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PPARγ和RXRα的表达上调增强了对肿瘤细胞生长的抑制作用
目的 研究过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPAPγ)和维甲类X受体α(RXRα)在人消化系统肿瘤(胃癌MGC803、结肠癌LOVO、肝癌SMMC7721)细胞中的表达及其对配体作用的反应. 方法 采用MTT检测细胞生长;半定量RT-PCR法检测PPARγ和RXRα mRNA的表达. 结果 吡格列酮(PGZ)单独作用及与9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)联合作用72 h,对MGC803和SMMC7721产生较强的抑制作用,联合作用组的抑制作用显著强于PGZ单独作用组(P＜0.01),但对LOVO的抑制作用不明显.PPARγ和RXRα在MGC803细胞中有较强表达,在SMMC7721和LOVO细胞中表达较弱.PGZ能显著上调MGC803和LOVO细胞中PPARγ的表达,联合作用组PPARγ表达比PGZ单独作用组显著升高(P＜0.05);9-cis-RA能显著上调MGC803和LOVO细胞中RXRα的表达,联合作用组RXRα表达与9-cis-RA单独作用组无明显差别. 结论 在MGC803、LOVO和SMMC7721肿瘤细胞中,MGC803细胞PPARγ和RXRα表达强,这对配体发挥作用可能是必需的,配体发挥的抑制细胞生长的效应可能与其介导的信号途径有关.
关键词： MGC803细胞 SMMC7721细胞 LoVo细胞 PPARγ RXRα -
关键词：
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维甲类X受体RXRα蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的 检测RXRα基因蛋白在胃癌、浅表性胃炎、正常胃黏膜中的表达,探讨其与胃癌发生发展的关系,并结合临床、病理资料分析其临床意义.方法 用免疫组织化学ABC法检测RXRα蛋白在胃癌、浅表性胃炎、正常胃黏膜中的表达情况.结果 RXRα蛋白主要定位于上皮细胞的胞核,少数胞质有着色,呈棕黄色或黄色颗粒状,在胃癌、浅表性胃炎、正常胃黏膜中,RXRα蛋白阳性表达率分别为25.0%、81.1%、96.1%;与正常黏膜组和浅表性胃炎比较,胃癌组RXR.表达率下降,差异有显著性(P＜0.05);RXRα蛋白表达与肿瘤分化程度无相关性(P＞0.05),而与肿瘤淋巴结转移和临床病理分期密切相关(P＜0.05).结论 胃癌组织中RXRα蛋白表达显著低于正常黏膜和浅表性胃炎组,提示RXRα蛋白表达下降对胃癌预后具有重要意义.
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Aβ影响神经细胞中RXRα与Nur77的核质穿梭
目的：探讨β淀粉样蛋白（ Aβ）对维甲类X受体α（ RXRα）、孤儿核受体 Nur77的生成和亚细胞定位的影响。方法用 Aβ25～35处理小鼠脑神经瘤细胞（N2a）细胞，并以阿尔茨海默病（AD）模型小鼠的大脑皮层和海马组织为研究对象。应用实时荧光 RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测N2a细胞和皮层、海马组织中RXRα、Nur77 mRNA表达和蛋白表达，应用核质分离结合Western印迹检测 N2a细胞中 RXRα、Nur77蛋白在细胞核与细胞质中的含量，应用免疫荧光技术观察N2a细胞与皮层、海马细胞中RXRα、Nur77的亚细胞定位；流式细胞仪检测N 2a细胞凋亡情况，Western印迹检测Bcl-2和Bax表达量。结果 N2a 细胞经 Aβ处理24 h 后，RXRαmRNA 表达水平下降了16.47％，Nur77 mRNA 表达水平无明显变化；RXRα、Nur77总蛋白量无明显变化，但RXRα与Nur77在细胞质中的含量分别由对照组的2.99％、3.91％增至处理组的21.4％、24.2％；Bcl-2蛋白表达下降，Bax表达量上升，细胞凋亡率从对照组1.23％增至Aβ25～35处理组18.69％；与对照小鼠比较，AD小鼠中 RXRα、Nur77 mRNA 表达水平在大脑皮层无明显差异，但在海马中分别增加了8.67％、11.73％；RXRα、Nur77总蛋白量变化无明显差异，但亚细胞定位发生改变，从细胞核迁移至细胞质增加并伴有凋亡发生。结论 Aβ可能诱导RXRα与Nur77从细胞核迁移至细胞质，诱发凋亡。
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维甲类X受体和基质金属蛋白酶-2在结直肠癌组织中的表达
目的 探讨维甲类X受体(RXRs)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在结直肠癌组织中的表达.方法 应用免疫组化方法检测53例结直肠癌标本,31例良性腺瘤标本和37例正常结直肠黏膜标本组织中RXRα和MMP-2的表达.结果 53例结直肠癌组织中RXRα和MMP-2的表达率分别为49.1％(26/53)和75.5％(40/53),与正常结直肠黏膜组织和良性腺瘤比较,结直肠癌组织中RXRα表达率下降,MMP-2表达率升高(P＜0.05)；结直肠癌组织RXRα低表达和MMP-2高表达,与淋巴结转移和临床病理分期有关(P＜0.05),与肿瘤肿瘤分化程度无关.另外,在结直肠癌组织中,RXRα和MMP-2的表达呈负相关.结论 RXRα和MMP-2在不同结直肠癌组织中的表达量不同,提示RXRα和MMP-2与结直肠癌的发生、发展有着密切关系.
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新型慢性手部湿疹治疗药——Alitretinoin
Alitretinoin是一种能激活所有已知的细胞内维甲酸类受体亚型(RARα、RARβ、RARγ、RXRα、RXRβ和RXRγ)的内源性维甲酸.2009年11月加拿大批准Toctino(alitretinoin,阿利维A酸)软胶囊上市,每日一次,每次30mg,用于局部外用强效糖皮质激素无效的慢性手部湿疹患者.
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多耐药相关蛋白MRP2与核受体RXRα、RARα在人阻塞性胆汁淤积肝组织中的表达变化
目的 观察多耐药相关蛋白MRP2 (multidrug resistance associated protein 2) 与核受体RXRα、RARα在人阻塞性胆汁淤积肝组织的表达变化.方法 收集人正常及阻塞性胆汁淤积肝组织标本各20例,HE染色验证阻塞性黄疸病变,免疫组化方法检测人多耐药相关蛋白MRP2及核受体RXRα、RARα的表达变化.结果 人阻塞性胆汁淤积肝组织中核受体RXRα、RARα表达减弱,多耐药相关蛋白MRP2表达也减弱.结论 与体外培养肝细胞与模型动物一样,人阻塞性胆汁淤积肝组织中MRP2表达减弱也可能由核受体RXRα、RARα表达减弱导致.
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通心络、辛伐他丁对兔颈动脉粥样硬化斑块ABCA1表达的影响
目的 探讨通心络、辛伐他丁对兔颈动脉粥样硬化性斑块ABCA1、RXRα表达的影响,并评价各自的优缺点.方法 将32只新西兰大白兔分为4组,A组:正常对照组8只,余24只建立颈动脉粥样硬化性狭窄大白兔模型,并分为B组:模型对照组8只;C组:辛伐他丁组8只(辛伐他丁5 mg·kg-1·d-1,1次·d-1);D组:通心络组8只(通心络1 g·kg-1·d-1,1次·d-1);药物干预前后检测兔静脉血的TG、TC、LDL及HDL水平,药物干预2周后用Western Blot法检测右侧颈动脉狭窄段血管ABCA1、RXRα蛋白表达量.结果 通心络、辛伐他丁干预组较模型组、正常对照组ABCA1、RXRα蛋白表达均上调(P＜0.05),血脂水平较模型对照组下降(P＜0.05);辛伐他丁组较通心络组ABCA1、RXRα蛋白表达上调、血脂下降程度更明显(P＜0.05);但辛伐他丁组较通心络组ALT增高(P＜0.05).结论 通心络、辛伐他丁可使兔颈动脉粥样硬化斑块ABCA1、RXRα蛋白表达水平上调,这可能是两种药物抗动脉粥样硬化斑块形成的机理之一;辛伐他丁在降脂、上调ABCA1、RXRα蛋白表达方面好于通心络,但通心络无损害肝功能的副作用、而辛伐他丁损害肝功能的副作用明显.
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9-顺式维甲酸诱导胃癌MGC803细胞周期阻滞和凋亡的作用机制
背景与目的:9-顺式维甲酸(9-cis retinoic acid,9-cis RA)对胃癌的抗癌活性及机制尚不清楚,本研究以MGC803为靶细胞观察9-cis RA对胃癌的作用.方法:采用RT-PCR法检测维甲类X受体α(recinoid X receptor α,RXRα)、细胞周期蛋白Cyclin D1和细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4 mRNA表达,流式细胞术检测细胞周期,MTT实验检测9-cis RA作用MGC803细胞后生长抑制情况,Hoechst33342/PI双荧光染色和琼脂糖凝胶电泳检测凋亡,免疫细胞化学检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达.结果:0.1～10 μmol/L 9-cis RA作用MGC803细胞96 h,能显著抑制细胞增殖.10 μmol/L 9-cis RA分别作用48、72和96 h,G1期细胞随着作用时间的延长而增加,呈明显的G1期阻滞.作用72 h后,细胞出现核染色质凝集、DNA片段化等凋亡特征;从作用48 h开始,Bcl-2表达即显著下降.在MGC803细胞中RXRα表达较弱,经10 μmol/L 9-cis RA作用48 h其表达水平显著增加(P＜0.01);作用96 h,细胞中Cyclin D1和CDK4表达显著降低(P＜0.01).结论:9-cis RA能明显诱导MGC803细胞周期G1期阻滞和凋亡,该作用可能与其下调细胞周期因子Cyclin D1和CDK4表达有关.
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靶向核受体RXRα的淫羊藿抗炎活性成分的快速精准鉴定
目的 建立从中药中高效精准鉴定靶向核受体RXRα的天然活性成分的方法.方法 通过受体-配体识别结合的原理,将中药淫羊藿抗炎活性馏分与核受体RXRα蛋白共同孵育,捕获配体小分子,利用高效液相色谱仪、核磁和质谱识别并鉴定配体化合物,生物学技术手段进行化合物活性验证.结果 从淫羊藿抗炎馏分中快速筛选出核受体蛋白RXRα的小分子配体宝藿苷Ⅰ,生物学活性测试显示该配体化合物能够有效抑制细胞炎症反应,且具有RXRα依赖性.结论 受体-配体识别法能够有效鉴定淫羊藿抗炎馏分中靶向核受体RXRα的活性小分子,该法为天然产物和中药活性成分的精准鉴定提供新的思路,为新型RXRα天然小分子调节剂的快速筛选起到促进作用.
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阻塞性胆汁淤积大鼠肝细胞膜蛋白MRP3与核受体RXRα蛋白表达关系的研究
目的通过体外细胞培养和建立大鼠胆管结扎(bile duct ligation, BDL)所致阻塞性胆汁淤积动物模型,在蛋白水平观察多耐药相关蛋白MRP3(multidrug resistance-associated protein 3, MRP3)和核受体RXRα(retinoid-X receptor alpha, RXRα)表达的关系.方法用鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid, CDCA)或苯巴比妥(phenobarbital, PB)分别刺激培养的肝癌细胞HepG2并建立DBL阻塞性胆汁淤积大鼠模型后,分别抽提HepG2细胞总蛋白、核蛋白和大鼠肝脏细胞膜蛋白和核蛋白,Western blot方法检测MRP3和RXRα蛋白表达水平的变化.结果在细胞水平,CDCA和PB可诱导HepG2细胞膜MRP3蛋白表达增高,并抑制细胞核RXRα蛋白表达;在动物体内,BDL大鼠肝脏MRP3明显增加,同时RXRα表达明显下降.结论肝细胞膜蛋白MRP3表达的上调可能与核受体RXRα表达抑制有关.
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通心络对颈动脉粥样硬化性斑块ABCA1表达的影响
目的:探讨通心络对兔模型颈动脉粥样硬化性斑块的三磷酸腺苷结合盒运转体A1(ABCA1)、视黄酸X受体(RXRα)信使核糖核酸(mRNA)表达的影响及机制.方法:32只新西兰大白兔分为4组,其中空白对照组8只(A组),余24只兔于右侧颈动脉放置改良的硅橡胶圈,加1%高胆固醇喂养的方法建立粥样硬化性颈动脉狭窄动物模型.颈动脉狭窄模型而无药物干预的对照组8只(B组);辛伐他丁治疗组8只,给予辛伐他丁5 mg/kg,每天1次(C组);通心络治疗组8只,给予通心络1g/kg,每日1次(D组).药物干预前后分别检测兔模型静脉血的血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL)水平,两种药物干预2周后处死动物取右侧颈动脉狭窄段及对侧相应段血管,以Western Blot法测定其ABCA1、RXRα蛋白质表达量.结果:给予通心络和辛伐他丁干预兔模型组(C组和D组)ABCA1、RXRα蛋白质表达水平均增高,血脂水平下降.结论:通心络可使模型兔颈动脉粥样硬化斑块的ABCA1 mRNA、RXRα mRNA表达水平和其蛋白质表达水平上调,可能有益于抗动脉粥样硬化斑块形成作用.
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鹅去氧胆酸和苯巴比妥对HepG2细胞MRP3与核受体RXRα蛋白表达的影响
目的通过诱导剂刺激体外培养的人肝癌细胞HepG2,观察多耐药相关蛋白MRP3(multidrug resistance-associated protein 3,MRP3)和核受体RXRα(retinoid-X receptor alpha,RXRα)蛋白的表达变化.方法用鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)或苯巴比妥(phenobarbital,PB)分别刺激培养的肝癌细胞HepG2后,抽提HepG2细胞总蛋白和核蛋白,Western blot方法检测MRP3和RXRα蛋白表达水平的变化.结果 CDCA和PB可诱导HepG2细胞膜MRP3蛋白表达增高,并抑制细胞核受体RXRα蛋白表达.结论 HepG2细胞中膜转运蛋白MRP3表达的上调可能与核受体RXRα表达抑制相关.
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复发性自然流产患者绒毛RXRα的表达
目的:探讨复发性自然流产患者绒毛RXRα表达水平及其对胚胎生长的调控作用.方法:用RT-PCR方法检测23例自然复发性流产患者和33例正常早孕者离体绒毛RXRα mRNA表达水平.结果:1)复发性自然流产组及正常妊娠组离体绒毛中均表达RXRα mRNA,其水平分别为0.306±0.358和0.578±0.300,两组相比有统计学差异(P＜0.05).2)自然流产组绒毛中RXRα mRNA表达水平与胚胎死亡时大小呈正相关(r=0.405,P＜0.05).3)自然流产患者血清中狼疮样抗凝因子(ACL)增高组与ACL正常组RXRα mRNA表达水平分别为0.37±0.35和0.39±0.37,两组相比无统计学差异(P＞0.05).4)复发性自然流产患者血清中血小板聚集度(PagT)增高组与PagT正常组RXR α mRNA表达水平分别为0.38±0.36和0.40±0.35,两组相比无统计学差异(P＞0.05).结论:RXRα基因表达水平降低可能是复发性自然流产的发病机理之一.
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PPARγ和RXRα配体联用对白血病细胞生长作用机制的研究
目的 研究过氧化物酶体增牛物活化受体(PPARγ)和维甲类X受体(RXRα)在人类白血病细胞(HL-60、K562、U937)中的表达及其对配体作用的反应.方法 采用MTT法检测细胞生长;半定苗RT-PCR法检测PPARγ和RXRαmRNA的表达.结果 PPARγ和RXRα在HL-60细胞中有较强表达,在K562、U937细胞中表达较弱.PPARγ的配体上槿乙酸(PLAB)能显著抑制3株细胞的生长,PLAB与RXRα的配体9-顺式维甲酸(9-cisRA)联合作用时,与PLAB单独作用比较,对受体高表达的HL-60细胞抑制作用增强较明显(P＜0.05),但对K562、U937的作用增强不明显(P＞0.05).PLAB和9-cisRA分别上调HL-60细胞PPAR γ和RXRα的表达,且联合作用组显著高于单独作用组(P＜0.05).结论 在HL-60、K562、U937细胞中,HL-60细胞PPARγ和RXRα表达强,这对配体发挥作用可能是必需的,配体发挥的抑制细胞生长的效应可能与其介导的信号途径有关.
