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铅暴露U251细胞对钙离子信号通路的影响
目的 探讨铅暴露人神经胶质瘤U251细胞对钙离子信号通路的影响.方法 将体外培养的人神经胶质瘤U251细胞(human U251 glioma cells,U251)分别暴露于含有乙酸铅(400μg/ml)的培养液中8和24 h,提取RNA.应用cDNA芯片技术筛选差异表达基因,并利用信息学技术进行钙离子信号通路分析.结果 铅暴露U251细胞,导致2840条基因差异表达,钙离子信号通路中有45条基因表达异常.结论 铅暴露U251细胞后,参与钙离子信号通路的45条基因发生了表达改变,导致细胞膜上钙离子通道发生变化,钙离子调控的生物学功能受到影响.
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乙酸铅对Z310细胞周期和PHB1蛋白表达的影响研究
目的 探讨乙酸铅对大鼠脑脉络丛永生化细胞系Z310细胞周期和PHB1蛋白表达的影响.方法 以浓度为0、0.2、2、10、20和50 μmol/L的乙酸铅分别染毒处理Z310细胞12和24 h,检测细胞周期的变化情况；以0、50、100和200 μmoL/L的乙酸铅染毒Z310细胞24 h,检测PHB1蛋白表达的变化情况.结果 随着染铅浓度2、10、20和50 μmol/L的增加,染毒12 h的G0/G1期的细胞数量所占比例明显增加(P＜0.05)；染毒24 h的细胞周期变化不明显.染铅组PHB1蛋白的表达量改变与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 乙酸铅可引起Z310细胞周期G0/G1的比例增加,但未引起PHB1蛋白表达的改变,提示乙酸铅可能通过非PHB1介导的信号通路诱发Z310细胞周期的阻滞,其机制值得进一步研究.
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VDAC1基因低表达型Z310细胞系的建立与乙酸铅对其增殖的影响
目的 运用载体介导的RNA干扰技术靶向抑制电压依赖性阴离子通道1(voltage-dependent anion channel 1,VDAC1)在永生化大鼠脑脉络丛Z310细胞中的表达,构建VDAC1基因低表达型Z310细胞系,并检测乙酸铅对其增殖的影响,为进一步研究VDAC1蛋白在乙酸铅对Z310细胞毒性机制中的功能和作用提供实验基础.方法 利用分子克隆技术构建4种特异性VDAC1-miRNA (GFP)干扰载体,筛选、测序验证并扩增.通过Lipofectamine LTX转染试剂盒将重组质粒转染Z310细胞,转染24 h后,以荧光显微成像技术观察细胞的转染效果.经Blasticidin筛选后,通过实时荧光定量PCR法和蛋白印迹法(Western blotting)检测转染后细胞中靶基因和靶蛋白的表达情况.并采用CCK-8法检测乙酸铅(1、5、10、20、50、100、200和400 μmol/L)染毒24 h对VDAC1低表达Z310细胞增殖的影响.结果 本实验筛选出有效的干扰载体13MR0047-3-1,与空载体组比,其对靶基因的沉默效率为52.62％；与未处理的Z310细胞组比,其下调了81.28％ VDAC1蛋白的表达.CCK-8法结果显示,20 μmol/L以上剂量的乙酸铅可抑制VDAC1低表达Z310细胞的增殖,存在剂量-效应关系；且与相同染毒剂量组的空载体对照Z310细胞比,高剂量乙酸铅(200 ～ 400 μmol/L)对VDAC1低表达Z310细胞的毒性更大,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠脑脉络丛永生化Z310细胞电压依赖性阴离子通道1的靶向抑制成功,VDAC1基因低表达型Z310细胞系构建成功.VDAC1的低表达促使Z310细胞对乙酸铅的毒性作用更为敏感,其机制值得进一步研究.
关键词： 永生化Z310细胞 电压依赖性阴离子通道1 乙酸铅 增殖 -
杨梅素对乙酸铅所致雄性小鼠生精障碍的影响
目的 研究杨梅素(myricetin)对乙酸铅所致雄性小鼠生精障碍的影响,并探讨其作用机制.方法 采用腹腔注射乙酸铅(20 mg· kg-1)连续7d建立雄性小鼠生精障碍模型,自造模第2天开始,杨梅素低、中、高剂量组分别灌胃杨梅素(100、200和400 mg· kg-1),连续42 d.观察雄性小鼠的精子密度、精子畸变率变化,检测睾丸组织中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)水平及血清中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的变化,并观察睾丸组织的病理改变.结果 与模型组相比,杨梅素各剂量组的精子密度增高、精子畸变率降低,杨梅素各剂量组睾丸组织中LDH的活性增高、NO的含量降低,杨梅素中、高剂量组睾丸组织中TNF-α含量降低,杨梅素各剂量组血清中MDA含量降低,同模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).睾丸组织镜下观察:模型组生精上皮变薄,生精细胞层次和数量减少,生精小管腔见少量精子形成,而杨梅素中、高剂量可改善乙酸铅所致的睾丸组织改变.结论 杨梅素对乙酸铅所致雄性小鼠生精障碍具有一定改善作用,作用机制可能与降低NO水平,抑制炎症介质产生及抗氧化相关.
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乙酸铅和氯化镉暴露对小鼠睾丸支持细胞乳酸水平的影响
目的 探究乙酸铅、氯化镉单独或联合染毒对小鼠睾丸支持细胞(15P-1细胞)乳酸(LD)水平的影响.方法 将15P-1细胞分设对照(空白培养基)组和乙酸铅(0.05～160 μmol/L)单独染毒组、氯化镉(0.05～160μmol/L)单独染毒组,染毒24 h后,测定细胞存活率.后续实验分别设对照(空白培养基)组和乙酸铅(1～60μmol/L)单独染毒组、氯化镉(0.5～30μmol/L)单独染毒组及乙酸铅(1、10、20μmol/L)+氯化镉(0.5、5、10 μmol/L)联合染毒组,染毒24 h后,测定细胞内葡萄糖摄取量、乳酸脱氢酶(LDH)活力以及细胞内、外LD浓度和pH值.结果 与对照组比较,2.5～160μmol/L乙酸铅和2.5～160 μmol/L氯化镉分别单独染毒组15P-1细胞存活率均降低(P＜0.05).与对照组比较,0.5～10 μmol/L氯化镉染毒15P-1细胞内的葡萄糖摄取量较高(P＜0.05).与相同浓度乙酸铅+氯化镉染毒组比较,仅0.5 μmol/L氯化镉单独染毒组细胞内葡萄糖摄取增加(P＜0.05).与对照组比较,1、10 μmol/L乙酸铅染毒、各浓度氯化镉染毒及10 μmol/L乙酸铅+5 μmol/L氯化镉染毒组15P-1细胞内的LD浓度较高,而20～60 μmol/L乙酸铅染毒及20 μmol/L乙酸铅+10 μmol/L氯化镉染毒组15P-1细胞内的LD浓度较低(P＜0.05);与对照组比较,1～30 μmol/L乙酸铅染毒及15、30 μmol/L氯化镉染毒15P-1细胞外的LD浓度均较低,而0.5、5μmol/L氯化镉染毒及1μmol/L乙酸铅+0.5 μmol/L氯化镉染毒组15P-1细胞外的LD浓度较高(P＜0.05).与对照组比较,10～60 μmol/L乙酸铅染毒及5～15 μmol/L氯化镉染毒15P-1细胞内的pH值较低(P＜0.05).与对照组比较,20～60 μmol/L乙酸铅染毒及各浓度氯化镉染毒15P-1细胞外的pH值较高(P＜0.05).与对照组比较,各浓度乙酸铅+氯化镉染毒组15P-1细胞内、外的pH值均较高(P＜0.05).与相同浓度乙酸铅+氯化镉染毒组比较,1、10、20 μmol/L乙酸铅单独染毒组及0.5、5、10 μmol/L氯化镉染毒组细胞内pH值较高,而1、10、20 μmol/L乙酸铅单独染毒组及0.5、10 μmol/L氯化镉单独染毒组细胞外pH值较高(P＜0.05).与对照组比较,各浓度乙酸铅染毒15P-1细胞内的LDH活力较低,而各浓度氯化镉染毒15P-1细胞内的LDH活力较高(P＜0.05).与对照组比较,各浓度乙酸铅+氯化镉染毒组15P-1细胞内LDH活力均较高(P＜0.05).与相同浓度乙酸铅+氯化镉染毒组比较,1、10、20 μmol/L乙酸铅单独染毒组及5、10 μmol/L氯化镉单独染毒组细胞内的LDH活力较高(P＜0.05).结论 乙酸铅对生精系统的损伤可能通过降低细胞内LDH活力进而抑制细胞内乳酸生成来实现,而氯化镉则可能通过抑制细胞内LD转运到细胞外供给精子发生需要的能量来实现.
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乙酸铅和硫酸铝对神经母细胞瘤细胞和皮层神经元细胞毒性的比较
目的 探讨神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)和皮层神经元对神经毒物乙酸铅和硫酸铝敏感性的差异,为神经元体外替代方法及实验研究提供一定的数据支持.方法 原代培养皮层神经元及培养细胞系SH-SY5Y,乙酸铅和硫酸铝染毒浓度分别为25、50、100、200、400、800、1 600、3 200 μmol/L,作用时间分别为3和24h,测定并计算细胞存活率和半数致死浓度(IC50)值.结果 除硫酸铝作用24 h外,皮层神经元的IC50值均低于SH-SY5Y;SH-SY5Y对乙酸铅IC50值均高于硫酸铝;皮层神经元对乙酸铅的IC50值低于硫酸铝.结论 皮层神经元对乙酸铅和硫酸铝的毒性较SH-SY5Y敏感.若以皮层神经元为靶细胞,则乙酸铅相对敏感,若以SH-SY5Y作为靶细胞,则硫酸铝则更为敏感.
关键词： 乙酸铅 硫酸铝 神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y) 皮层神经元 细胞存活率 -
铅暴露对不同发育阶段子代小鼠海马中谷氨酸转运体表达的影响
目的 探讨铅暴露对不同发育阶段子代小鼠海马中谷氨酸转运体GLAST、GLT-1表达的影响.方法 将24只清洁级妊娠昆明小鼠随机分为对照(蒸馏水)组及0.5、1.0、2.0 g/L乙酸铅暴露组,每组6只.母鼠从妊娠第1天至断乳前(出生后21d)、仔鼠从断乳至出生后40 d(postnatal day,PND40),采用自由饮水方式进行染毒.分别于PND10、PND20和PND40,测定脑组织中铅含量及海马组织中GLAST和GLT-1 mRNA和蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,2.0 g/L乙酸铅暴露组PND10仔鼠和1.0、2.0 g/L乙酸铅暴露组PND20仔鼠及各浓度乙酸铅暴露组PND40仔鼠脑组织中的铅含量均较高,仅1.0、2.0 g/L乙酸铅暴露组PND40仔鼠海马组织中GLAST mRNA的表达水平均较低,仅2.0 g/L乙酸铅暴露组PND40仔鼠海马组织中GLT-1 mRNA的表达水平较低,仅1.0、2.0 g/L乙酸铅暴露组PND20和PND40仔鼠海马组织中GLAST蛋白的表达水平均较低,仅2.0 g/L乙酸铅暴露组PND10仔鼠及1.0、2.0 g/L乙酸铅暴露组PND20和PND40仔鼠海马组织中GLT-1蛋白的表达水平较低,差异有统计学意义(P＜0.05).随着乙酸铅暴露浓度的升高和暴露时间的延长,不同发育阶段仔鼠的脑组织中的铅含量均呈上升趋势,海马组织中GLA ST和GLT-1 mRNA和蛋白的表达水平均呈下降趋势.结论 饮水铅暴露可通过抑制不同发育阶段仔鼠海马中GLAST和GLT-1的表达,干扰发育早期仔鼠海马中Glu的转运与代谢,进而可影响突触信号的转导过程,这可能是铅导致学习记忆损伤的机制之一.
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神经调节素1对铅中毒小鼠脑前额叶皮层细胞凋亡的影响
目的 研究神经调节素1(neuregulin1,NRG1)对铅中毒小鼠脑内细胞凋亡的影响.方法 选择60只健康4月龄SPF级C57bl/6雄性小鼠采用腹腔注射方式染毒乙酸铅(30 mg/kg),隔日注射1次,共注射7次.铅中毒模型建立后,将小鼠随机分成6组,分别为对照组和低(20 ng/kg)、中(50 ng/kg)、高(100 ng/kg)剂量NRG1处理组及NRG1 (50 ng/kg)+Wortmannin(PI3K抑制剂,0.01 nmol)组、NRG1 (50 ng/kg) +Wortmannin (0.05 nmol)组,其中,NRG1采用腹腔注射方式染毒,连续染毒14 d;Wortmannin在NRG1处理的第1天采用右侧脑室一次性注射染毒.检测小鼠前额叶皮层ErbB4和Bax的表达变化、DNA凋亡情况及p-Akt蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,NRG1处理组的ErbB4阳性细胞计数和荧 光强度、p-Akt表达水平增高,而Bax细胞数和DNA碎片表达减少,差异有统计学意义(P＜0.05).与50 ng/kg NRG1处理组相比,NRG1 +Wortmannin组小鼠前额叶皮层ErbB4细胞数和荧光强度、p-Akt蛋白表达明显减少,Bax细胞数和DNA碎片增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NRG1可通过上调ErbB4和p-Akt的表达,拮抗铅中毒引起的小鼠前额叶皮层细胞凋亡.
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芹菜素对乙酸铅染毒小鼠脑组织中脂质过氧化指标的影响
目的 探讨芹菜素对乙酸铅染毒小鼠脑组织的脂质过氧化指标影响.方法 将健康成年昆明小鼠50只按体重随机分为正常对照组、染铅模型组及芹菜素低、中、高剂量组,每组10只.空白对照组给予等量的生理盐水,其他各组腹腔注射0.1 g/L乙酸铅[1 mg/(kg·d)]对小鼠染毒,连续1周.染毒结束后,芹菜素低、中、高剂量组每天给予芹菜素灌胃(350、700、1 400 mg/kg),其他组仅给予等体积的食用植物油灌胃,持续30 d.检测小鼠血铅、脑铅含量及脑组织中过氧化脂质(LPO)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活力.结果 与空白对照组比较,各染铅组小鼠血铅、脑铅含量均升高,脑组织中SOD、CAT活力均下降,MDA、LPO含量均升高,差异有统计学意义(P＜0.01).与染铅模型组比较,芹菜素中、高剂量组血铅、脑铅含量明显降低,SOD活力升高,MDA含量降低;3个剂量组CAT活力均升高,LPO含量均下降,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 芹菜素可以降低乙酸铅染毒小鼠血铅、脑铅水平,升高小鼠脑组织SOD和CAT活力,降低MDA和LPO含量,减轻脑组织的脂质过氧化损伤.
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乙酸铅及硫酸铝和甲醛暴露对大鼠不同脑区血脑屏障通透性的影响
目的 定量评估乙酸铅、硫酸铝和甲醛暴露对大鼠不同脑区血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性的影响.方法 设低(1/8 LD50)、中(1/4 LD50)、高剂量(1/2 LD50)和空白对照组(不作处理),采用腹腔注射染毒Wistar大鼠.于染毒后24、48和72 h采用伊文蓝(EB)比色法测定大鼠大脑皮质、皮质下及海马组织血脑屏障通透性.血脑屏障通透性以每毫克组织中EB的光密度值表示(OD/mg).结果 与对照组比较,低、中、高剂量乙酸铅(18.75、37.5和75.0 mg/kg)、硫酸铝(7.5、15.0和30.0 mg/kg)染毒后24、48和72 h大鼠大脑皮质、皮质下及海马组织血脑屏障通透性增高(P＜0.01).各剂量甲醛染毒组(50.0、100.0和200.0 mg/kg)大鼠皮质下及海马组织血脑屏障通透性在所有观察时点均增高(P＜0.05),脑皮质血脑屏障通透性在第48和72小时增高(P＜0.05).结论 乙酸铅、硫酸铝和甲醛暴露能够引起大鼠大脑皮质、皮质下及海马组织的血脑屏障通透性增高,提示对上述脑区血脑屏障功能具有损伤性,较易侵入大脑甚至对中枢神经产生暴露和影响.
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纳米二氧化钛在不同水溶液中的团聚及铅吸附效应比较
目的 研究并比较不同浓度纳米二氧化钛(titanium dioxide nanoparticles,nano-TiO2)在超纯水、DMEM培养基和水库水中的团聚效应及其对铅的吸附情况.方法 用以超纯水、DMEM培养基和水库水为溶剂的1 μg/ml乙酸铅溶液倍比稀释纳米二氧化钛溶液终浓度分别为0.001、0.01、0.1、1、10 μg/ml.采用扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(IEM)检测分散状态和团聚状态纳米二氧化钛粒径,采用纳米粒度仪检测纳米二氧化钛在水溶液中团聚粒径,采用石墨炉原子吸收(GFAAS)法检测纳米二氧化钛对铅的吸附量.结果 在分散状态下,纳米二氧化钛粒径约为20～30 nm.除在0.001 μg/ml纳米二氧化钛和乙酸铅混合溶液中未检测到外,纳米二氧化钛与乙酸铅团聚体在纯水、DMEM培养基、水库水中的平均粒径分别为(297±16),(301±10),(302±19) nm.不同浓度纳米二氧化钛和乙酸铅混合溶液在同种水溶液中聚合物粒度大小无显著差异,相同浓度纳米二氧化钛和乙酸铅混合溶液在不同水溶液中团聚物体粒径大小亦无显著差异.纳米二氧化钛对铅的吸附量随纳米二氧化钛剂量升高呈现出剂量依赖性上升(均P＜0.05).但相同浓度不同水溶液中纳米二氧化钛对铅的吸附量没有显著性差异.结论 在无分散剂的三种水溶液中,纳米二氧化钛迅速发生团聚,并能够吸附铅,团聚和吸附效应无差别.
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铅暴露对不同发育阶段仔鼠海马中谷氨酰胺合成酶活力及蛋白表达的影响
目的 探讨铅暴露对不同发育阶段仔鼠海马中谷氨酰胺合成酶(GS)活力及蛋白表达的影响.方法 将24只孕鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组及0.5、1.0、2.0 g/L铅暴露组,每组6只.采用自由饮水方式进行染毒,母鼠从妊娠第1天至仔鼠断乳(出生后21d左右);仔鼠从断乳后至出生后(PND)40d.分别在PND10、20和40d,测定仔鼠脑组织中铅含量、海马组织中GS活力及其蛋白表达.结果 随着铅暴露浓度的升高,仔鼠脑组织中的铅含量呈上升趋势,海马组织中GS活力及其蛋白表达呈下降趋势.结论 饮水铅暴露可通过抑制不同发育阶段仔鼠海马中GS蛋白的表达,导致海马中GS活力下降.
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一次性腹腔内铅染毒对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡率的影响
为探讨铅对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡率的影响,本研究将72只25日龄SPF级ICR雌性小鼠随机分为1和2mg/kg乙酸铅染毒组和对照组(生理盐水),每组24只.预饲2 d后,每只小鼠腹腔注射8 IU囊泡包埋的促卵泡素(FSH).48 h后,腹腔注射染毒乙酸铅,染毒剂量为0.2 ml/只.分别于染毒后48和96 h用流式细胞仪测定卵巢颗粒细胞凋亡率.结果 显示.染毒48 h后,对照组和1、2mg/kg乙酸铅染毒组颗粒细胞凋亡率分别为(7.6666±1.9675)%,(6.1000±0.435 9)%,(6.833 3±1.238 7)%,3者间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).染毒96 h后,1、2 mg/kg乙酸铅染毒组颗粒细胞凋亡率分别为(16.9000±2.433 8)%和(22.933 3±4.543 3)%.均高于对照组[(8.2000±1.50444)%1,差异有统计学意义(P＜0.05).与染毒48 h比较.染毒96 h后各乙酸铅染毒组的细胞凋亡率均较高,差异有统计学意义(P＜0.05).表明铅对卵巢颗粒细胞凋亡的促进作用具有时间依赖性和一定的剂量相关性.
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乙酸铅对脑脉络丛Z310细胞毒性作用
目的 初步探讨乙酸铅诱导大鼠脑脉络丛Z310细胞的低剂量兴奋作用和高剂量抑制作用.方法 以浓度为0、0.000 2、0.002、0.02、0.2、2、20、200、500 μmol/L的乙酸铅分别染毒Z310细胞12和24h,用噻唑蓝(MTT)法和2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐(WST-8)法检测细胞生存情况,并观察各剂量组细胞形态变化.结果 0.02 μmol/L乙酸铅染毒24h,MTT法检测Z310细胞存活率为107.06％,0.2μmol/L染毒组24 h时细胞存活率升高为110.91％; ＞2 μmol/L乙酸铅染毒时,细胞存活率随剂量增加而降低；染毒24 h时,200、500 μmol/L乙酸铅组细胞存活率(MTT法)分别下降至79.37％和76.81％(P＜0.01)；染毒12、24 h时,200、500 μmol/L乙酸铅组细胞存活率(WST-8法)分别下降至81.67％和72.36％及56.89％和44.05％ (P ＜0.05).结论 低剂量乙酸铅可引起Z310细胞兴奋效应；高剂量乙酸铅引起Z310细胞抑制效应；WST-8法检测细胞存活率较MTT法更敏感.
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大口径毛细管测定食品中甜蜜素
甜蜜素又名环己基氨基磺酸钠,是一种复合食品添加剂,用作甜味剂的一种.国家卫生标准GB2760-1996规定使用限量为0.65～8.O g/kg[1].但目前美国、英国、日本等40多个国家禁止使用甜蜜素作为食品甜味剂.出口产品生产企业为了适应出口国的要求,在生产中必须严格控制各种原材料中的甜蜜素含量.而GB13112-91[2]采用直接酯化法只适用于饮料、凉果等食品,不适合多种食品的测定.本文根据实际需要,采用大口径毛细管,改进样品处理方法及提取剂,采用乙酸铅、草酸钾-磷酸氢二钾[3]沉淀体系预处理样品,四氯化碳提取,气相色谱法测定.方法简便、灵敏可靠,适用于多种食品样品的测定.现介绍如下.
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乙酸铅诱发人肾小管上皮细胞线粒体损伤的体外研究
[目的]研究铅对人肾小管上皮细胞( human kidney cells,HK-2)线粒体的损伤作用,并探讨其可能的作用机制. [方法]以不同浓度的乙酸铅处理体外培养的HK-2细胞,罗丹明123( rhodamine 123,Rh123)及10-壬基吖啶橙(10-nonyl acridine orange,NAO)结合荧光化学发光仪分别检测细胞线粒体膜电位及心磷脂水平,细胞免疫荧光法结合流式细胞术检测线粒体细胞色素c( cytochrome c,Cytc)释放情况,加甘露醇观察铅对心磷脂及Cytc变化的影响.[结果]乙酸铅能造成HK-2细胞线粒体膜电位剂量及时间依赖性下降,荧光强度从正常对照组的4.56±0.25下降到400 μmol/L组的2.90士0.26或从正常对照组的4.44±0.20下降到12h组的2.34±0.50,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).乙酸铅能明显造成HK-2细胞线粒体心磷脂NAO荧光强度时间及剂量依赖性下降,荧光强度从正常对照组的2.45±0.18下降到400μmol/L组的0.91 ±0.18或从正常对照组的2.52±0.01下降到24h组的1.50±0.05,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).乙酸铅能诱发线粒体Cytc释放,剂量及时间依赖性地降低细胞内Cyt c荧光强度.50μmol/L甘露醇能使NAO荧光强度从1.38±0.14恢复至2.30±0.15,将Cytc荧光强度从9.49±0.31恢复至14.20士0.39,明显抑制铅对心磷脂的氧化及Cytc的释放. [结论]铅可能早期通过HK-2细胞线粒体膜电位溃散,造成线粒体功能损害,进一步加强线粒体心磷脂的氧化损伤,促使Cytc释放,造成线粒体的结构损伤.
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人外周血淋巴细胞体外乙酸铅染毒后氧化应激损伤研究
[目的]研究乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞致氧化应激与DNA氧化损伤情况.[方法]分别用浓度为0μmol/L、20 μmol/L、40μmol/L和80 μmol/L的乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞6h、12h、24 h,应用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色分析和流式细胞仪检测染毒后细胞内活性氧类(ROS)水平,高度水溶性四唑盐(WST-1)法检测染毒后细胞内总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒检测染毒后细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平,并对ROS、T-SOD、8-OHdG三指标间的关系进行相关性分析.[结果]乙酸铅染毒6h后,各染毒组人外周血淋巴细胞ROS水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);20 μmol/L染毒组人外周血淋巴细胞T-SOD和8-OHdG水平与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05),而40 μmol/L和80 μmol/L染毒组人外周血淋巴细胞T-SOD和8-OHdG水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).乙酸铅染毒12 h和24 h后,各染毒组人外周血淋巴细胞ROS、T-SOD和8-OHdG水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜ 0.01).相关性分析显示,细胞内ROS含量与T-SOD活性呈负相关(r6 h=-0.865、r12 h=-0.890、r24 h=-0.801,P＜0.01),与8-OHdG含量呈正相关(r6h=0.840、r12 h=0.829、r24 h=0.866,P＜0.01).[结论]乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞后会诱导细胞ROS生成,抑制细胞内抗氧化酶SOD活性,造成人外周血淋巴细胞氧化应激状态增强和DNA氧化性损伤.
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面制食品中甲醛和次硫酸氢钠检验方法探讨
甲醛合次硫酸氢钠(NaHSO2.CH2O.2H2O,分子量154.11)俗名吊白块,是工业用漂白剂.有不法分子利用它加热时分解为甲醛和二氧化硫特性,把它加入面制食品中,从而使面制食品漂白,以改善劣质面制食品的感官.由于吊白块的分解物甲醛毒性大,对人体肾脏造成损害,是一种潜在的致癌物质,故在食品加工中严禁使用.目前,没有相应的国家标准检测方法,在检测中引用的往往是一些公开发表的论文介绍方法:如乙酰丙酮比色法、变色酸比色法、乙酸铅试纸法等.由于采用方法的不同,得出的结果可能会截然不同,为了能准确地应用检测方法,查阅了有关文献,对几种常用的方法进行了探讨[1].
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孕期乙酸铅暴露对子代小鼠睾丸组织能量代谢酶活力的影响研究
目的 评价孕期乙酸铅暴露对性成熟雄性子代小鼠睾丸组织能量代谢酶活力的影响,并探讨其对生殖系统损伤的作用机制. 方法 将清洁级健康昆明种孕小鼠32只按体重随机分为高剂量组(2 000 mg/kg)、中剂量组(1 000 mg/kg)、低剂量组(500 mg/kg)和对照组(蒸馏水),每组8只.于妊娠第14 d开始,每日灌胃染毒,灌胃剂量为10 ml/kg,持续至母鼠自然分娩.记录孕鼠染毒期间体重增量和分娩时间.待雄性仔鼠8周龄(性成熟)时,称重并处死,分离双侧睾丸和附睾,测定睾丸、附睾的重量及脏器系数、附睾精子数.检测睾丸组织中的碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、Ca-Mg-ATP酶、Na-K-ATP酶、总ATP酶活力. 结果 各组孕鼠分娩时间和体重增量间比较,差异均无统计学意义(P均＞0.05).中、高剂量组仔鼠体重、睾丸重量、睾丸脏器系数、附睾重量、附睾脏器系数均明显低于对照组(P＜0.05);各染毒组仔鼠附睾精子数、睾丸组织SDH酶、Na-K-ATP酶、Ca-Mg-ATP酶、总ATP酶活力均明显低于对照组(P均＜0.01);高剂量组仔鼠睾丸组织LDH酶、AKP酶活力均明显低于对照组(P＜0.01);且随着乙酸铅染毒剂量的增高,睾丸组织SDH酶、Na-K-ATP酶、Ca-Mg-ATP酶以及总ATP酶活力均呈下降趋势. 结论 在本研究的染毒时间和剂量范围内,孕期乙酸铅暴露可干扰雄性子代小鼠睾丸的能量代谢,继而使得精子生成减少.
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初断乳雄性SD大鼠铅损伤动物模型的建立
目的 建立初断乳雄性SD大鼠铅损伤动物模型,用于研究铅对动物主要器官组织系统的损害.方法 选取45只初断乳雄性SD大鼠,分层随机分成正常对照组、1‰和4‰浓度乙酸铅水剂量组,以自由饮用方式进行染毒28 d,实验结束时处死动物,进行各种生理指标及肝、脑、股骨铅含量检测.结果 与饮用蒸馏水组相比,随着乙酸铅浓度的增加,雄性SD大鼠各项生理指标都反映出铅损伤迹象,肝、脑及股骨中的铅含量都呈升高趋势,饮用1‰和4‰乙酸铅水两个剂量组大鼠肝脏和股骨中铅含量有显著性升高(F=37.555,P＜0.01;F=36.67,P＜ 0.01),饮用4‰乙酸铅水剂量组大鼠脑中铅含量也有显著性升高(F=26.363,P＜ 0.01)结论 初断乳雄性SD大鼠饮用含乙酸铅蒸馏水建立动物铅损伤模型是一种简便、可靠、易于控制的方法,可用于对大鼠铅损伤的研究.
