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全反式维甲酸联合地西他滨对U937细胞系和初发老年AML患者的作用及机制研究
目的:分析全反式维甲酸(ATRA)联合地西他滨(DAC)对p16INK4a(p16)和维甲酸受体β(RARβ)的DNA甲基化以及基因表达的影响,探讨2药联合对U937细胞和老年初发急性骨髓系白血病(AML)患者的抗肿瘤作用及其机制.方法:采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测p16和RARβ的表达,通过甲基化特异性PCR分析p16和RARβ启动子的甲基化水平,应用WST-1法和流式细胞术分别检测ATRA联合DAC对U937细胞的增殖作用及其对分化、凋亡和细胞周期的影响.结果:ATRA联合DAC可以诱导DNA去甲基化,增强p16和RARβ的基因表达;2药联合导致U937细胞的生长抑制和分化、凋亡和周期阻滞;此外,对于不能耐受标准化疗的老年AML患者,ATRA联合DAC联合方案在发挥抗肿瘤活性的同时,伴随着p16和RARβ表达水平的上调,以及骨髓原始细胞的减少,且患者显示良好的耐受性.结论:ATRA联合DAC方案,作为诱导分化和去甲基化的联合治疗策略,具有抗AML作用潜能,有助于优化老年AML治疗策略和改善临床预后.
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9-顺式维甲酸抑制甲状腺鳞癌细胞SW579增殖的作用机制
目的:观察9-顺式维甲酸(9-cis-retinoic acid,9-cisRA)对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞RARβ、p21、CDK4、CyclinD1表达的影响,进而探讨9-cisRA的抗癌作用机制.方法:分别以终浓度为1×10-7、1×10-6、5×10-6、1×10-5 mol/L 9-cisRA作用SW579细胞,各组细胞均在培养24 h后加药,继续培养48 h.用RT-PCR方法检测SW579细胞RARβ、p21、CDK4、CyclinD1的mRNA表达;用Western Blot检测SW579细胞RARβ、p21、CDK4、CyclinD1的蛋白表达.结果:9-cisRA作用后,RT-PCR检测结果表明,经不同浓度9-cisRA处理的细胞RARβ、p21的mRNA表达水平均显著上调;CDK4的mRNA表达水平无明显变化;CyclinD1的表达水平明显下调;Western Blot检测结果表明经不同浓度9-cisRA处理的细胞RARβ、p21蛋白表达水平均显著上调;CDK4蛋白表达水平无明显变化;CyclinD1蛋白表达水平明显下调.结论:9-cisRA在一定浓度范围内可能通过上调RARβ、p21的表达进而下调细胞周期蛋白CyclinD1的表达,从而抑制细胞增殖.
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膀胱移行细胞癌组织基因的P14ARF、DAPK、RARβ甲基化变异分析
目的 通过检测新鲜冰冻膀胱癌组织中P14ARF、DAPK、RARβ基因的启动子CpG岛基因的甲基化状态,探讨P14ARF、DAPK、RARβ在膀胱癌发生过程中的作用及诊断意义.方法 采用甲基化特异性PCR技术检测48例手术切除的膀胱癌组织和其中13例相应癌旁组织标本、17例非肿瘤患者正常膀胱组织中DAPK、RARβ、P14ARF基因的甲基化情况.结果 48例膀胱癌组织中发现P14ARF基因异常甲基化13例(27.0%),DAPK基因异常甲基化13例(27.0%);RARβ基因异常甲基化44例(91.6%);17例腺性膀胱炎组织中发现P14ARF基因异常甲基化0例,DAPK基因异常甲基化2例(11.7%);RARβ基因异常甲基化3例(17.6%);13例正常膀胱组织中,仅有2例RARβ基因异常甲基化,P14ARF基因、RARβ基因异常甲基化膀胱癌组织与腺性膀胱炎组织差异有统计学意义(P<0.01;P<0.05).结论 P14ARF、DAPK、RARβ基因异常甲基化与膀胱癌发病密切相关,RARβ基因可作为正常膀胱组织与癌组织鉴别诊断的标志物.
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新型慢性手部湿疹治疗药——Alitretinoin
Alitretinoin是一种能激活所有已知的细胞内维甲酸类受体亚型(RARα、RARβ、RARγ、RXRα、RXRβ和RXRγ)的内源性维甲酸.2009年11月加拿大批准Toctino(alitretinoin,阿利维A酸)软胶囊上市,每日一次,每次30mg,用于局部外用强效糖皮质激素无效的慢性手部湿疹患者.
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河南食管癌高、低发区居民食管癌前病变和癌组织维甲酸受体β的表达
目的:探讨食管癌高、低发区人群正常食管上皮和各级癌前病变组织中维甲酸受体β(RARβ)蛋白表达变化的特征及其与形态变化之间的关系.方法:食管癌高发区患者70例,低发区患者77例,采用卵白素-生物素-辣根过氧化氢酶复合物(ABC)法,检测高、低发区居民食管组织中RARβ蛋白表达.结果:RARβ免疫阳性反应主要定位天细胞膜和细胞浆.高、低发区居民食管正常上皮和各级病变组织中均有不同程度的免疫阳性反应,从正常→基底细胞过度增生(BCH)→间变(DYS)→鳞状细胞癌(SCC),高发区免疫阳性率分别为16%、27%、31%、60%,低发区分别为13%、38%、40%、66%.随SCC分化程度升高,RARβ阳性反应百分率亦呈升高趋势;高发区居民高、中、低分化SCC组织中RARβ的免疫阳性率为95%、73%、25%,低发区分别为95%、77%、39%,两地区间分化程度相似的SCC组织中RARβ阳性率相比差异无统计学意义(P＞0.05).但是,高发区低分化与中、高分化SCC组织免疫反应阳性率相比差异有统计学意义(P＜0.01),与低发区SCC结果相似.结论:RARβ蛋白表达发生于食管癌变的各个阶段,食管癌高、低发区存在相似的改变,其蛋白表达的阳性率随SCC分化程度升高而显著升高,提示RARβ改变可能与食管癌细胞的分化有关.
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RARβ和Nur77相互调控在芬维A胺及HDACi抗肝癌中的作用
目的 前期研究发现,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi) Scriptaid、TSA分别联合芬维A胺能诱导人肝癌细胞凋亡,RARβ和Nur77可能在其中起重要作用.本研究将探讨RARβ和Nur77在芬维A胺及HDACi对肝癌作用中的相互调控.方法 利用RNA干扰技术人为敲低肝癌细胞Huh-7 RARβ或Nur77基因表达,用芬维A胺(10μM)、组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid(10μM)、TSA(1μM)处理后,利用实时荧光定量PCR检测Nur77 mRNA及RARβ mRNA表达水平.结果 人为敲低RARβ基因表达,对HDACi及芬维A胺处理Huh-7细胞后Nur77 mRNA表达无显著影响(P＞0.05),同样,人为敲低Nur77基因表达,对HDACi及芬维A胺处理Huh-7细胞后RARβ mRNA表达亦无影响(P＞0.05).结论 在HDACi及芬维A胺对肝癌细胞作用中,未发现RARβ和Nur77之间存在基因转录水平的相互调控.
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维甲酸受体α、β在子宫内膜癌组织中的表达及意义
目的:通过检测子宫内膜癌组织中维甲酸受体α(Retinoic acid receptor α,RARα)及维甲酸受体β(Retinoic acid receptor β,RARB)表达情况,探讨维甲酸受体在子宫内膜癌发生发展及预后中的作用.方法:收集手术标本的石蜡切片48例,用免疫组化技术检测子宫内膜癌中RARα、RARβ的表达,评估其与临床病理参数之间的关系.结果:(1)RARα及HARβ的阳性表达率分别为47.92%(23/48)、25%(12/48),RARα的表达明显高于RARβ.(2)子宫内膜癌中RARa的表达随手术病理分期的增加及组织分化程度的降低而升高,表现出显著性差异(P<0.01,P<0.01),但与子宫内膜癌组织学分类、肌层侵润深度无关(P>0.05).(3)RARβ表达随着子宫内膜腺癌组织分化程度的降低而减少(P<0.05),但与手术病理分期、组织学类型、肌层侵润深度无关(P>0.05).结论:子宫内膜癌中存在RARα、RARβ表达,RARα的高表达与子宫内膜癌的发展有关,RARβ的表达缺失及RARα的高表达预示子宫内膜癌的预后不良.
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维甲酸受体α、β在子宫内膜癌组织中的表达及意义
目的:通过检测子宫内膜癌组织中维甲酸受体α(Retinoic acid receptor α,RARα)及维甲酸受体β(Retinoic acid receptor β,RARB)表达情况,探讨维甲酸受体在子宫内膜癌发生发展及预后中的作用.方法:收集手术标本的石蜡切片48例,用免疫组化技术检测子宫内膜癌中RARα、RARβ的表达,评估其与临床病理参数之间的关系.结果:(1)RARα及HARβ的阳性表达率分别为47.92%(23/48)、25%(12/48),RARα的表达明显高于RARβ.(2)子宫内膜癌中RARa的表达随手术病理分期的增加及组织分化程度的降低而升高,表现出显著性差异(P<0.01,P<0.01),但与子宫内膜癌组织学分类、肌层侵润深度无关(P>0.05).(3)RARβ表达随着子宫内膜腺癌组织分化程度的降低而减少(P<0.05),但与手术病理分期、组织学类型、肌层侵润深度无关(P>0.05).结论:子宫内膜癌中存在RARα、RARβ表达,RARα的高表达与子宫内膜癌的发展有关,RARβ的表达缺失及RARα的高表达预示子宫内膜癌的预后不良.
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孕期开始的持续维生素A缺乏加重LPS诱导的仔鼠肠上皮屏障功能障碍
目的 探讨孕期维生素A(VA)缺乏对LPS诱导的仔鼠肠上皮屏障功能障碍的影响.方法 构建孕期开始的VA正常(VAN)和VA缺乏(VAD)母鼠模型,其子代(仔鼠)于6周龄时给予脂多糖(LPS)灌胃诱导肠道感染.高效液相色谱法(HPLC)检测血清视黄醇水平;ELISA试剂盒检测仔鼠血清二胺氧化酶(DAO)浓度;采用RT-PCR和Westem blot技术测定RA受体(RARβ)、Toll样受体4和紧密连接蛋白ZO-2的变化.结果 VA营养水平与LPS处理均是血清视黄醇的影响因素(P＜0.000 1和P=0.035 9),但影响血清视黄醇水平的主要因素是VA营养水平(P＜0.000 1).同时,VA水平与LPS处理也均是血清DAO水平的影响因素(P=0.048 1和P＜0.000 1),但LPS是引起DAO水平升高的主要因素(P＜O.000 1).此外,VAD仔鼠结肠黏膜组织中的RARβ、TLR4和ZO-2的mRNA和蛋白表达水平均较VAN组显著降低.LPS处理后,RARβ的表达水平在VAN组进一步降低,VAD仔鼠结肠黏膜组织中TLR4和ZO-2的表达水平始终低于VAN组.结论 孕期开始的持续的VA缺乏主要降低血清视黄酸水平及ZO-2的表达,LPS处理上调血清DAO水平及肠上皮细胞TLR4的表达,而RARβ的表达水平受到VAD及LPS的交互作用,提示VA缺乏可能会降低仔鼠肠道的天然免疫调节能力,降低肠道屏障功能,从而影响肠道的抗感染能力.
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维吾尔族妇女宫颈病变与RARβ基因启动子甲基化的关系
目的 通过对宫颈癌特异性RARβ基因启动子甲基化水平研究,探讨宫颈癌发生与该基因表达的表观遗传学调控的关系.方法 收集维吾尔族妇女宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)、宫颈内上皮瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈炎患者的新鲜组织标本56例,应用Sequenom MassARRAY 甲基化DNA定量分析平台,对组织DNA的RARβ基因启动子区CpG位点进行甲基化水平定量分析.结果 RARβ基因启动子区的目的 CpG片段含有16个CpG位点,通过Sequenom MassArray (质谱)对单一CpG位点的甲基化定量测试,发现CpG-6、CpG-12.13(联合位点)和CpG-14等4个CpG位点甲基化率在宫颈癌与宫颈炎组之间有显著差异(P<0.05),并且各个CpG位点的甲基化水平变化存在密切相关性(r＞0.5,P<0.01).但是,从整体CpG片段的甲基化水平角度分析,不同宫颈病变组织之间无统计学差异(P＞0.05).结论 RARβ基因启动子区CpG岛的特定CpG位点高甲基化是宫颈癌演进过程的重要标志,可能与维吾尔族宫颈癌的关系比较密切.从表观遗传学角度分析,此种甲基化引起基因转录水平下调,继而导致蛋白质表达缺失.
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甲状腺乳头状癌组织中DAPK1与RARβ的表达及临床意义
目的:通过检测新疆地区甲状腺乳头状癌组织及甲状腺良性病变组织中DAPK1和RARβ的蛋白表达特点,探讨其在甲状腺乳头状癌发生发展中的意义.方法:采用免疫组织化学S-P法,检测DAPK1与RARβ在新疆地区38例甲状腺乳头癌、21例甲状腺良性腺瘤、13例桥本氏甲状腺炎、6例结节性甲状腺肿和6例癌旁正常甲状腺组织中的蛋白表达,并分析其与临床病理因素间的关系.结果:DAPK1在甲状腺乳头状癌中的阳性表达明显低于甲状腺腺瘤、桥本氏甲状腺炎、结节性甲状腺肿和癌旁正常甲状腺组织(P<0.01);RARβ在甲状腺乳头状癌中的阳性表达明显高于在甲状腺良性腺瘤、桥本氏甲状腺炎、结节性甲状腺肿和癌旁正常甲状腺组织(P<0.01);DAPK1与RARβ在甲状腺乳头状癌中的表达与患者的年龄、性别、民族无明显相关关系(P>0.05).结论:DAPK1可能参与了甲状腺乳头状癌的发生发展过程.检测DAPK1和RARβ的表达水平可作为判断甲状腺乳头状癌转移和预后的参考指标.
