首页 > 文献资料
-
人外周血淋巴细胞染色体制备中的影响因素分析
目的 分析人外周血淋巴细胞染色体制备中的影响因素,做好质量控制,掌握染色体制备技术,及时准确反映辐射损伤情况,为诊断与治疗提供依据.方法 采用微量全血培养法制备标本,以RPMI1640全培养基进行体外淋巴细胞培养,对采血后细胞培养时间、秋水仙素浓度、滴片等影响因素进行分析.结果 1 089例放射工作人员外周血淋巴细胞染色体标本中,1次培养成功1 077例,出现问题后采取补救措施补救成功12例,成功率100%.结论 影响人外周血淋巴细胞染色体制备的因素很多,总结一套适合本实验室的制备方法,确保外周血染色体制备成功.
-
电离辐射致人外周血淋巴细胞mtDNA 4977 bp缺失分析
DNA是电离辐射的重要靶分子之一,从碱基损伤到糖基破坏,导致DNA链断裂,DNA交联与整个或部分高级结构的变化,终影响其生物学功能[1].线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)是线粒体基质中的裸露分子,由于缺乏组蛋白保护和修复系统功能的欠缺,mtDNA比核DNA(nDYA)更易受到损伤,导致mtDNA突变,与生物衰老、神经肌肉性疾病、糖尿病及肿瘤的发生有着很密切的关系[2].
-
1-19 重质芳烃的致突变性
目的与方法用Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、人外周血淋巴细胞姐妹染色单体交换(SCE)试验以及小鼠精子畸形试验对重质芳烃进行了致突变性研究.结果重质芳烃无移码突变和碱基置换效应;微核试验显示在316~1 580 mg/kg剂量范围内,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率显著增加(6.25‰~10.00‰,与阴性对照组的2.38‰比较,P<0.01);SCE试验结果显示在活化系统(S9混合液)存在的条件下,人外周血淋巴细胞SCE频率较对照组显著增高(在0.5 mg/ml及5 mg/ml剂量组分别为3.48及4.84,对照组为1.08);小鼠精子畸形试验显示在1 580 mg/kg剂量水平,小鼠精子畸形率显著增高(8.56‰),与阴性对照组(3.33‰)比,差异有显著性(P<0.01).结论重质芳烃具有间接致突变性,对其职业性接触及应用的安全性应给予高度重视.
-
微量全血中有核细胞单细胞凝胶电泳技术
单细胞凝胶电泳技术(single cel gel electrophoresis,SCGE),又称彗星试验(comet assay),是近年来发展起来的在单细胞水平上检测DNA断裂的方法,具有简便、快速和敏感的特点[1],已被广泛应用于毒理学、临床研究及人群监测等多种领域[2].
-
苯乙烯及7,8-氧化苯乙烯对人淋巴细胞DNA分子加合作用的定性分析
为了探讨苯乙烯对机体的化学损伤机制,在国内外现有研究的基础上,我们采用体外细胞染毒方式,对苯乙烯及其活性中间代谢产物SO与健康成人外周血淋巴细胞DNA的加合作用进行了研究.
-
莪术四君子汤对硫酸镍诱导的人外周血淋巴细胞非程序脱氧核糖核酸合成的影响
目的:探讨莪术四君子汤对硫酸镍诱导的人外周血淋巴细胞非程序性DNA合成的影响.方法:用3H-TdR掺入法测定了人外周血淋巴细胞非程序性DNA合成(UDS).结果:莪术四君子汤实验剂量浓度达到1.0g/ml时,由硫酸镍或硫酸镍与紫外线共同诱导的人外周血淋巴细胞UDS基本恢复到阴性对照水平;莪术四君子汤实验剂量浓度达到1.5g/ml时未见其抑制3H-TdR向人外周血淋巴细胞DNA的掺入.结论:莪术四君子汤对人外周血淋巴细胞非程序DNA合成无诱导效应,但对硫酸镍及硫酸镍与紫外线共同诱导的人外周血淋巴细胞非程序DNA合成有明显抑制作用,且呈剂量效应关系.提示莪术四君子汤能有效减轻镍和紫外线对人外周血淋巴细胞DNA的损伤.
关键词: 莪术 四君子汤 硫酸镍 人外周血淋巴细胞 非程序脱氧核糖核酸合成 -
外周血B淋巴细胞半套式PCR法扩增人抗体基因
目的用半套式PCR法,以一组人抗体重链和轻链引物直接从人外周血淋巴细胞中扩增人全套抗体基因片段.方法从不同人群外周血淋巴细胞中提取总RNA,经反转录后,以免疫球蛋白信号肽序列引物和家族特异性免疫球蛋白可变区基因引物,进行半套式PCR扩增人全套抗体基因片段.结果采用不同的引物进行重链、轻链Kappa和Lambda链的半套式PCR扩增,均能获得相应大小的PCR产物,其结果扩增率达到100%.结论在建立抗体基因文库时,半套式PCR法能进一步丰富扩增的抗体基因的多样性,可弥补由于转化效率不高而降低抗体库多样性的不足.
-
正常人外周血淋巴细胞凋亡受体的表达与细胞凋亡的关系
本研究检测凋亡受体Fas、TNFRⅠ、TNFRⅡ在人外周血淋巴细胞(PBL)增殖过程中的表达情况及其细胞周期特异性,并探讨其与凋亡受体途径介导的细胞周期特异性细胞凋亡的关联性.应用双参数流式细胞术检测人外周血淋巴细胞在G0期和经植物凝集素刺激(PHA)进入细胞周期后Fas、TNFRⅠ、TNFRⅡ的表达情况以及细胞周期特异性,同时检测肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体诱导人外周血淋巴细胞的凋亡.结果表明:经植物凝集素刺激24小时后的外周血淋巴细胞Fas、TNFRⅠ、TNFRⅡ表达率较G0期外周血淋巴细胞分别增加了(35.55±6.63)%,(30.63±2.66)%,(26.62 ±5.14)%,均具有显著性差异(P<0.01),而且主要表达在G1期;未经植物凝集素刺激的外周血淋巴细胞停留在G0期,TNF-α和anti-Fas诱导后没有发生凋亡,而刺激后进入细胞周期的淋巴细胞经TNF-α和anti-Fas诱导后发生凋亡,其凋亡主要在G1期.结论:凋亡受体在外周血淋巴细胞中的表达与凋亡受体途径介导的细胞凋亡有明显的量效关系,凋亡受体途径介导细胞凋亡的细胞周期特异性与凋亡受体表达的细胞周期特异性有关,细胞凋亡的发生与细胞是否进入细胞周期有关.
-
联合免疫抑制剂对肾移植受者外周血淋巴细胞抑制作用的临床观察
淋巴细胞的增殖和活化是免疫排斥发生的细胞学基础,其在肾移植排斥反应过程中起重要作用,研究表明,免疫抑制剂无论预防还是治疗排斥反应,均主要是通过抑制或对抗淋巴细胞的增殖和活化来发挥作用[1].而临床应用中有关其对淋巴细胞增殖和活化作用的研究很少,我们检测了10例肾移植稳定病人和10例排斥反应病人外周血淋巴细胞标志分子CD4、CD8、CD19和CD57以及细胞粘附分子CD11a和CD54的表达变化,以期对联合免疫抑制剂在预防和抗排斥过程中的作用机制有进一步了解.
-
肺结核病人外周血T淋巴细胞亚群、嗜银蛋白的测定
结核病的发生、发展及免疫功能等已有不少报道,关于核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)在肺结核病人外周血淋巴细胞中的应用研究尚未见报道.本文通过对肺结核病人T淋巴细胞亚群及其AgNORs的对比分析,探讨二者的变化规律和相互联系,为指导临床免疫检测及治疗提供参考.
-
He-Ne激光照射对离体人外周血淋巴细胞产生微核的影响
激光在临床上应用比较广泛,为探讨其细胞遗传学效应,我们用He-Ne激光照射离体人外周血淋巴细胞,观察了淋巴细胞微核率的变化,现报告如下.
-
体内微核实验检测结直肠癌患者遗传不稳定性
大多数人类肿瘤都具有基因组遗传不稳定的物质基础.其表达在细胞水平上为染色体不稳定性和微卫星不稳定性[1-3],这种遗传与环境风险因子相互作用对体细胞基因组稳定性的影响,为目前肿瘤细胞遗传学和分子流行病学研究提供了新的思路.微核作为染色体损伤的生物学标记物,反映了机体遗传不稳定性状态或受到环境诱变剂和致癌剂暴露作用的影响,在肿瘤的遗传易感性检测及肿瘤防治研究中已广泛运用[4-5].本研究随机在临床抽取一组结直肠癌患者,进行人外周血淋巴细胞微核检测,以探讨患者体内自发淋巴细胞微核形成与结直肠癌基因组遗传不稳定的相关性.
-
同种和异种混合淋巴细胞反应及分类混合淋巴细胞反应的比较
目的:对比体外人外周血淋巴细胞对于异种小鼠细胞和同种异体细胞混合淋巴细胞反应.方法:建立异种-同种混合淋巴细胞反应模型,进行分类细胞反应试验.结果:人外周血淋巴细胞对于异种小鼠细胞的反应明显低于对于同种异体细胞的反应(P<0.05).细胞分类研究显示:在异种混合淋巴细胞反应中,主要是CD4+T细胞通过间接途径受小鼠抗原刺激而增生;在同种混合淋巴细胞反应中,主要是CD4+T细胞通过直接途径受同种异体抗原刺激而增生.在两种混合淋巴细胞反应中,CD8+T细胞也参与.结论:异种混合淋巴细胞反应弱于同种混合淋巴细胞反应,异种细胞只通过间接途径刺激T细胞.同种和异种混合淋巴细胞反应均需要抗原提呈细胞参与,CD4+T淋巴细胞是反应的主要细胞.
-
基因工程HER2/CD3双特异抗体抑制乳腺癌生长的实验研究
近年来人们对难治性乳腺癌发生、发展相关生物学因素的认识不断深入.其中癌基因HER2/neu在乳腺癌诊断和免疫治疗中的研究进展为显著.我们在成功建立BT-474人乳腺癌模型的基础上,探讨了抗HER2×抗CD3双特异抗体(HER2×CD3 BsAb)与正常人外周血淋巴细胞联合应用对过度表达HER2乳腺癌生长的影响,以期进一步阐明HER2×CD3 BsAb体内抗肿瘤机制.
-
卵巢上皮性癌细胞培养上清液增强CD+4CD+25调节性T淋巴细胞增殖及免疫抑制功能的实验研究
CD+4CD+25调节性T淋巴细胞是一类具有抑制CD4+和CD8+T淋巴细胞活化和增殖功能的免疫调节细胞.近的研究发现,在卵巢上皮性癌(卵巢癌)患者外周血及腹腔内,这类细胞的比例显著增加,可能是卵巢癌患者免疫功能下降和生存率低下的重要原因之一[1].我们先前的体外实验也证实,卵巢癌细胞株SKOV3的培养上清液和健康人外周血淋巴细胞共培养后,能诱导其中的CD+4CD+25调节性T淋巴细胞比例增加[2].为了进一步阐明其机制,我们将卵巢癌细胞培养上清液和纯化的CD+4CD+25调节性T淋巴细胞共同培养,观察其增殖、表型及功能是否发生改变.
-
核电站工作人员外周血淋巴细胞染色体畸变分析
人外周血淋巴细胞染色体畸变分析作为“生物剂量计”估算核辐射事故受照人员的剂量,已得到广泛地应用,同时也是评价辐射远后效应的重要指标.国内在有关慢性低剂量受照人员,特别是放射工作人员染色体畸变分析方面已积累了大量的资料[1-3].但是,国内有关核电站工作人员外周血淋巴细胞染色体畸变分析报道极少.为此,本研究对国内某核电站个人年有效剂量和从业期间累积有效剂量(以下简称累积有效剂量)资料较为完整的188名工作人员进行了外周血淋巴细胞染色体畸变随访观察,以分析染色体畸变与工作人员年有效剂量和累积有效剂量的关系.
-
α粒子照射诱发DNA双链断裂修复及其在染色质中的分布
目的 探索α粒子照射诱发人外周血淋巴细胞双链断裂(DSB)的修复特点及与染色质结构的关系,为其作为α核素内照射鉴定指标和生物剂量估算指标提供实验依据.方法 取4名健康成人外周血淋巴细胞,0.5 Gyα粒子和γ射线照射,采用免疫荧光技术检测照射后10 min~48 h DSB分子标志物γH2AX焦点、同源重组(HR)修复蛋白Rad51焦点的形成及其消除过程,以及它们在染色质中的分布.结果 与未照射时相比,人淋巴细胞经0.5 Gyα粒子照射后10 min ~2 h,可见明显的线性γH2AX焦点径迹形成(t=ll.12、14.40、16.56,P<0.05),至照后6h基本消失;而γH2AX焦点形成数在α粒子照射后30 min达到大值(t=51.72,P<0.05),6h内快速下降(t=29.83,P<0.05),至照后24 ~ 48 h残留焦点数约为16%;照后10 min,约27%的γH2AX焦点位于DAPI亮染的异染色质区,可能降低了其修复效率.而0.5 Gyγ射线照射后10 min ~48 h,未见线性γH2AX焦点径迹形成,随机、散在分布的γH2AX焦点均位于DAPI淡染的常染色质区,焦点形成数与残留数均显著低于α粒子照射诱发的焦点数.修复蛋白Rad51焦点在α粒子和γ射线照射后30min ~2 h有升高趋势,但与本底值无明显差异,且与γH2AX焦点的共定位仅占3% ~8%.结论 α粒子照射诱发入外周血淋巴细胞线性γH2AX焦点径迹形成可作为判断是否存在α粒子内照射的生物指标,其在照射后稳定存在一定时间的特性,为其作为生物剂量估算指标提供了可能.
-
细胞适应性反应分子机制研究进展
电离辐射的适应性反应发现于1984年,在对人外周血淋巴细胞进行照射时发现,小剂量辐射的预先处理能使机体对随后的大剂量照射产生适应性,减轻了辐射损伤;随后,适应性反应在其他种属的哺乳细胞中也不断被发现.
-
低强度微波与4-硝基喹啉氧化物对人淋巴细胞DNA损伤的研究
目的研究低强度2 450 MHz微波(5.0 mW/cm2)与4-硝基喹啉氧化物(4-NQO)对人淋巴细胞DNA损伤效应的联合作用.方法采用彗星试验来检测人外周血淋巴细胞经微波与4-NQO联合作用后的DNA损伤情况.微波与4-NQO联合暴露方式有3种:微波辐射后4-NQO染毒、微波与4-NQO同时暴露、4-NQO染毒后微波辐射.结果微波辐射组的DNA损伤指标(彗星形状和彗星全长)与对照组比较,差异无显著性(P>0.05).微波照射后4-NQO染毒组中,50,25 μmol/L剂量的DNA损伤指标与相应4-NQO组比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01).微波与4-NQO同时暴露组或4-NQO染毒后微波照射组与相应4-NQO组比较差异无显著性(P>0.05).结论低强度2 450 MHz微波不能诱发DNA损伤,当微波辐射先于4-NQO暴露时,微波能增强4-NQO诱发的DNA损伤效应.
-
辐射诱导人外周血淋巴细胞DNA损伤反应相关基因表达变化的实验研究
目的 采用实时定量PCR技术,检测人外周血淋巴细胞DNA损伤反应相关基因表达对X射线全身照射的反应,为探索新型辐射生物标志物奠定基础.方法 以吸收剂量为0、1、2、3、4、5 Gy X射线照射正常人外周血,在照射后4和24 h,应用实时定量PCR法,对淋巴细胞细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物蛋白1a(Cdknla)、生长阻滞和DNA损伤基因45a(Gadd45α)基因的表达变化进行检测.应用胞质分裂阻滞微核法(CB微核法),检测淋巴细胞微核率变化.结果 Cdknla基因在人外周血淋巴细胞受到1~5 Gy照射后4和24 h,其相对表达量均较对照组显著性升高,至4 Gy达到峰值,5 Gy后不再继续增加.Cdknla基因表达与照射剂量呈线性相关(r=0.946、0.975,P<0.05).Gadd45ct基因在1~5 Gy照后4和24 h,其相对表达量均呈剂量依赖性升高,且照射后4 h的表达高于24 h(r=0.936、0.797,P<0.05).CB微核法中,在1~5 Gy X射线照射后4和24 h,各剂量组淋巴细胞微核率均显著增多,呈现良好的线性关系(r=0.990、0.984,P<0.05).结论 辐射使Cdknla基因和Gadd45α基因表达上调,表现出较好的剂量线性关系,有可能成为研制新型辐射生物剂量计的候选基因.