表达变化情况.结果 PGPIPN对人食管癌Eca-109细胞有明显的生长抑制作用并有剂量依赖性,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关,Eca-109细胞经PGPIPN作用后,其survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强.结论 PGPIPN能诱导人食道癌Eca-109细胞凋亡,这可能与survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强有关.
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丁酸钠对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的作用
目的:观察丁酸钠对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的作用.方法:以1、2.5、5 mmol/L丁酸钠处理Eca-109细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,透射电镜观察细胞凋亡的形态,四甲基噻唑氮蓝法检测抑制细胞增殖率,TUNEL法检测细胞凋亡率.结果:Eca-109细胞经丁酸钠处理后:光镜下观察细胞变小、变圆,部分从培养瓶壁上脱落下来;电镜下细胞核体积缩小,染色质浓缩聚集于核膜处;细胞增殖受到明显抑制,1、2.5、5 mmol/L丁酸钠处理24 h、48 h和72 h后,细胞生长抑制率分别是13.38%、34.15%、39.02%,14.04%、33.33%、46.49%和31.11%、40.74%、48.15%,与低浓度组比较差异有统计学意义(P<0.05～P<0.01);2.5 mmon/L丁酸钠处理24 h组与阴性对照组细胞凋亡率分别是5.5%和1.6%,差异有统计学意义(P<0.01).结论:丁酸钠可抑制食管癌Eca-109细胞增殖、促进凋亡,且呈浓度和时间依赖性.
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干细胞Nanog蛋白在食管癌组织中的表达及意义
目的 探讨食管癌组织中干细胞Nanog蛋白表达,分析其与食管癌临床病理特征的关系.方法 收集87例食管癌患者的癌组织及癌旁正常组织标本,采用免疫组化法检测癌组织及癌旁正常组织中的Nanog蛋白表达,同时用免疫荧光技术检测食管癌细胞系TE-1、Eca-109中的Nanog蛋白表达.结果 Nanog蛋白在食管癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织(P＜0.05),Nanog蛋白在食管癌组织中的表达与其病理分期、分化程度和淋巴结转移有关(P均＜0.05).食管癌细胞系TE-1、Eca-109中的Nanog阳性蛋白呈高表达,且表达存在异质性;多数细胞以细胞质表达为主,少数以细胞核表达为主,细胞核表达阳性率为10％.结论 Nanog蛋白在食管癌组织中的表达与食管癌的发生、发展及转移密切相关.
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活性氧在COPADG诱导食管癌Eca-109细胞凋亡中的作用
不同浓度2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)作用于人食管癌Eca-109细胞24h,结果显示随COPADG浓度的升高Eca-109细胞的抑制率增加,Eca-109细胞凋亡率与COPADG浓度呈正相关,r=1.0,P＜0.01;Eca-109细胞内活性氧(ROS)水平与Eca-109细胞凋亡率呈正相关,r=1.0,P＜0.01.认为COPADG可能通过提高Eca-109细胞内ROS水平诱导Eca-109细胞凋亡.
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苦参素诱导人食管癌Eca-109凋亡作用及机制的研究
目的:探讨苦参素诱导人食管癌Eca-109凋亡作用及其机制.方法:运用倒置显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态变化;运用流式细胞术检测细胞凋亡及凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax的表达水平.结果:苦参素1 mg/mL、2 mg/mL作用24 h后,倒置显微镜和透射电子显微镜观察Eca-109细胞均出现典型的凋亡形态变化;流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P＜0.05);Bcl-2表达量明显减少,Bax表达量明显增加,差异具有显著性(P＜0.05);但细胞凋亡峰不明显.结论:苦参素对人食管癌Eca-109有诱导凋亡作用,其机制与上调Bax和下调Bcl-2表达有关.
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RNA干扰沉默survivin基因对食管癌Eca-109细胞放射敏感性的影响
目的 探讨RNA干扰沉默survivin基因对食管癌Eca-109细胞放射敏感性的影响.方法 构建靶向survivin基因特定序列的小干扰RNA(small interfering,siRNA)真核表达干扰质粒pRNAT-siRNA-survivin转染食管癌Eca-109细胞为干扰组,构建阴性对照质粒pRNAT-siRNA-control转染Eca-109细胞为阴性对照组,未转染的Eca-109细胞为空白对照组,3组采用Western blot检测survivin蛋白表达水平.取对数生长期干扰组Eca-109/si-survivin细胞和空白对照组Eca-109细胞,在直线加速器下分别给予6 Gy的X线照射,分别为干扰+X线照射组和单纯X线照射组(X线照射组),采用流式细胞术检测各组细胞凋亡指数,采用MTT法分析细胞存活分数.结果 干扰组细胞survivin蛋白表达水平(18.75±3.12)较阴性对照组(44.17±3.15)和空白对照组(46.20±2.62)明显下调(P＜ 0.05);干扰+X线照射组细胞凋亡指数[(29.56±0.74)％]明显高于空白对照组[(4.35±0.15)％]、阴性对照组[(4.32±0.32)％]、干扰组(9.24±0.35)％]和X线照射组[(22.17±0.75)％],差异均有统计学意义(P＜0.05),干扰组和X线照射组明显高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05);干扰+X线照射组细胞存活分数[(19.54±1.12)％]明显低于空白对照组[(95.35±1.40)％]、阴性对照组[(93.45±1.38)％]、干扰组[(70.96±0.85)％]和X线照射组[(35.84±0.52)％](P＜0.05),干扰组和X线照射组明显低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05).结论 靶向survivin的siRNA能特异性沉默survivin基因表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,进而增强人食管癌Eca-109细胞的放射敏感性.
关键词： 食管癌 RNA干扰 Survivin基因 Eca-109细胞 放射敏感性 -
CpG基序在人食管癌Eca-109细胞疫苗中的佐剂效应
目的:探讨CpG基序在人食管癌Eca-109细胞疫苗中的佐剂效应.方法:培养Eca-109细胞,用酸洗法收集细胞膜表面小肽,再用去盐、浓缩、超滤法纯化这些小肽后,以此刺激人外周血树突状细胞(DC)作为人食管癌疫苗,不用小肽刺激的DC作为对照疫苗,并用这些疫苗加佐剂CpG基序激活纯化的T细胞.实验分组:①CpG基序加食管癌疫苗组(CpG-Ve);②CpG基序加食管癌对照疫苗组(CpG-Vc);③单纯食管癌疫苗组(Ve);④单纯食管癌对照疫苗组(Vc);⑤单纯CpG基序刺激组;⑥直接用纯化的T细胞加Eca-109细胞作效应对照组.用3H渗入法对各组行T细胞增殖试验,用51Cr释放试验测定各组细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的活性.结果:CpG-Ve组的T细胞增殖活性和CTL对Eca-109细胞杀伤率均高于其余各组(P＜0.01).结论:CpG基序可能是人食管癌疫苗研究中的有效佐剂.
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人食管癌细胞抗药机制的探讨
目的：在建立体外多药抗药细胞株的基础上，研究其抗药性形成机制，寻求克服抗药性的方法。方法：用人食管癌上皮细胞Eea-109细胞，在无诱导剂的情况下，以递加培养液中阿霉素(ADM)质量浓度的方法，建立了Eca-109／ADM多药抗药细胞株。用荧光光度法测定抗药细胞内还原性谷胱甘肽(GSH)含量及ADM的累积量。结果：研究发现Eca-109／ADM细胞内GSH含量增加、降低细胞内GSH的含量，细胞的抗药性呈现部分逆转；抗药细胞内ADM的质量浓度较敏感株Eca-109细胞低，用维拉帕米能增加抗药细胞内ADM的质量浓度，同时部分逆转其抗药性。结论：Eca-109／ADM细胞的抗药机制主要是由于细胞内GSH含量升高及细胞内药物质量浓度降低所致。
