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SiO2粉尘对肺泡巨噬细胞膜性质影响的实验研究
矽肺的发生发展是多因素相互作用的结果.目前一般认为,SiO2粉尘被肺泡巨噬细胞(AMS)吞噬后,导致AMS受损、死亡,是矽肺发病的重要原因[1].随着膜毒理学的发展,进一步证实了SiO2粉尘作用AMS后,在生物物理、生物化学、膜成分以及形态结构等方面都发生了变化[2].采用体外细胞培养方法,检测了AMS的乳酸脱氢酶(LDH)活性、K+和丙二醛(MDA)含量及荧光偏振度P,分析了SiO2粉尘对AMS膜通透性、脂质过氧化及流动性的影响,找出较敏感、简便、迅速反映膜毒性的指标.
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苯乙烯及7,8-氧化苯乙烯对人淋巴细胞DNA分子加合作用的定性分析
为了探讨苯乙烯对机体的化学损伤机制,在国内外现有研究的基础上,我们采用体外细胞染毒方式,对苯乙烯及其活性中间代谢产物SO与健康成人外周血淋巴细胞DNA的加合作用进行了研究.
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纤维矿物粉尘体外细胞毒性研究
许多矿物粉尘有潜在的生物化学作用,矿物粉尘若与生物体细胞产生较强的生物化学作用,即表现出生物活性.我们的前期研究结果认为:矿物粉尘的生物活性与其表面的活性基团OH-呈正相关关系,本研究采用有机酸对纤维矿物粉尘进行减毒处理,为寻找矿物粉尘的表面安全改造剂,减少由该类矿物粉尘所造成的尘肺、肺纤维化等职业病及环境污染提供理论依据.1.材料:4种纤维状矿物粉尘分别采自全国4个不同矿区,经超声粉碎制成超细粉尘,各粉尘分散度均为<15 μm纤维在90%以上,由西南科技大学中心实验室采用电化学方法测其OH-电导率的方法分析其表面OH-含量,结果斜发沸石、纤维硅灰石不含OH-,纤维坡缕石含大约5.0%OH-,纤维水镁石含30.89%OH-.
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体外细胞培养应用于中药复方研究的进展
纵观现代医学研究史,体内(in vivo)实验和体外(in vitro)实验是不可分割的两个方面.从各自的地位来看,由于体外实验的结果终要通过体内实验来证实其价值,体内实验更为重要.然而,体外实验以其需时短、实验条件和因素易于控制,便于进行相对复杂的实验设计,可以避免体内实验的伦理学问题等优点,在现代医学的发展中发挥了极为重要的作用,而现代医学的许多重大突破源于体外实验的启迪.在中西医结合临床实践中,中药复方仍然是主要的用药方式.
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组织工程用猪膀胱无细胞基质的体外细胞毒性检测
生物相容性是评价组织工程支架材料的重要指标之一,是组织工程产品进行临床应用的前提和基础.本研究参照医疗器械生物学评价标准,对本实验室制备的猪膀胱无细胞基质进行体外细胞毒性测定,为其合理应用于组织工程提供实验依据.
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三维培养技术及其在肿瘤研究中的应用
传统的单层平面培养技术在肿瘤体外细胞模型建立、肿瘤细胞生物学行为分析中一直发挥着主导作用,但限于单层平面培养方法本身及肿瘤细胞传代次数的制约,细胞的形态、极性、基因表达乃至功能状态与体内肿瘤细胞的实际病理生理状况经常相距甚远,而基于两维培养的肿瘤细胞模型在肿瘤分子病理机制探讨中也开始受到越来越多的挑战.近些年,三维培养技术的发展及对肿瘤细胞生物学特性研究的深入,使得模拟体内组织细胞生长环境方面具有明显优势的立体培养,在肿瘤细胞生物学特性解析、药物疗效的评估中受到普遍的关注.
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我国建起了细胞培养细胞库--基础性科技工作建设项目
细胞是一切有机体的基本生命单位,是一切生命科学研究的基础材料.体外培养细胞要求绝对无菌等苛刻的条件,否则容易引起支原体感染或变异,使科研数据不够准确或难以重复. 长期以来我国在此领域仅有零星尝试,由于缺乏可靠的细胞来源和培养材料,常常难以使体外细胞长期健康成活和传代.一些珍贵的科研成果如单克隆抗体或传染特定基因的细胞株常因传代保存不善而造成损失.为了取得令国际同行信服的科研数据,国内很多实验室都在国外购买标准细胞.没有我国自己的符合国际标准的细胞培养细胞库,已成为我国科技发展的瓶颈.1999年启动国家细胞库建设项目.2000年10月,中国医科院基础医学细胞中心成立.与国内有关单位一起研制生产了大型液氮冻存设备 ,完成了原保存的100余株、系细胞的整理和登记,扩容入库细胞60株、系,同时建立健全了各种规章制度,制定了符合国标标准的操作规程,并开始对外提供细胞等服务.中科院上海生化细胞所1991年就建成中科院细胞库,这次改建了生物防护实验室,对外服务细胞千余种.科技部、卫生部专家希望这两个细胞库加速基地建设和国际化进程,继续为国家重要科研项目提供标准的细胞株,并在今后基因组计划、干细胞的深入研究中,发挥优质技术平台作用 .引自<健康报>
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OATP1B1/BCRP/MRP2转运体基因多态性对瑞舒伐他汀人体药代动力学的影响
目的:瑞舒伐他汀是一种新型他汀类降脂药,体外细胞试验结果表明, OATP1B1和BCRP/MRP2转运体分别介导该药的肝细胞摄取和胆汁外排。由于他汀类药物是长期连续用药,在多剂量连续给药条件下观察肝胆转运体基因型对药物体内过程的影响更有意义。目前转运体基因型对瑞舒伐他汀多剂量给药体内过程的影响未见报道。因此,本文旨在研究OATP1B1/BCRP/MRP2基因多态性对瑞舒伐他汀单剂量和多剂量给药后人体药代动力学的影响。
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骨质疏松症防治药物的体外细胞药效评价
骨质疏松症已成为人类老年时生活质量下降和寿命缩短的主要原因之一,因而对有效防治骨质疏松症的药物研究是近四分之一世纪以来十分重视的课题.随着细胞实验技术和分子生物学技术的发展,骨质疏松症防治药物的研究在细胞与分子水平阐明了骨质疏松症病理机制的基础上,又取得了长足的进展.骨质疏松症的发生与成骨细胞和破骨细胞的功能失偶联有关,因而在细胞水平上观察药物对骨细胞功能的调整作用是评价骨质疏松症防治药物药效的方法之一.本文分别就成骨细胞药效和破骨细胞药效评价方法作一抛砖引玉的介绍,以供骨质疏松症防治药物研究的参考.
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皮肤细胞老化的生物标记及其意义
在体外组织培养传代过程中,正常人类细胞逐渐丧失增殖传代能力,终达到一种不可逆的增殖停滞状态,称为细胞老化.有证据表明,体外细胞的老化至少部分反应体内的细胞衰老[1].为研究皮肤老化,先研究细胞老化很必要.目前,在细胞和分子水平发现一些指标,如成纤维细胞体外增殖能力降低,DNA的损伤修复能力降低,线粒体DNA片段的缺失,端粒长度缩短,衰老相关β半乳糖苷酶活性增加,晚期糖基化终产物水平升高,老化相关调控因子的改变等.这些指标作为细胞老化的生物学标志,可用来评价皮肤细胞老化模型的建立是否成功.
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胰岛素在肝星状细胞增殖中的作用
胰岛素作为一种多功能的激素类蛋白,不仅能调节机体的代谢,也促使体外细胞的分裂和增殖[l].肝星状细胞(hepattc stellate cell,HSC)作为肝间质细胞及肝纤维化的启动细胞,受到刺激后产生大量的细胞外基质,终导致肝纤维化[2].因此,研究影响HSC增殖的因素及其作用,将有助于阐明肝纤维化发病机理.本研究旨在了解胰岛素对HSC的生长、增殖作用.
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骨形态发生蛋白12,13对促进髌腱愈合的体外细胞培养研究
骨型态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)是转移生长因子(TGF)-β家族中的成员之一,在胚胎形成和组织修复过程中对骨和软骨的形成起诱导作用[1,2].BMP12和BMP13在肌腱损伤修复过程中所起的作用机制尚未有研究.本实验应用人髌腱分离培养的成纤维细胞进行体外相关实验,评估BMP12和BMP13可能促进肌腱损伤愈合的作用.
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采用视频系统的细胞原位计数法
在体外细胞培养过程中,细胞生长曲线是反映细胞生物学特性十分重要的指标.传统细胞生长曲线的绘制方法,是通过胰酶消化后制成细胞悬液,显微镜下计数,然后计算出细胞总数[1].这种方法不能在不同时相或用药前后进行自身对照观察,因此我们在实验中采用定位微量细胞培养技术及细胞原位计数法[2],并将视频系统引入该方法中,现简介如下.1 仪器及设备选用菲利浦VR-HD 1000录像机、松下TC-2140监视器、奥林巴斯IX 70倒置显微镜、细胞培养容器(丹麦NUNC 6孔板、12孔板或培养皿)、小玻璃管(外径为6 mm,长为3.5 cm,一端为盲端)、血盖片或普通盖片、投影胶片(非复印型)等.
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尘肺患者氧化性损伤及相关细胞因子表达水平的研究
动物实验和体外细胞培养研究均已证明,在粉尘引起纤维化的过程中,活性氧起着非常重要的作用,而细胞因子作为引起纤维化的介质,在尘肺的发生中也起着重要作用[1].我们对某些尘肺患者血清中与氧化性损伤有关的指标和部分细胞因子的表达水平进行了测定.
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器官型脊髓培养与肌萎缩侧索硬化
肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是选择性侵犯上、下两级运动神经元的慢性进行性变性疾病.ALS研究中采取的模型可分为三种:免疫介导的动物模型、体外细胞(或组织)培养模型和转基因动物模型.器官型脊髓培养(Organotypic Spinal Cord Cultures)是近年来发展起来的一种新的体外细胞(或组织)培养技术,有近十年的历史.
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DCS细胞中SRS19-6白血病病毒3’-cDNA序列的克隆
利用本室建立的树突状细胞肉瘤(dendritic cell sarcoma,DCS)细胞系免疫Lou/c大鼠,制 备了细胞膜蛋白单克隆抗体983D4,该抗体具有小鼠肿瘤细胞的特异性,能抑制体外细胞生 长 速度,降低克隆形成能力[1]。为了得到其cDNA序列,本工作构建了DCS细胞cDNA表 达文库并用983D4单抗进行了免疫学筛选。1 材料与方法1.1 细胞总RNA的提取及cDNA合成 用异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提一步法 [2]提取DCS细胞总RNA,oligo-dT纤维素层析柱(Gibco-BRL)分离mRNA后,按照Gibc o-BRL公司逆转录试剂操作说明,分别用MMLV逆转录酶和E.coli DNA聚合酶I作用下合成cD NA第一、二链,Sephacryl S-400离心柱除去小分子cDNA。
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高度对平行平板流动腔流场特性影响的数值研究
平行平板流动腔是体外细胞力学研究的主要实验装置,在定常流情况下,人们通常使用近似公式τ=6μQ/bh2来计算切应力,其中Q为流量,μ为流体粘度,b和h分别为腔体的宽度和高度.其中高度h是决定切应力大小的重要指标,根据近似公式的假设,通常认为越小越好,目前常用的范围是0.1~0.5mm.由于其值非常小,加上细胞力学实验所必须的严格的无菌环境,很难在系统装配好后实际测量其大小.因此,常常把流动腔密封胶圈的厚度作为流动腔的高度.然而,在装配时密封胶圈会由于压力的作用发生变形,导致实际的流动腔高度小于密封胶圈的高度.而且每次装配产生的高度差是不尽相同的.
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C-myc反义寡核苷酸对人肝癌移植瘤生长的影响
在肝癌组织中,C-myc mRNA及蛋白均有较高表达….我们发现,脂质体(LR)介导C-myc反义寡核苷酸(A-SODN)对人肝癌细胞SMMC-7721在体外细胞培养实验中有抑制肿瘤细胞生长作用[2].
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地塞米松对宁得朗化疗的影响
宁得朗(Nimustine hydrochloride)是目前治疗脑胶质瘤较为有效的化疗药物,通过诱导胶质瘤细胞凋亡而产生抗癌作用.而地塞米松(DXM)是临床上脑胶质瘤化疗病人常用药物,本研究通过体外细胞培养实验,观察DXM对宁得朗诱导胶质瘤细胞凋亡的影响,探讨DXM同时用于宁得朗治疗脑胶质瘤的可行性.
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体外培养软骨细胞修复软骨缺损的研究进展
关节软骨缺损是常见的疑难病症之一.创伤、肿瘤、骨关节炎等原因所致的关节软骨缺损由于不能自行修复,目前临床多采用自体或异体软骨移植修复,软骨膜或骨膜移植修复、软骨细胞移植修复等.但自体软骨来源有限,异体软骨又存在慢性免疫排斥反应,终可能导致手术失败;软骨膜或骨膜移植远期软骨易于退化[1].随着体外细胞培养方法的不断改进,现已能够把软骨细胞从坚韧的软骨中分离出来,获得大量高纯度的软骨细胞并分裂出新生软骨细胞[2].克服了软骨细胞来源有限的缺点,从而推动了软骨缺损修复的发展.