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CDK4和CyclinB1在乳腺癌中的表达和意义
目的 研究乳腺癌组织中CyclinB1和CDK4的蛋白表达水平、临床意义及预后.方法 应用免疫组织化学法检测乳腺癌组织中CyclinB1和CDK4蛋白表达情况,并比较其与临床病理特征之间的关系.结果 CDK4蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率56.3％,Ⅰ级表达率为36.4％,Ⅱ级为58.8％,Ⅲ级为100％,三者比较有显著差异(P＜0.05)；说明CDK4蛋白的表达随着乳腺癌分化程度降低而升高.CyclinB1蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为68.8％,Ⅰ级表达率为54.5％,Ⅱ级为70.6％,Ⅲ级为100％.CyclinB1蛋白在各级中的表达没有明显差异(P＞0.05).结论 乳腺癌的发生发展可能与CDK4和CyclinB1的过表达有关.
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Cyelin D1和CDK4正性调节苯并(a)芘所致人胚肺成纤维细胞周期改变
目的 研究苯并(a)芘[B(a)P]对人胚肺成纤维细胞(HELF)的细胞周期分布及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)蛋白表达的影响,并探讨两种蛋白含量改变与细胞周期效应之间的关系.方法 将反义cychn D1质粒和反义CDK4质粒导入HELF细胞内.建立两种质粒稳定转染的细胞模型.用0.1、0.5、2.5和12.5μmol/L的B(a)P处理HELF细胞24h.用蛋白印迹方法检测cvclin D1和CDK4蛋白表达水平;利用流式细胞技术检测B(a)P处理对HELF细胞及两种稳定转染细胞系细胞周期的影响.结果 成功建立了反义cyelin D1和反义CDK4稳定转染的细胞系.不同剂量B(a)P处理可引起cvclin D1蛋白表达的显著增加,但对CDK4蛋白表达无明显影响;2.5/μmol/L的B(a)P处理HELF细胞24h后,引起其细胞周期G1期显著下降,S期显著增加;2.5μmol/L的B(a)P处理反义cyclin D1和反义CDK4稳定转染的HELF细胞24h后,对其细胞周期的分布无显著影响.结论 Cyelin D1和CDK4基因均参与了B(a)P所致细胞周期改变过程,并发挥正性调节作用.
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p16、CDK4、cyclinD1在乳腺癌中的表达和预后的关系
目的:探讨p16、CDK4、cyclinD1在乳腺癌组织中的表达和预后的关系.方法:应用免疫组织化学方法检测86例术前均未作放化疗的乳腺癌组织中p16、CDK4、cyclinD1的表达,和临床特征(年龄、病理分级、ER、PR、淋巴转移等)的关系,并分析其与预后的关系.结果:(1)p16蛋白阳性表达率为58.1%,阳性产物主要位于胞核内,少数可见胞浆及胞膜染色;CDK4阳性表达率为36.0%,阳性产物主要位于细胞质和细胞核中;cyclinD1蛋白阳性表达率为39.5%,阳性产物主要位于细胞核中.(2)p16在Ⅰ级、Ⅱ级侵润性导管癌中的阳性表达率分别为70.5%和45.2%(P＜0.05):在淋巴结阴性组与淋巴结阳性组中的阳性表达率分别为79.2%和31.6%(P＜0.01):≤50岁组和≥50岁组阳性率分别是56.3%和60.5%(P＞0.05):ER阴性和阳性组分别为47.4%和66.7%(P＞0.05);PR阴性和阳性组分别是54.3%和62.5%(P＞0.05).CDK4在Ⅰ级、Ⅱ级侵润性导管癌组织中的阳性表达率分别为25.0%和47.6%(P＜0.05);在淋巴结阴性和阳性的乳腺癌组织中阳性率分别为20.8%和55.3%(P＜0.001);ER阴性和阳性组分别是44.7%和29.2%(P＞0.05);PR阴性和阳性组分别是39.1%和32.5%(P＞0.05);≤50岁组和≥50岁组阳性率分别是37.5%和34.2%(P＞0.05).cyclinD1在Ⅰ级、Ⅱ级侵润性导管癌组织中的阳性表达率分别为34.1%和45.2%(P＞0.05);在淋巴结阴性和阳性的乳腺癌组织中阳性率分别为25.0%和57.9%(P＜0.02);ER阴性和阳性组分别为44.7%和35.4%(P＞0.05);PR阴性和阳性组分别是37.0%和42.5%(P＞0.05);≤50岁组和≥50岁组阳性率分别是43.8%和34.2%(P＞0.05).(3)p16与CDK呈负相关(P＜0.01),与cyclinD1呈负相关(P＜0.01):CDK4与cyclinD1呈正相关(P＜0.05).(4)单因素分析提示影响总生存率的因素有:组织学分级、淋巴结转移、ER、PR、p16、CDK4、cyclinD1(P＜0.05).(5)多因素生存分析结果表明p16和淋巴结转移是影响乳腺癌患者总生存率的独立预后因素(P＜0.01).结论:细胞周期调节因子p16、CDK4、cyclinD1与乳腺癌的发生、发展密切相关,可以作为判断肿瘤侵润转移、指导治疗和估计预后的参考指标,特别是p16蛋白的表达水平及淋巴结转移可能是判断乳腺癌术后生存的独立有效指标,而综合应用上述指标可能会更有帮助.
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靛玉红对喉癌Hep-2细胞增殖的影响及机制
目的:探讨靛玉红甲肟(IRO)对人喉癌Hep-2细胞增殖的影响及机制.方法:MTT法检测不同浓度、不同作用时间IRO对Hep-2细胞增殖活性的影响.流式细胞仪检测IRO对Hep-2细胞周期的影响.Western法检测IRO对Hep-2细胞CDK4和cyclin D1蛋白表达的影响.结果:MTT结果发现IRO对Hep-2细胞具有明显的增殖抑制作用,且表现为剂量依赖性(P＜0 01).流式检测发现,以10μmol/L的IRO处理Hep-2细胞后,细胞阻滞于G0/G1期,不同浓度组间差异存在显著性(P＜0 01).Western结果发现IRO对Hep-2细胞CDK4和cyclin D蛋白的表达有抑制作用(P＜0 01).结论:IRO具有抑制人喉癌Hep-2细胞增殖的作用,其机制与阻滞细胞于G0/G1期有关.
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氧化苦参碱对结肠癌LoVo细胞c-myc,PSMD9,CDK4mRNA表达的影响
目的:探讨氧化苦参碱( oxymatrine,OM)抑制人结肠癌LoVo细胞增殖和诱导凋亡的分子作用机制.方法:采用流式细胞仪检测LoVo细胞凋亡率以及细胞周期分布；采用荧光定量PCR法检测0.25,0.5 g·L-1 OM对LoVo细胞增殖相关基因c -myc,蛋白酶调解因子9(PSMD9),CDK4的基因表达的影响.结果:0.5 g·L-1以下浓度的OM作用结肠癌LoVo细胞48 h,对细胞凋亡无明显影响.0.25 g·L-1 OM作用48 h时可明显抑制人结肠癌LoVo细胞c-myc基因表达(P＜0.05).0.5g·L-1 OM作用48 h时可明显抑制LoVo细胞c-myc,CDK4的基因表达(P ＜0.01,P＜0.01,).药物作用时间为96 h时,0.5g·L-1 OM可明显抑制c-myc,PSM D9,CDK4基因表达(P＜0.05,或P＜0.01).结论:较低剂量OM显著抑制人结肠癌LoVo细胞增殖的作用机制,可能与下调LoVo细胞c-myc,PSM D9,CDK4表达有关.
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CYCLIND1和CDK4在胰腺癌中高表达及其意义
目的 探讨胰腺癌中CYCHND1、CDK4的表达及其与临床病理参数的关系;研究增殖细胞核抗体(PCNA)的评分和CYCHND1、CDK4表达的关系.方法 应用免疫组织化学二步法检测CYCHND1、CDK4和PCNA在48例胰腺癌和14例慢性胰腺炎组织中的表达.结果 胰腺癌组织中CYCHND1、CDK4的阳性表达率明显高于慢性胰腺炎组(P<0.01).在低分化、有淋巴结转移、临床分期Ⅲ,Ⅳ期的胰腺癌组织中CYCHND1和CDK4的阳性表达率明显高于高分化、无淋巴结转移、临床分期Ⅰ、Ⅱ期的胰腺癌(P<0.05);胰腺癌中CYCHND1、CDK4表达阳性组中PCNA评分明显高于阴性组(P<0.05).结论 CYCLIND1、CDK4过表达参与胰腺癌的发生、发展,促进胰腺癌细胞的增殖.
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中国134例黑色素瘤患者Pl6INK4a、CDK4和CCND1基因突变及其临床意义
目的 通过分析中国黑色素瘤患者P16INK4a、CDK4和CCNDl基因的突变情况,探索其可能的临床意义.方法 研究共纳入2010年1月至2014年 12月在北京肿瘤医院就诊的l34例中国黑色素瘤患者,收集其肿瘤组织切片(肢端型37例,黏膜型87例,非肢端皮肤型10例),通过PCR扩增及Sanger 测序,检测P16INK4a、CDK4和CCND1基因突变情况,并分析基因突变情况与临床预后的相关性.结果 134例黑色素瘤患者P16INK4a、CDK4和CCND1基因 突变率分别为8.2％ (11/134)、0.75％(1/134)和0％(0/134).81.8％(9/11)的P16INK4a基因突变可能影响蛋白质功能.P16INK4a野生型患者的总生存 期明显长于突变型患者(X2 = 8.872,P＜0.01).P16INK4a基因突变是影响黑色素瘤的独立预后因素(P＜0.05).结论 P16INK4a基因可能成为黑色素 瘤靶向治疗新的突破点.
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重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织p21、cyclin D1及CDK4表达的影响
目的 观察重组人内抑素(rhEndostatin)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜组织p21,细胞周期素D1(cyclin D1)及细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)基因表达的影响,探讨rhEndostatin抑制AA大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的分子机制. 方法 雄性SD大鼠36只,随机分为正常组(n=12)、AA模型组(n=12)和rhEndostatin(2.5mg/kg)治疗组(n=12).制备AA大鼠模型,分别采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法,定量分析rhEndostatin对AA大鼠滑膜组织p21、cyclin D1、CDK4 mRNA及cyclin D1蛋白表达的影响. 结果 rhEndostatin治疗组大鼠滑膜组织p21、cyclin D1 mRNA和cyclin D1蛋白表达水平降低,CDK4 mRNA表达水平增加,与AA模型组比较,差异均有统计学意义(P< 0.01). 结论 rhEndostatin降低AA大鼠滑膜组织 cyclin D1表达水平可能是其抑制AA FLS增殖的分子机制之一.
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鼻咽癌及癌前病变组织CDK4和p16蛋白的表达
目的观察CDK4和p16蛋白在鼻咽癌组织中的表达,探讨其与鼻咽癌发生发展的关系.方法应用S-P法检测CDK4和p16蛋白在80例鼻咽癌、30例鼻咽黏膜慢性炎组织中的表达.结果80例鼻咽癌中CDK4和p16表达率分别为78.8%和20.0%.CDK4表达率在鼻咽癌与中-重度异型增生黏膜间差异不显著,二者与轻度异型增生黏膜相比均差异非常显著(P＜0.01).角化性鳞癌p16的表达率明显高于分化型非角化性癌和未分化癌(P＜0.01).淋巴结转移组中p16表达率明显低于无转移组(P＜0.01),而CDK4表达率高于无转移组(P＜0.05).结论CDK4过表达与p16低表达可能涉及鼻咽癌的发生发展过程,CDK4基因的扩增或过表达可能是鼻咽黏膜上皮细胞癌变的早期事件.p16的表达缺失与鼻咽癌的转移、组织学分型有关.CDK4的过表达与鼻咽癌的转移有关.
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朗格汉斯组织细胞增生症中CyclinD1、CDK4和MDM2的表达
目的 通过探讨CyclinD1、CDK4、MDM2在朗格汉斯组织细胞增生症(LCH)中的表达情况,为其诊断提供参考.方法 运用免疫组织化学技术,检测20例LCH、7例皮肤组织中的cyclinD1、CDK4、MDM2的表达情况.结果 超过90％的LCH,其Langerhans细胞表达CyclinD1(95％,19/20)、CDK4(90％,18/20)、MDM2(90％,18/20),表达模式为中到高强度的核阳性染色.对照皮肤组织内的Langerhans细胞CyclinD1、CDK4、MDM2表达均为(一).结论 Cyclin D1、CDK4、MDM2在LCH中有中至高强度的表达,可能用于Langerhans细胞增生和肿瘤性Langerhans细胞增生的辅助鉴别诊断.
关键词： 朗格汉斯组织细胞增生症 免疫组化 CyclinD1 CDK4 Mdm2 -
唾液腺癌中P16、CyelinD1和Cdk4的表达及临床意义
目的 探讨正常唾液腺组织唾液腺癌中P16、CyclinD1和Cdk4的表达及临床意义.方法 应用免疫组化S-P法分别检测10例正常唾液腺,30例黏液表皮样癌,30例腺样囊性癌组织P16、CycliuD1及Cdk4蛋白表达.结果 P16蛋白阳性表达率在正常唾液腺和唾液腺癌中分别为90%和38%,有显著差异(P<0.01).CyclinD1蛋白阳性表达率在正常唾液腺和唾液腺癌中分别为20%和80%,有显著差异(P<0.01).Cdk4蛋白阳性表达率在正常唾液腺和唾液腺癌组段中分别为30%和88%,有显著差异(P<0.01).在唾液腺癌组织中,P16与CyclinD1和Cdk4蛋白表达正相关(P<0.01).CyclinD1和Cdk4蛋白表达正相关(P<0.05).P16、CyclinD1和Cdk4与患者年龄,癌细胞恶性程度无关(P>0.05).结论 P16蛋白表达减少与唾液腺癌的发生有关.CyclinD1与Cdk4蛋白表达的增加与唾液腺癌的发生有关.
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人突变型CDK4真核荧光表达质粒的构建及对人肝细胞SMMC-7702中POLD1基因表达的调控
目的:构建包含突变型CDK4基因的真核绿色荧光表达载体,作为POLD1基因依赖的细胞周期复制调控的模型,研究POLD1基因相关的癌性增殖的机制,为干预细胞恶性增殖提供新的思路.方法:设计人突变型CDK4基因全长特异性引物进行PCR扩增人肝癌细胞系SMMC-7721总cDNA,以pEGFP-Cl质粒为模板连接,得到重组质粒GFP-CDK4后进行测序和生物信息学比对分析；转染细胞分3组:实验组(转染突变型CDK4重组真核表达质粒GFP-CDK4),阴性对照组(转染空载体pEGFP-Cl组)和空白对照组(SMMC-7702).通过MTT试验分析细胞增殖变化:实时荧光定量PCR技术检测CDK4、POLDl及细胞周期相关因子的表达量,Western blot检测蛋白表达的差异.结果:成功构建了人突变型CDK4基因真核表达质粒GFP-CDK4,转染到肝细胞SMMC-7702后使细胞表达融合绿色荧光的CDK4蛋白；SMMC-7721细胞中突变型的CDK4存在5个碱基突变,4个碱基插入,2个碱基缺失,这使得5个氨基酸序列发生了改变；与空白对照组及阴性对照组相比,实验组细胞增殖明显升高(0.826±0.08 vs 0.596±0.06,0.609±0.10,F=7.033,均P＜0.05)；实验组CDK4 mRNA表达水平差异明显(1.94±0.11 vs 1.01±0.00,1.05±0.12,F=54.046,P＜0.01),POLD1 mRNA相应地升高(2.47±0.25 vs 1.16±0.00,1.26±0.23,F=135.496,P＜0.01)；稳定转染细胞的蛋白水平变化趋势与基因相同,其中实验组CDK4(0.65±0.03 vs 0.41±0.03,0.39±0.05,F=14.665,均P＜0.05),P125(0.54±0.04 vs 0.30±0.07,0.25±0.06,F=11.788,均P＜0.05).结论:人突变型CDK4基因的真核表达载体GFP-CDK4显著促进肝细胞的增殖能力,这与POLD1基因及P125蛋白的高表达相关.
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蛙皮素对人胃黏膜上皮永生细胞系cyclin D1/CDK4的影响
目的研究蛙皮素对正常胃黏膜上皮细胞的促生长作用及其与细胞周期调控因子之间的关系。方法应用人胃黏膜上皮永生细胞株GES-1，经蛙皮素及受体拮抗剂不同处理后，以MTT为指标研究对细胞增殖的影响；流式细胞仪观察对细胞cyclin D1表达的影响；利用Western印迹和增强化学发光法观察CDK4蛋白表达的变化；利用Sepharose微珠免疫沉淀方法检测对CDK4活性的影响。结果蛙皮素在浓度为10-7 mol/L时对GES-1细胞有明显的促生长作用，对cyclin D1表达有促进作用；蛙皮素受体拮抗剂均抑制这些作用；同时还发现蛙皮素可使人胃黏膜上皮永生细胞系细胞的CDK4蛋白表达及其激酶活性增加。结论蛙皮素促进人胃黏膜上皮细胞生长是通过使细胞周期调控因子cyclin D1和CDK4蛋白表达升高，CDK4激酶活性增加，促进细胞周期的进展而实现的。
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苦参碱对BBN诱发大鼠膀胱癌发生发展作用及其机制探讨
目的 研究苦参碱对N-丁基-N-(4-羟丁基)亚硝基胺(BBN)致大鼠膀胱癌发生发展的影响及其分子机制.方法 雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为空白对照组、BBN组(模型组)、阳性药物对照组[塞来昔布500 mg/(kg· d)]、苦参碱50、100和200 mg/(kg·d)剂量组6组.采用BBN诱发大鼠膀胱癌,苦参碱灌胃给药35周,病理学观察膀胱组织形态,免疫组织化学法和蛋白质印迹法分别检测膀胱组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EG-FR)蛋白表达和细胞周期调控通路p16INK4a/Cyclin D1/CDK4各蛋白的表达.结果 BBN组、塞来昔布组、苦参碱组膀胱癌的发生率没有显著性变化,差异无统计学意义,P=0.068.在确诊的膀胱癌组织中,与BBN组相比,苦参碱组浸润性膀胱癌的发生率明显降低,x2=6.065,P=0.014.免疫组织化学法检测结果显示,BBN组EGFR蛋白表达评分为3.845±0.972,与50 mg/kg苦参碱的2.691±1.045(P=0.036)、100 mg/kg苦参碱的2.230±0.748(P=0.029)和200 mg/kg苦参碱的2.739±0.814(P=0.041)比较,差异有统计学意义.蛋白质印迹法检测结果显示,大鼠膀胱组织p16INK4a蛋白平均表达量苦参碱200 mg/kg组(0.448 6±0.195)较BBN组(0.303 8±0.183)上调,P=0.045;Cyclin D1蛋白的平均表达量苦参碱50 mg/kg组(0.448 0±0.236)和200 mg/kg组(0.389 2±0.242)较BBN组(0.630 2±0.221)下降,P值分别为0.018和0.010;CDK4蛋白的平均表达量苦参碱200 mg/kg组(0.648 4±0.366)较BBN组(0.913 3±0.312)下降,P=0.041.结论 苦参碱对BBN诱导的大鼠膀胱癌的发生无抑制作用,但可抑制其向浸润进展,其作用机制可能与抑制大鼠膀胱组织EGFR蛋白的表达及对p16INK4a/Cyclin D1/CDK4细胞周期调控通路的调控有关.
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胃癌及癌前病变中p16、CDK4、cyclinD1蛋白的表达及其意义
目的探讨胃癌及癌前病变中p16、CDK4和cyclinD1蛋白的表达、相互关系及其意义.方法应用免疫组化SP法检测胃癌、不典型增生、慢性浅表性胃炎及正常胃组织中p16、CDK4和cychnD1蛋白的表达情况.结果胃癌中p16蛋白表达率为52.7%,显著低于正常胃组织、慢性浅表性胃炎和不典型增生(P＜0.01),而CDK4和cyclinD1蛋白表达率分别为61.8%、47.3%,均明显高于正常胃组织、慢性浅表性胃炎和轻度不典型增生,有显著性差异(P＜0.01),但胃癌和中～重度不典型增生组织中CDK4和cyclinD1蛋白表达率之间无显著性差异(P＞0.05).胃癌中p16与cyclinD1蛋白表达呈负相关关系(P＜0.05),而CDK4与CyclinD1呈正相关关系(p＜0.01).结论胃癌发生机制涉及p16、CDK4和cyclinD1调节通路中多个基因的异常,且与胃癌Lauren分型、浸润深度、淋巴结转移有关.CDK4和cy-clinD1蛋白高表达可能是胃癌发生过程中的早期分子事件.
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细胞周期调控因子p16和CDK4在骨肉瘤中的表达
目的 探讨骨肉瘤中细胞周期调控因子p16和CDK4的表达关系及意义.方法 应用S-P免疫组织化学方法检测68例骨肉瘤组织中p16和CDK4的表达情况.结果 68例骨肉瘤组织中p16和CDK4的阳性表达率分别为39.7%和46.4%.低分化骨肉瘤组织中p16的阳性率和阳性强度明显低于高分化骨肉瘤组织(χ2=22.267,P＜0.01);p16在骨肉瘤中的表达与性别、年龄和组织类型无显著相关(P＞0.05).低分化骨肉瘤组织中CDK4的阳性率和阳性强度明显高于高分化骨肉瘤组织(χ2=20.766,P＜0.01),CDK4在骨肉瘤中的表达在不同性别、年龄和组织类型间差异无显著性(P＞0.05).CDK4的表达与p16的表达呈明显负相关(r =-0.790,P＜0.01).结论 p16和CDK4的表达都与骨肉瘤的病理分期有关.
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肾细胞癌组织中CDK4、CyclinD1的表达及其意义
目的探讨肾细胞癌组织中CDK4、CyclinD1的表达水平及意义.方法应用实时荧光定量PCR法检测30例人肾细胞癌组织及癌旁肾组织中CDK4、CyclinD1的表达水平.结果CDK4和CyckunD1在肾癌细胞中的表达水平均明显高于癌旁肾组织,但CyclinD1的表达升高水平和比例高于CDK4表达的升高.CyclinD1/CDK4的比值,在肾癌组织中高于癌旁肾组织.结论CDK4和CyclinD1的过度表达可能引起细胞异常增殖、分化失控.CDK4和CyclinD1基因在肾细胞的发生、发展中可能起重要作用.
关键词： 肾细胞癌 实时荧光定量聚合酶链反应 CDK4 CyclinD1 -
CDK4及MDM2在不同危险分层腹膜后脂肪瘤中的表达研究
目的:比较CDK4及MDM2在不同危险分层腹膜后脂肪肉瘤(RPLS)中的表达.方法:选择我院普外科手术切除的原发性及复发性RPLS 129例(共151例次标本),均经常规术后病理检查确诊并行CDK4、MDM2等免疫组化检查,比较CDK4、MDM2在不同危险分层RPLS中的阳性表达情况.结果:CDK4在高危组阳性表达率达98.0％,显著高于低危组的70.4％ (P＜0.05);与中危组的80.8％比较,差异不显著(P＞0.05).MDM2在高危组阳性表达率为93.8％,显著高于低危组的66.7％和中危组的61.5％(P＜0.05).CDK4和MDM2在高危组不同病理分型阳性表达率均较高,但组间差异不显著(P＞0.05).结论:CDK4、MDM2在高危RPLS阳性率表达更高,对RPLS预后有一定参考价值.
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2 GyX射线对EL-4细胞p16、CyclinD、CDK4基因转录和蛋白表达影响
目的研究电离辐射对EL-4细胞p16、CyclinD、CDK4基因转录及蛋白表达的影响.探讨p16/CyclinD/CDK4负向调控通路在辐射诱导G1期阻滞中的作用.方法采用半定量RT-PCR方法检测2 GyX射线照射后EL-4细胞p16 mRNA水平变化,采用Northern blot方法检测CyclinD、CDK4基因转录变化,应用免疫细胞化学方法(ICC)检测3种蛋白表达的变化.结果2 Gy X射线照射后2～48 h EL-4细胞p16 mRNA水平增高,48 h恢复至正常水平.p16蛋白表达照射后2h开始增高,12h达到峰值(P＜0.01),72 h恢复至正常水平.EL-4细胞周期蛋白CyclinD mRNA水平于照射后1 h开始明显降低,照射后8 h降至低值.CyclinD蛋白表达于照射后8 h开始明显减少,持续至照射后48 h(P＜0.05～P＜0.01).EL-4细胞CDK4 mRNA水平于照射后1h明显降低,照射后4 h～12 h保持较低水平,72 h恢复至正常水平.CDK4蛋白表达于照射后4 h明显下降,12 h降至低,72 h仍低于正常水平(P＜0.01).结论2 Gy X射线照射可诱导EL-4细胞p16表达增高,CyclinD和CDK4表达降低.提示p16/CyclinD/CDK4负向调控通路可能在电离辐射诱导EL-4细胞G1期阻滞中发挥重要作用.
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电离辐射对胸腺细胞及脾细胞p16、CyclinD1、CDK4蛋白表达的影响
目的研究电离辐射对小鼠胸腺细胞及脾细胞中p16、CyclinDl及CDK4蛋白表达的影响.方法采用单克隆抗体免疫荧光标记及流式细胞术检测蛋白表达的变化.结果时效实验证实,2.0 Gy X射线全身照射后8,24及48 h,胸腺细胞p16蛋白表达显著增高(分别P＜0.05、P＜0.0l及P＜0.05);照射后24 h,脾细胞p16蛋白表达显著增高(P＜0.05).然而,照射后8～24 h,胸腺细胞CDK4蛋白表达显著降低(P＜0.05～P＜0.01);照射后8～72 h,脾细胞CDK4蛋白表达显著降低(P＜0.05～P＜0.01).量效实验证实,1.0,2.0及4.0Gy全身照射后24 h,胸腺细胞及脾细胞p16蛋白表达均显著增高(P＜0.05～P＜0.01).然而,2.0 Gy照射后胸腺细胞CDK4蛋白表达显著降低(P＜0.05);0.5～6.0Gy照射后脾细胞CDK4蛋白表达显著降低(P＜0.05～P＜0.01).研究还发现,胸腺细胞及脾细胞中CyclinDl蛋白表达于照射后均明显降低.结论电离辐射可诱导胸腺细胞及脾细胞中p16蛋白表达增高.p16-CyclinD1/CDK4通路可能在X射线诱导胸腺细胞G1期阻滞中起重要作用.
