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植物类雌激素杨梅素对结肠癌细胞系RKO生长的影响
目的 检测一种植物类雌激素杨梅素对人结肠癌细胞系RKO生长的影响,并初步探讨其作用机制. 方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测杨梅素对RKO细胞系生长的影响;流式细胞仪技术检测杨梅素对细胞周期的影响;半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)确定杨梅素对抑癌基因p16INK4a表达的影响. 结果 MTT法显示杨梅素处理组对结肠癌细胞系生长有明显抑制作用;流式细胞仪分析结果显示,经杨梅素处理后RKO细胞周期明显阻滞在G0/G1期;RT-PCR结果显示杨梅素恢复了RKO细胞系p161NK4a的转录. 结论 杨梅素对RKO细胞系生长有明显的抑制作用,杨梅素可能通过上调抑癌基因p16INK4a的表达使RKO细胞周期阻滞于G0/G1期.
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杨梅素对小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制研究
目的 观察杨梅素对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的影响,探讨其作用机制.方法 将72只小鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、杨梅素组、阳性对照组,每组18只.杨梅素组小鼠腹腔注射杨梅素生理盐水溶液50 mg/kg,阳性对照组小鼠腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液5 mg/kg,正常组、模型组小鼠腹腔注射等体积生理盐水.给药后1 h,小鼠于鼻腔滴注0.2 mg/ml的脂多糖溶液,50μl/只,建立急性肺损伤小鼠模型.造模后24 h取材,采用ELISA测定小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)上清中TNF-α和IL-1β水平,采用细胞分类计数法分析BALF中细胞总数、巨噬细胞和中性粒细胞的数目;检测BALF总蛋白含量及肺湿干重比值,检测肺组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)水平,采用HE染色观察肺组织病理学改变,采用Western blot法检测核因子 κB抑制蛋白(inhibitor of NF-κB,IκB)、p-IκB、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达.结果 与模型组比较,杨梅素组、阳性对照组小鼠BALF中炎性细胞总数、巨噬细胞和中性粒细胞数量降低(P<0.01);BALF总蛋白水平、肺湿干重比值降低(P<0.05);BALF中TNF-α[(5.47±2.54)pg/ml、(4.19±0.50)pg/ml比(15.28±1.27)pg/ml]和IL-1β[(336.20±41.06)pg/ml、(247.99±25.12)pg/ml比(464.88±34.51)pg/ml]水平降低(P<0.01);肺组织MPO[(0.74±0.12)U/g、(0.61±0.08)U/g比(1.66±0.07)U/g]水平降低(P<0.01);肺组织p-IκB/IκB[(0.61±0.01)、(0.59±0.01)比(0.95±0.01)]、p-NF-κB/NF-κB[(0.54±0.01)、(0.59±0.03)比(0.96±0.02)]表达降低(P<0.01).结论 杨梅素可减轻炎症反应,保护脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤,机制可能与其影响NF-κB信号转导通路的激活有关.
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栽培藤茶中功能性成分动态变化
目的:考察不同采摘时期的两年生栽培藤茶中几种功能性成分多糖、总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素的含量动态变化.方法:以蒸馏水为溶剂恒温(90℃)回流提取栽培藤茶中的功能性成分;以苯酚-硫酸比色法、三氯化铝比色法分别在紫外-可见分光光度仪490,318 nm下测定不同采摘时期的两年生栽培藤茶中多糖、总黄酮的含量;采用Dikma ODS C18色谱柱,以甲醇/乙腈(5∶11)-0.1％磷酸水溶液(80∶20)为流动相,流速1 mL· min-1,在HPLC色谱仪紫外检测波长为292,370 nm处分别对二氢杨梅素和杨梅素进行含量测定,柱温为40℃.结果:不同采摘时期的两年生栽培藤茶中多糖、总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素的含量差别比较明显,其中多糖以8,9月份含量高,分别为2.46％和2.41％;总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素的含量均是4月份达到高,分别为8.74％,4.69％,0.18％.结论:本实验所建立的测定不同采摘时期栽培藤茶中4种功能性成分含量变化的分析方法可行,结果可靠,能明确栽培藤茶中这4种功能性成分含量达到高的佳采收时期.
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HPLC测定刺梨中杨梅素和槲皮素的含量
目的:建立同时测定中药刺梨中杨梅素和槲皮素含量的HPLC分析方法.方法:采用Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm× 150 mm,5 μm),以甲醇-0.4％磷酸溶液为流动相,流速1.0 mL.min-1；检测波长368 nm.结果:杨梅素和槲皮素分别在0.036 2 ～0.253 7μg,0.056～0.196 μg峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9999);平均加样回收率分别为98.32％,98.84％,RSD分别为2.18％,1.78％.结论:该方法简便、准确、重现性好,可用于中药刺梨的质量控制.
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杨梅素联合围脂滴蛋白基因沉默促进前脂肪细胞系3T3-L1的降脂
目的 探讨杨梅素(Myric)与围脂滴蛋白(PLIN1)基因沉默对3T3-L1脂肪细胞脂解通路的影响.方法 采用经典"鸡尾酒"方法诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,筛选出杨梅素佳干预浓度和时间.杨梅素联合sh-PLIN1干扰载体对成熟的脂肪细胞进行干预,实验共分为4组:对照组(control group)、转染组(sh-RNA group)、杨梅素组(Myric group)和联合干预组(Myric+sh-RNA group).油红O染色脂滴,观察脂滴形态;Western blot检测细胞中ERK、p-ERK、MEK、p-MEK和激素敏感性脂肪酶磷酸化蛋白(p-HSL)的表达;ELISA测定细胞中环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)和磷酸化的蛋白激酶C(p-PKC)的含量.结果 与Myric组和sh-RNA组相比,Myric+sh-RNA组脂滴形态变小,数量明显减少.与sh-RNA组和对照组相比,Myric+sh-RNA组和Myric组细胞内p-PKC含量、p-ERK/ERK和p-MEK/MEK的比值以及p-HSL表达显著升高(P<0.05).同时,Myric+sh-RNA组和Myric组细胞内cAMP和PKA含量低于sh-RNA组和对照组(P<0.05).结论 杨梅素的促脂解作用可能是通过激活PKC-MEK/ERK信号通路,增加该通路中p-HSL的表达量来实现的;杨梅素同时可能对cAMP/PKA信号通路中相关因子的活性有一定的抑制作用.
关键词： 杨梅素 PLIN1沉默 3T3-L1脂肪细胞 脂解机制 -
杨梅素的研究进展
杨梅素是一种广泛存在于杨梅等多种天然植物中的黄酮醇类化合物,具有抗炎镇痛、抗肿瘤、降血糖、保肝等多种药理活性,显示出丰富的资源优势和巨大的潜在利用价值.本文从杨梅素的药理作用、体内过程、分析方法、制剂现状等方面进行综述,以期对今后杨梅素的研究开发有所裨益.
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杨梅素对血小板活化因子拮抗的作用
目的 研究杨梅素对血小板活化因子(PAF)的拮抗作用.方法 以放射配体结合试验观察[3H]PAF与家兔血小板受体特异性结合的作用;以分光光度法测定PAF诱发血小板粘附的强度;以Fura-2荧光分光光度法测定兔多形核白细胞(PMNs)内钙离子浓度.结果 杨梅素可浓度依赖地抑制[3H]PAF与血小板受体的特异性结合,其IC50分别为 34.8,85.7和118.6 μmol*L-1;该药可明显抑制PAF诱发的血小板粘附及PMNs内游离钙浓度的升高,且呈明显的量效关系,其抑制血小板粘附的IC50为 13.1 μmol*L-1.结论 杨梅素具有抗PAF作用,为一新的PAF受体拮抗剂.
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红花黄酮成分抑制血小板激活因子介导的血小板活化作用
目的观察红花黄酮成分杨梅素(Myr)和山奈酚(Kae)对血小板激活因子(PAF)诱导的兔洗涤血小板聚集、5-HT释放及血小板内游离钙离子浓度升高的影响.方法以比浊法测定家兔洗涤血小板(WRP)聚集,邻苯二甲醛(OPT)荧光法测定5-HT浓度,Fura-2 荧光探针测定血小板内游离钙离子浓度.结果 Myr和Kae体外呈浓度依赖性地抑制PAF诱发的WRP聚集及5-HT释放.Myr抑制WRP聚集的IC 50为17.5 μmol·L-1;抑制5-HT释放的IC50为64.1 μmol·L -1.Kae抑制聚集、释放作用的IC50分别为73.7 μmol·L-1和128 μmol·L-1;同时Myr和Kae均能明显抑制PAF引起的血小板内游离钙增高.结论 Myr和Kae可抑制PAF诱导的血小板活化作用.
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粗根老鹳草化学成分的研究
老鹳草为传统中药,有祛风湿、通经络、止泄痢的功效,其单味制剂老鹳草软膏有消炎解毒、收敛生肌的作用[1].
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杨梅素诱导人肝癌HepG2凋亡机制研究
目的 对杨梅素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡机制进行研究.方法 采用MTT法测定细胞死亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;用琼脂糖电泳观察DNA片段化.用Western印迹法分析相关蛋白的变化. 结果杨梅素明显抑制HepG2细胞的增殖,诱导HepG2细胞调亡.Caspase-3,caspase-9抑制剂可明显抑制100 μg/ml杨梅素诱导的凋亡.Western印迹结果显示100 μg/ml杨梅素作用于细胞后,细胞色素c水平明显升高. 结论杨梅素(100 μg/ml)通过激活线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡.
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显齿蛇葡萄化学成分研究
目的 研究显齿蛇葡萄的化学成分.方法 应用硅胶、聚酰胺、反相硅胶、Sephadex LH-20柱色谱和硅胶制备薄层色谱进行分离纯化, 根据理化常数和光谱分析鉴定结构.结果 从显齿蛇葡萄中分离并鉴定了4个黄酮类化合物: 二氢杨梅素(1), 杨梅素(2), 杨梅苷(3), 杨梅素-3-O-β-D-半乳糖苷 (4).结论 其中化合物4为首次从该属植物中分离得到,根据2D NMR正确归属了化合物1的1H and 13C NMR数据.
关键词： 显齿蛇葡萄 二氢杨梅素 杨梅素 杨梅苷 杨梅素-3-O-β-D-半乳糖苷 -
LC-MS/MS同时测定小鼠血浆中二氢杨梅素和杨梅素及其组织分布研究
目的 首次建立同时测定藤茶中二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)和杨梅素(myricetin,MY)的LC-MS/MS,并将其运用到DMY和MY的小鼠体内组织分布研究.方法 ICR小鼠分别灌胃给药144.4 mg·kg-1DMY和MY后处死,采集血、心、肝、脾、肺、肾、脑组织,采用蛋白沉淀法处理样本,Ultimate@AQ-C18(3.0 mm×100 mm,3.0μm)色谱柱进行分离来测定各组织中的药物浓度,并进行数据整理与分析.结果 方法学考察的精密度、准确度、基质效应和萃取回收率等均能符合生物样品分析的要求.组织分布结果表明,DMY和MY体内吸收较快,肝组织中DMY和MY的大达峰浓度高于其他组织,DMY的血药浓度和组织分布浓度总体上均要高于MY.结论 本实验建立的同时测定各组织中的DMY和MY药物浓度的LC-MS/MS具有快速、稳定、专属性高的特点,其组织分布研究结果为进一步的开发与临床应用DMY和MY提供了参考.
关键词： 液相色谱-二级质谱联用 二氢杨梅素 杨梅素 藤茶 组织分布 -
榉树叶黄酮类化学成分的研究
目的 研究榉树(Zelkova serrata)叶中黄酮类化合物的化学成分.方法 榉树叶体积分数70％乙醇回流提取物经过硅胶色谱柱色谱、聚酰胺色谱柱色谱、制备薄层色谱及其他分离手段分离纯化,根据化合物理化性质和波谱数据鉴定结构.结果 分离得到8个黄酮类成分,分别鉴定为杨梅素(1),二氢杨梅素(2),槲皮素(3),杨梅苷(4),杨梅素-3-O-β-D-吡喃木糖苷(5),槲皮素-3-O-β-D-吡喃木糖苷(6),槲皮苷(7)和芦丁(8).结论 所获得的8个成分均为首次从榉树叶中分离得到.
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杨梅素对乙酸铅所致雄性小鼠生精障碍的影响
目的 研究杨梅素(myricetin)对乙酸铅所致雄性小鼠生精障碍的影响,并探讨其作用机制.方法 采用腹腔注射乙酸铅(20 mg· kg-1)连续7d建立雄性小鼠生精障碍模型,自造模第2天开始,杨梅素低、中、高剂量组分别灌胃杨梅素(100、200和400 mg· kg-1),连续42 d.观察雄性小鼠的精子密度、精子畸变率变化,检测睾丸组织中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)水平及血清中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的变化,并观察睾丸组织的病理改变.结果 与模型组相比,杨梅素各剂量组的精子密度增高、精子畸变率降低,杨梅素各剂量组睾丸组织中LDH的活性增高、NO的含量降低,杨梅素中、高剂量组睾丸组织中TNF-α含量降低,杨梅素各剂量组血清中MDA含量降低,同模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).睾丸组织镜下观察:模型组生精上皮变薄,生精细胞层次和数量减少,生精小管腔见少量精子形成,而杨梅素中、高剂量可改善乙酸铅所致的睾丸组织改变.结论 杨梅素对乙酸铅所致雄性小鼠生精障碍具有一定改善作用,作用机制可能与降低NO水平,抑制炎症介质产生及抗氧化相关.
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HPLC法同时测定蒙药复方森登-4中栀子苷、芦丁及杨梅素的含量
目的 建立HPLC法测定蒙药复方森登-4中栀子苷、芦丁及杨梅素的含量.方法 采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Hypersil ODS 25 μm(4.6 mm×250 μm)谱柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱；流速0.1 mL/min,检测波长:栀子苷为240 nm,芦丁和杨梅素为300 nm,柱温30℃.结果 栀子苷线性范围为0.64 ～6.40 μg(r =0.999 9),平均加样回收率为100.19％ (RSD=0.61％)；芦丁的线性范围为0.024～0.240 μg(r=0.999 9),平均加样回收率为99.20％(RSD=2.01％)；杨梅素的线性范围为0.472～4.720 μg(r=0.999 9),平均加样回收率为98.76％(RSD=1.98％).结论 所建立HPLC法可同时测定蒙药复方森登-4中栀子苷、芦丁及杨梅素的含量.该方法简便、快速、准确,重现性好,可作为复方森登-4的质量控制方法.
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蒙药复方森登-4特征图谱及其中6个指标性成分的含量测定
目的：建立蒙药复方森登-4特征图谱及同时测定其中没食子酸、京尼平-1-β-D-龙胆二糖苷、栀子苷、（2 R，3 R）-双氢杨梅素、芦丁、杨梅素6个成分含量的方法。方法采用高效液相色谱‘HPLC’法。蒙药复方森登-4特征图谱色谱系统：用Extend-C18色谱柱（250 mm ×4．6 mm，5μm），以乙腈（A）－0．6％磷酸水溶液（B）为流动相，流速为1 mL／min，检测波长为254 nm，柱温为25℃，进样量为10μL。蒙药复方森登-4中6个成分含量测定色谱系统：用Extend-C18（250 mm ×4．6 mm，5μm）色谱柱，以乙腈（A）－0．6％磷酸水溶液（B）为流动相，流速为0．5 mL／min，检测波长为254 nm和292 nm，柱温为27℃，进样量为10μL。结果蒙药复方森登-4特征图谱共检出90多个峰，与标准品HPLC图谱比对，共指认出10个峰，其中6个峰可以含量测定。经后续HPLC含量测定，6个成分的含量均在线性范围内，并与其各自峰面积积分值呈良好的线性关系（均 r ＝0．9999）；平均回收率在98．29％～103．75％之间，RSD为1．44％～2．97％。结论本法准确、简便、重复性好，可作为蒙药复方森登-4的质量控制方法。
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杨梅素对HepG2细胞凋亡的影响
目的：探讨杨梅素对人肝癌细胞系 HepG2凋亡的影响及其机制。方法以不同浓度的杨梅素孵育HepG2细胞，在不同时间分别采用倒置显微镜观察细胞形态学变化；采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率；采用乳酸脱氢酶（LDH）活力定量测定试剂盒测定细胞上清液LDH活性；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡途径关键蛋白的表达。结果杨梅素对HepG2细胞的凋亡诱导作用呈现剂量和时间依赖性。杨梅素作用于HepG2细胞，随杨梅素浓度增加，细胞凋亡率增加。与正常对照组相比，100μmol/L杨梅素作用于HepG2细胞24 h后，细胞存活率明显降低[（100.02±5.97）%vs.（71.60±3.75）%，P=0.006]；早、晚期细胞凋亡率明显升高[（10.19±2.61）%vs.（2.52±2.05）%，P=0.003；（11.71±3.34）%vs.（3.69±1.13）%，P=0.004]，差异均有统计学意义。随杨梅素浓度增加，线粒体途径的促凋亡因子BAX蛋白表达量增加，而抗凋亡因子BCL-2蛋白表达量降低。结论杨梅素能够诱导HepG2细胞凋亡，可能具有潜在的抗肝癌活性；线粒体途径在此过程中起重要作用。
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杨梅素抗肝肿瘤细胞HepG2作用及其机制的研究
目的 探讨杨梅素对肝癌细胞HepG2的生长抑制和诱导凋亡作用及其作用机制.方法 应用甲基噻唑蓝(MTT)比色法,测定杨梅素对HepG2细胞株活性的影响,检测其抑制HepG2细胞株的时间效应和剂量效应;应用形态学观察、HE染色和Annexin V-PI流式检测,测定杨梅素对HepG2细胞的凋亡作用,并进行细胞周期的分析,后对杨梅素对细胞凋亡相关的蛋白p34cdc-2、Cyclin B1、Bcl-2和PARP的影响进行了研究.结果 杨梅素对HepG2细胞具有生长抑制及诱导凋亡作用,且呈时间依赖和剂量依赖性,表现为:细胞G2/M期阻滞,出现明显的凋亡峰;Bliss法测定杨梅素对HepG2细胞的IC50值为(32.18±2.31)μmol/L,30、50 μmol/L杨梅素对G2/M期细胞比率分别为(41.32±0.90)%和(80.07±0.90)%,差异有统计学意义(P < 0.05);p34cdc-2蛋白的表达量未见变化,而CyclinB1蛋白的表达量明显上升,Bcl-2蛋白的表达量锐减,并诱导半胱氨酸蛋白酶Caspase-3的底物PARP蛋白(113 kD)水解为89 kD的特异性水解产物.结论 杨梅素通过激活Caspase家族蛋白实现对肝癌细胞HepG2细胞株的增殖抑制及诱导凋亡作用.
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杨梅素抗类风湿性关节炎作用研究
目的 探讨杨梅素的抗类风湿关节炎作用.方法 通过对四种动物模型进行研究,考察杨梅素的抗类风湿性关节炎的作用.结果 杨梅素大剂量组对四种大鼠模型具有一定的抑制作用.结论 本研究证明杨梅素具有祛风除湿、温经止痛、活血通络功效,为杨梅素的开发利用提供了翔实的实验依据.
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杨梅素对人肺腺癌细胞增殖的影响及其机制
目的 研究杨梅素(myricetin,Myr)对人肺腺癌(A549)细胞增殖的影响及其作用机制. 方法 以人肺腺癌系A549细胞为离体研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法研究不同浓度的Myr对A549细胞生长的抑制作用并测定其半数抑制浓度(IC_(50));采用Western blot法检测Myr对蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平的影响.结果 Myr对A549细胞具有明显的增殖抑制作用,随着Myr浓度的增加,细胞的存活率明显降低.Myr作用72 h的IC_(50)值为41.7 μg/ml.32 μg/ml杨梅素无血清作用A549 12 h即可显著抑制Akt~(Ser473)的磷酸化水平. 结论 Myr能够剂量依赖,陆抑制A549细胞增殖,Akt的活性下调可能是Myr体外诱导人A549肺腺癌细胞增殖抑制作用的分子靶点.
