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植物类雌激素杨梅素对结肠癌细胞系RKO生长的影响
目的 检测一种植物类雌激素杨梅素对人结肠癌细胞系RKO生长的影响,并初步探讨其作用机制. 方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测杨梅素对RKO细胞系生长的影响;流式细胞仪技术检测杨梅素对细胞周期的影响;半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)确定杨梅素对抑癌基因p16INK4a表达的影响. 结果 MTT法显示杨梅素处理组对结肠癌细胞系生长有明显抑制作用;流式细胞仪分析结果显示,经杨梅素处理后RKO细胞周期明显阻滞在G0/G1期;RT-PCR结果显示杨梅素恢复了RKO细胞系p161NK4a的转录. 结论 杨梅素对RKO细胞系生长有明显的抑制作用,杨梅素可能通过上调抑癌基因p16INK4a的表达使RKO细胞周期阻滞于G0/G1期.
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补肾阳中药对小鼠胚胎干细胞活动及相关基因表达的影响
目的:观察补肾阳中药复方对小鼠胚胎干细胞活动的影响.方法:选用小鼠胚胎干细胞模型CRL-1825细胞株,加入补肾阳中药复方大鼠含药血清,观察补肾阳中药对干细胞增殖、分化、凋亡以及相关基因表达的影响.结果:补肾阳中药可以抑制CRL-1825细胞凋亡,但对CRL-1825细胞增殖、分化无明显影响;补肾阳中药同时可促进CRL-1825细胞Notch1基因表达,相对表强度由46.33升高至102.81;补肾阳中药还可以抑制P16INK4a基因表达,相对表强度由202.11降至93.11.结论:补肾阳中药复方可以抑制CRL-1825细胞凋亡,并可能与调控Notch1、P16INK4a表达相关.
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人参皂苷Rg1延缓造血干细胞衰老与p16INK4a表达关系的研究
目的:探讨人参皂苷单体Rg1延缓造血干细胞(HSC)衰老与p16INK4a的表达调控关系,为寻找延缓HSC衰老途径提供理论和实验依据.方法:免疫磁性分选法分离纯化Sca-1+HSC后分组.对照组常规培养;衰老组运用三丁基过氧化氢(t-BHP)复制衰老模型;Rg1组在对照组基础上加入10μmol·L-1Rg1共培养;Rg1延缓衰老组给予10μmol·L-1Rg1预处理后,复制衰老模型;Rg1治疗衰老组,衰老模型复制后,给予10μmol·L-1Rg1抗衰老处理.衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)细胞化学染色、流式细胞术分析细胞周期和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养确定Rg1延缓或治疗Sca-1+HSC衰老生物学作用.RT-PCR及Western blotting检测衰老相关基因pl6INK4amRNA及蛋白的表达.结果:Rg1延缓衰老组,Rg1治疗衰老组与衰老组相比,SA-β-gal染色阳性细胞百分比降低,G1期细胞比例下降,生成造血祖细胞混合集落数增加,p16INK4amRNA及蛋白的表达下降;Rg1延缓衰老组的SA-β-gal染色阳性细胞百分比、G1期比例、pl6INK4amRNA及蛋白的表达均低于Rg1治疗衰老组,形成造血祖细胞混合集落数高于Rg1治疗衰老组.结论:Rg1具有延缓和治疗Sca-1+HSC衰老的作用,Rg1延缓衰老比治疗衰老效果更好.Rg1可能通过调控p16INK4a的表达发挥其对抗t-BHP诱导的Sca-1+HSC衰老的作用.
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中国134例黑色素瘤患者Pl6INK4a、CDK4和CCND1基因突变及其临床意义
目的 通过分析中国黑色素瘤患者P16INK4a、CDK4和CCNDl基因的突变情况,探索其可能的临床意义.方法 研究共纳入2010年1月至2014年 12月在北京肿瘤医院就诊的l34例中国黑色素瘤患者,收集其肿瘤组织切片(肢端型37例,黏膜型87例,非肢端皮肤型10例),通过PCR扩增及Sanger 测序,检测P16INK4a、CDK4和CCND1基因突变情况,并分析基因突变情况与临床预后的相关性.结果 134例黑色素瘤患者P16INK4a、CDK4和CCND1基因 突变率分别为8.2％ (11/134)、0.75％(1/134)和0％(0/134).81.8％(9/11)的P16INK4a基因突变可能影响蛋白质功能.P16INK4a野生型患者的总生存 期明显长于突变型患者(X2 = 8.872,P＜0.01).P16INK4a基因突变是影响黑色素瘤的独立预后因素(P＜0.05).结论 P16INK4a基因可能成为黑色素 瘤靶向治疗新的突破点.
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p16ink4a与Ki-67用于人宫颈病变辅助诊断的比较
目的 对p16ink4a与Ki-67作为辅助诊断人宫颈病变的两种标记物进行比较.方法 采用免疫组织化学方法,检测p16ink4a与Ki-67蛋白在42例人正常宫颈组织,21例人宫颈上皮内瘤样变(CIN)Ⅰ级、21例CINⅡ、36例CINⅢ组织中的表达,用等级相关方法分析p16ink4a、Ki-67表达水平与CIN等级之间的相关性.计算两种标记物的敏感性、特异性、阳性预测价值、阴性预测价值和约登指数.结果 p16ink4a和Ki-67表达均与CIN等级呈正相关.p16ink4a检测人宫颈病变的敏感性为83.3%,特异性为90.5%,阳性预测值为94.2%,阴性预测值为74.5%,约登指数为0.738.Ki-67检测人宫颈病变的敏感性为98.7%,特异性为16.7%,阳性预测值为68.75%,阴性预测值为87.5%,约登指数为0.154.联合使用两种标记物的敏感性、特异性均为83.3%.结论 Ki-67敏感性、阴性预测值高,但特异性差,适用于早期发现人宫颈病变.p16ink4a特异性、阳性预测值高,是辅助诊断人宫颈病变的较好指标.综合比较,p16ink4a优于Ki-67.
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p16INK4A、p53、Ki-67及ER在宫颈病变中表达的临床病理意义
目的 探讨p16INK4A、p53、Ki-67及ER在不同程度宫颈病变组织中的表达及应用组织芯片技术的可行性.方法 将104例患有宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)、尖锐湿疣以及正常宫颈的组织各集成在3张组织芯片上,用免疫组化SP法检测其p16INK4A、p53、Ki-67及ER蛋白的表达.结果 p16INK4A、p53、Ki-67及ER在宫颈鳞癌组中的阳性表达率分别为100%、83.33%、83.33%和5.56%,p16INK4A表达以强阳性为主;在CINⅢ中的阳性表达率分别为82.35%、82.35%、100%、41.18%,p16INK4A和Ki-67表达以强阳性为主;在CINⅡ中的阳性表达率分别为88.24%、76.47%、100%和47.06%,p16INK4A表达以强阳性为主;在CINⅠ中的阳性表达率分别为65%、60%、100%和80%,p16INK4A表达以弱及中等强度为主,p53、Ki-67及ER表达为弱至中等阳性;在尖锐湿疣组中的阳性表达率分别为13.64%、59.09%、18.18%和68.18%,p16INK4A、p53和Ki-67表达均以弱阳性为主,ER表达则增强至中度阳性;正常对照组只有职表达为100%,其余全部阴性.宫颈鳞癌、CINⅢ、CIN Ⅱ、CINⅠ及尖锐湿疣各组p16INK4A、p53、Ki-67及ER蛋白阳性表达率与对照组比较差异显著(P<0.05).结论 p16INK4A缺失、p53突变与宫颈浸润性鳞癌、CIN的发生、发展密切相关;p16INK4A、p53和Ki-67的升高与宫颈病变恶性程度呈正相关,ER的升高与其呈负相关;组织芯片技术完全可以用于子宫颈病变方面的研究.
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喉鳞状细胞癌中p16INK4a基因甲基化状况及表达
目的 研究喉鳞状细胞癌p16INK4a基因启动子区域5'CpG岛的甲基化状况,探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床病理指标的关系.方法 采用甲化特异性PCR检测30例喉鳞状细胞癌及15例远离肿瘤的正常喉黏膜p16INK4a基因启动子区域5'CoG岛的甲基化状况,并应用免疫组化EnVision法检测p16INK4a蛋白的表达情况.结果 30例喉鳞状细胞癌中p16INK4a基因启动子区5'CpG岛甲基化率76.7%(23/30);p16INK4a蛋白缺失率为93.3%(28/30).15例正常喉黏膜中未检测到p16INK4a基因异常甲基化,而且其相应蛋白表达均为阳性.p16INK4a基因甲基化状况与其蛋白表达和临床分期密切相关.结论 p16INK4a基因5'CoG岛异常甲基化在喉鳞状细胞癌中频率很高,可能在喉癌发生、发展中扮演重要角色;而且这可能是一个早期事件,其临床早期诊断和基因治疗意义均值得进一步深入探讨.
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p16INK4a和Ki-67免疫细胞化学染色在宫颈液基细胞学中的应用价值
目的 探讨液基细胞学检测(LCT)剩余细胞学标本中p16INK4a、Ki-67的免疫细胞化学染色筛查宫颈鳞状细胞癌和宫颈癌前病变的价值.方法 采用免疫细胞化学和免疫组化法对194例细胞学标本和91例组织活检标本进行p16INK4a、Ki-67检测.结果 p16INK4a、Ki-67表达阳性率随着宫颈病变程度的加重而升高,与病变级别呈正相关.Ki-67的标记指数(LI)在HSIL组高,与其他各组间均数的差异显著(P＜0.05).LSIL及其以上病变细胞学p16INK4a和Ki-67与组织学诊断符合率分别为87.3％和80.95%.宫颈脱落细胞学Ki-67、p16INK4a的免疫细胞化学染色检出高级别病变及鳞癌病变的敏感度、特异度分别为83.6％、86.7％和87.1％、100％. 结论 利用LCT液基细胞学涂片中p16INK4a、Ki-67的免疫细胞化学染色作为辅助诊断指标应用于宫颈癌高危人群筛查,具有重要意义.
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pEGFP-BMI-1真核表达载体的构建、鉴定及其表达
本研究构建真核表达载体pEGFP-BMI-1并观察其在HeLa细胞中的表达.将BMI-1逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)产物克隆入pEGFP-N1,经酶切、PCR鉴定及测序分析,构建pEGFP-BMI-1真核表达载体;采用脂质体转染法,将融合基因pEGFP-BMI-1转入HeLa细胞,用荧光显微镜和Western blot检测其表达,SYBR Green I实时定量RT-PCR方法检测转染前后HeLa细胞中P16INK4amRNA的表达变化.结果表明:重组后的pEGFP-N1质粒已成功载入BMI-1的全长编码基因,序列测定的结果与预期设计完全一致.荧光显微镜下可见在转染pEGFP-BMI-1的HeLa细胞中存在荧光分布;Western blot检测发现存在外源性融合蛋白BMI-1-EGFP的表达.在HeLa细胞中过表达BMI-1显著下调P16INK4amRNA的表达为对照组的9.2%(p＜0.01).结论:成功构建了真核表达质粒pEGFP-BMI-1,转染HeLa细胞后可表达融合蛋白BMI-1-EGFP.这为今后研究BMI-1在肿瘤发生发展中的机制奠定了基础.
关键词： pEGFP-BMI-1 BMI-1 基因转染 Hela细胞 p16INK4a -
P16ink4a、Ki67蛋白联合检测在HPV持续感染的宫颈病变早期诊断中的临床意义
目的 探讨P16ink4a、Ki67蛋白在宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈癌早期诊断及预防治疗中的临床意义.方法 采用免疫组化技术SP法检测205例CIN(包括CINⅠ级,CINⅡ级,CINⅢ级)和18例宫颈鳞癌的P16ink4a和Ki67蛋白的表达情况,采用杂交捕获二代法(HC2)检测HPV-DNA感染程度.分析P16ink4a和Ki67蛋白表达联合监测HPV持续感染(HPV持续感染指第二次检出HPV阳性距离第一次超过12个月)与宫颈病变程度预后的相关性.结果 CINⅠ病例组中的HPV持续感染率比CINⅡ~Ⅲ病例组及宫颈鳞癌组较高,且宫颈鳞癌组的HPV持续感染率较CINⅡ~Ⅲ组高,差异有统计学意义(P<0.05);P16ink4a蛋白、Ki67蛋白阳性率均随着宫颈病变程度加重而升高,差异有统计学意义(P<0.05),但宫颈鳞癌组中P16ink4a蛋白阳性率之和与CINⅡ~Ⅲ组相近;HPV持续感染组中P16ink4a蛋白、Ki67蛋白表达率、及P16ink4a蛋白、Ki67蛋白联合表达率较HPV转阴组升高,差异均有统计学意义;联合监测HPV-DNA及P16ink4a蛋白、Ki67蛋白的表达有助于正确诊断宫颈鳞癌,其灵敏度达55.56%,特异度达78.05%,曲线下面积达0.984.结论 P16ink4a蛋白在宫颈病变及宫颈癌组织中呈过表达,可作为宫颈癌早期筛查和诊断的分子生物学指标之一,能有效分流不同宫颈瘤变级别的患者,对临床监测和治疗具有指导意义. Ki67能区分宫颈高度病变与宫颈癌,但不能区分宫颈良性病变与宫颈低度病变,需结合P16ink4a蛋白联合判断.HPV持续感染患者中联合监测P16ink4a、Ki67蛋白则能尽早准确诊断宫颈癌变.
关键词： p16INK4a Ki67 宫颈疾病/诊断/代谢 人乳头瘤病毒 -
Bmi-1基因对胃癌细胞增殖的影响及机制
目的:探索干扰Bmi-1基因后对其可能的下游基因Akt/PKB活性和P16INK4a基因表达的影响及对肿瘤细胞增殖和细胞衰老的作用.方法:用s iRNA技术干扰Bmi-1表达后,运用Western blot检测Bmi-1蛋白及相关蛋白pAkt、Akt和P16INK4a的表达,同时进行SA-β-Gal染色检测细胞衰老,软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖能力.结果:转染Bmi-1 i质粒组平均细胞衰老率28%±3.5%,而对照Ctrl i组为16%±2.7%,有明显统计学差异( P<0.01).转染Bmi-1 i质粒组细胞平均克隆形成数为3.4±1.4个,而对照Ctrl i组为11±2.3个,两组比较有明显的统计学差异( P<0.01).Bmi-1 i 组较Ctrl i 组Bmi-1和pAkt蛋白表达明显下降,而P16INK4a蛋白表达升高.结论:干扰Bmi-1可以通过降低Akt/PKB活性和上调P16INK4a蛋白表达,促进肿瘤细胞衰老并减弱肿瘤细胞的增殖能力.
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大肠癌胃泌素、生长抑素的表达及比势与细胞周期调控基因的相关性
目的:探讨大肠癌组织中胃泌素(GAS)、生长抑素(SS)的表达及其比势与细胞周期调控蛋白P16INK4a、P21CIP1及细胞周期素(Cyclins)、细胞周期依赖性蛋白激酶(CDKs)表达的关系.方法:随机选择79例大肠癌患者的手术切除标本,采用免疫组化SP法检测GAS、SS、P16INK4a、P21CIP1、Cyclin D1、Cyclin E、Cyclin A、Cyclin B1、CDK2、CDK4的表达情况.结果:Cyclin D1、CDK2、CDK4、Cyclin A在GAS高表达组、中表达组的阳性表达率明显高于低表达组;而P16INK4a、P21CIP1阳性表达率与此相反.Cyclin E在SS低表达组的阳性表达率明显高于中表达组、高表达组;P21CIP1在SS高表达组、中表达组的阳性表达率明显高于低表达组;CDK2在SS低表达组的阳性表达率明显高于SS高表达组.大肠癌组织中GAS、SS表达的积分比值(GAS/SS)与Cyclin D1(r=0.252)、Cyclin E(r=0.387)、Cyclin A(r=0.466)、CDK2(r=0.519)、CDK4(r=0.434)呈正相关(P＜0.01)与P16INK4a(r=-0.385)、P21CIP1(r=-0.454)蛋白的表达积分呈负相关(P＜0.01).结论:GAS、SS对大肠癌细胞生长的调控可能与P16INK4a、P21CIP1、Cyclin Dl、CyclinA、CDK2、CDK4、Cyclin E基因异常表达有关.GAS对大肠癌细胞周期的调控位点可能在Gl、S、G2期,SS对大肠癌细胞周期的调控位点可能在G1/S、G2/M期的交界点,即S、M期的入口.对大肠癌GAS/SS积分比值分析,可作为临床大肠癌生物学行为的重要评估指标.
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P16INK4a和Fas在椎间盘组织细胞中的表达及意义
目的:分析衰老关键基因p16INK4a及凋亡相关基因Fas在人类椎间盘退变过程中的表达变化.方法:分别取正常人和腰椎间盘退变患者的髓核及纤维环组织块制作石蜡切片,利用免疫组织化学及免疫荧光法检测p16INK4a和Fas的表达情况;提取总蛋白及总RNA,利用Western blot及RT-PCR对p16INK4a和Fas的表达以及视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)的磷酸化状态进行分析.结果:p16INK4a在正常人椎间盘髓核及纤维环组织中的表达阳性率分别为6.6%、4.7%,在内破裂椎间盘(IDD)及突出椎间盘(LIDP)组织中的表达分别为44.1%、38.9%和56.1%、46.7%,较正常人椎间盘明显升高(P＜0.05),尤以LIDP中的表达上调显著(P＜0.05);Fas在正常椎间盘与IDD的髓核及纤维环组织中的表达阳性率均较低,分别为9.9%、8.1%和10.2%、10.9%,在LIDP组织中有相对较高表达阳性率,分别为25.2%和22.0%;Western blot及RT-PCR分析显示,p16INK4a与Fas在各自蛋白及相应mRNA水平上的表达具有相同的变化趋势;p16INK4a与Fas极少在同一个椎间盘细胞内表达;随着p16INK4a表达的升高磷酸化pRb也逐渐减少.结论:p16INK4a可能参与了椎间盘细胞的衰老过程,是导致椎间盘退变发生和发展的原因之一;Fas表达升高可能是突出椎间盘细胞中的一种继发改变.
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HPV16感染的宫颈鳞癌中微小染色体维持蛋白-5和P16INK4A表达的研究
目的 探讨微小染色体维持蛋白-5 (MCM5)与P16INK4A在HPV16感染的宫颈鳞癌中表达及意义.方法 采取实时荧光定量PCR及免疫组化,测定存在HPV16感染的正常宫颈、CIN1、CIN 2/3及宫颈鳞癌组织中MCM5、P16INK4A的mRNA、蛋白表达情况.结果 ①MCM5 mRNA及蛋白在HPV16感染的不同程度宫颈病变组织中表达趋势一致,随CIN程度的增加表达增高.MCM5 mRNA及蛋白在鳞癌中表达显著较各级别上皮内病变及正常组织高(P＜0.01).MCM5蛋白的表达和年龄无关联(P＞0.05);与病理分级、临床分期相关(P＜0.01);②不同程度宫颈病变中P 16INK4AmRNA、蛋白表达趋势一致,随CIN程度增加表达增高.P16INK4A mRNA及蛋白在鳞癌中的表达明显高于正常及CIN 1组织(P＜0.01);和CIN2/3之间差异无统计学意义(P＞0.05).P16INK4A蛋白在宫颈癌中的表达和患者年龄及临床分期没有关联(P＞0.05);和病理分级有关(P＜0.01);③MCM5和P16IK4A蛋白表达呈正相关(r---0.497,P＜0.01).结论 宫颈鳞癌中MCM5和P16INK4A存在高表达,可能与其发生、进展相关.MCM5可较好的反映宫颈的恶性增生,与P16INK4A联合检测对于完善CIN分级及预后的判断具有一定的参考价值.
关键词： 宫颈鳞癌 p16INK4a 微小染色体维持蛋白5 -
p16INK4A、p53、Ki-67及ER在宫颈病变组织中的表达及其相关性研究
目的 探讨p16INK4A、p53、Ki-67及雌激素受体(ER)在不同程度宫颈病变中表达及相关性.方法 采用SP法检测宫颈鳞状细胞癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)、尖锐湿疣及正常宫颈组织中p16INK4A、p53、Ki-67及ER蛋白的表达.结果 p16INK4A、p53、Ki-67及ER在宫颈鳞癌组中的阳性率分别为100%、86.4%、86.4%及4.6%;在CIN Ⅲ中为92.5%、75.0%、100%、20.0%;在CIN Ⅱ中为90.5%、64.3%、100%及23.9%;在CINⅠ中为71.8%、43.6%、100%、79.5%;在尖锐湿疣组中为39.0%、43.9%、26.9%、61.0%.p16INK4A在宫颈鳞癌、CIN Ⅲ、Ⅱ组中,以强阳性表达为主;尖锐湿疣组仅为弱阳性表达.Ki-67在宫颈鳞癌、CINⅢ组中,以强阳性表达为主.宫颈鳞癌、CINⅢ、Ⅱ、Ⅰ、尖锐湿疣中p16INK4A、p53、Ki-67、ER阳性表达率与对照组比较差异有高度显著性(P＜0.05).结论 p161NK4A、p53蛋白高表达与宫颈鳞癌、CIN的发生发展密切相关;p16INK4A、p53、Ki-67阳性率与宫颈病变严重程度呈正相关,ER的阳性率与其呈负相关.
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宫颈上皮内瘤变p16INK4a和p53及Ki-67表达及其诊断价值探讨
目的:探讨用p16和p53及Ki-67等免疫组化标记作为宫颈上皮内瘤变(CIN)诊断的辅助指标.方法:选取我院档案CIN患者133例,年龄20～86岁,中位年龄46岁.经3位高年资病理医师复查确认,其中CIN 1级31例、CIN 2级37倒和CIN 3级65例.另选同期我院宫颈慢性炎患者19例,浸润性鳞状细胞癌患者20例作为对照.采用SP法进行p16、p53和Ki-67免疫组化染色,结果独立评分.各级别CIN与免疫组化表达的关系采用单变量x2检验和Spearman等级相关分析.结果:p16阳性表达位于细胞核或胞核伴胞质,p53和Ki-67定位于细胞核.p16、p53和Ki-67表达阳性率随着CIN的加重而升高,均与CIN级别呈正相关,r值分别为0.789、0.554和0.749,P＜0.001.153例CIN 1+标本中p16、p53和Ki-67与组织学诊断符合率分别为96.7％(148/153)、71.9％(110/153)和 88.2％(135/153).在102例CIN 2+标本中,p16、p53和Ki-67免疫组化染色的敏感性分别为97.1％(99/102)、74.5％(76/102)和97.1％(99/102)；特异性分别为94.7％(18/19)、84.2％(16/19)和73.7％(14/19).p16、p53和Ki-67 3者联合在CIN 2+中的敏感性和特异性分别为98.0％(100/102)、68.4％(13/19).结论:在宫颈活检的组织学评价时,结合p16、p53和Ki-67免疫组亿柒色,对提高高级别CIN的捡出率、减少漏诊有很大作用.
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苦参碱对BBN诱发大鼠膀胱癌发生发展作用及其机制探讨
目的 研究苦参碱对N-丁基-N-(4-羟丁基)亚硝基胺(BBN)致大鼠膀胱癌发生发展的影响及其分子机制.方法 雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为空白对照组、BBN组(模型组)、阳性药物对照组[塞来昔布500 mg/(kg· d)]、苦参碱50、100和200 mg/(kg·d)剂量组6组.采用BBN诱发大鼠膀胱癌,苦参碱灌胃给药35周,病理学观察膀胱组织形态,免疫组织化学法和蛋白质印迹法分别检测膀胱组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EG-FR)蛋白表达和细胞周期调控通路p16INK4a/Cyclin D1/CDK4各蛋白的表达.结果 BBN组、塞来昔布组、苦参碱组膀胱癌的发生率没有显著性变化,差异无统计学意义,P=0.068.在确诊的膀胱癌组织中,与BBN组相比,苦参碱组浸润性膀胱癌的发生率明显降低,x2=6.065,P=0.014.免疫组织化学法检测结果显示,BBN组EGFR蛋白表达评分为3.845±0.972,与50 mg/kg苦参碱的2.691±1.045(P=0.036)、100 mg/kg苦参碱的2.230±0.748(P=0.029)和200 mg/kg苦参碱的2.739±0.814(P=0.041)比较,差异有统计学意义.蛋白质印迹法检测结果显示,大鼠膀胱组织p16INK4a蛋白平均表达量苦参碱200 mg/kg组(0.448 6±0.195)较BBN组(0.303 8±0.183)上调,P=0.045;Cyclin D1蛋白的平均表达量苦参碱50 mg/kg组(0.448 0±0.236)和200 mg/kg组(0.389 2±0.242)较BBN组(0.630 2±0.221)下降,P值分别为0.018和0.010;CDK4蛋白的平均表达量苦参碱200 mg/kg组(0.648 4±0.366)较BBN组(0.913 3±0.312)下降,P=0.041.结论 苦参碱对BBN诱导的大鼠膀胱癌的发生无抑制作用,但可抑制其向浸润进展,其作用机制可能与抑制大鼠膀胱组织EGFR蛋白的表达及对p16INK4a/Cyclin D1/CDK4细胞周期调控通路的调控有关.
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宫颈癌前病变及宫颈癌组织Survivin和p16INK4A及p53表达的研究
目的:探讨Survivin、p16INK4A和p53与宫颈癌前病变及宫颈癌的关系及临床病理关系.方法:应用免疫组化EnVision法,检测107例宫颈癌、86例宫颈癌前病变(CIN)及35例宫颈炎组织中Survivin、p16INK4A和p53表达水平,并加以分析.结果:在35例宫颈炎、86例宫颈CIN、107例宫颈癌中,Survivin阳性表达率分别为0、48.8%(42/86)和88.9%(72/81);p53阳性表达率分别为2.8%(1/35)、40.7%(35/86)和83.9%(68/81),两者均呈增高趋势,而p16INK4A 的阳性表达率降低,分别为94.3%(33/35)、59.3%(51/86)和28.4%(23/81),三组间两两比较差异有统计学意义,P＜0.01.Survivin、p16INK4A表达在子宫颈癌的FIGO分期、间质浸润深度及淋巴结是否转移的表达,差异有统计学意义,P＜0.05;p16INK4A还在宫颈癌组织学分级间阳性表达,差异有统计学意义,P＜0.05;p53在组织学类型及分级中其阳性表达,差异有统计学意义,P＜0.05.结论:Survivin、p16INK4A和p53异常表达参与了宫颈癌的发生发展过程,其阳性表达可作为检测宫颈癌前病变的生物标志,并可用于判断宫颈癌患者的预后.
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p16INK4a在宫颈液基细胞学辅助筛查中的标记意义
目的 评价p16INK4a在宫颈液基细胞学检查中的标记意义.方法 收集74例宫颈外口和颈管的脱落细胞标本,分别进行液基细胞学检测和p16INK4a免疫细胞化学染色,并应用杂交捕获二代法检测高危人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染.结果 74例标本中,细胞学诊断未见癌细胞或癌前病变细胞(阴性)10例,意义不明的不典型鳞状细胞(ASC-US)15例,鳞状上皮内低度病变(LSIL)28例,不除外上皮内高度病变的不典型鳞状细胞(ASC-H)5例,鳞状上皮内高度病变(HSIL)11例,鳞状细胞癌(SCC)5例.各级别病变中,HR-HPV阳性者分别为1、4、3、9、7和5例,p16INK4a免疫细胞化学染色阳性者分别为2、5、3、8、9和5例.随着宫颈病变级别的上升,HR-HPV和p16INK4a免疫细胞化学染色阳性率均增高.结论 p16INK4a免疫细胞化学染色增强了对不典型细胞的区分能力,可以提高宫颈癌筛查的准确性.
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p16INK4a免疫细胞化学检测在筛查宫颈癌中的作用
目的 探讨p16INK4a免疫细胞化学检测在筛查宫颈癌及其癌前病变中的作用.方法 选择220例宫颈液基细胞学剩余标本,制作液基薄片进行p16INK4a免疫细胞化学检测,随访组织活检结果,并与高危人乳头瘤病毒(HR-HPV)DNA检测结果进行对照.结果 p16INK4a在宫颈细胞学诊断的鳞状细胞癌(SCC)、鳞状上皮内高度病变(HSIL)、鳞状上皮内低度病变(LSIL)、非典型鳞状细胞-不除外上皮内高度病变(ASC-H)和非典型鳞状细胞-不能明确意义(ASC-US)病例的阳性表达率分别为100.0%(7/7)、92.2%(107/116)、24.3%(17/70)、100.0%(14/14)和36.4%(4/11).150例p16INK4a阳性者中,111例有组织活检诊断,其中宫颈上皮内瘤变(CIN)2级及以上病变者97例(87.4%);70例p16INK4a阴性者中,18例有组织活检诊断,无一例CIN2及以上病变.p16INK4a在CIN2及以上病变与在CIN1之间的阳性表达率差异有统计学意义(P＜0.01),而HR-HPV DNA的阳性率在两者之间差异无统计学意义.结论 p16INK4a在宫颈HSIL及以上病变中高表达,有利于高危病例的筛选.
