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  • 邻苯二甲酸二乙基己酯在体外对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡Caspase通路的影响

    作者:吴维光;史海霞;韩建秋;葛红雨

    目的 通过对原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞进行邻苯二甲酸二乙基已酯( di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP在体外对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡通路Caspase -3和Caspase -9基因表达以及细胞凋亡的影响.方法 分离和培养原代未成熟大鼠的卵巢颗粒细胞,用不同浓度的DEHP(0、10、50、100 nmol/L)染毒24 h.荧光定量PCR法检测颗粒细胞的Caspase -3和Caspase -9基因mRNA表达水平,Weastern blot检测颗粒细胞Caspase -3和Caspase -9蛋白表达水平,流式细胞术检测颗粒细胞凋亡率.结果 与对照组相比,各DEHP处理组卵巢颗粒细胞Caspase -3基因mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05),Caspase -9基因mRNA和蛋白表达水平也降低(P<0.05),同时细胞凋亡率增加(P<0.05),呈浓度依赖关系.结论 DEHP可通过激活Caspase通路而诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵巢功能.

  • 子宫内膜细胞色素P450芳香化酶的表达研究进展

    作者:陈咏健;李美芝

    细胞色素P450芳香化酶(aromatase cytochrome P450, P450 arom)能催化C19雄激素转化为雌激素,是雌激素合成的关键酶之一。P450 arom位于细胞内质网,在体内多种雌激素合成部位表达,如卵巢颗粒细胞、脂肪组织、胎盘合体滋养层细胞、脑细胞等。近年的研究发现P450 arom在子宫内膜上也有表达,能促进子宫内膜局部雌激素的转化,现对其在子宫内膜的研究进展综述如下。细胞色素P450芳香化酶的结构特征 P450 arom与其它细胞色素P450异构体的结构类似。C端为血红素结合区,该区含有保守的半胱氨酸残基,可作为含铁血红素的第5个配位配基。该区上游有2个保守区,一个由20个以上氨基酸构成,一个为高度保守的部分I螺旋。N端由疏水氨基酸组成,但在有些情况下,连接N端的是糖基序列[1]。 P450 arom是CYP 19基因的产物,是细胞色素P450产物中唯一由单基因编码的酶。CYP 19是细胞色素P450基因超家族成员之一。随着分子生物学技术的发展,对CYP 19基因的结构及调节有了较深入的了解。人CYP 19基因位于染色体15 q 21.1,该基因的开放阅读框包含9个外显子,II~X,其中翻译起始位点位于外显子II。基因至少长75 kb,在第一个编码外显子II上游有4个未翻译外显子,I.1~4,在后一个编码外显子X上有血红素结合区(heme-binding region,HBR),同时,该外显子还有两个选择性多聚腺苷酸位点,可产生两种长度不等的转录产物,分别为3.4和2.9 kb(图1)。 CYP 19基因的主要特点是其具有组织特异性表达。用聚合酶链反应(PCR)和快速扩增互补DNA末端(rapid amplification cDNA end,RACE)检测发现,CYP 19基因在不同组织的转录产物5’末端不相同[3-4]。在胎盘组织,转录产物5’末端主要为未翻译外显子I.1,I.2<1%;在卵巢,5’末端为外显子II;而在脂肪细胞,不同条件下,有3种不同的5’末端,I.4、I.3和II。这种组织特异性在于该基因的组织特异性启动子调节。在胎盘,转录运用远端启动子I.1;在卵巢为近端启动子II;脂肪组织为启动子I.4、I.3及II。CYP 19基因这种运用选择性启动子调节组织特异性表达的特点,对人体不同部位雌激素的合成调节具有重要意义。

  • NR4A1对小鼠卵巢颗粒细胞脂肪代谢相关调控因子的调节作用

    作者:董丽;刁飞扬;薛凯;李梅;江帆;崔毓桂;刘嘉茵

    目的 观察NR4A1对小鼠卵巢颗粒细胞中脂肪代谢相关调控因子脂联素受体2(Adipo-R2)、解偶联蛋白2(UCP2)、B类清道夫受体(CD36)的调节作用.方法 分别构建NR4A1超表达腺病毒载体(AdCMV-NR4A1)及干涉腺病毒载体(AdH1-siRNA/NR4A1).体外培养小鼠卵巢颗粒细胞,贴壁生长至90%时,分为病毒感染组、胰岛素(100nmol/L)与胰岛素增敏剂(10 2mol/L)组和病毒+胰岛素组.Trizol裂解细胞提取总RNA,实时荧光定量PCR法检测颗粒细胞中Adipo-R2,UCP2,CD36的mRNA表达水平.结果 在小鼠卵巢颗粒细胞中超表达NR4A1能够促进Adipo-R2,UCP2,CD36基因的转录(P<0.05),RNA干扰NR4A1后则可以抑制以上基因的表达(P<0.05);胰岛素可以促进UCP2,CD36基因的表达(P<0.05),而对Adipo-R2的作用不明显;另外胰岛素增敏剂曲格列酮也能够促进Adipo-R2,UCP2,CD36的表达(P<0.05);RNA干扰NR4A1 24 h后,再向细胞中加入生理剂量(100nmol/L)胰岛素30 min后Adipo-R2,UCP2,CD36的表达水平与单独干涉组比均可逆转升高(P<0.05),其中UCP2的表达水平可升高到胰岛素组同样的水平,但Adipo-R2,CD36的逆转升高水平并没有达到仅加入胰岛素时的升高水平(P<0.05).结论 NR4A1对Adipo-R2,UCP2,CD36具有正向调节作用,同时与胰岛素或胰岛素增敏剂可能有协同调节作用,进而发挥对脂肪代谢的调控.

  • 氯丙嗪对大鼠卵巢颗粒细胞损伤及其作用机制

    作者:邬静;袁慧;彭双清

    目的 通过氯丙嗪染毒体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞,研究其对卵巢颗粒细胞的毒性作用,并初步探讨可能的作用机制.方法 对未成熟的Wistar大鼠卵巢颗粒细胞进行原代培养,用不同浓度的氯丙嗪(0、0.1、1和10μmol/L)染毒24 h.MTT法检测细胞相对活力,ELISA法检测培养液中孕酮(P)和雌二醇(E<,2>)的含量,Hoechst 33258检测颗粒细胞的凋亡变化.结果 在本次实验所设置的剂量范围内,与对照组比较,氯丙嗪能明显地抑制大鼠卵巢颗粒细胞增殖和E<,2>的分泌(P<0.05),促进颗粒细胞凋亡(P<0.01),呈浓度依赖关系;而低剂量的氯丙嗪(0.1μmol/L)却能够促进P的分泌(P<0.05),但是随着剂量的升高,P的分泌量逐渐下降.结论 氯丙嗪可通过抑制卵巢颗粒细胞增值、诱导颗粒细胞凋亡并影响细胞甾体激素的分泌,而引起卵巢功能障碍.

  • 卵巢颗粒细胞-卵泡膜细胞瘤1例报告

    作者:陶纪兰;张玉琴

    患者,女,16岁,因"声音变粗、体毛增多1年多,闭经、下腹胀痛6个月余"就诊,以"盆腔包块性质待查"收入院.患者15岁月经初潮,月经3~4天/15天~4个月,量中,色暗红,轻微痛经.1年前,开始出现声音变粗,如成年男性声音,体毛增多,长胡须.自认为发育阶段,未予重视.

  • 邻苯二甲酸二乙基己酯对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞氧化应激的影响

    作者:吴维光;曹秀琴;史海霞

    目的 探讨邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞氧化应激和细胞凋亡的影响.方法 体外分离和原代培养未成熟大鼠卵巢颗粒细胞,用不同浓度的DEHP(10、50、100 nmol/L)染毒24 h.应用流式细胞术检测颗粒细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS),应用紫外分光光度计测定颗粒细胞培养液中超氧化物岐化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量.结果 DEHP作用24 h后,空白对照组和DEHP低、中、高剂量组细胞凋亡率分别为(2.16±1.14)%、(4.57±1.20)%、(7.72±1.23)%和(12.15±1.29)%;ROS检测结果分别为(4.15±1.18)%、(7.42±1.16)%、(12.09±1.19)%和(19.24±1.15)%;SOD检测结果分别为(17.63±1.21)×103、(11.31±1.23)×103、(6.89±1.20)×103和(3.52±1.22)×103 U/L;MDA检测结果分别为:(1.23±0.10)×103、(2.61±0.11)×103、(4.98±0.10)×103和(8.21±0.11)×103nmol/L.与对照组相比,大鼠卵巢颗粒细胞内ROS和MDA增高,颗粒细胞内SOD酶活性降低,同时颗粒细胞凋亡率增加,呈浓度依赖关系.结论 DEHP可通过激活细胞氧化应激而诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵巢功能.

  • 2,5-己二酮抑制大鼠卵巢颗粒细胞干细胞因子的表达

    作者:李昱辰;陈钦辉;刘瑾;朱建林;罗凌凤;张文昌

    目的 研究2,5-己二酮对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及干细胞因子(SCF)表达的影响.方法 21日龄清洁级雌性SD大鼠10只,提取卵巢颗粒细胞混合后,均匀接种到六孔板培养,设立1个对照组和3个实验组,培养24 h后分别加入浓度为0、20、40、60 mmol/L的2,5-己二酮染毒24 h,Hoechst 33258荧光染色计算细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测SCF、Bax、Bcl-2基因mRNA相对表达量.结果 各染毒剂量组卵巢颗粒细胞凋亡率增高,差异有统计学意义(F=221.23,P<0.05).SCF基因mRNA的相对表达量在40、60 mmol/L剂量组呈下降趋势,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).Bcl-2基因mRNA的相对表达量随染毒剂量增加呈下降趋势,各剂量组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).Bax基因mRNA的表达量和Bax/Bcl-2比值随着染毒剂量增加呈上升趋势,各剂量组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 2,5-己二酮染毒可致卵巢颗粒细胞凋亡率增高,抑制SCF基因表达,SCF/c-Kit信号通路可能参与此过程.

  • 镉对大鼠卵巢颗粒细胞孕激素合成的影响研究

    作者:贾海梅;张文昌;陈昱;汪家梨

    目的 研究镉对大鼠卵巢颗粒细胞孕激素合成的影响,并探讨其机制.方法 未成年Wistar大鼠皮下注射孕马血清促性腺激素(PMSG) 100 IU,48 h后,取出卵巢颗粒细胞体外培养,备用.①取备用细胞随机分成4组,染镉剂量分别为0、10、20、40 μmo l/L,孵化 30 min,测孕酮、Camp含量.②取备用细胞,随机分为3组,分别为空白对照组、40 μmol/L CdCl2、1 mmol/L 8-Br-Camp(Camp类似物)+40 μmol/L CdCl2, 培养2 h,测量孕酮含量.结果 各剂量组与对照组比较孕酮含量差异有统计学意义(P<0.01),且随着染镉剂量的增加孕酮含量明显下降;8-Br-Camp+40 μmol/L CdCl2 组与单纯40 μmol/L CdCl2 比较, 孕酮含量明显升高(P<0.01);高剂量(40 μmol/L)、中剂量(20 μmol/L)组镉抑制细胞内Camp的含量(P<0.01).结论 在本实验的条件下,镉可抑制大鼠颗粒细胞孕酮的合成;8-Br-Camp可增加孕酮含量,且可逆转镉所导致的孕酮降低;镉对Camp的抑制作用可能是其抑制孕酮合成的机制之一.

  • 育泡饮对大鼠卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期的影响

    作者:李楠;刘艳霞;金哲

    目的 观察育泡饮对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期的影响.方法 以不同剂量的育泡饮作用于体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞,并设立空白和西药促卵泡激素FSH(50ng/mL)对照组.用MTT法检测各组颗粒细胞24、48、和72 h增殖情况.流式细胞技术分析细胞周期各时相的变化.结果 (1)育泡饮显著增加了颗粒细胞的增殖能力,并且呈一定的量效和时效关系,随着育泡饮浓度的增加,其促增殖能力逐渐增强,在作用48 h后,育泡饮高剂量组为显著(P<0.05).(2)各剂量组育泡饮及FSH组均能使S期的细胞显著增多及增殖指数升高,G0/G1期细胞相对比例减少(P<0.05),其中育泡饮高剂量组的作用优于FSH组(P<0.05).结论 育泡饮对卵巢颗粒细胞增殖有显著促进作用,其作用机制可能是通过促进颗粒细胞从G0期向S期转化,增加S期细胞比率来实现的.

  • 正确评价顺铂对卵巢颗粒细胞增殖抑制作用的方法

    作者:石天娇;孙丽萍;牛建昭;薛晓鸥;杨晓敏

    目的 建立能够正确评价顺铂(CDDP)对卵巢颗粒细胞增殖抑制作用效果的细胞计数方法.方法 在卵巢颗粒细胞培养液中,加入不同浓度的CDDP,分选3个时间段,用MTT和CCK-8两种细胞计数方法对CDDP作用后的卵巢颗粒细胞进行计数,对比吸光度值变化、吸光度比值变化,辅以显微镜观察,对计数方法的可信性进行评价.结果 CCK-8细胞计数方法测定的吸光度值变化与显微镜观察结果不相符,MTT法变化与镜下观察细胞增殖抑制的趋势较符合.结论 CDDP作用后MTT吸光度值可在一定程度上反映CDDP对卵巢颗粒细胞增殖的抑制效果,但CDDP作用前吸光度值(CCK-8法)与作用后吸光度值(MTT法)比值”更能精确地说明CDDP对卵巢颗粒细胞增殖的抑制效果.

  • 四物合剂干预顺铂作用卵巢颗粒细胞E2分泌水平的实验研究

    作者:武虹波;赵丕文;孙丽萍;蔡欣悦;赵笛;杨蕾;卢迪

    目的 探讨四物合剂对顺铂损伤后颗粒细胞分泌E2水平的影响. 方法 取10只22~24天SD雌性大鼠卵巢颗粒细胞培养,另取48只22~24天SD雌鼠随机分为生理对照组、模型组、阳性组、四物合剂大、中、小剂量组,每组8只,以生理盐水(生理对照组与模型组,0.5 mL/天),戊酸雌二醇片阳性组(0.4 mg/kg·d),四物合剂大剂量组(13.5 mL/kg·d)、中剂量组(6.75 mL/kg·d)、小剂量组(3.38 mL/kg·d)分别灌胃3天后取药理血清.颗粒细胞用含20 %药理血清的细胞培养液分别培养24小时后检测指标.MTT法观察药理血清对顺铂损伤后原代颗粒细胞增殖的影响;放射免疫法观测四物合剂药理血清对顺铂作用颗粒细胞E2分泌的干预效果;免疫组化法检测四物合剂药理血清对顺铂作用颗粒细胞CYP19a1基因表达和Smad2/3激活的干预效果. 结果 MTT法检测结果表明:与模型组相比,阳性组、四物合剂各剂量组细胞吸光度均增强,四物合剂大剂量数值高(P<0.01);放免法检测结果表明,四物合剂药理血清对E2的分泌有促进作用,且大剂量效果明显(P<0.05);免疫组化法结果表明,四物合剂药理血清可以提高CYP19a1基因、Smad2/3蛋白、Psmad2/3蛋白的表达,其中大剂量作用明显(P<0.01). 结论 四物合剂药理血清对顺铂作用后的颗粒细胞E2的分泌水平有改善作用,但可能还不能起到完全修复的作用,还需进一步的实验观察.

  • 二仙汤对顺铂所致大鼠卵巢早衰模型中卵巢颗粒细胞增殖及周期的影响

    作者:赵笛;赵丕文;武虹波;蔡欣悦;孙丽萍;陶仕英;牛建昭;卢迪;齐明月

    目的:观察二仙汤对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。方法以不同剂量的二仙汤药理血清作用于体外培养的顺铂损伤卵巢颗粒细胞,并以正常药理血清为空白对照,戊酸雌二醇药理血清为阳性对照,同时对比加入PI3K/AKT通路的抑制剂LY294002后各组的变化。 MTT法检测各组药理血清作用于卵巢颗粒细胞24小时、48小时和72小时的增殖情况。流式细胞术检测各组中细胞周期各时相的变化。结果(1)二仙汤对顺铂损伤后的卵巢颗粒细胞具有增殖促进作用(P<0.05);且对于顺铂损伤后并给予LY294002抑制剂的颗粒细胞也具有增殖改善作用(P<0.05)。(2)二仙汤各剂量组及戊酸雌二醇组均能使处于S期的顺铂损伤颗粒细胞比例显著增多,G0/G1期细胞相对比例减少(P<0.01),且增殖指数升高(P<0.01)。结论二仙汤对卵巢颗粒细胞增殖有显著促进作用,其作用机制可能是激活或增强AKT信号通路,抑制细胞凋亡,从而促进细胞增殖;另一方面,也可能是通过促进颗粒细胞从G0期向S期转化,增加S期细胞比率来实现的。

  • PI3k/Akt通路参与二仙汤抑制顺铂所致卵巢颗粒细胞凋亡的作用

    作者:杨蕾;陶仕英;王继峰;牛建昭;赵丕文;孙丽萍;王燕霞;武洪波;蔡欣悦

    目的:观察顺铂干预大鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况,从而探讨二仙汤含药血清经PI3k/Akt通路抑制卵巢颗粒细胞凋亡的作用机制.方法:SD雌性大鼠30只,随机分为3组,分别为生理盐水组、补佳乐组、二仙汤组.心脏取血,制备药物血清.SD大鼠卵巢颗粒细胞,经培养贴壁后,用顺铂损伤大鼠原代卵巢颗粒细胞.经各组药理血清作用后,应用Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,并对各实验组大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡情况进行分析.应用免疫组化法,测定各分组PI3k、Akt、p-Akt蛋白的表达情况,并进行图像分析.结果:流式细胞凋亡结果显示,二仙汤可以降低顺铂损伤后的大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡率.免疫组化结果显示,PI3k、p-Akt、Akt在细胞质内均有表达,可见棕黄色阳性物质;而二仙汤可以上调顺铂干预后大鼠卵巢颗粒细胞的PI3k、p-Akt、Akt的表达.结论:二仙汤含药血清上调了PI3k、p-Akt、Akt的表达,从而抑制了卵巢颗粒细胞凋亡,该过程可能通过调节PI3k/Akt通路实现,进而有效地保护卵巢功能.

  • 育麟方对卵巢储备功能降低大鼠颗粒细胞分泌功能的影响

    作者:蔡彬彬;何嘉琳;王素霞

    目的:研究育麟方影响环磷酰胺致卵巢储备功能降低大鼠模型卵巢颗粒细胞的分泌功能的机制.方法:性成熟雌性SD大鼠参考文献制备卵巢储备功能降低大鼠模型,分为育麟方高、中、低剂量组,补佳乐组,模型组,正常组.正常组,模型组予蒸馏水20 mL· kg-1,补佳乐组予戊酸雌二醇片0.21 mg·kg-1,育麟方低、中、高组分别予育麟方生药15.2,30.4,60.8 g·kg-1 ig 21 d后,予动情前期处死,放射免疫法测定大鼠血清卵泡刺激素(FSH),黄体生成素(LH)水平及抗苗勒管激素(AMH)表达水平,光镜下观察卵巢组织形态学变化,卵泡数目及黄体数目.结果:与正常组比较,模型组FSH,LH含量明显升高(P<0.05),AMH含量明显降低(P<0.05),各级卵泡数目,黄体数目明显减少(P<0.05);与模型组比较,育麟方治疗组大鼠血清FSH,LH水平明显减少(P<0.05),育麟方中剂量组及补佳乐组血清AMH水平明显增高(P<0.05),育麟方中、高剂量组的各级卵泡及黄体数量明显增多(P<0.05).结论:育麟方可能通过影响卵巢储备功能降低模型鼠的颗粒细胞内分泌功能而改善其卵巢储备功能.

  • 逍遥散加减方对高催乳激素血症大鼠卵巢颗粒细胞增殖和细胞周期的影响

    作者:李燕;李肖梅

    目的:探讨以肝脾为核心,运用逍遥散加减方治疗高催乳素血症(HPRL)模型大鼠,观察逍遥散加减方对体外培养HPRL大鼠卵巢颗粒细胞增殖及细胞周期的影响.方法:选用SD雌性大鼠120只,随机分为正常组、模型组、阳性药溴隐亭组(1 mg·kg-1)、逍遥散加减方高、中、低剂量组(55,22.5,13.75 g·kg-1).采用ip甲氧氯普胺,制作HPRL大鼠模型.给药30 d后,采用MTT检测各组细胞培养24,48,72,96 h细胞增殖情况;采用流式细胞仪分析细胞周期各时相的变化及细胞凋亡指数.结果:与正常组比较,模型组24,48,72,96 h大鼠卵巢颗粒细胞增殖明显降低,细胞凋亡指数显著增高,S期的细胞增殖明显降低,G0/G1期细胞相对比例明显增加(P<0.05);与模型组比较,溴隐亭组、逍遥散加减方高、中、低剂量组明显增加大鼠卵巢颗粒细胞增殖(P<0.05),逍遥散加减方高剂量组降低卵巢细胞凋亡指数,使S期的细胞增殖显著增多,G0/G1期细胞相对比例减少(P<0.05),其中加味逍遥散高剂量组的作用与溴隐亭组相近.结论:逍遥散加减方促进卵巢颗粒细胞增殖,降低细胞凋亡指数,其作用机制可能是通过促进颗粒细胞从G0期向S期转化,增加S期细胞比例完成.

  • 四物汤及其组成药对对大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响

    作者:禹良艳;华永庆;朱敏;王欢;唐于平;段金廒

    目的:探讨四物汤及其组成药对对大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响,以期阐明配伍因素对于四物汤干预卵巢功能的作用.方法:体外培养大鼠卵巢颗粒细胞,在培养体系中加入终浓度为2,20,200 mg·L(-1)四物汤及其各药对的样品,通过MTT法检测细胞增殖情况,观察其对卵巢颗粒细胞生长的影响.结果:四物汤对于卵巢颗粒细胞增殖具有显著促进作用,与溶剂对照组比较上升了36.73%;各药对亦具有显著促进作用,其强弱顺序为:当归-川芎(66.86%)>当归-白芍(58.52%)>白芍-川芍(47.03%)>白芍-熟地黄(41.43%)>当归-熟地黄(23.67%);对归芎药对的进一步研究表明,其水提物中当归-川芎1:2配比,50%醇提物中1:1配比和先水提再醇提物中1:1.5配比药对对大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响较为显著.结论:四物汤及其5个药对均有促进卵巢颗粒细胞增殖的作用,其中归芎药对在四物汤调节卵巢功能起着重要作用,并且不同的配伍比例、不同的提取方法对于促进卵巢颗粒细胞增殖具有各自的特点和贡献.

  • 四物合剂对化疗后大鼠卵巢形态及颗粒细胞凋亡的影响

    作者:孙海芸;陈云芝;薛晓鸥

    目的:探讨四物合剂对化疗所致卵巢储备功能下降的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法:以40只雌性SD大鼠为研究对象,随机分为正常对照组(正常组)、顺铂模型组(模型组)、四物合剂组(四物组)和倍美力组,每组各10只.模型组、四物组和倍美力组连续7d腹腔注射顺铂2mg·kg-1·d-1,正常组连续7d腹腔注射等量的生理盐水,随后正常组和模型组连续7d纯净水灌胃10 mL·kg-1·d-1,四物组连续7d四物合剂灌胃1mg·kg-1·d-1、倍美力组连续7d倍美力溶液灌胃1 mg·kg-1·d-1.自实验第1天起,每日制作大鼠阴道分泌物涂片以观察大鼠动情周期;实验第14天大鼠称重、麻醉,取血清运用放免法测血中卵泡刺激素( FSH)、黄体生成激素(LH)、雌二醇(E2)和孕酮(Pro):取双侧卵巢,同侧切片后常规HE染色,图像分析仪下进行颗粒细胞层大厚度的显微测量,并运用原位细胞死亡检测法检测颗粒细胞凋亡情况.结果:与正常组比较,模型组大鼠FSH和凋亡指数均升高,差异有统计学意义(P<0.05),同时E2值下降.与模型组比较,四物组大鼠FSH和凋亡指数降低,差异有统计学意义(P<0 05),同时E2值升高.结论:四物合剂对化疗后大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡有一定的抑制作用,能促进卵巢功能恢复,但还不能起到完全修复的作用.

  • 毓麟合剂及其拆方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌的影响

    作者:张玉萱;徐玲玲;朱全刚

    目的:探讨毓麟合剂及其拆方对离体大鼠卵巢颗粒细胞(GC)增殖及雌、孕激素分泌的影响.方法:体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞,加入毓麟合剂及其拆方汤剂作用24h后,在显微镜下观察卵巢颗粒细胞数量的变化,MTT法测定卵巢颗粒细胞增殖数量,ELISA法测定培养液中雌、孕激素的浓度.结果:毓麟合剂可明显增加卵巢颗粒细胞数量,并增加雌二醇(E2)和孕酮(P)的分泌.HE染色显微镜下观察可表现为卵巢颗粒细胞增多等.结论:毓麟合剂能够增加离体大鼠卵巢颗粒细胞数量并能够促进雌二醇和孕酮的分泌.

  • 补肾化痰方调控大鼠卵巢GC中APN信号通路机制的研究

    作者:李宛静;徐晓娟;黄映红;邓蒂斯;雒芙蓉;张纯

    目的:通过分析补肾化痰方对大鼠颗粒细胞脂联素受体1/2(AdipoR1/2)蛋白表达水平及下游分子相关基因表达的差异,探讨该复方激活卵巢GC中APN信号通路的机制.方法:采用雌性SD大鼠,体外培养卵巢颗粒细胞,Western-blotting测定AdipoR1/2的蛋白表达量,Real-time PCR测定AMPK、PPAR-α/βγ、Cyp19a的mRNA表达.结果:与空白组比较,罗格列酮组、中药中低剂量组大鼠GC的AdipoR1/2含量均明显上升且差异有统计学意义;GC中AMPK、PPAR-α/β/γ、Cyp19a的mRNA表达量亦有明显的变化趋势,与空白组比较,罗格列酮组、中药中低剂量组的mRNA表达差异有统计学意义.结论:补肾化痰方能激活大鼠GC中APN信号通路的机制,可能与该方调节卵巢生殖激素转化及卵巢局部糖脂代谢相关.

  • 坤宁安丸对更年期大鼠卵巢颗粒细胞超微结构的影响

    作者:张雅萍;王秀霞;张丽

    目的:研究坤宁安丸对更年期大鼠卵巢颗粒细胞的影响.方法:采用更年期大鼠模型,应用光镜和电镜观察大鼠卵巢组织学变化和超微结构.结果:治疗组颗粒细胞超微结构与更年期对照组比较有明显差异,主要表现为线粒体和滑面内质网非常丰富,胞质内有大量脂滴,凋亡小体少见.结论:提示坤宁安具有预防和延缓颗粒细胞凋亡而达到阻止卵泡闭锁、颗粒细胞分泌雌激素增多的目的,可能是防治更年期综合征的主要机理.

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