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藤黄酸对结肠癌LoVo细胞增殖和侵袭能力的影响
目的 探讨不同浓度藤黄酸(gambogic acid,GA)对结肠癌LoVo细胞株增殖、侵袭能力及基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)蛋白表达的影响.方法 CCK-8法检测藤黄酸对LoVo细胞增殖的影响;Transwell小室检验LoVo细胞体外侵袭能力的改变;Western Blot检测LoVo细胞中MMP-2蛋白的改变.结果 CCK-8检测显示,GA剂量1、2、4、6、8mol/L作用于细胞24h、48h后,对结肠癌Lovo细胞增殖的抑制率分别为(o.16±0.11)％、(0.24±0.08)％、(0.58±0.01)％、(0.67±0.03)％、(0.79±0.01)％和(0.27±0.05)％、(0.69±0.09)％、(0.85±0.01)％、(0.87±0.01)％、(0.89±0.01)％,与对照组(0μmo/L)比较差异具有统计学意义(P＜0.05).Transwell侵袭实验显示,低剂量藤黄酸可抑制LoVo细胞侵袭,其中对照组(0 μmo/L)穿膜细胞数为(120.50±8.69)个,实验组的(1μmol/L)穿膜细胞数为(69.83±4.75)个,两组比较差异有条件下意义(P＜0.05).Western Blot结果显示,GA剂量1、2、4μmol/L作用LoVo细胞后MMP-2蛋白表达水平分别下降48.67％、74.72％、82.70％,与对照组(0μmo/L)比较差异有统计学意义.结论 藤黄酸可抑制LoVo细胞增殖及其侵袭能力,其作用机制可能与降低LoVo细胞中MMP-2蛋白表达有关.
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氧化苦参碱对结肠癌LoVo细胞c-myc,PSMD9,CDK4mRNA表达的影响
目的:探讨氧化苦参碱( oxymatrine,OM)抑制人结肠癌LoVo细胞增殖和诱导凋亡的分子作用机制.方法:采用流式细胞仪检测LoVo细胞凋亡率以及细胞周期分布；采用荧光定量PCR法检测0.25,0.5 g·L-1 OM对LoVo细胞增殖相关基因c -myc,蛋白酶调解因子9(PSMD9),CDK4的基因表达的影响.结果:0.5 g·L-1以下浓度的OM作用结肠癌LoVo细胞48 h,对细胞凋亡无明显影响.0.25 g·L-1 OM作用48 h时可明显抑制人结肠癌LoVo细胞c-myc基因表达(P＜0.05).0.5g·L-1 OM作用48 h时可明显抑制LoVo细胞c-myc,CDK4的基因表达(P ＜0.01,P＜0.01,).药物作用时间为96 h时,0.5g·L-1 OM可明显抑制c-myc,PSM D9,CDK4基因表达(P＜0.05,或P＜0.01).结论:较低剂量OM显著抑制人结肠癌LoVo细胞增殖的作用机制,可能与下调LoVo细胞c-myc,PSM D9,CDK4表达有关.
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PPARγ和RXRα的表达上调增强了对肿瘤细胞生长的抑制作用
目的 研究过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPAPγ)和维甲类X受体α(RXRα)在人消化系统肿瘤(胃癌MGC803、结肠癌LOVO、肝癌SMMC7721)细胞中的表达及其对配体作用的反应. 方法 采用MTT检测细胞生长;半定量RT-PCR法检测PPARγ和RXRα mRNA的表达. 结果 吡格列酮(PGZ)单独作用及与9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)联合作用72 h,对MGC803和SMMC7721产生较强的抑制作用,联合作用组的抑制作用显著强于PGZ单独作用组(P＜0.01),但对LOVO的抑制作用不明显.PPARγ和RXRα在MGC803细胞中有较强表达,在SMMC7721和LOVO细胞中表达较弱.PGZ能显著上调MGC803和LOVO细胞中PPARγ的表达,联合作用组PPARγ表达比PGZ单独作用组显著升高(P＜0.05);9-cis-RA能显著上调MGC803和LOVO细胞中RXRα的表达,联合作用组RXRα表达与9-cis-RA单独作用组无明显差别. 结论 在MGC803、LOVO和SMMC7721肿瘤细胞中,MGC803细胞PPARγ和RXRα表达强,这对配体发挥作用可能是必需的,配体发挥的抑制细胞生长的效应可能与其介导的信号途径有关.
关键词： MGC803细胞 SMMC7721细胞 LoVo细胞 PPARγ RXRα -
羊栖菜多糖体外诱导人大肠癌细胞凋亡
目的 研究羊栖菜多糖(SFPS)对人大肠癌lovo细胞和RKO细胞增殖的作用及其意义.方法 MTT法检测SFPS在体外抑制大肠癌细胞增殖的抑制率;扫描电镜、透射电镜和流式细胞术鉴定细胞凋亡.结果 SFPS对lovo细胞和RKO细胞具有显著的生长抑制作用,并在一定范围内呈量效关系.电镜下可见细胞膜表面微绒毛减少、染色质固缩、边集,凋亡小体形成.流式细胞术结果显示,G0/G1期的细胞比例有不同程度的增高,相应的S期细胞比例显著下降(P＜0.01);而lovo细胞的细胞周期时相比例无明显改变.结论 SFPS在体外能够显著诱导lovo和RKO细胞凋亡,这可能是SFPS抑制人大肠癌细胞增殖的机制之一.
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咪达唑仑抑制人结肠癌LoVo细胞的增殖
目的 探讨咪达唑仑抑制人结肠癌LoVo细胞增殖的机制.方法 咪达唑仑处理LoVo细胞后,甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)及BrdU掺人比色法检测细胞增殖情况,Western印迹及PCR检测P300蛋白及mRNA水平.构建P300干扰稳定细胞株,MTT及BrdU掺入比色法检测细胞增殖情况,Western印迹检测P300及细胞周期相关蛋白的表达水平.结果 咪达唑仑抑制LoVo细胞增殖和抑制P300表达.敲除P300后P21及P27表达上调,LoVo细胞增殖被抑制.结论 咪达唑仑可能通过下调P300的表达而抑制人结肠癌LoVo细胞增殖.
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EGCG对LoVo和SW480结肠癌细胞株的作用及对Notch1与Notch2基因表达的影响
目的:探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株LoVo细胞和SW480细胞增殖的抑制作用,研究其对Notch1与Notch2的基因表达的影响,方法:体外培养LoVo细胞和SW480细胞,采用不同浓度的EGCG(10、20、35 mg/L)对其进行干预,MTT法检测EGCG对LoVo细胞和SW480细胞增殖的抑制作用；用流式细胞仪检测EGCG对LoVo细胞和SW480细胞细胞凋亡和细胞周期的影响.实时荧光定量PCR检测EGCG干预后的LoVo细胞和SW480细胞的Notch1与Notch2基因的表达情况,结果:MTT法检测EGCG对LoVo细胞和SW480细胞增殖均具有抑制作用,且呈浓度依赖性,不具有时间依赖性.流式细胞仪检测EGCG能增强LoVo细胞和SW480细胞的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关.EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍其向S期转换,抑制其细胞增殖.实时荧光定量PCR检测EGCG能下调两株细胞Notch2的基因表达,而SW480细胞的Notch1基因表达有下调的趋势,LoVo细胞的Notch1基因表达有上调的趋势,但差异均无显著意义,结论:EGCG对体外培养的LoVo细胞和SW480细胞的增殖有明显抑制作用,且能诱导细胞凋亡和影响细胞周期,其作用机制可能与下调Notch2的基因表达及激活Notch信号转导途径有关,但是EGCG对Notch1基因表达的影响尚需要做进一步探讨.
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藤梨根提取物对大肠癌LoVo细胞增殖的抑制作用及诱导凋亡的影响
目的:研究藤梨根提取物(ethanol extract from radix of actinidia chinensis,EERAC)对人大肠癌LoVo细胞增殖和凋亡的影响.方法:提取藤梨根抗癌有效活性成分(EERAC),按浓度分为4处理组(lO、40、160、320 mg/L)和空白对照组(0 mg/L).各实验组经作用24、48、72 h后,进行一般形态学和AO/EB荧光染色观察；MMT法检测细胞增殖的抑制情况；免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法测定LoVo细胞中凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达变化.结果:与空白对照组比较,一般形态学显示EERAC处理组能使细胞密度减低,增殖变慢；细胞逐渐变大,细胞间接触变松,胞浆中颗粒增多,细胞脱壁现象和周围碎片增多；荧光染色观察可见处理组细胞呈橙红色荧光,细胞核出现碎片状或固缩状的凋亡特征学形态改变,凋亡现象与EERAC的浓度呈正相关性；MTT法检测显示,EERAC处理组对LoVo细胞的佳作用时间为72 h,大抑制率为79.48％,具有浓度和时间的依赖性(P＜0.01); IHC检测结果显示EERAC作用LoVo细胞24 h后,Bcl-2表达明显减弱,Bax、Caspase-3表达水平明显增高,Bcl-2/Bax比值下降,差异具有统计学意义(P＜0.05),其效应与浓度相关.结论:EERAC具有明显抑制LoVo细胞增殖的作用,其机制可能与降低Bcl-2表达,上调Bax、Caspase-3的表达水平,激活线粒体凋亡途径有关.
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VEGFR-3 siRNA体外对人结肠癌细胞生长的抑制作用
目的: 探讨血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)在肿瘤细胞生长中的作用.方法:根据人ⅦGFR-3mRNA编码序列,设计3个RNA干涉靶点,构建siRNA表达载体,并转染到LoVo细胞中,应用半定量RT-PCR检测基因转染前后VEGFR-3mRNA表达水平的变化,采用四甲基偶氮唑蓝显色法(MTT)观察细胞生长变化,并应用流式细胞计数仪分析细胞凋亡的情况.结果:针对,VEGFR-3基因的siRNA表达载体成功构建,psiRNA-VEGFR-3可显著抑制LoVo细胞中VEGFR-3基因的表达,转染psiRNA-VEGFR-3细胞生长明显抑制,并可诱导LoVo细胞出现凋亡.结论:p3iRNA-VEGFR-3载体能够在loVo细胞中引发RNA干扰效应,下调VEGFR-3基因的表达可以抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡.
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腹腔热灌注化疗对人大肠癌细胞裸鼠腹腔种植的影响
目的研究腹腔热灌注化疗(continous hyperthermic peritonealperfusion chemotherapy,CHPPC)的抗癌疗效,探讨CHPPC的抗癌机制.方法采用人结肠癌LoVo细胞裸鼠腹腔种植模型(n=35),模拟结肠癌术后两个时期,即术后腹腔内散在游离癌细胞期和肉眼可见的广泛癌细胞种植期,进行腹腔灌注(MMC 0.01 g/L～0.02 g/L,10 mL/min,41.5℃)治疗,观察其对癌细胞腹腔内种植的影响.结果早期CHPPC组的致瘤率为40%(4/10),延期CHPPC组为60%(6/10),单纯热疗组与单纯化疗组均为80%(4/5),对照组的致瘤率为100%(5/5).生存时间(d):早期CHPPC组(59.4±4.9)较单纯化疗组(36.2±8.5)和单纯热疗组(35.6±9.1)明显延长(P=0.000),CHPPC早期与延期(41.4±7.9)相比差异显著(P=0.001). 结论CHPPC有明显的抗癌作用,早期CHPPC的抗癌作用显著高于延期CHPPC及单纯热疗、单纯化疗.实施CHPPC的时机是越早越好.
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细胞自噬与结肠癌 Lovo 细胞迁移和侵袭的相关性研究
目的：探讨不同自噬状态对结直肠癌Lovo细胞迁移和侵袭能力的影响。方法将Lovo细胞分为自噬增强组、正常细胞组和3-甲基嘌呤自噬抑制组。用激光共聚焦显微镜观察绿色荧光颗粒，用Q-PCR检测Beclin1 mRNA表达水平，透射电镜观察自噬溶酶体，Transwell实验评价Lovo细胞迁移与侵袭能力。结果绿色荧光颗粒数以自噬增强组多，其次为正常细胞组，而自噬抑制组少。 Beclin1 mRNA表达量自噬增强组为（1．23±0．12）个，正常细胞组为（1±0．13）个，自噬抑制组为（0．98±0．1）个。自噬增强组可见大量的自噬溶酶体，明显多于正常细胞组和自噬抑制组。迁移实验细胞计数：自噬增强组高于正常细胞组（138．0±16．7与90．7±12．9，P＝0．026）和自噬抑制组（138．0±16．7与92．7±26．7，P＝0．030）。侵袭实验细胞计数：自噬增强组高于正常细胞组（147．0±13．0与99．0±20．5，P＝0．028）和自噬抑制组（147．0±13．0与95．7±25．6，P＝0．021）。结论结肠癌Lovo细胞自噬增强促进肿瘤细胞迁移和浸润，可能是局部浸润和远处转移的机制之一。
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组织因子对大肠癌细胞侵袭及血行转移的影响
目的分析组织因子(TF)表达对人类大肠癌细胞侵袭和血行转移能力的影响.方法利用构建有正义/反义组织因子cDNA (TFcDNA)的质粒pcDNA3.1/Zeo,以脂质体法转染人类大肠癌细胞HT-29细胞及LoVo细胞;转染成功的HT-29细胞及LoVo细胞采用Western Blot检测TF表达水平,通过裸鼠皮下成瘤观察细胞体内侵袭能力的变化;通过建立裸鼠体内肺转移及肝转移模型观察细胞体内血行转移能力的变化.结果转染了正义TFcDNA的HT-29细胞及LoVo细胞的TF表达水平较未转染的HT-29细胞及LoVo细胞升高,转染了反义TFcDNA的HT-29细胞及LoVo细胞的TF表达水平则降低;转染了正义TFcDNA的HT-29细胞的体内侵袭能力较未转染的HT-29细胞增强,转染了反义TFcDNA的HT-29细胞的体内侵袭能力则减弱;转染了正义TFcDNA的LoVo细胞的体内血行转移能力较未转染的LoVo细胞增强,转染了反义TFcDNA的LoVo细胞的体内血行转移能力能力则减弱.结论 TF可以促进人类大肠癌细胞的侵袭和血行转移的能力.
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结肠癌组织LSD1表达对结肠癌LoVo细胞转移潜能影响研究
目的:研究赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1 (lysine specific demethylase 1,LSDl)在人结肠癌组织中的表达,及其对人结肠癌LoVo细胞株转移潜能的影响.方法:收集2007-06-01-2011-08-31南通大学附属医院52例结肠癌石蜡组织标本,免疫组化方法检测52例组织中LSD1的表达情况并分析其临床意义;瞬时转染LSD1特异性短发卡RNA(shRNA)干扰质粒下调LSD1的表达,通过细胞划痕实验、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验观察下调LSD1的表达后LoVo细胞迁移及侵袭行为的变化.结果:LSD1在结肠癌组织中阳性表达率为67.3％(35/52),在癌旁组织中为37.5％0(9/24),x2 =5.958,P=0.014.结合临床资料分析显示,LSD1的表达与分化程度(P=0.001)、淋巴结转移(P=0.011)及Duke分期(P=0.024)有关,而与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、大体类型、浸润深度及有无远处转移无关.细胞划痕结果显示,转染组细胞迁移能力明显受抑制;Transwell迁移实验结果显示,Control组和转染LSD1-shR-NA组穿过膜细胞数分别为220.25±6.75和40.875±1.813,转染LSD1-shRNA组穿过膜细胞数明显减少,z=3.787,P＜0.001;Transwell侵袭实验结果显示,Control组和转染LSD1-shRNA组穿过膜细胞数分别为222.75±6.25和33.625±1.75,转染LSD1-shRNA组穿过膜细胞数明显减少,z=3.782,P＜0.001.结论:LSD1表达与结肠癌的恶性程度及转移潜能密切相关,下调LSD1表达能抑制结肠癌LoVo细胞的转移潜能.
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CXCR4-PI3KⅢ-自噬轴与结肠癌LoVo细胞转移潜能相关性研究
目的:探讨调控CXCR4-PI3KⅢ-自噬轴对结直肠癌LoVo细胞迁移和侵袭能力的影响.方法:实验分为正常LoVo细胞组、介导CXCR4-RNAi慢病毒转染LoVo细胞组(CXCR4-RNAi组)和无意义慢病毒转染LoVo细胞组(NC组).采用Q-PCR检测PI3KⅢmRNA表达,蛋白质印迹法检测PI3KⅢ、LC3-Ⅱ及Beclin l的表达,激光共聚焦显微镜观察绿色荧光颗粒,透射电镜观察自噬溶酶体,Transwell小室评价LoVo细胞迁移与侵袭能力.结果:PI3KⅢmRNA表达量正常LoVo细胞组为1.09±0.11,NC组为1.07±0.25,CXCR4-RNAi组为0.86±0.06.PI3KⅢ相对表达量CXCR4-RNAi组为0.227±0.023,低于正常LoVo细胞组的0.607±0.012(P＜0.001)和NC组的0.667±0.040(P＜0.001),正常LoVo细胞组和NC组差异无统计学意义,P=0.310.LC3-Ⅱ相对表达量CXCR4-RNAi组为0.083±0.012,低于正常LoVo细胞组的0.233±0.015(P＜0.001)和NC组的0.253±0.020(P＜0.001),正常LoVo细胞组和NC组差异无统计学意义,P=0.184.Beclin 1相对表达量CXCR4-RNAi组为0.207±0.012,低于正常LoVo细胞组的0.440±0.053(P=0.134)和NC组的0.650±0.252,P=0.011.绿色荧光颗粒和自噬溶酶体数量正常LoVo细胞组和NC组明显多于CXCR4-RNAi组.CXCR4-RNAi组迁移实验细胞计数(87.7±9.1)低于正常LoVo细胞组的126.3±4.9(P=0.009)和NC组的115.0±18.7(P=0.035).CXCR4-RNAi组侵袭实验细胞计数(88.7±10.5)低于正常LoVo细胞组的109.7±4.7 (P=0.019)和NC组的107.7±8.1,P=0.029.结论:CXCR4 PI3KⅢ自噬轴可调控结肠癌Lo-Vo细胞自噬状态,影响肿瘤细胞迁移和浸润,可能是恶性肿瘤浸润转移的机制之一.
关键词： CXCR4-PI3KⅢ-自噬轴 细胞自噬 LoVo细胞 迁移 侵袭 -
丹皮酚对人结肠癌LoVo细胞增殖抑制机制的研究
目的 研究丹皮酚对人结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡的影响,探讨丹皮酚抗肿瘤的作用机制.方法 用丹皮酚作用于体外培养的人结肠癌LoVo细胞,用MTT(四甲基偶氮唑蓝)比色法检测LoVo细胞的生长活性,光镜下观察细胞形态学改变,流式细胞仪测定细胞凋亡率以及Bcl-2蛋白表达水平.结果 丹皮酚在0.047-1.504μmol/L剂量下对体外培养的结直肠癌Lovo细胞的增殖具有抑制作用,且呈明显的剂量、时间效应关系(P＜0.05或P＜0.01).丹皮酚0.094-1.504 μmol/L作用48 h后,光镜可见LoVo细胞呈典型的凋亡形态学改变;流式细胞仪检测结果 显示,细胞凋亡率升高,呈药物剂量依赖性,Bcl-2基因表达显著下调,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 丹皮酚对人结肠癌LoVo细胞生长具有抑制作用,其机制可能与下调Bcl-2基因表达,诱导肿瘤细胞凋亡有关.
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ATRA对人结直肠癌LoVo细胞sICAM-1表达的影响
目的 探讨ATRA对人结肠癌LoVo细胞sICAM-1表达的影响.方法 应用ELISA法检测ATRA在不同溶度及不同作用时间下对oVo细胞表达sICAM-1的影响. 结果 相同作用时间,sICAM-1表达水平随ATRA浓度增加而逐渐下降,差异有统计学意义(P＜0.05).相同浓度条件下,ATRA作用24、48和72小时,sICAM表达水平随作用时间延长而显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ATRA可以抑制人结直肠癌LoVo细胞sICAM-1的表达,其对sICAM-1表达的抑制作用随药物浓度增大和作用时间延长而增高.
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RNA干扰沉默高迁移率族蛋白B1的表达对结直肠癌LoVo细胞增殖和侵袭的抑制作用
目的：探讨小分子RNA（ siRNA）干扰高迁移率族蛋白B1（ HMGB1）基因的表达对结直肠癌细胞株LoVo增殖和侵袭的抑制作用。方法采用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默HMGB1的表达，以逆转录聚合酶链反应和Western blot法检测干扰后LoVo细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达情况。采用四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法、流式细胞术、Transwell小室实验、细胞划痕实验及裸鼠成瘤实验，分析HMGB1基因沉默对LoVo细胞生长、增殖、侵袭及转移的影响。结果慢病毒介导siRNA可成功转染结直肠癌细胞株LoVo。 HMGB1?siRNA转染组LoVo细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的相对表达水平分别为0．24±0．04和0．21±0．03，阴性对照组分别为0．82±0．13和1．15±0．18，空白对照组分别为0．93±0．15和1．21±0．20；HMGB1?siRNA转染组HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平均明显低于阴性对照组和空白对照组（ P＜0．05）。 MTT法检测结果显示，HMGB1?siRNA转染组LoVo细胞的生长速度较阴性对照组和空白对照组降低（ P＜0．05）。流式细胞术检测结果显示，HMGB1?siRNA转染组LoVo细胞的增殖指数为38．27±1．32，明显低于阴性对照组（54．66±1．74）和空白对照组（57．43±1．29，P＜0．05）。Transwell小室实验显示，HMGB1?siRNA转染组穿膜细胞数为（14．0±3．5）个／高倍视野，明显低于阴性对照组[（51．0±6．7）个／高倍视野]和空白对照组[（68．0±5．3）个／高倍视野，P＜0．05]。细胞划痕实验显示，划痕后培养48 h时，HMGB1?siRNA转染组LoVo细胞的迁移距离为（83．61±23．21）μm，明显低于阴性对照组[（202．86±46．46）μm]和空白对照组[（214．58±57．38）μm，P＜0．05]。裸鼠成瘤实验显示，21 d后，肿瘤终体积为（521±34）mm3，明显小于阴性对照组[（763±46）mm3]和空白对照组[（802±51）mm3，P＜0．05]。结论慢病毒介导的RNA干扰技术可有效抑制结直肠癌LoVo细胞中HMGB1基因的表达，HMGB1基因沉默可使结直肠癌细胞生长缓慢，增殖周期延长，侵袭与迁移能力明显下降，裸鼠移植瘤的生长受到明显抑制。
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高侵袭转移Lovo细胞亚系的建立及其生物学特性的研究
目的：建立高侵袭Lovo细胞亚系以及研究其生物学特性。方法：应用裸鼠体内连续传代法，筛选并建立高侵袭Lovo细胞亚系，并测量Lovo亚系电泳泳动速率、细胞周期和DNA含量。结果：Lovo亚系细胞电泳泳动速率明显高于其母系Lovo细胞；其增殖周期(S+G2M)百分率为57.4％，高于其母系Lovo细胞的41.7％，且其DNA含量也远高于其母系细胞。结论：Lovo亚系细胞比Lovo母系细胞具有更高侵袭力和更快的增殖能力。
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结直肠癌患者血清与LoVo细胞、HT29细胞培养液比较蛋白质组学研究
目的对LoVo细胞、HT29细胞培养液与结直肠癌患者血清中特异蛋白质组进行对比研究.方法应用美国CipherGen公司金属亲和表面(IMAC3)芯片和蛋白质芯片仪检测LoVo细胞培养液、HT29细胞培养液与结直肠癌患者血清.结果结直肠癌患者血清与LoVo细胞培养液中都含有质荷比为11 731Da的蛋白质.HT29细胞培养液与结直肠癌患者血清中无相同的蛋白质.结论 LoVo细胞培养液与结直肠癌患者血清中有相同的蛋白质.
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STAT3磷酸化抑制剂隐丹参酮提高5-FU诱导的结直肠癌细胞凋亡
目的 探究结直肠癌细胞中利用信号转导蛋白和转录激活因子3(STAT3)磷酸化抑制剂隐丹参酮(CTS)抑制STAT3 705位点磷酸化对5-氟尿嘧啶(5-FU)效果的影响.方法 采用Western印迹法检测5株结直肠癌细胞中STAT3的磷酸化水平,挑选磷酸化程度高的2株细胞进行后续实验研究.采用Western印迹法检测5-FU处理后结直肠癌细胞STAT3磷酸化水平的变化.应用MTT实验评价5-FU与CTS联合处理结直肠癌细胞对细胞活性影响.利用流式细胞仪检测5-FU与CTS联合处理细胞后对细胞凋亡的影响,同时利用Western印迹法检测抗凋亡蛋白Bcl2的变化情况.结果 5-FU能够降低结直肠癌细胞STAT3 705位点磷酸化水平,利用CTS抑制STAT3磷酸化极大的增强了5-FU的作用效果,降低了结直肠癌细胞活性,促进了细胞凋亡.同时进一步机制研究表明CTS与5-FU联合作用降低了Bcl2蛋白水平.结论 结直肠癌细胞中,利用STAT3磷酸化抑制剂CTS抑制STAT3磷酸化水平能够明显提高5-FU的作用效果.
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阿司匹林对大肠癌LoVo细胞增殖、凋亡的影响及机制
目的 观察阿司匹林对人结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及探讨可能的作用机制.方法 用不同浓度阿司匹林处理体外培养的LoVo细胞24、48、72h,MTT法检测其对结肠癌LoVo细胞增殖的影响,倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,阿司匹林(浓度分别为2、4、8mmol/L)分别处理LoVo细胞48h,行流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度计检测easepase-3相对活性,激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+浓度的变化,Western blot法检测bcl-2、bax基因表达情况.结果 阿司匹林(浓度1～10mmol/L)能显著抑制LoVo细胞增殖,呈剂量、时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;阿司匹林处理LoVo细胞48h后,细胞凋亡率分别为11.4％、22.3％、37.1％,对照组凋亡率为2.4％;阿司匹林处理细胞48h后,casepase-3相对活性显著增加;阿司匹林能上调bax的表达并下调bcl-2表达,呈剂量依赖性.结论 阿司匹林均能抑制LoVo细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能为增加细胞内Ca2含量、casepase-3活性及上调bax的表达并下调bcl-2表达.
